植物乳杆菌代谢产物和Ca2+诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究

目的:探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋白获得的代谢产物以及Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法:植物乳杆菌23201经复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物1(LPM1)。利用草酸钠溶液沉淀LPM1中的Ca2+获得不含Ca2+的代谢产物(LPM1-F);采用MTT法检测不同浓度的LPM1和LPM1-F对CAL-27细胞体外增殖的抑制作用;通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞的形态学变化;采用Annexinv-FITC/PI双染试剂盒检测早期凋亡率。结果:不同浓度LPM1和LPM1-F分别作用CAL-27细胞24h,最大抑制率分别达到(48.81±4.96)%和(56.70±2.33)%;荧光显微镜下观察,凋亡细胞皱缩,凝聚呈新月形或马蹄形,贴壁不良;流式细胞仪结果显示:经LPM1和LPM1-F处理的CAL-27细胞早期凋亡率均高于对照组。结论:植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制CAL-27细胞生长,呈剂量的依赖性,并且诱导细胞凋亡,其中Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长和凋亡无影响。     

沙樱桃黄酮对人A-704细胞毒性及增殖的影响

目的探讨沙樱桃黄酮对人A-704(肾癌)细胞毒性作用及其对细胞增殖的影响,为沙樱桃的应用和开发提供实验依据。方法体外培养人A-704细胞沙樱桃黄酮,用台盼蓝法检测对细胞毒性作用;用克隆形成法测定对细胞分裂增殖的影响;用X射线能量色散谱仪分析对细胞内微量元素含量的影响。结果①台盼蓝法测定结果显示,给药后培养6h,沙樱桃黄酮(0.1,0.5,5mg.L-1)组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组活细胞数比对照组分别减少了33.8%、35.8%、60.8%和40.3%,到18h减少了57.3%、80.1%、99%和59.6%,差异有显著性(P<0.01)。沙樱桃黄酮组间比较,差异有显著性(P<0.01)。②克隆形成法测定结果表明,沙樱桃黄酮(0.1,0.5,5mg.L-1)组和5-FU组克隆数比对照组减少了40.4%、47.6%、83.6%和43.4%,差异有显著性(P<0.01)。③X射线能量色散谱仪分析结果表明,细胞内Ca2+离子水平随给药浓度的增加而升高,K+和P3+离子浓度则降低,与对照组比,差异有显著性(P<0.01)。结论沙樱桃黄酮对人A-704细胞具有明显的毒性作用,其作用与抑制细胞分裂,改变细胞膜结构,使细胞内游离Ca2+增加活化细胞内核酸内切酶,引起细胞DNA损伤有关。     

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖抑制机制的研究

目的 探讨姜黄素(curcumin)对人舌癌Tca8113细胞株体外增殖及凋亡的调控作用.方法 选用人舌鳞癌Tca8113细胞系进行体外培养,以5-40μmol/L的姜黄素分别处理Tca8113细胞24～72h后,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组化法检测细胞内核增殖抗原ki-67、癌基因蛋白p-21、细胞凋亡相关基因蛋白Bax表达水平.结果 curcumin对Tca8113细胞增殖有抑制作用,并随药物浓度升高和时间延长而增强,倒置显微镜观察可见细胞发生凋亡形态学改变的程度和浓度与时间呈正相关,免疫组织化学检测到核增殖抗原ki-67、p-21表达均下调,Bax表达增强.结论 姜黄素对Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用,并与浓度、时间有量效关系.通过上调凋亡基因蛋白Bax,下调ki-67、p-21蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

艾塞那肽对人舌鳞癌SCC-25细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘要： 目的 探讨艾塞那肽对人舌鳞癌 SCC-25 细胞增殖、 侵袭能力以及凋亡相关指标的影响。方法 体外培养 SCC-25 细胞, Western blot 检测 SCC-25 细胞中胰高血糖素样肽 1 受体（GLP-1R）表达。实验分 4 组： 对照组、 1、 10 和 100 nmol/L 艾塞那肽处理组。培养 24 h、 48 h 和 72 h 后 MTT 法检测各组细胞增殖能力, Transwell 实验检测各组细胞侵袭能力。Western blot 检测基质金属蛋白酶（MMP） -2、 Caspase-3 和 p38 丝裂原活化蛋白激酶（Phosphop38 MAPK）表达。结果 SCC-25 细胞表达 GLP-1R。与对照组相比, 艾塞那肽处理组细胞存活率及侵袭率明显降低（P < 0.05）, MMP-2 蛋白表达降低（P < 0.05）, Caspase-3 蛋白表达明显升高（P < 0.05）; 各指标变化呈现艾塞那肽浓度和时间依赖性。10 nmol/L 艾塞那肽处理组 24 h 后 Phospho-p38 MAPK 表达升高（P < 0.05）。结论 艾塞那肽可抑制 SCC-25 细胞增殖和侵袭, 且可能通过促进 Phospho-p38 MAPK 和 Caspase-3 的表达诱导细胞凋亡。     

柚皮素对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的影响

目的探究柚皮素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖及凋亡的影响及其机制。方法将细胞分为4组:空白对照组和低、中、高3个浓度实验组(柚皮素20,40,80μmol·L^-1),体外培养24 h。通过噻唑蓝比色法检测柚皮素对舌鳞癌Tca8113细胞抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡状况,蛋白质印迹法检测肿瘤蛋白p53(p53)、周期蛋白依赖激酶抑制剂1A(p21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达(光密度比值)。结果 24 h后,空白对照组和低、中、高3个浓度实验组的Tca8113细胞抑制率分别为0,(16.19±1.74)%,(22.97±1.06)%和(48.72±1.95)%;这4组的细胞凋亡率分别为(1.66±0.53)%,(28.21±3.08)%,(47.21±2.54)%和(63.38±3.40)%;这4组的p53蛋白的相对表达量分别为0.53±0.11,0.66±0.09,0.78±0.10和0.90±0.13;这4组的p21蛋白的相对表达量分别为0.61±0.12,0.83±0.15,1.04±0.09和1.34...     

红景天苷对人舌癌细胞的凋亡作用及机制研究

目的：探讨红景天苷对人舌癌细胞增殖和凋亡的影响,并解释其分子机制,为舌癌的临床治疗提供新的思路。方法：CCK-8法和克隆形成实验检测红景天苷药物对人舌癌细胞增殖能力的影响;Annexin V/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡情况;PI染色法检测红景天苷对细胞周期的影响;细胞迁移法检测红景天苷对舌癌细胞迁移的影响;免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase 3的表达水平;免疫印迹法检测细胞内ERK和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达水平的变化。结果：红景天苷能显著抑制人舌癌细胞的增殖且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法和TUNEL法显示,随着红景天苷浓度的增加,Tca-8113细胞凋亡明显增多。PI染色法显示,红景天苷处理细胞后,G2/M期细胞明显减少。细胞迁移实验表明,红景天苷作用于舌癌细胞后,随着给药浓度的逐渐升高,细胞的迁移能力明显降低。免疫印迹结果表明,红景天苷可以使Bax和Cleaved caspase 3蛋白表达水平升高,Bcl2的蛋白表达水平降低。同时,红景天苷可以抑制ERK和PI3K/AKT信号通路。结论：红景天苷可以明显抑制人舌癌Tca-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK和PI3K/AKT信号通路有关。     

短棒状杆菌菌体细胞与细胞代谢产物生物学活性的比较

欲提高短棒状杆菌制剂的临床应用效果,为该产品进一步精制奠定基础,进行了短棒状杆菌有效成份的研究。在适宜的培养基中,以厌氧法培养短棒状杆菌,分别收获菌体及培养上清,做生物学活性检测。结果显示,菌体细胞内脾激活和抑瘤试验生物学活性显著,细胞代谢产物无生物学活性。实验证实,短棒状杆菌的有效成份在菌体细胞内,与细胞代谢产物无关。     

白花蛇舌草总黄酮体外对人肝癌细胞HepG-2的作用

目的:观察白花蛇舌草总黄酮体外对HepG-2肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:以HepG-2细胞为实验细胞株,观察白花蛇舌草中的总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态的影响;用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:白花蛇舌草总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态有影响,抑制其生长并诱导HepG-2肿瘤细胞的调亡。结论:白花蛇舌草中的总黄酮通过诱导凋亡对人肝癌细胞HepG-2有抑制增殖作用。     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的作用机制初步研究

目的　探讨姜黄素对人肺腺癌细胞 (SPC A1 )抗癌作用机制。方法　采用细胞培养、荧光显微镜、原位末端标记、放射免疫、原位杂交等技术 ,探讨姜黄素抗癌作用及其机制。结果　①姜黄素作用于癌细胞后 ,光镜下可见有细胞脱壁 ,悬浮培养液中 ;荧光镜下可见细胞核破碎 ,裂解成大小不等的凋亡小体 ,原位末端标记法进一步证实 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用 2 4h凋亡率达 42 67%。②姜黄素作用于癌细胞后 ,使细胞内cAMP浓度升高。③ 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用于癌细胞 2 4h后 ,使人肺癌细胞半胱氨酸蛋白酶 8(Caspase 8)mRNA表达明显增高。结论　姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡 ,其作用机制可能与细胞内cAMP浓度升高、Caspase 8表达增高有关     

大蒜素抑制人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖和迁移

目的观察大蒜素对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、迁移的影响,并探讨其相关作用机制。方法培养CAL-27细胞分为阴性对照组,阳性对照(40μg·mL~(-1)顺铂)组, 15、 30和60μg·mL~(-1)大蒜素组,采用CCK-8法、平板克隆形成及Transwell法检测细胞增殖和迁移情况,采用Western blot和RTPCR法检测细胞生存素(survivin)、胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白和m RNA表达水平。结果与阴性对照组比较,阳性对照组和30、 60μg·mL~(-1)大蒜素组CAL-27细胞增殖被显著抑制,克隆形成数减少,细胞迁移能力显著降低(P <0.05, P <0.01),且60μg·mL~(-1)大蒜素组与阳性对照组作用相似(P> 0.05)。与阴性对照组比较, 60μg·mL~(-1)大蒜素组CAL-27细胞survivin、ICAM-1、 MMP-2和MMP-9蛋白和m RNA表达水平显著下调(P <0.05, P <0.01)。结论大蒜素可抑制CAL-27细胞增殖、迁移,其作用机制可能与下调survivin/ICAM-1/MMP信号通路有关。     

长链非编码 RNA HOTAIR 影响人舌鳞癌细胞 Tb3.1 增殖与凋亡的体内外研究

目的 研究长链非编码 RNA HOTAIR 对人舌鳞癌细胞系 Tb3.1 增殖与凋亡的影响 。 方法 使用 HOTAIR siRNA（siHOTAIR）敲低 HOTAIR 的表达; 实验分为 siHOTAIR 组、无义序列组和空白对照组。 前 2 组分别用 siHOTAIR 和无义序列转染舌鳞癌细胞, 空白对照组细胞不做任何处理。 实时定量 PCR 检测 HOTAIR 的表达水平; 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 Tb3.1 细胞增殖; Western blot 检测 B 细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、BAX 的表达; 流式细胞仪检测细胞凋亡; 平板克隆形成实验检测细胞增殖情况;并行细胞衰老检测 。 动物实验建立 Tb3.1 裸鼠皮下荷瘤模型, 通过免疫组织化学染色及 TUNEL 法评价干扰 HOTAIR 后对 Tb3.1 细胞增殖、凋亡的作用。 结果 siHOTAIR 处理后 HOTAIR 的表达水平降低; Western blot 结果示 Cleaved Caspase-3 和 BAX 表达水平升高, Bcl-2 表达水平降低。 MTT 结果显示 siHOTAIR 组细胞增殖受到抑制;流式细胞示 siHOTAIR 组细胞凋亡升高; 细胞衰老实验显示 siHOTAIR 组细胞衰老数目增加; 免疫组化结果显示, siHOTAIR 组较对照组 Ki-67、Bcl-2 表达减少, Caspase-3、BAX 表达增加; TUNEL 结果显示, siHOTAIR 组较空白对照组肿瘤细胞凋亡水平升高。 结论 干扰 HOTAIR 可以促进舌鳞癌细胞的凋亡并抑制其增殖, HOTAIR 可以作为舌鳞癌治疗的研究方向。     

苏黄止咳胶囊对老年患者动态血压的影响

目的观察苏黄止咳肢囊对老年患者动态血压的影响。方法对80例老年感冒后咳嗽患者于应用苏黄止咳胶囊前、应用后第3天和第7天进行动态血压监测各参数进行对比分析,包括24 h平均收缩压（24hSBP）、24h平均舒张压（24hDBP）、日间平均收缩压 （dSBP）、日间平均舒张压（dDBP）、夜间平均收缩压（nSBP）、夜间平均舒张压（nDBP）和昼夜平均动脉压差值百分率（d-nMAP/dMAP）。结果用药后第3天和第7天动态血压24hSBP,24hDBP,dSBP, dDBP, nSBP,nDBP和d-nMAP/dMAP与用药前的比较无统计学差异 （p〉0.05）。结论苏黄止咳胶囊可以安全用于无高血压、心脏病及肝肾肺疾病的老年感冒后咳嗽患者。     

海嘧啶注射剂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机理。方法：采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响，采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源，结果：海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡，升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i浓度，[Ca^2 ]i升高来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放，结论：海嘧啶的抗肿瘤作用机理为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i，启动细胞凋亡机制，从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

线粒体分裂在甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、凋亡以及侵袭中的作用

目的研究线粒体动力学蛋白Mfn2和Drp1在甲状腺鳞癌SW579细胞中的表达和线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)对SW579细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法采用RT-PCR检测Mfn2和Drp1 m RNA,Westernblot检测Mfn2和Drp1蛋白在Nthy-ori 3-1和SW579两种细胞中的表达;然后将SW579分为对照组(DMSO,0.1%)和Mdivi-1低、中、高剂量组(浓度分别为15、30、45μmol/L),培养16 h,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的变化,用RT-PCR检测细胞色素C(Cyt C)和Caspase-3 m RNA的变化,Westernblot检测Cyt C和Caspase-3蛋白的变化,用Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果与Nthy-ori 3-1细胞系相比,SW579细胞系中Mfn2 m RNA和蛋白表达明显降低,Drp1 m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);与对照组相比,Mdivi-1各组SW579细胞存活率和线粒体膜电位均明显降低,Cyt C和Caspase-3的m RNA及蛋白表达均明显增加,侵袭能力明显减弱(均P<0.01),并且呈药物浓度依赖性。结论甲状腺鳞癌SW579细胞中存在线粒体动力学异常,Mdivi-1可以抑制此细胞的增殖和侵袭,并能诱导其凋亡。     

尼美舒利对人食管癌细胞Eca-109 COX-2表达及生长的抑制作用

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞株COX-2表达和细胞增殖及凋亡的影响。方法MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;流式细胞仪检测COX-2蛋白表达、细胞周期时相分布及凋亡率的变化;光镜和琼脂糖电泳法进一步观察细胞凋亡。结果尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和浓度依赖性;呈浓度依赖性下调Eca-109细胞COX-2 mRNA及蛋白表达;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,增殖指数降低,凋亡细胞增多。结论尼美舒利可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

长链非编码RNA UCA1对人下咽鳞状细胞癌FaDu 细胞增殖、侵袭、凋亡及周期的影响

摘要：目的探讨长链非编码RNA尿路上皮癌抗原1（lncRNA UCA1）对人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞增殖、侵袭、凋亡及周期的影响。方法向FaDu细胞转染UCA1-siRNA（si-UCA1组）,以转染阴性干扰RNA为阴性对照组（si-NC组）,以未转染组为空白对照组（Control组）,通过实时荧光定量PCR确定UCA1-siRNA的干扰效果;通过CCK-8实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术分别检测UCA1-siRNA对FaDu细胞增殖、侵袭以及细胞周期的影响;Western blot实验检测UCA1-siRNA对FaDu细胞增殖、凋亡及周期相关因子Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase 9、cyclin D1和PCNA蛋白表达的影响。结果si-UCA1可有效下调FaDu细胞中UCA1的表达,与Control组及si-NC组相比,si-UCA1组FaDu细胞增殖及侵袭能力显著降低,G1期细胞比例显著升高,S期及G2期细胞比例显著下降,凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase 9表达水平显著升高,Bcl-2表达水平显著下调,细胞周期、增殖相关蛋白cyclin D1、PCNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论下调lncRNA UCA1的表达可抑制下咽鳞状细胞癌FaDu细胞增殖、侵袭能力,阻滞细胞周期,并可促进FaDu细胞凋亡。     

Study on preliminary mechanism of apoptosis in HepG-2 by CSA

Objective To study on the mechanism of killing and apoptosis inducing effect of total alkaloid in the CSA(Capparis spinosa L.alkaloid,CSA)on human hepatocarcinoma cell Line HepG-2.Methods The killing effect of the CSA on human hepatocarcinoma cell Line HepG-2 was measured by MTT method.Morphological observation of the HepG-2 cells was completed by fluorescence microscope.The apoptosis inducing effect and changing of mitochondria membrane potential of the CSA on the HepG-2 cells were measured by flow cytometry.In addition,effect of intracellular Ca2+ level of the CSA on the HepG-2 cells was studied by laser confocal microscope.Results The CSA has obvious cytotoxicity on the HepG-2 and seems to be dose-dependent,and its IC50 value is 162.4 μg·mL-1.The HepG-2 cells have characteristic morphologic changes of apoptosis by the function of CSA,and the apoptosis percentage is higher than the natural one.The progress of cells cycle from S phase to G2 phase has been blocked,and the mitochondria membrane potential is markedly decreased,and the intracellular Ca2+ level is increased by the function of CSA.Conclusions The CSA has obviously killing and apoptosis inducing effect on human hepatocarcinoma cell Line HepG-2 by the mechanism of decreasing the mitochondria membrane potential and increasing the intracellular Ca2+ level.     

Resveratrol inhibits oral squamous cell carcinoma cells proliferation while promoting apoptosis through inhibition of CBX7 protein

As a natural compound, resveratrol (Res) is confirmed to be promising drug for the treatment of malignant tumors. Therefore, our study aimed to observe the impacts of Res on the proliferation and apoptosis of oral squamous cell carcinoma cells (HSC‐3 cells) as well as the mechanism involving chromobox protein homolog 7 (CBX7) signal transduction. HSC‐3 cells were treated with Res, Akt agonist (AL3818) and p16 inhibitor (SC79), and transfected with CBX7 mimics and inhibitor plasmids. The CCK‐8 assay was used to detect cell proliferation, flow cytometry was performed to assess cell cycle and apoptosis, and cell colonies and histone DNA level were also measured. Western blot analysis was used to determine the expression levels of related proteins. HSC‐3 cells showed decreased cell proliferation, colonies, BrdU‐counled cells and increased apoptosis, histone DNA level, the activities of caspase‐3 and caspase‐9 when treated with Res. Western blot analysis revealed elevated Cle‐PARP and Cle‐caspase 3 expression and reduced t‐PARP expression in HSC‐3 cells treated with Res compared with control. AL3818 and SC79 could decrease the inhibitory effects of Res on the growth of HSC‐3 cells. Furthermore, CBX7 overexpression could also partly reverse the roles of Res in the growth of HSC‐3 cells, and Akt and p16 signal transduction. Our results demonstrate that Res suppresses the proliferation, and induces the apoptosis of oral squamous cell carcinoma cells through the inhibition of CBX7/Akt and the activation of p16 cascades.