食管癌组织中KAI1、EphA2蛋白的表达及其意义

目的探讨KAI1蛋白和EphA2蛋白的表达与食管癌发生及浸润转移的关系以及两者表达的相关性。方法采用免疫组化方法,检测160例食管癌组织及其150例正常黏膜中KAI1和EphA2蛋白的表达。结果KAI1蛋白在癌组织中的表达明显低于其正常黏膜（P〈0．05）,在有淋巴结转移病例中的表达明显低于无淋巴结转移病例（P〈0．05）,KAI1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度无关（P〉0．05）。EphA2蛋白在食管癌组织中的表达明显高于其正常黏膜（P〈0．05）,在深层浸润组的表达明显高于浅层浸润组（P〈0．05）,在有淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）,EphA2蛋白的表达与肿瘤的分化程度无关（P〉0．05）。KAI1蛋白和EphA2蛋白的表达在有淋巴结转移的病例中有显著负相关（P〈0．05）。结论 KAI1蛋白的低表达和EphA2蛋白的高表达与食管癌的癌变及转移的发生有关,两者对于食管癌的淋巴结转移具有负向调节作用。     

p21WAF1基因表达对人骨肉瘤预后的价值

目的 探讨骨肉瘤组织中p21^WAF1基因的表达与骨肉瘤生物学特性及预后的关系。方法 采用原位杂交及免疫组织化学（LSAB法）检测p21^WAF1mRNA及p21蛋白在45例骨肉瘤、10例骨纤维结构不良实体瘤组织标本的表达。结果 （1）p21蛋白阳性表达率在骨肉瘤中为17．7％（8／45）;（2）骨肉瘤组织高分化组与低分化组的p21蛋白阳性表达率之间的差异有统计学意义（40．0％,11．4％,X^2=4．34,P〈0．05）;（3）p21^WAF1mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42．2％（19／45）,骨肉瘤组织高分化组与低分化组的p21^WAF1mRNA阳性表达率之间的差异有统计学意义（60．0％,37．1％,X^2=20．6,P〈0．01）;（4）p21^WAF1mRNA表达阳性者术后生存时间高于表达阴性者术后生存时间（P〈0．05）。结论 （1）随着骨肉瘤恶性度的升高,p21^WAF1基因mRNA及p21蛋白的表达下降。（2）p21WAF1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对评价患者的预后有一定价值。     

卵巢上皮性肿瘤中Skp2、p27kipl、E-cad的表达

目的检测Skp2、p27kipl和E-cad在卵巢上皮性肿瘤中的表达情况及其相互关系。方法采用免疫组化SP法，检测99例卵巢上皮性肿瘤组织中Skp2、p27kipl及E-cad的表达。结果p27kipl在卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤的表达率分别为76．5％、70．6％高于卵巢癌29．2％（P〈0．05），在早期癌中的表达高于晚期癌（P〈0．05）。Skp2在卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤的表达率分别为0、23．5％，均低于卵巢癌50．8％（P〈0．05），在早期癌的表达低于晚期癌（P〈0．05）。卵巢癌中skp2表达与组织分化有关，在低分化癌的阳性表达率高于高分化癌（P〈0．05），在组织学类型方面，浆液性癌中skp2的阳性表达率高于非浆液性癌（P〈0．05）。E—cad在良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌表达率分别为88．2％、82．4％、55．4％，恶性组低于良性组（P〈0．05）。E—cad在早期癌的表达率高于晚期癌（P〈0．05）。Skp2表达与p27kipl表达呈负相关（P〈0．05），E-cad表达与p27kipl表达呈正相关（P〈0．05），而E-cad表达与Skp2表达则呈负相关（P〈0．05）。结论skp2过度表达与p27kipl表达减少可能与卵巢上皮性肿瘤的发生发展密切相关，而E-cad在晚期卵巢癌中表达降低可能反映了卵巢癌分化程度的降低。     

实时荧光定量PCR检测MMP-3 mRNA在大肠癌的表达

目的探讨大肠癌组织MMP-3 mRNA表达及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR检测56例大肠癌组织及癌旁正常组织MMP-3 mRNA表达，分析MMP-3 mRNA表达与大肠癌临床病理因素之间的关系。结果癌组织和癌旁正常组织MMP-3 mRNA表达有显著差异（P〈0．05）。癌组织MMP-3 mRNA表达与淋巴结转移、组织学类型、血管侵犯、肝转移及肿瘤病理分期密切相关（P〈0．05），与肿瘤部位、肿瘤大小、及患者的性别和年龄等无关（P〉0．05）。结论MMP-3高表达同大肠癌生物学行为密切相关，可能与大肠癌的发生、发展及预后有关联。     

口腔鳞癌组织中P15和P21的表达研究

目的探讨p15和p21基因的蛋白产物在口腔鳞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化P—V法检测108例口腔鳞癌和10例正常口腔黏膜组织中P15和P21蛋白的表达，并将结果进行统计分析。结果口腔鳞癌组织中P15蛋白的阳性表达率低于正常口腔黏膜组织（P〈0．05），而P21蛋白的阳性表达率两组间无明显差异（P〉0．05）；口腔鳞癌中，Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌P15蛋白的阳性表达率明显低于Ⅰ、Ⅱ期口腔鳞癌的表达率（P〈0．01），无颈淋巴结转移组P15蛋白表达水平比有转移组高（P〈0．05）；P21阳性表达率在不同性别组中的表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论P15蛋白的表达与口腔鳞癌的临床分期及淋巴结转移有关，P15蛋白表达水平可作为临床评估口腔鳞癌恶性程度、转移和预后的参考指标。     

环氧化酶-2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨环氧化酶-2（COx-2）在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用链霉素抗生物素卵白素-过氧化物酶（SP）法进行免疫组化染色，观察43例结直肠癌组织和14例正常大肠组织中COX-2的表达情况。结果：COX-2在83．72％的结直肠癌组织中表达，仅在14．29％的正常大肠组织中表达（P〈0．005）。COX-2表达水平与肿瘤Duke’s分期、大小、淋巴结转移呈正相关（P〈0．05），而与肿瘤分化程度、位置、浸润深度及患者性别无明显相关性（P〉0．05）。结论：COX-2在结直肠癌组织中过表达，可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用。     

血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制

目的：检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化，以探讨血小板第4因子（PF4）对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制。方法：雄性BALB／c小鼠随机分为3组，第1组（正常对照组）、第2组（单纯照射组）、第3组（PF4保护组），第3组在照射前26h及20h腹腔注射PF440μg／kg，第2、3组全身一次性5Gy ^60Co-γ射线照射，照射后4h取小鼠骨髓细胞，Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化。结果：第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高，而Cyclin D1、CDK4则明显降低（P〈0．05）；第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异（P〈0．05），而Cyclin D1与CDK4无统计学意义（P〉0．05）。结论：p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用。     

幽门螺旋杆菌感染性胃癌组织中Cyclin D1、MMP-9的表达及意义

目的探讨幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,HP)感染性胃癌组织中Cyclin D1、MMP-9的表达及临床意义。方法收集重庆市肿瘤医院手术切除的胃癌组织104例,分为HP阳性组(n=56)和HP阴性组(n=48),另收集40例癌旁正常胃组织作为对照组。采用免疫组化SP法检测各组中Cyclin D1和MMP-9蛋白的表达,分析两者表达与胃癌临床病理特征、HP感染的关系及其对预后的影响。结果 HP阳性组Cyclin D1和MMP-9阳性率高于HP阴性组和对照组,差异有统计学意义(P 0. 017);临床分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低、有淋巴结转移者的Cyclin D1和MMP-9阳性率明显高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期、分化程度高、无淋巴结转移者(P 0. 05); Cyclin D1和MMP-9均与HP感染呈正相关(rs=0. 504,rs=0. 532,P均0. 05); HP阳性、Cyclin D1和MMP-9阳性者生存期均显著较短(P均0. 05)。结论 Cyclin D1和MMP-9在HP感染性胃癌组织中表达上调,与HP共同促进胃癌的发生、发展,影响预后。     

Six1和Six4在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与预后的关系北大核心CSCD

目的探讨Six1和Six4在食管鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法应用组织芯片技术、免疫组织化学EnVision法检测Six1和Six4在292例食管鳞癌组织及其相应的癌旁正常食管上皮组织中的表达水平,分析两者表达与临床病理特征及预后之间的关系。结果在292例食管鳞癌患者中,Six1、Six4蛋白在癌组织的阳性率分别为72．9％（213／292）和56．2％（164／292）,明显高于癌旁正常组织的阳性率,分别为33．2％（97／292）和32．5％（95／292）,差异具有统计学意义（P〈0．05）。X2检验结果显示Six1蛋白表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度及生存状态相关,其在死亡组患者的阳性率82．3％（130／158）,明显高于生存组阳性率61．9％（83／134,P〈0．05）。Six4蛋白表达与肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度相关,肿瘤分化程度越高、浸润深度越深其阳性率越高。单因素Log-rank分析显示性别、TNM分期、Six1蛋白表达与食管鳞癌患者的总生存率相关（P〈0．05）。Six1蛋白表达阴性组5年生存率51．9％（41／79）高于阳性组的43．7％（93／213）,差异具有统计学意义（X^2=4．079,P=0．043）,其他临床参数与预后均未显示统计学意义（P〉0．05）。多因素Cox比例风险模型分析显示,TNM分期、Six1蛋白表达水平是影响食管癌术后患者预后的独立因素（P〈0．05）。结论Six1和Six4蛋白在食管鳞癌组织中均高表达,其表达水平与食管鳞癌发生发展及预后密切相关,Six1蛋白高表达是食管鳞癌患者预后不良的因素,可作为临床预测食管鳞癌患者预后的一个重要指标。     

喉癌中STK15基因扩增及表达的研究

目的研究喉癌中5TK15基因扩增、mRNA和蛋白表达增高在喉癌发生、发展中的作用。方法应用差异PCR方法检测40例喉鳞状细胞癌及癌旁正常对照组织5TK15基因扩增的情况；应用逆转录-PCR方法检测同批标本STK15mRNA表达情况；用免疫组织化学方法分析STK15蛋白表达。结果肿瘤组织中5TK15基因扩增率为35％（14／40）；STK15 mRNA表达增高占67．5％（27／40）；STK15蛋白表达的阳性率为72．5％（29／40）；将扩增与表达的结果与喉癌患者的临床各项指标进行统计学分析，5TK15基因扩增、STK15mRNA表达增高与肿瘤的分化程度显著相关（P〈0．05）；STK15蛋白表达与肿瘤的分化程度和病理分级显著相关（P〈0．05）。结论喉癌中5TK15基因扩增、mRNA和蛋白表达水平增高，导致中心体复制异常、染色体不稳定。可能在喉癌的发生及恶性进展中起一定作用。     

脑胶质瘤中β-catenin和细胞周期素D1表达的意义

目的:研究β-catenin与Cyclin D1蛋白在脑胶质瘤的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学SABC法检测49例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达.男30例, 女19例, 年龄12～75岁, 平均42.56岁.结果:在正常脑组织和脑胶质瘤中, β-catenin蛋白阳性的比例分别为2/5和38/49(P<0.01), Cyclin D1蛋白阳性的比例分别为1/5和42/49(P<0.01);比较β-catenin和Cyclin D1在脑组织、低级别脑胶质瘤和高级别脑胶质瘤中的光密度值, 发现发现各组之间均存在着统计学差异(P<0.05或P<0.01);β-catenin的过度表达与Cyclin D1的过度表达显著相关(r=0.6395, P<0 05).结论:脑胶质瘤细胞β-catenin与Cyclin D1表达增强, 可能参与胶质瘤的发生.     

Cyclin D1蛋白表达与卵巢癌转移相关性研究

目的:探讨细胞周期蛋白(CyclinD1)表达与卵巢癌转移的相关性和CyclinD1与P21WAF1、P53蛋白的关系。方法:应用蛋白免疫印迹技术(Westernblot)检测61例人卵巢癌组织及7例卵巢非癌组织中CyclinD1、P53及P21WAF1蛋白的表达。结果:卵巢癌组织中CyclinD1和P53蛋白表达率均明显高于卵巢非癌组织(P<0.05);P21WAF1蛋白表达卵巢癌组织低于卵巢非癌组织(P>0.05)。CyclinD1与P53及P21WAF1蛋白表达与卵巢癌组织类型无关(P>0.05)。P21WAF1蛋白表达与卵巢癌的临床分期相关(P<0.05),CyclinD1、P53蛋白表达与卵巢癌的临床分期无关(P>0.05)。CyclinD1、P53及P21WAF1蛋白表达与卵巢癌转移相关(P<0.05)。结论:CyclinD1蛋白表达与卵巢癌肿瘤转移相关,CyclinD1与P21WAF1、P53蛋白在卵巢癌发生、发展中可能有一定作用,但不起协同作用。     

应用丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化对肿瘤细胞周期相关蛋白的调控作用

目的 探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰水平对肿瘤细胞增殖周期相关蛋白Cyclin A、Cyclin DI、Cyclin E和P21waf/cipl的调控作用. 方法 应用0.75～4.00 mmol/ VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48 h后,PI标记流式细胞术检测细胞周期;间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21waf/cip1蛋白表达;RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21waf/cip1 mRNA表达. 结果 HepG2、BGC-823、MCF-7这3种细胞系培养48 h后,流式细胞术分析可见0.75～4.00 mmol/L、VPA实验组随药物浓度的增加而出现逐渐递增的细胞增殖周期G1期阻滞趋势.HepG2、BGC-823细胞Cyclin A蛋白及mRNA表达被明显下调;MCF-7细胞Cyclin A蛋白及mRNA表达在两个浓度组均未见明显变化;Cyclin D1蛋白及mRNA表达在3个细胞系均被明显下调;P21waf/cip1蛋白及mRNA表达在3个细胞均被明显上调;Cyclin E蛋白及mRNA表达则未见明显变化. 结论 应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰可对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Cyc-lin D1、P21waf/cip1表达起明显的调控作用;对Cychn A的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,而对Cyclin E则无明显的调控作用.在VPA诱导肿瘤细胞增殖周期G1期阻滞过程中,下调CyclinD1和上调P21waf/cip1蛋白及mRNA表达可能是其共同作用途径.     

脱落酸抑制人肝癌细胞增殖

目的探讨脱落酸抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖作用的机制。方法免疫细胞化学检测P53、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达;RT-PCR检测P53和端粒酶mRNA表达。结果经脱落酸(ABA)、环六亚甲基二乙酰胺(HMBA)和ABA HMBA作用后细胞内mtP53、Cyclin D1、Ki-67及细胞内mt P53、hTERT mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论ABA抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖,其作用机制可能是调控细胞周期,降低mtP53、Ki-67、Cyclin D1蛋白及mtP53,hTERT mRNA表达。     

miR-409-3p靶向CXCL9调控滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对滋养层细胞增殖、迁移和侵袭影响及作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测正常妊娠胎盘组织和子痫前期胎盘组织中miR-409-3p和干扰素伽玛诱导的单核细胞因子(CXCL9)mRNA表达水平,蛋白印迹(Western blot)法检测CXCL9蛋白表达水平。转染miR-409-3p模拟物或CXCL9小干扰RNA至滋养层细胞HTR8/SVneo,构建miR-409-3p过表达或CXCL9表达抑制的HTR8/SVneo细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-409-3p与CXCL9调控关系。结果与正常妊娠胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中miR-409-3p水平升高(P<0.05),CXCL9 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。miR-409-3p过表达或干扰CXCL9表达后,HTR8/SVneo细胞培养48 h和72 h后OD值、迁移和侵袭数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),p21蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-409-3p在HTR8/SVneo细胞中靶向负调控CXCL9表达。CXCL9过表达逆转了miR-409-3p过表达对HTR8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 miR-409-3p抑制HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭与下调CXCL9表达有关。     

肾癌中cyclinD1和p27kip1的表达及其意义

目的探讨cyc lin D1、p27k ip1在普通型肾细胞癌(renal cell carc inom a,RCC)发生、发展中的作用。方法用半定量RT-PCR方法检测25例普通型RCC和10例肿瘤远端的正常肾组织中cyc lin D1的mRNA含量,用免疫组化方法检测76例普通型RCC中cyc lin D1和p27k ip1蛋白的表达,并对cyc lin D1、p27k ip1蛋白表达与临床病理参数的关系进行分析。结果普通型RCC中cyc lin D1的mRNA含量0.488±0.399,高于正常对照组0.089±0.066(P<0.01)。cyc lin D1的表达与肿瘤体积大小有关,体积大者cyc lin D1高表达(P<0.05)。普通型RCC中p27k ip1表达低于正常对照组,随着p27k ip1表达的降低,肿瘤的细胞核Fu-hrm an分级、TNM分期增高。结论cyc lin D1高表达和p27k ip1的低表达与普通型RCC的发生有关;p27k ip1的低表达可能促进肿瘤的演进,p27k ip1的表达可作为评价普通型RCC预后的参考指标。     

食管鳞癌组织中miRNAs差异表达谱的筛选及研究

目的 筛选并鉴定在食管鳞癌（ESCC）及癌旁组织中miRNAs的差异表达,为进一步阐明其在ESCC发病机制中的作用奠定基础。方法 选取在邯郸市第一医院行食管癌切除术患者新鲜的鳞癌组织及癌旁正常组织,各3例,抽提总RNA,利用miRNAs芯片筛选其中差异表达的miRNAs,并对miR-106b-3p通过进一步RT-qPCR 技术进行验证。结果 miRNAs芯片从配对组织中共筛检出62个差异表达的miRNAs,其中41个miRNAs表达上调,21个miRNAs表达下调,鳞癌组织与癌旁正常组织中差异表达的miRNAs比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。miR-106b-3p在ESCC组织中的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）,与芯片结果一致。结论 食管鳞癌组织中miRNAs的差异表达为进一步研究miRNAs在ESCC发病中的作用奠定了基础;miR-106b-3p的高表达可能与ESCC的发生、发展有关。     

Overexpression and localization of cyclin D1 mRNA and antigen in esophageal cancer.

We examined the expression of cyclin D1 mRNA in two human carcinoma cell lines (A431 and TT) and 17 specimens of esophageal cancer with in situ hybridization. Cyclin D1 mRNA was overexpressed in the cytoplasm of cancer cells that showed cyclin D1 gene amplification by Southern blot hybridization. Cyclin D1 antigen was overexpressed in the nucleus of these cancer cells. The distribution of cyclin D1 mRNA-positive cells was similar to that of cyclin D1 antigen-positive cells in the cancer tissues. We then attempted to correlate overexpression of cyclin D1 antigen and prognosis, by using 55 formalin-fixed, paraffin-embedded specimens of esophageal cancer. The overall 5-year survival of patients with strongly staining tumors was significantly lower than that of patients with weakly or nonstaining tumors (7 versus 59%; P < 0.01). There was no significant correlation between cyclin D1 expression and other clinicopathological factors. These results suggest that cyclin D1 may play an important role in carcinogenesis and that cyclin D1 overexpression may be a useful prognostic factor in esophageal cancer.     

miR-211 对上皮性卵巢癌细胞HO8910 增殖及细胞周期相关蛋白的影响

目的:探讨miR-211 与上皮性卵巢癌发生的关系,及其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:对30 例上皮性卵巢癌组织标本及卵巢癌细胞系HO8910 中miR-211、Cyclin D1 和CDK6 表达情况进行研究,同时选取30 例非卵巢癌患者组织标本及正常卵巢上皮细胞株IOSE80 作为对照,并分析上皮性卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中miR-211、Cyclin D1、CDK6 表达情况及表达相关性;miR-211 对卵巢癌细胞增殖,以及对Cyclin D1 和CDK6 表达的影响。结果:卵巢癌组织miR-211 相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),卵巢癌细胞中miR-211 相对表达水平显著低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05);在上皮性卵巢癌细胞系HO8910 中,第3 天和第4 天miR-211 组细胞数显著低于miR-Ctrl (P<0.05);上皮性卵巢癌组织中Cyclin D1、CDK6相对表达水平显著高于正常卵巢上皮组织(P<0.05);上皮性卵巢癌细胞系中miR-211 显著抑制Cyclin D1 和CDK6 的表达;在卵巢癌组织中,Spearman 相关性分析结果显示miR-211 和Cyclin D1 和CDK6 相对表达水平呈负相关(r =-0.583,P =0.010)。结论:miR-211 可抑制卵巢癌细胞增殖,并抑制周期相关蛋白Cyclin D1 和CDK6 的表达,miR-211 与周期相关蛋白Cyclin D1 和CDK6 在卵巢癌发生中可能存在调控关系。