SARS 25例临床诊断患者血浆特异性抗体和病毒的动态检测

目的 动态检测SARS患者血浆特异性IgM和IgG以及SARS冠状病毒(SARS-CoV)的变化规律。方法 用酶联吸附免疫法对25例145份SARS临床诊断患者血浆特异性IgM和IgG进行定性检测,用RT-PCR对其中114份血浆进行SARS-CoV定性检测。结果 IgM和IgG抗体的阳性样本检出率分别为49．0％(71／145)和54．5％(79／145),阳性患者检出率均为84．0％(21／25),两种抗体大多在发病第2～4周产生,前5周检出率相近,均呈上升趋势,以后IgM抗体检出率开始下降,IgG抗体检出率则继续上升。血浆SAPS-CoV阳性样本检出率为15．8％(18／114),阳性患者检出率为40．0％(10／25),多为发病后4周内采集的样本,抗体检测阴性或初次阳性。结论 血浆特异性抗体以及SARS-CoV检测可作为SARS的确诊依据;抗体产生后大多数病人血浆病毒很快转阴,但有个别病人在抗体产生2～3周后仍能在血浆中检测到病毒序列。     

SARS多脏器穿刺组织病理学及超微结构的研究

目的　探讨严重急性呼吸综合征 (SARS)病理学改变和超微结构特点及其与临床病程的关系。方法　应用光镜、组织化学、透射电镜、免疫组化和间接免疫荧光法对病程为 3～ 5周的 4例中晚期SARS死亡病例多器官穿刺组织 (肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、胃)进行研究。结果　SARS死亡病例肺部病理改变以肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化等机化性肺炎表现为主要特征 ,同时有弥漫性肺泡损伤和脱屑性肺炎改变。脾脏内CD3和CD2 0阳性淋巴细胞减少 ,CD6 8阳性的组织细胞和S 10 0阳性的树突状细胞增多。骨髓粒细胞系统增生减退。在肺泡Ⅱ型上皮细胞、血管内皮细胞和脾脏淋巴细胞胞质内可见多种类型的冠状病毒样颗粒 ,大小均为 6 0～2 2 0nm ,有包膜 ,表面似有纤突样结构 ,以具有同心圆外膜、低电子密度核心的A型病毒颗粒和具有高电子密度核心的C型病毒颗粒为多见。间接免疫荧光法血清检测 4例病人SARS病毒IgGAb均呈明确阳性反应。结论　SARS是由新型冠状病毒引起的急性呼吸道传染病 ,主要靶器官是肺脏和免疫器官。SARS不同病程死亡病人的肺部病理学改变有不同的特征。     

严重急性呼吸综合征临床分期与分型特点及其意义探讨

目的　研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者临床分期与分型特点 ,以便更好地指导临床治疗。方法　采用SPSS 11 0及SDAS软件回顾性地分析 330例临床确诊的SARS患者的临床特征 ,提出具体的分期、分型方案及其各自的特点。结果　SARS患者的临床表现分为 4期 ,即潜伏期、初期、极期及恢复期。潜伏期 112 (5 70± 2 4 5 )天。初期 :为病程的第 110 (3 98± 2 4 8)天 ,以发热为首发症状 ,常无上呼吸道卡他症状 ,胸片无异常。极期 :包括肺部炎性渗出、肺实变和多器官衰竭 (MOF) 3个阶段。肺部炎性渗出阶段可表现为呼吸功能不全 ,约 95 %的患者为病程的第 2 3周 ,持续时间为 12 1天。主要特点为明显咳嗽 ,可有轻度的呼吸困难和低氧血症 ,X线表现为云雾状或斑片样小片状、片状阴影 ;肺实变阶段大多出现I型呼吸衰竭 ,呼吸困难更突出 ,低氧血症更明显 ,双肺弥漫性实变 ,呈磨玻璃样改变。恢复期 :大多在病程第 3周后 ,时间为 5 5 6 (2 4 37± 8 81)天。该期又可分为两期 ,即Ⅰ期 (完全恢复 )和Ⅱ期 (很可能存在肺纤维化)。SARS临床分型分为轻型 (普通型 )、重型及极重型(暴发型 )。3型的临床特征差异很大 ,病死率分别为零、5 76 %和 6 1 5 4%。结论　由 330例患者的病例资料经详细分析所得SARS的分期和临床分型较     

SARS病毒全基因组芯片在临床检测中的应用

目的：利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸，为SARS病毒核酸的诊断提供线索。方法：提取SARS患者血、便和痰样本中的冠状病毒RNA，经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针，与SARS病毒全基因组芯片进行杂交，同时用体外培养的病毒RNA和从健康人分离的白细胞的RNA分别做阳性和阴性对照，杂交后的芯片用Axon4100A扫描仪扫描和分析。结果：SARS患者的3种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在，与整个病毒基因组比较大都为一些不连续的片断。其中痰和便标本中的基因谱较为相似，并且发现编码S1蛋白的核酸在多数痰和便标本中是连续的。结论：冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸，同时能够监测不同样本中该病毒全基因组变化的特点，初步显示该芯片用于临床检测的可行性。     

SARS冠状病毒对心脏及其传导系统影响的病理学研究

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法 应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法,对6例SARS死亡患者的心脏组织及其中1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果 SARS患者的心脏损伤表现为心肌细胞空泡变性、萎缩和少数心肌细胞肌浆溶解,心肌问质轻度水肿、少量炎细胞浸润及轻度小血管炎;Macchiavello染色示心肌细胞胞质内偶见病毒包涵体;核酸原位杂交示少部分心肌细胞及心脏传导系统特化心肌细胞内呈现明确的冠状病毒(SAPS-CoV)阳性杂交信号。结论SARS-CoV不仅能够感染心肌细胞,而且可感染心脏传导系统中的特化心肌细胞,可引起心脏轻度病毒性心肌炎性改变。该研究结果为解释临床上SARS患者心律失常和心肌酶谱异常提供了重要的病理学依据。     

放射与SARS

SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)严重急性呼吸综合症，又称传染性非典型肺炎。危及人类的安全和生命，势如狂飚，凶猛异常，肆虐全球。至今被感染者已超过7000人，分布在33个国家，死亡率在4．8％～5．8％之间，已经夺走了500多人的生命。它对人类的打击突如其来，始料不及。病毒     

严重急性呼吸综合征康复者冠状病毒特异性抗体定量检测与分析

目的　检测SARS患者体内冠状病毒特异性抗体IgG、IgM的含量。方法　抽取 2 2例SARS康复者不同康复时期的血液 ,经病毒灭活后分离血清 ,用ELISA法对SARS病毒特异性抗体IgG、IgM进行检测。结果　IgG类抗体在所有康复者体内都呈阳性 ,且检测到康复 71天的患者该类抗体仍然没有衰减 ;IgM类抗体在康复 5 0天的部分患者 (5 / 2 2 ,2 2 73%)中仍呈阳性 ,而在 6 5天时则全部为阴性。对照组 2 2例 ,两类抗体全部为阴性。结论　可能所有SARS康复者体内都产生了冠状病毒特异的IgG类抗体 ,并且这种抗体可能持续较长时间。     

再次从SARS患者肺组织中分离与检出呼肠病毒

我们已报道从北京市第 1例SARS患者及其母亲的咽拭子中分离、检出呼肠病毒[1 ] 。在透射电镜下 ,发现感染细胞胞浆内有典型的晶格状排列的病毒颗粒和病毒包涵体。血清学、RT_PCR和核酸序列分析证实是一种独特的呼肠病毒 (呼肠病毒科正呼肠病毒属 )。初步动物实验显示该病毒可导致小鼠非典型肺炎的发生和死亡。最近 ,我们又从北京市佑安医院 1例SARS患者 (2 0 0 3年 6月 7日死亡 )病理尸检的肺组织标本中分离、检出呼肠病毒。透射电镜观察可查见在感染细胞核周胞质内有大小不等、无定形的病毒包涵体。包涵体由中等致密的细丝状病毒浆 (…     

新分离的冠状病毒与严重急性呼吸综合征病原关系的研究

目的　确定新分离的冠状病毒与目前流行的严重急性呼吸综合征的病原关系。方法　以用细胞培养法从严重急性呼吸综合征病例标本中分离出的冠状病毒为抗原 ,通过免疫荧光染色及中和试验测定严重急性呼吸综合征患者血清中抗新分离的冠状病毒的抗体 ,分析确定新冠状病毒与严重急性呼吸综合征的病原关系。结果　在临床确诊的 1 1 3份严重急性呼吸综合征患者血清标本中 ,99份检测出有抗新冠状病毒的抗体。 1 0对双份血清检测结果显示 ,后采集的血清抗体效价均比发病初期采集的明显增高 ,最高的升高 1 2 8倍。中和试验结果证明 ,病人血清抗体能够中和新分离的冠状病毒。结论　新分离的冠状病毒与此次流行的严重急性呼吸综合征密切相关 ,是目前流行的严重急性呼吸综合征的主要病原体     

重症SARS患者应用甲基强的松龙注射剂时机对疗效和不良反应影响

目的　研究甲基强的松龙注射剂的应用时机 ,对重症SARS患者疗效和不良反应的影响。方法　回顾性分析北京市小汤山医院临床确诊的 37例使用甲基强的松龙注射剂重症SARS患者的病情、用药纪录及药品不良反应发生情况 ,根据用药时机分为 3组 ,描述性分析各组病例基本病情、疗效和不良反应。结果　用药时机 >19d组的治愈率高于其他 2组 ,同时死亡率低于其他 2组 ;用药时机 0～ 9d组药物不良反应发生率为 35 .8% ,大于其他 2组 ,出院血糖高于入院血糖。结论　在重症SARS患者的治疗中 ,甲基强的松龙注射剂有着确切的疗效 ,掌握好应用时机对于重症SARS患者的治疗至关重要。     

SARS病毒基因的PCR扩增及序列测定

目的 利用RT—PCR技术检测SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及自细胞中的SARS病毒，并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。方法 采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒，抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA，进行RT—PCR和nest PCR反应，检测SARS病毒RNA，并对扩增产物进行DNA测序。结果 14例SARS疑似患者中2例咽拭子RT—PCR结果阳性，约占14％；5例临床确诊病人中2例咽拭子nest PCR结果阳性，约占40％；6例临床确诊SARS病人中1例血清nest PCR结果阳性，占17％，其他5例疑似患者结果阴性；在22份疑似患者外周血白细胞中未检测到SARS病毒；扩增产物DNA序列与美国和加拿大在GenBank中报道的序列一致。结论 RT—PCR方法是一种快速有效的SARS病毒检测手段，为临床诊断及发病机制研究提供了依据；扩增片段内未发现突变。     

SARS冠状病毒的多组织嗜性及其全基因序列的测定

目的研究SARS冠状病毒对不同组织的感染情况,了解SARS流行初期病毒的基因组序列。方法用Trizol RNA抽提试剂提取因SARS病毒感染而死亡的3例死者不同组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,然后用针对SARS病毒不同基因区间的引物进行PCR扩增,并对其中1例肺组织中病毒全序列进行了测定。结果3例病例中有2例仅在肺组织中扩增到病毒序列,另1例除在肺组织中检测到病毒外,还在气管、肾、淋巴结及肝组织中检测到病毒的存在。病毒全序列分析结果显示,该序列全长为29760个碱基,具有典型的冠状病毒序列特征,除具有RNA聚合酶基因和s、E、M和N4种结构蛋白基因外,还有另外8个蛋白编码框。经与GenBank上登录的部分其他SARS冠状病毒全序列进行比对,发现该序列除存在少量的SNP外,还多出一段29个核苷酸的序列,这段序列的存在完全改变了ORF10和ORF11两个蛋白编码框,使得在此终止的蛋白翻译能够继续进行下去,从而使ORF10和ORF11两个读框成为一个读框。结论SARS病毒具有多组织嗜性;该序列有可能是病毒从动物传到人的原始序列。     

158例流行前无偿献血者血清SARS相关冠状病毒抗体检测

目的探讨输入不稳定的血液及其制品而传播严重急性呼吸综合征(SARS)相关冠状病毒的可能性。方法采用ELISA法对158例医务工作者流行前无偿献血的血清进行SARS相关冠状病毒抗体检测,对结果阳性者及其长期接触者进行随访。结果在所有血清样本中,SARS抗体阳性2例(1．27％);阳性者本人、长期接触者以及受血者均无感染SARS的病史。结论SARS病毒既往并未在医院内流行,其感染途径不明。输入不稳定的血液制品有感染SARS的危险只是理论上的推断,随着对SARS研究的深入,其传播途径将更加明确。     

应用一步和套式PCR法检测SARS患者标本中的SARS病毒核酸序列

目的：建立敏感、特异和快速的针对SARS病毒的RT-PCR方法，为SARS的早期诊断及防治提供依据。方法：采用一步和套式PCR法对SARS患者不同标本中的SARS病毒RNA进行扩增及序列测定。结果与结论：应用外引物和内引物可分别扩增出约380bp和150bp的单一条带，其大小与预期的相一致。应用套式PCR可使检测敏感性从l0-6提高到lO-15。采用这种方法从SARS患者粪便、痰、鼻咽拭子和血液标本中均可扩增出与预期大小一致的条带，且测序结果显示该扩增片段为SARS病毒的特异序列，表明本研究建立的RT-PCR方法敏感、特异，可用于SARS的快速检测.．     

SARS冠状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达

目的构建SARS冠状病毒主要结构蛋白原核表达载体,并探讨各结构蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达情况及其病毒致病机制。方法从SARS病人组织中抽提出RNA,经RT-PCR获得SARS冠状病毒刺突蛋白(S)、核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)基因,将S基因的两个区段、N基因和M基因分别克隆至表达载体pET-32和pET-28上,转化大肠杆菌13121,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况。结果成功构建了SARS冠状病毒重组蛋白的表达载体pET32-S1、pET32-S2、pET32-N、pET32-M、pET28-S1、pET28-S2和pET28-N;N蛋白表达量最高,S2蛋白表达量次之,S1蛋白和M蛋白表达不明显。结论SARS病毒的N蛋白较容易在原核细胞中表达,而S蛋白和M蛋白可能由于有较多的半胱氨酸或跨膜区而不易在体外表达。N蛋白和S蛋白均有较好的抗原性。前者更适用于SARS的早期诊断。     

SARS冠状病毒多聚酶区抗原在感染诊断中的作用探讨

目的原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-COV）非结构蛋白RNA多聚酶表位区,了解其在SARS-COV感染诊断及作为病毒复制指标方面的意义。方法通过PCR扩增获得RNA多聚酶表位区基因,与原核表达载体pET32a＋连接,转化大肠杆菌BL-21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后,应用ELISA检测SARS患者及动物模型血清标本的IgG抗体。结果获得原核表达的RNA多聚酶表位区。ELISA检测正常人血清均阴性,SARS患者血清阳性率为95％;检测SARS病毒感染实验动物血清阳性率100％,灭活纯化病毒接种恒河猴均为阴性。结论RNA多聚酶表位区具有很好的免疫原性,可用于感染诊断的检测及作为病毒复制的指标。     

中性粒细胞防御素抗SARS冠状病毒研究

目的 检测人和兔中性粒细胞防御素的抗SARS冠状病毒活性,探讨防御素在SARS发生发展过程中的作用。方法 应用酸-尿素-聚丙烯酰胺凝胶洗脱电泳(CAU-PAGE)从人和兔中性粒细胞中分别纯化人中性粒细胞防御素(HNP—3)和兔中性粒细胞防御素(RNP1—5),通过微量培养法观察不同浓度防御素对SARS冠状病毒BJ01株感染Veto—E6细胞及病毒复制的影响。结果 用CAU-PAGE分离的HNP1—3和RNP1—5经15％SDS-PAGE电泳后在分子量4000左右呈现单一条带,HNP1—3经ELISA定量检测确认。HNP1-3和RNPl5的抗大肠杆菌(ATCC25922菌株)活性的IC50分别在25～50μg／ml和5～10μg／ml之间,保持了天然的抗菌活性。在抗SARS冠状病毒实验中,HNP1-3和RNP1—5在25～100μg／ml浓度时,不能阻断SARS冠状病毒致细胞病变效应(CPE),也不能抑制SARS冠状病毒在Veto—E6细胞中的复制。结论 天然防御素HNP1—3和RNP1—5对SARS冠状病毒没有抑制和杀灭活性,可能提示家兔和人对SARS冠状病毒不具备天然免疫力。     

重症急性呼吸综合征病例尸解肺组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定

目的：从患者尸解肺组织中直接扩增冠状病毒部分聚合酶基因序列，为重症急性呼吸综合征(非典型肺炎)的病原确认提供依据。方法：采用RT—PCR方法，从非典型肺炎病例标本中进行冠状病毒聚合酶基因的扩增与序列测定。采用C1ustal X1.8软件进行系统发生树分析。结果与结论：从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中，可分别扩增出冠状病毒的DNA片段。测序结果显示其核苷酸序列与目前已知冠状病毒的同源性在60％左右，而与加拿大和美国最近报道的新型冠状病毒的序列是一致的。