UbcH10基因沉默联合多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞体内成瘤实验

目的 观察UbcH10基因沉默对多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR体内成瘤作用的影响.方法 采用慢病毒系统在MCF-7/ADR细胞中进行UbcH10基因沉默.将基因沉默后的肿瘤细胞及对照肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,通过裸鼠尾静脉连续给予多柔比星或生理盐水2周并停药1周,测量肿瘤体积,分析UbcH10沉默对多柔比星抑制MCF-7/ADR体内成瘤作用的影响.采用蛋白质印迹分析检测瘤体中的UbcH10及BCL-2蛋白含量,分析UbcH10与肿瘤细胞化疗敏感性之间的调控关系.结果 通过慢病毒实验系统成功建立UbcH10基因沉默细胞株MCF-7/ADR UbcH10-RNAi.经过3周给药处理,多柔比星组肿瘤体积与对照组比较差异无统计学意义,肿瘤抑制率为4.16％;基因沉默+多柔比星组肿瘤体积与对照组差异有统计学意义(P＜0.05),肿瘤抑制率为41.8％.瘤体内蛋白含量检测结果显示,对照组、多柔比星组、基因沉默+多柔比星组UbcH10蛋白表达量分别为0.81±0.16、0.78±0.12、0.18±0.04,基因沉默+多柔比星组其余两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);BCL-2蛋白表达量组间差异与UbcH10一致,二者之间具有正相关性.结论 UbcH10基因沉默可以显著增强多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的体内成瘤作用.     

Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法：MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率。转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素（0、0.1、0.5和1.0mg·L^-1）,0mg·L^-1阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性。结果：与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低（P<0.01）,阿霉素浓度为1.0 mg·L^-1时,2组细胞存活率分别为（48.15±6.28）%和（41.73±6.17）%,对阿霉素的敏感性明显增强。结论：Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性。     

siRNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的研究siRNA(small interfering RNA)对乳腺癌多药耐药性的逆转作用。方法设计针对MRP基因的siRNA,转染乳腺癌MCF-7/adr细胞,用实时荧光定量PCR分析MRP mRNA的表达;流式细胞仪检测MRP蛋白表达和细胞内柔红霉素积累量。结果该siRNA能使耐药细胞株MCF-7/adr中MRP基因的mRNA及蛋白表达水平分别下调(58.16±1.36)%、(51.87±1.90)%(P<0.05),细胞内柔红霉素积累量显著增加(P<0.01)。结论siRNA可逆转乳腺癌的多药耐药。     

RNAi沉默MACC1基因表达抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移

目的探讨RNAi沉默MACC1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移的影响及相关的分子机制。方法化学合成针对MACC1基因的荧光标记的siRNA-FAM,利用siRNA转染试剂将MACC1特异性siRNA-FAM转染至乳腺癌MCF-7细胞;采用RT-PCR检测siRNA对MACC1 mRNA表达的影响,Western blot检测siRNA对MACC1蛋白合成的影响;MTT实验检测沉默MACC1基因后对MCF-7细胞增殖活性的影响;Transwell迁移实验检测沉默MACC1基因后对MCF-7细胞迁移能力的影响;Western blot检测干扰MACC1对S100A4及vimentin蛋白合成的影响。结果 MACC1基因在乳腺癌MCF-7细胞高表达;针对MACC1基因的siRNA转染MCF-7细胞48 h后,siRNA组与空白对照组比较,能够显著抑制MACC1基因表达和蛋白合成,抑制效率分别为81%和75%;MACC1特异性siRNA转染MCF-7细胞24、48、72 h后,MMT结果显示与空白对照组比较,siRNA组能够抑制细胞生长,并随着时间延长抑制明显(P<0.05);转染MCF-7细胞48 h后,Transwell迁移实验结果显示siRNA组与空白对照组比较,穿过小室细胞数明显降低,其能有效抑制MCF-7细胞迁移(P<0.05);siRNA组与空白对照组相比,S100A4和vimentin表达降低(P<0.05)。以上实验阴性对照组和空白对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论利用特异性siRNA干扰MACC1基因表达,可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力,且这一过程可能与S100A4和Vimentin的表达下调有关。     

体外siRNA抑制乳腺癌细胞株端粒逆转录酶基因的表达

目的:筛选能高效抑制乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453端粒逆转录酶(hTERT)基因表达的RNA干扰靶点,为乳腺癌的基因治疗提供依据.方法:构建针对hTERT基因的三种siRNA(siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3),分别转导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453.同时以无同源性的siRNA-hTERT4作阴性对照,含GFP基因的载体作阳性对照.应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和Western Blot技术检测siRNA处理前后hTERT基因表达变化;MTT法检测细胞生长率;流式细胞术分析基因沉默对细胞凋亡的影响.结果:与阴性对照组相比,siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3三个实验组siRNA转染细胞后,hTERT的mRNA表达量下调至21%～40%,蛋白表达下降至50%,而三个实验组间差异无统计学意义(P>0.05).转染48 h后,MCF-7细胞抑制率分别为(57±4.3)%,(61±4.3)%,(65±6.0)%;MDA-MB-453细胞抑制率分别为(45±5.1)%,(45±4.1)%,(50±4.0)%.流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率有所增加,MCF-7细胞为(18.90±0.11)%,(27.30-I-0.18)%,(27.00 4-0.16)%;MDA-MB-453细胞为(12.25 4-0.17)%,(17.80±0.19)%,(20.60 4-0.21)%.结论:经siRNA-hTERTl,siRNA-hTERT2,siRNA-hTERT3处理均可明显抑制MCF-7和MDA.MB-453乳腺癌细胞的增殖及hTERT基因的表达,能够明显促进细胞的凋亡.     

siRNA抑制Ki-67表达对乳腺癌MCF-7／ADR细胞阿霉素耐药性的研究

目的采用Ki-67RNA表达载体干扰沉默Ki-67基因,检测其对乳腺癌MCF-7／ADR细胞株耐-67mRNA及蛋白表达的影响,观察沉默艇-67基因前后乳腺癌细胞株对阿霉素敏感性改变。方法体外合成靶向艇-67siRNA表达载体,应用脂质体法瞬时转染尉-67高表达的乳腺癌细胞株MCF-7／ADR,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染后Ki-67mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性及转染前后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果Ki-67siRNA载体转染后24h可显著抑制乳腺癌MCF-7／ADR细胞株的Ki-67mRNA和蛋白表达及细胞的增殖活性。Ki-67siRNA组阿霉素IC50值为（6．3±0．9）μg/ml。结论si—Ki-67能够有效抑制Ki-67基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力,沉默Ki-67表达能部分逆转阿霉素耐药现象。     

siRNA抑制Ki-67表达对乳腺癌MCF-7/ADR细胞阿霉素耐药性的研究

目的采用Ki-67 RNA表达载体干扰沉默Ki-67基因,检测其对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株Ki-67 mRNA及蛋白表达的影响,观察沉默Ki-67基因前后乳腺癌细胞株对阿霉素敏感性改变。方法体外合成靶向Ki-67siRNA表达载体,应用脂质体法瞬时转染Ki-67高表达的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染后Ki-67mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性及转染前后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果 Ki-67siRNA载体转染24h后可显著抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞株的Ki-67 mRNA、蛋白表达及增殖活性。Ki-67 siRNA组阿霉素IC₅₀值为（6.3±0.9）μg/ml。结论 Si-Ki-67能够有效抑制Ki-67基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力。沉默Ki-67表达能部分逆转阿霉素耐药现象。     

川楝素对多柔比星体外抗乳腺癌活性的影响

目的观察川楝素对多柔比星体外抗乳腺癌活性并研究其机制。方法多柔比星(0~3μg/m L)和川楝素(10mol/L)处理细胞48h,MTT法检测乳腺癌细胞系MDA-MB-435和MDA-MB-231细胞活力。转染后的MDA-MB-435细胞经多柔比星(0.2μg/m L)和川楝素(10mol/L)处理48h,流式细胞术检测MDA-MB-435细胞凋亡;Western blot实验检测MDA-MB-435细胞FOXO1、Bim、Noxa表达水平,细胞色素C的释放水平及半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3活化水平。结果川楝素明显增强MDA-MB-435和MDA-MB-231细胞系对不同浓度多柔比星的敏感性。多柔比星联合川楝素处理的MDA-MB-435相对细胞活力(0.55±0.04)显著低于多柔比星单治疗组(0.87±0.07,P0.05)和多柔比星+川楝素+FOXO1 siRNA组(0.79±0.07,P0.05)。多柔比星联合川楝素处理的MDA-MB-435细胞凋亡率[(34.2±2.8)%]显著高于多柔比星单治疗组[(9.3±0.8)%,P0.05]和多柔比星+川楝素+FOXO1 siRNA组[(12.5±1.1)%,P0.05]。多柔比星联合川楝素处理的MDAMB-435细胞中FOXO1、Bim、Noxa表达水平,细胞色素C的释放水平及Caspase-9、Caspase-3活化水平均显著高于多柔比星单治疗组和多柔比星+川楝素+FOXO1 siRNA组。结论川楝素可能通过上调FOXO1表达增强多柔比星的体外抗乳腺癌活性。     

Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用

目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用。方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P<0.05),并且si-Chkl+DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+DADS组(P<0.05)。Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)%上升到(29.8±1.7)%。结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性。     

多柔比星影响他莫昔芬对MCF-7乳腺癌细胞的作用

目的研究多柔比星(ADM)影响他莫昔芬(TAM)对MCF-7乳腺癌细胞的作用及作用机制。方法 MTT检测在ADM作用后, TAM对MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制作用。Western blot检测对照组、ADM组、TAM组以及ADM+TAM组中细胞Her-2、Akt的表达情况。结果 MTT表明, TAM对MCF-7乳腺癌细胞有抑制作用(P<0.05);而MCF-7乳腺癌细胞在ADM作用后, TAM丧失了对细胞的抑制作用(P> 0.05)。Western blot表明,与对照组比较,ADM组、TAM组及ADM+TAM组MCF-7细胞中Her-2和Akt水平的表达均增高(P <0.05)。结论TAM可以抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长,而在ADM作用后,激活信号通路,增加Her-2、Akt的表达,导致TAM的作用下降,说明在ADM作用后,TAM对细胞的抑制作用消失。     

造成支原体假阳性培养原因探讨

目的：探讨具有分解脲素酶的细茵种类和数量与支原体假阳性培养的相关性。方法：将150份支原体阳性培养物,分混浊、透亮清瓶底有沉淀、透亮清瓶底无沉淀进行细菌分离培养和转种支原体培养鉴定药敏板;用不同浓度具有脲素酶的常见细菌及茵量加入支原体肉汤培养基内进行培养。结果：50例混虫的培养管分离出50株细茵,分离率100％(50／50);透亮清但有沉淀的分离出21株细菌,分离率42％(21／50);透亮清无沉淀物的没有分离出细菌;当加入含有脲素酶的细菌低于10^4／ml时,对支原体肉汤培养基影响不大;而加入茵量高于10^4／ml时,则可导致培养呈假阳性或混浊。结论：加入标本中含有大量能分解尿素的细茵时,对支原体培养基有影响,可导致假阳性。     

胆总管下段结石的超声诊断探讨

胆总管结石为临床常见病,而结石局限在胆总管下段的胆总管下段结石临床较少见,且诊断较困难。本组356例胆总管结石中,胆总管下段结石132例,而通过超声诊断的121例,占91．67％。本研究探讨超声检查胆总管下段结石的操作手法,对提高胆总管下段结石的诊断符合率有重要意义。     

小型猪用生物拉链的生物相容性评价

目的:研究设计小型猪腹壁拉链动物模型用生物拉链,并检测、评价其生物相容性.方法:结合小型猪体型和生活习性特点、以及动物外科手术实验要求,设计生物拉链外形,并依据国家标准(GB/T 16886.10-2005/ISO 10993-10:2002),采用皮肤刺激性试验和皮肤致敏试验测定其生物相容性.结果:生物拉链具备操作简便、节省手术操作时间、减少创口感染等诸多优点,并成功获得国家知识产权专利(专利号:200920207646.1);皮肤刺激性试验未出现皮肤刺激反应;皮肤致敏试验未出现皮肤致敏反应.结论:生物拉链设计合理,具有良好的生物相容性,为小型猪腹壁拉链模型动物在教学、科研和临床中的推广应用奠定了良好的基础.     

关于加强食品安全监管的思考

食品安全监管是保障食品安全的重要措施?而目前食品安全的监管力度尚不够,为此应充分注重源头管理,对突发性食品安全事件应能及时回应,同时应加强执法力度?投入适当经费研究防控措施?加大食品安全举报的奖励?加强食品安全国际间的交流和改变目前食品安全监管模式?加大环境污染的治理,以从政策上引导食品的生产与加工等方面来增强对食品生产的安全监管?