蛋白免疫印迹试验检测新生儿早期先天梅毒21例

目的：评估梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TPPA—IgM—WB）在诊断新生儿早期先天梅毒中的作用。方法：对21例梅毒孕妇所产21例新生儿血清,应用梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TPPA—IgM—WB）和常规血清学方法（TPPA、RPR、FTA—ABS—IgM）进行检测,评价上述实验诊断方法和常规实验室检测在先天梅毒早期诊断中的作用。结果：21例孕妇梅毒病例所生的21例新生儿中,按常规综合诊断方法10例诊断为先天梅毒,而新生儿血清IgM蛋白印迹试验12例阳性（10例常规方法诊断为先天梅毒）。结论：血清IgM蛋白印迹试验诊断先天梅毒具有较高的特异性和敏感性,结果显示可能高于现行的常规综合诊断方法的诊断价值。     

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究

目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析。方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定;用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔;间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本。结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp0319;高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度。Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的表达条带。间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%。检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%。结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础。     

梅毒患者外周血单一核细胞诱导的树突细胞的生物学特性

目的 探讨梅毒患者外周血单一核细胞（PBMC）诱导的树突细胞（DC）的生物学特性。方法 分离诱导产生单一核细胞来源的树突细胞（MoDC），比较梅毒患者与正常对照组MoDC表型的差异；用重组梅毒螺旋体脂蛋白TpN17体外刺激正常人MoDC后观察其表型的变化、免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化的情况。结果 与正常对照组相比，梅毒患者MoDC细胞表面CD80（51.90%）表达明显上升（P < 0.05）。CD83（16.53%）、CD86（66.13%）及HLA-DR（91.29%）的表达率与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。TpN17可以刺激MoDC表面CD80、CD83表达升高，细胞表达磷酸化ERK1/2（p-44/42）；未经TpN17刺激的DC，无磷酸化ERK蛋白表达。结论 梅毒患者MoDC表型的异常可能与梅毒螺旋体抗原刺激有关，TpN17可以刺激DC成熟，其信号转导途径与ERK有关。     

梅毒螺旋体Tp0844重组蛋白的表达、纯化及免疫反应性研究

目的 克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白Tp0844,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,筛选与宿主具有高反应性的Tp主要蛋白。 方法 通过生物信息学分析,获取Tp0844基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。结果 成功构建PET-30a（+）-Tp0844原核表达重组体,经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白,经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43 000的重组蛋白;以梅毒IgG抗体阴、阳性血清为一抗,采用Western印迹法检测发现,Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应,而与健康阴性血清未出现反应条带。 结论 可溶性重组表达的Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性,可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。     

蛋白印迹法Western—Blot诊断梅毒的临床评价

蛋白印迹法(Western-Blot)是80年代新发展起来的一种先进检测技术,它结合了免疫学和生物化学的特点,特异性强,敏感性高。本文试以荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA—ABS)和快速血浆反应素试验(RPR)作为对照,对蛋白印迹法用于诊断梅毒的若干问题作一临床评价。     

用蛋白印迹技术初步评价重组梅毒螺旋体抗原的反应性

目的：初步分析重组梅毒螺旋体抗原对梅毒螺旋体抗体的反应性。方法：用蛋白印迹技术检测与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合的2种重组梅毒螺旋体蛋白（rTP47和rTP17)与二期梅毒患者血清的反应性。结果：30份二期梅毒患者血清均与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应,反应强度与RPR试验测定的血清滴度无绝对一致性,但MBP－rTP17与二期梅毒患者血清的反应强于MBP－rTP47,30份正常人血清均不与MBP－rTP47和MBP－rTP17反应。结论：MBP－rTP47和MBP－rTP17对二期梅毒患者血清的反应性较强。     

梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析

目的 探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值.方法 通过生物信息学分析,获取TP0993基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹检测其免疫抗原性,用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清,同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行比较,根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况,评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值.结果 成功构建PET-28a(+)-0993原核表达载体,经表达、纯化后获得相对分子质量约为34 000的重组蛋白;Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔,能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答.以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,对TPPA法检测的480份临床血清进行检测,与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88.3％,特异度为85.8％,ELISA法与TPPA法符合率为86.5％.结论 重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性,可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一.     

荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒中的意义

目的:探讨荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒中的运用。方法:对我院收治的50例先天梅毒患儿以及40例正常新生儿进行荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒的敏感度以及特异性研究。结果:荧光PCR其敏感度为98%,特异性为100%,明显高于蛋白免疫印迹的84%以及85%。两种方法比较具有统计学差异性(P<0.05)。结论:荧光PCR在诊断新生儿先天梅毒中较蛋白免疫印迹技术具有更好的敏感性以及特异性,值得在临床中推广。     

各期梅毒患者治疗前 IgG、IgA 和 IgM 抗体表达差异的研究

目的：分析梅毒各个时期治疗前IgG、IgA和 IgM抗体的表达差异。方法：采用免疫印迹法检测已确诊的34份不同时期（一期8例,二期15例,三期11例）梅毒患者治疗前血清中IgG、IgA和IgM Tp蛋白表达情况。结果：IgG抗体Tp47、Tp45、Tp34和Tp15在治疗前各期梅毒患者血清中均100％表达,Tp33在三期梅毒中的阳性率（63.6％）明显低于一、二期梅毒（均为100％）,差异有统计学意义（P＝0.009）。 IgA抗体各期表达无明显差异,其中一期梅毒中Tp41、Tp34、Tp33和Tp30抗体以及三期梅毒中Tp33均无阳性条带出现。 IgM抗体Tp41和Tp37在各期梅毒患者血清中阳性率差异有统计学意义（ P值分别为0.035、0.020）,其余差异均无统计学意义。结论：强阳性的 Tp 蛋白 Tp47、Tp45和Tp15可作为早期梅毒诊断的指标;在各期表达有明显差异的Tp41、Tp37和Tp33可考虑作为临床分期观察指标;Tp45、Tp41、Tp17和Tp15可作为以后临床治疗效果的辅助诊断参考。     

胶体金法检测梅毒特异性抗体

目的：探讨梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法（TPAb)对梅毒诊断的实用性和优越性。方法：用TPAb法对梅毒患者，非梅毒患者血清进行检测，同时与快速血浆反应素试验（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）相比较。结果：TPAb法检测一期梅毒21例敏感性为71.43%，高于RPR法（57.14%)及TPHA法（66.67%)；二期梅毒64例，TPAb法及TPHA法检测敏感性均为100%，高于RPR法（92.19%)，同时对125例非梅毒患者血清进行了检测，结果全部阴性，特异性为100%。结论：TPAb法具有较高敏感性和特异性而且简单、方便、快速，适用于各期梅毒的诊断。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析

【摘要】 目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因,对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析。方法 全基因合成Tp0136基因,构建E.coli表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和Western印迹鉴定。用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）以鉴定其免疫原性,Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性。结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136,并表达和纯化出膜蛋白Tp0136,相对分子质量为50 000,纯度 > 95%。用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,能刺激其产生高滴度抗体,具有较强的免疫原性。Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的免疫反应性。结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白,Ｔp０１３６可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用。     

性传播疾病

20140935梅毒螺旋体IgM抗体在梅毒血清固定中的应用/俞莺（无锡市第五医院皮肤科）,袁波∥中国性科学.-2013,22（1）.-33-36 198例RPR阳性患者病程1周-5年,其中28例病程1年以上,且RPR滴度固定;二期梅毒17例,潜伏梅毒11例。应用抗原特异性免疫印迹法检测IP-IgM抗体,阳性8例,阴性20例;其中二期梅毒阳性5例,阴性12例,潜伏梅毒阳性3例,阴性8例。     

梅毒实验室诊断研究进展

本文综述了各种现代检验技术在诊断梅素方面的应用研究，并对目前常用的血清学诊断方法进行了初步评价。作者认为：蛋白印迹法特异性高，敏感性强，且操作方便，设备简单，具有推广价值；酶免疫分析法便于建立自动化实验系统，一次可检测大量标本，结果客观准确，适用于大样本人群调查；多聚酶链反应方法准确，快速，可用于先天梅毒，早期梅毒以及艾滋病患者感染梅毒等复杂情况下的诊断。     

55例梅毒血清学检测结果分析

目前，临床上使用19S—IgM—TPELISA法（用于早期梅毒确诊），TPPA法（确诊试验），RPR法（筛选试验）来诊断梅毒，我们采用上述三种方法检测55例梅毒病人的血清，同时，选择20例健康人作为对照。检测结果报道如下。     

北京市2012年男男性行为者HIV及梅毒感染状况调查

【摘要】 目的 了解北京市男男性行为（MSM）人群HIV及梅毒感染状况,探讨两者之间的相关性。 方法 对北京市艾滋病哨点监测MSM人群600例进行HIV及梅毒实验室检测。用ELISA方法对所有研究对象样本进行HIV初筛,初筛阳性者用免疫印迹方法进行确认;梅毒检测采用快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）与梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）两种方法同时进行,TPPA阳性者即视为梅毒感染者（包括既往感染与现症感染）;符合条件的HIV阳性血清还接受HIV-1 BED捕获酶联法（BED方法）检测并计算HIV在此人群中的发病率;对MSM人群HIV及梅毒感染状况进行统计学相关性分析。 结果 MSM人群600例,HIV阳性49例,阳性率8.17%;HIV新近感染14例,发病率为4.68%。HIV感染者表现出外地户籍比重大、学历层次相对较高的特点。梅毒RPR与TPPA均阳性51例（8.5%）,感染率（含既往感染）为18.5%（111/600）。 结论 北京市哨点监测MSM人群HIV感染率及发病率、梅毒感染率均维持在较高水平;HIV感染与梅毒感染有显著相关性。     

梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验诊断新生儿胎传梅毒的探讨

目的探讨梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验(Treponema pallidum IgM Western blot，TP-IgM-WB)在新生儿胎传梅毒早期诊断中的价值。方法对8例胎传梅毒新生儿(其母亲均为梅毒)进行TRUST、TPPA，FTA-ABS-19S-IgM和TP-IgM-WB 4种梅毒血清学检查，并结合临床对结果进行比较。结果8例中3例出现胎传梅毒的典型临床表现，包括典型皮肤损害，梅毒新生儿肺炎，伴发心、脑、肝、肾多脏器衰竭；另外5例无胎传梅毒的临床表现。梅毒血清学试验结果：所有8例TP-IgM-WB均为阳性；除1例外，7例FTA-ABS-19S-IgM试验为阳性；3例有症状的胎传梅毒及3例胎传潜伏梅毒中4种梅毒血清学试验均为阳性；1例TRUST和TPPA均阴性，但FTA-ABS-19S-IgM和TP-IgM-WB均阳性；1例FTA-ABS-19S-IgM阴性，但TRUST滴度是母亲的4倍，TPPA和TP-IgM-WB均阳性。结论梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验可作为一种确诊试验应用于新生儿胎传梅毒，尤其是胎传潜伏梅毒的早期诊断。     

梅毒螺旋体IgM抗体在梅毒血清固定中的应用

目的：探讨梅毒螺旋体特异性IgM（TP—IgM）抗体在梅毒血清固定中的应用。方法：对285例梅毒患者中病程1年以上,快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）阳性且血清固定患者,用免疫印迹法检测TP—IgM抗体。结果：285例梅毒患者中,28例发生血清固定,经TP—IgM检测,阳性8例,阴性20例;28例血清固定患者中,17例二期梅毒患者TP—IgM抗体阳性5例,阴性12例;11例潜伏梅毒患者中TP—IgM抗体阳性3例,阴性8例;无一期梅毒。结论：梅毒螺旋体特异性IgM抗体可作为梅毒血清固定患者感染并活动的一项血清学指标。     

一期梅毒患者酶毒螺旋体和血清学检测

目的：比较评价几种用于一期梅毒（PS）的实验诊断方法。方法：采用暗视野显微镜法（D－F）、镀银染色法（Ag）、间接免疫荧光法（ⅡF），聚合酶链反应（PCR）等4种梅毒螺旋体（TP）检测方法和甲苯胺红不加红血清学试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）对91例PS患者进行检测。结果：Ag法、ⅡF法、PCR法检测TP阳性率较高，D－F法阳性率较低，对于病程小于2周患者TRUST阳性率明显低于TPPA。结论：Ag法是TP检测的有效方法之一，对于病程小于2周的PS患者TPPA比TRUST更具有诊断价值。     

免疫印迹法与分离人皮肤ⅡF法检测类天疱疮抗体的比较研究

硬用１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ分离正常人皮肤为底物的ⅡＦ法和免疫印迹技术检测１２２例类天疱疮患者血清中抗基底膜抗体，比较研究上述两种方法对检测类天疱疮抗体的工及价值。结果仞皮肤ＩＩＦ法阳性８９例（７２．９５％）。免疫印迹法检测，与２３０ＫＤ、１８０ＫＤ和１６０ＫＤ分子量蛋白抗原结合阳性９２例（７５．４１％）。两法合用总阳性率为８３．６１％。分离皮肤ＩＩＦ法适合于常规采用，而免疫印迹法是前者的进一步补充。     

免疫即迹法与分离人皮肤IIF洁检测类天疱疮抗体的比较研究

采用１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ分离正常人皮肤为底物的ＩＩＦ法和免疫印迹技术检测１２２例类天疱疮患者血清中抗基底膜抗体，比较研究上述两种方法对检测类天疱疮抗体的灵敏度及价值。结果分离皮肤ＩＩＦ法阳性８９例（７２．９５％）。免疫印迹法检测，与２３０ＫＤ、１８０ＫＤ和１６０ＫＤ分子量蛋白抗原结合阳性９２例（７５．４１％）。两法合用总阳性率为８３．６１％。分离皮肤ＩＩＦ法适合于常规采用，而免疫印迹法是前者的进一步补充。