吉西他滨耐药胰腺癌细胞系的耐药机制

目的探讨吉西他滨耐药胰腺癌细胞系的耐药机制。方法应用免疫组织化学方法和逆转录PCR法（RT—PCR）,对吉西他滨耐药细胞系的耐药机制进行了研究。选用沙尔威辛（SAL）进行逆转耐药实验,采用了RT—PCR法、流式细胞仪和MTT法,评估SAL逆转耐药的效果。结果免疫组织化学法显示,耐药细胞SW1990-GEM的P-糖蛋白（P—gP）表达为弱阳性,其亲本细胞SW1990为阴性。多药耐药相关蛋白（MRP）在两细胞系表达均为阴性。SW1990-GEM的多药耐药基因（mdr-1）在mRNA水平上的转录比其亲本细胞系SW1990增强;脱氧胞苷激酶（dCK）基因的转录减少;核苷酸还原酶（RR）基因的转录增强。经过SAL作用后,mdr-1在mRNA水平上的转录减少。流式细胞仪显示,经过4,30,60,90nmol／LSAL作用后,细胞内罗丹明123的蓄积累分别增加1．04,1．16,1．39,1．72倍。用4nmol／LSAL进行逆转吉西他滨耐药实验,未接受SAL处理的对照组对吉西他滨的IC50为203．72μmol／L;经SAL作用1h后再加吉西他滨组的IC50为121．36μmol／L（P=0．219）;经SAL作用24h后再加吉西他滨组的IC59为121．64μmol／L（P=0．167）。结论胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的原因与dCK减少有关,同时也与mdr-1和RR升高相关。SAL能够下调SW1990-GEM耐药细胞的mdr-1和P—gP表达,但低浓度的SAL不能逆转SW1990-GEM对吉西他滨的耐药。     

人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其特性

背景与目的:临床前和临床研究显示吉西他滨对实体瘤有较好的疗效,尽管已有卵巢癌和红白血病吉西他滨耐药细胞系的报道,但肺癌吉西他滨耐药细胞系尚未见报道。我们建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系,并对其细胞生物学特性进行研究。方法:逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,建立了对吉西他滨耐药的人肺腺癌细胞系A549-Gem。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算出A549和A549-Gem的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较A549和A549-Gem的生长曲线,并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测A549-Gem对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果:吉西他滨对A549和A549-Gem的IC50分别为(6.56±1.19)μmol/L和(921.09±225.27)μmol/L,RI为140.52(P=0.0195)。集落形成实验的RI为132.95。根据生长曲线计算出A549和A549-Gem的倍增时间为29.7h和36.4h。交叉耐药实验表明,A549-Gem对长春新碱(VCR)和足叶乙甙(VP-16)的RI分别为54.38和6.18(P<0.01),对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、阿糖胞苷(Ara-C)和紫杉醇(Taxol)无交叉耐药。结论:成功建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系A549-Gem,耐药性能明显、稳定,非常适合用于肺癌中吉西他滨耐药的研究。A549-Gem对VCR、VP-16产生交叉耐药,对ADM、DDP、Ara-C和Taxol无交叉耐药     

低表达miR-33a诱导胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药

背景与目的：胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。由于其对一线化疗药物吉西他滨的耐受,往往导致预后较差。MicroRNA(miRNA,miR)是一类非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。miR-33a作为代谢相关的miRNA被广泛研究,而与耐药之间关系的报道较少。该研究通过探讨miR-33a参与胰腺癌吉西他滨耐药及其作用解析,为胰腺癌化疗提供新的理论依据。方法：采用原位杂交方法检测胰腺癌组织中miR-33a的表达情况;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各胰腺癌细胞系中miR-33a的表达情况。利用SW1990和Miapaca-2胰腺癌亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株(SW1990^res,Miapaca-2^res)及miR-33a稳定表达细胞株(SW1990-miR-33a,Miapaca-2-miR-33a、SW1990^res-miR-33a和Miapaca-2^res-miR-33a);采用细胞毒性实验检测miR-33a的表达对胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的影响。结果：miR-33a在胰腺癌组织样本中普遍低表达。与HEK293T正常人胚肾细胞相比,其在各胰腺癌细胞系中均呈低表达。miR-33a过表达可以增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,能有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。结论：miR-33a在胰腺癌组织中低表达,导致胰腺癌患者对吉西他滨获得性耐药。增加miR-33a表达,从而增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,为开发新型胰腺癌分子靶向治疗药物,联合化疗提供新的理论依据。     

乳腺癌耐药蛋白ABCG2对胰腺癌SW1990细胞耐药性影响的实验

目的 探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中ABCG2的表达及其与化疗耐药的关系。方法 胰腺癌细胞SW1990用DMEM培养液常规培养,用0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,使用流式细胞仪测其细胞凋亡率,Western blot检测ABCG2蛋白的表达,RT-PCR检测ABCG2 mRNA的表达,并且分析ABCG2表达水平与化疗耐药的关系。结果 0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,细胞凋亡率分别为（21.1±0.61）%、（13.4±2.17）%、（6.4±1.34）%,不同时间点两两相比P均<0.05。0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48、72 h后与对照组相比,ABCG2 mRNA分别上升了（2.21±0.11）倍、（3.30±0.08）倍和（4.72±0.12）倍,蛋白上升了（2.17±0.14）倍、（3.61±0.09）倍和（4.98±0.13）倍,且组间比较P均<0.05,有统计学意义。结论 吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随着时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与吉西他滨作用细胞后上调ABCG2的表达有关。     

缺氧状态下人胰腺癌细胞对吉西他滨反应的实验研究

目的:观察缺氧状态对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响并分析其相关机制。方法:将人胰腺癌细胞SW1990分为常氧组、缺氧组、常氧+吉西他滨组和缺氧+吉西他滨组。MMT法检测各组细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Real-time PCR和Western blot分别检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与常氧+吉西他滨组相比,低氧+吉西他滨组的细胞增殖率明显增加,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);低氧组和低氧+吉西他滨组HIF-1α蛋白表达分别显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01);与常氧组相比,低氧组和低氧+吉西他滨组的MDR1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:缺氧状态可增加人胰腺癌细胞SW1990对吉西他滨的化疗抵抗,其机制与缺氧环境可诱导HIF-1α和MDR1基因表达有关。     

人肺腺癌细胞系SPC-A1多西他赛耐药细胞系的建立及其特性

背景与目的:多西他赛是近年来应用于临床的一种有效的化疗药物,其独特的作用机制使其具有良好的应用前景,然而,耐药性影响了其临床应用。本研究拟通过体外诱导耐药建立肺癌SPC-A1的多西他赛耐药细胞系,以便于进一步研究其耐药机制及耐药逆转。方法:通过体外逐步增加多西他赛浓度的方法诱导建立肺癌SPC-A1的多西他赛耐药细胞系。MTT比色法检测该耐药细胞的多药耐药特性;流式细胞术检测其细胞周期和细胞内罗丹明蓄积;细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算倍增时间;染色体核型分析对比耐药和亲本细胞株在遗传学上的变化。结果:MTT显示SPC-A1/Docetaxel对多西他赛、紫杉醇、顺铂、卡铂、吉西他滨、长春瑞滨、表柔比星、依托泊苷的耐药指数分别为13.20、2.18、1.12、1.39、1.38、0.93、10.14、2.12。流式细胞术检测其细胞周期显示:与亲代细胞比较SPC-A1/Docetaxel处于G1期的细胞增加,S期的细胞减少,G2期的细胞无明显变化。流式细胞仪检测SPC-A1和SPC-A1/Docetaxel细胞内罗丹明蓄积荧光强度分别为1382.26±0.32和806.34±0.49,耐药细胞内罗丹明蓄积较亲本细胞明显减少。SPC-A1和SPC-A1/Docetaxel细胞的倍增时间分别为27.4、35.1h。染色体核型分析两者遗传学无明显变化。结论:经体外诱导耐药建立的SPC-A1/Docetaxel表现出对多西他赛较高的耐药性,并呈多药耐药特性,耐药细胞系SPC-A1/Docetaxel与亲本细胞SPC-A1的生物学特性有明显差异,可用于对多西他赛的耐药机制和逆转耐药研究。     

紫杉醇或吉西他滨联合顺铂治疗蒽环类耐药晚期乳腺癌患者临床疗效及安全性观察

目的探讨紫杉醇联合顺铂(TP方案)与吉西他滨联合顺铂(GP方案)治疗蒽环类耐药晚期乳腺癌患者的临床疗效及安全性。方法选取2015年8月至2018年10月间宿迁市沭阳县中心医院收治的96例晚期乳腺癌患者,根据治疗方法不同分为紫杉醇组与吉西他滨组,每组48例。紫杉醇组患者采用紫杉醇联合顺铂治疗,吉西他滨组患者采用吉西他滨联合顺铂化疗,比较两组患者的近期临床疗效及不良反应。结果紫杉醇组患者总有效率为50. 0%,吉西他滨组为39. 6%,两组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。两组患者白细胞减少发生率比较,差异无统计学意义,但吉西他滨组患者Ⅲ度白细胞减少发生率更高,差异有统计学意义(P <0. 05);吉西他滨组患者血小板减少发生率高于紫杉醇组,差异有统计学意义(P <0. 05);紫杉醇组患者血红蛋白下降和脱发发生率均高于吉西他滨组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。两组患者过敏反应、肝肾功能损害和神经毒性发生率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。两组患者恶心呕吐严重程度主要为Ⅰ度与Ⅱ度,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论紫杉醇或吉西他滨联合顺铂治疗蒽环类耐药晚期乳腺癌患者,近期临床疗效相似。吉西他滨不良反应主要为白细胞减少、血小板减少、恶心呕吐,紫杉醇不良反应主要为白细胞减少、血红蛋白下降、恶心呕吐、脱发。     

SLC29A1基因C177G单核苷酸多态性与晚期胰腺癌吉西他滨化疗耐药及预后相关性的研究

摘 要：［目的］ 研究晚期胰腺癌患者SLC29A1基因177位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分布情况,并探索其与吉西他滨化疗耐药及与预后的关系。［方法］ 对晚期胰腺癌患者66例,抽提外周血标本DNA,应用DNA直接测序法明确SLC29A1基因177位点SNP序列,结合临床资料,分析SLC29A1基因SNP对晚期胰腺癌吉西他滨化疗耐药性及生存期的影响。［结果］ 66例患者SLC29A1基因C177G突变型为32例,其中吉西他滨化疗耐药者为25例,耐药率达78.1%;野生型34例,其中吉西他滨化疗耐药者17例,耐药率为50.0%。SLC29A1基因C177G突变型组胰腺癌患者吉西他滨化疗有效率明显较野生型组低,而耐药率明显较野生型组高,两者差异有统计学意义（P<0.05）。SLC29A1基因C177G突变型组胰腺癌患者的6个月生存率为72.3%,野生型组为83.7%,两者差异无统计学意义（P>0.05）;而前者的1年生存率为29．8%,后者为64.3%,差异有统计学意义（P<0.05）。［结论］ 晚期胰腺癌患者SLC29A1基因C177G SNP与胰腺癌患者吉西他滨化疗耐药及预后有相关性,可能成为有效预判胰腺癌患者吉西他滨化疗耐药及预后的敏感指标。     

吉西他滨救治耐药晚期乳腺癌临床进展

蒽环类及紫杉醇类药物一线治疗晚期乳腺癌 (ab vancedbreastcancer,ABC)曾取得显著效果。但对蒽环及紫杉醇类方案耐药的晚期乳腺癌的救治是目前肿瘤内科临床面临的难题。吉西他滨 (gemcitabine)作为一种新型嘧啶类抗代谢剂 ,可与DNA末端结合并有自我增强机制 ,对多种实体瘤具有独特的抗瘤活性[1] ,临床使用其单剂或含吉西他滨联合方案救治耐药ABC ,取得了令人注目的临床效果。1　吉西他滨单剂治疗耐药复发转移乳腺癌的疗效初步临床观察显示单剂吉西他滨治疗ABC疗效肯定[1～ 4 ] 。Spielmann等[2 ] 的多中心Ⅱ期临床观察中 ,对已接受蒽…     

吉西他滨固定剂量率输注治疗胰腺癌的研究进展

目的：总结国内外吉西他滨固定剂量率（FDR）输注治疗胰腺癌的研究进展,探讨其临床应用前景。方法：检索数据库PubMed、CNKI、万方及中国生物医学文献数据库2000—01—2011—12文献,以“吉西他滨、固定剂量率、胰腺癌”等为关键词,不限定发表时间和语言;纳入研究FDR吉西他滨的基础研究、临床试验、综述和meta分析,共检索到文献253篇。符合纳入标准的文献26篇。纳入标准：1）：比较吉西他滨FDR输注与标准输注的临床研究和Meta分析;2）：吉西他滨FDR输注药理学的研究。结果：药理学研究已证明FDR吉西他滨可使细胞内有活性的吉西他滨三磷酸盐达到最佳的蓄积速度。随机对照试验发现,相较于标准输注,FDR可以改善胰腺癌患者的生存结果,但血液系统毒性反应发生率较高。近年来的一些I搭床试验中,FDR吉西他滨单药或者联合其他化疗药物均有较好的生存结果,而且使用较小剂量时血液系统毒性也相应减少。结论：FDR吉西他滨可以提高胰腺癌患者的生存期,同时血液系统毒性反应发生率较高。     

Drug Combinations in the Treatment of Malaria

Summary

The knowledge of the plasmodium life-cycle is essential for the use of antimalarial drugs and their combinations. The antimalarial drugs currently available can act on one or more stages of parasitic development, but only on its proliferative phases. The combinations of drugs in the treatment of malaria aim at three distinct objectives: a) action on different stages of parasitic life-cycle; b) enhancement of antiparasitic activity; and c) prevention of drug resistance.

In this regard, complementary, additive and potentiating combinations have been used, sometimes on an empiric basis. The potentiating combinations seem the most logical and effective, but some of them are not rational due to pharmacokinetic differences between the proposed components.     

Development and evaluation of cancer chemotherapy drug information cards (DIC)

Cancer patients often receive multiple drugs. It is often difficult for them to differentiate between signs and symptoms caused by cancer from those induced by medications. Drug information cards (DIC) may serve a useful purpose to circumvent some of these problems. Here I describe DICs and their evaluation by patients. A vast majority (85%) of patients approved of these cards, and 67% would recommend them to others. I conclude that DICs are useful for cancer patients, and their role in nononcologic patients needs evaluation.     

长春瑞滨联合顺铂治疗多柔比星耐药的晚期转移性乳腺癌疗效观察

观察长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)治疗多柔比星(ADM)耐药的晚期转移性乳腺癌的疗效及毒性。32例既往使用ADM治疗后复发转移的晚期乳腺癌患者,其中单纯癌5例,浸润性导管癌25例,大汗腺样癌1例,硬癌1例。采用NVB25mg/m2,静脉滴入,d1、d8;DDP25mg/m2,静脉滴入,d1～d3。21d为1个周期,每2～3个周期评定疗效。完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)17例,稳定(SD)7例,进展(PD)7例,总有效率为56.3%(18/32)。主要毒性为骨髓抑制,Ⅲ～Ⅳ度白细胞下降发生率为53.1%(17/32)。其他为恶心、呕吐、贫血、静脉炎等。初步研究结果提示,NVB联合DDP治疗ADM耐药的晚期转移性乳腺癌疗效确切,毒性反应可耐受,值得临床应用。     

Determinants of the Cancer Drug Funding Process in Canada

Background: Canada has a publicly funded healthcare system with a complex drug funding process. After Health Canada approval to market a drug, the pan-Canadian Oncology Drug Review (pCODR) (now renamed the CADTH reimbursement review) makes a non-binding funding recommendation to the Canadian provinces (except Quebec), which each then decide whether the drug will be publicly funded. We identified the determinants of funding in this process. Methods: We analyzed drugs for advanced lung (n = 15), breast (n = 8), colorectal (CRC) (n = 7), melanoma (n = 10), and neuroendocrine (NET) (n = 3) cancers undergoing the funding decision process from 2011 to 2019. Determinants of funding assessed in the model included list price, cancer type, drug class, and pCODR recommendation. The primary outcome was the correlation between list price and time to funding (TTF: Health Canada approval to first provincial funding). Secondary outcomes included an exploratory analysis of predictors of drug funding. Results: We analyzed 43 drugs: targeted agents 72%, immunotherapy 20%, chemotherapy 7%. A total of 72% were funded in at least one province. Median TTF was 379 days (IQR 203–601). Median list price (28-day course) was CAD 8213 (IQR CAD 5391–9445). Higher list price was not correlated with TTF (correlation coefficient −0.20, p = 0.28). There was no association between list price and pCODR recommendation or the decision to fund in at least one province. A positive pCODR recommendation correlated with the provinces’ funding decisions (p < 0.001), where 89% of drugs with a positive recommendation were funded and 100% of drugs with a negative recommendation were not funded. Tumor type was predictive of TTF (p < 0.001): CRC drugs were the slowest at a median of 2541 days (IQR 702–4379), and NETs were the quickest at a median of 0 days (IQR 0–502). Cancer type predicted decision to fund in at least one province (p = 0.005), with funding for 100% of NET drugs at the high end and 29% of CRC drugs at the low end. Drug class was predictive of TTF (p = 0.01): 465 days (IQR 245–702) for targeted agents, 443 days (IQR 298–587) for chemotherapy, and 339 days (IQR 164–446) for immunotherapy. Conclusions: Determinants of drug funding included cancer type, drug class, and pCODR recommendation but not list price. Factors other than cost were more heavily weighted in the funding decisions of cancer drugs in Canadian provinces.     

长春瑞滨联合顺铂治疗多柔比星耐药的晚期转移性乳腺癌疗效观察

观察长春瑞滨（NVB）联合顺铂（DDP）治疗多柔比星（ADM）耐药的晚期转移性乳腺癌的疗效及毒性.32例既往使用ADM治疗后复发转移的晚期乳腺癌患者,其中单纯癌5例,浸润性导管癌25例,大汗腺样癌1例,硬癌1例.采用NVB 25 mg/m^2,静脉滴入,d1、d8;DDP 25 mg/m^2,静脉滴入,d1～d3.21 d为1个周期,每2～3个周期评定疗效.完全缓解（CR）1例,部分缓解（PR）17例,稳定（SD）7例,进展（PD）7例,总有效率为56.3%（18/32）.主要毒性为骨髓抑制,Ⅲ～Ⅳ度白细胞下降发生率为53.1%（17/32）.其他为恶心、呕吐、贫血、静脉炎等.初步研究结果提示,NvB联合DDP治疗ADM耐药的晚期转移性乳腺癌疗效确切,毒性反应可耐受,值得临床应用.     

DOP-DFPCF方案治疗食管癌的疗效分析

1993年3月～1995年4月，采用DIP－DFPCF两方案交替治疗食管癌126例，完全缓解49例（38．9％），部分缓解62例（49．2％），稳定12例（9．5％），进展3例（2．4％）。近期有效率88．1％，远期生存率为1年69．8％（88／126），2年34．4％（32／93）。主要毒性为消化道反应和骨髓抑制，无明显肝肾功能损害。     

奈西雅预防治疗化疗所致胃肠道反应的临床研究

目的:观察奈西雅防治化疗药物引起的胃肠道反应的疗效及其不良反应。方法:采用开放式的研究,对86 例患者化疗同时给予奈西雅(0. 3 mg,静脉推注,d1~d3),观察化疗不同时间其对食欲不振、恶心、呕吐等的预防和治疗作用。结果:奈西雅防治化疗药物尤其是顺铂和(或)表阿霉素的胃肠道不良反应有较好疗效,有效率分别为53 .5%~90 .6%;对顺铂引起的迟发性呕吐亦有一定的防治作用;不良反应轻,主要为便秘、头痛、口干、头重、发热感等。结论:奈西雅能有效防治化疗药物所致的胃肠道反应,疗效维持时间长,不良反应轻,为较好的化疗止吐剂。     

多西紫杉醇联合顺铂对晚期鼻咽癌诱导化疗的近期疗效

为了探讨多西紫杉醇（多帕菲DOC）＋顺铂（DDP）放疗前诱导化疗对晚期鼻咽癌的近期疗效并评价毒副反应,2004年10月～2005年10月我院收治的Ⅲ、ⅣA期鼻咽癌分为诱导化疗＋放疗组（C＋R组）30例,单纯放疗组（R组）30例,诱导化疗＋放疗组（C＋R组）予DP方案（DOC＋DDP）诱导化疗1个周期,DOC75mg／m^2,静脉滴入,d1,DDP80mg／m^2,静脉滴入,d3,化疗后2d予根治性放疗,单纯放疗组仅予根治性放疗。结果C＋R组,CR86．7％（26／30）,PR10．0％（3／30）,RR96．7％（29／30）;R组CR63．3％（19／30）,PR16．7％（5／30）,RR80．0％（24／30）。C＋R组CR和RR明显高于R组,x^2=11．27,P=0．001,x^2=7．01,P=0．034。主要毒副反应是骨髓抑制、消化道反应和肝功能损害。初步研究结果提示,DOC＋DDP放疗前诱导化疗明显改善了晚期鼻咽癌的近期疗效,毒副反应可耐受,长期疗效有待于临床进一步观察。     

Treatment Access,Health Economics,and the Wave of a Magic Wand

New drugs are expensive, in part due to excessive drug development costs. Governments are trying to reduce drug prices. This can delay access to effective agents. A country’s access to new drugs correlates with prices they agree to pay. After Health Canada approves a drug, the Canadian Agency for Drug and Technologies in Health (CADTH) assesses it. CADTH’s approval is usually contingent on it costing ≤CAD 50,000 per quality adjusted life year (QALY) gained. This value (unchanged from the 1970s) is inappropriately low. An inflation-adjusted CAD 50,000 1975 QALY should translate into a CAD 250,000 2021 QALY. CADTH’s target also does not consider that drug development costs have risen much faster than inflation or that new precision therapies may only be used in small populations. In a separate process, proposals from the Patented Medicines Price Review Board (PMPRB) would decrease initial Canadian drug prices by 20%, but prices would fall further as sales increased, with ultimate price reductions of up to 80%. PMPRB claims its proposal would not reduce drug access, but multiple analyses strongly suggest otherwise. Government price controls target the symptom (high prices), not the disease. They translate into shortages without solving the problem. CADTH and PMPRB approaches both threaten access to effective drugs.