依那普利对单侧尿路梗阻大鼠肾组织Smad 2/3活性的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)依那普利对单侧尿路梗阻大鼠肾组织Smad2/3信号蛋白活性的影响.方法:采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,治疗组从造模前24 h至造模后28 d以依那普利10 mg·kg-1·d-1灌胃,另设假手术组作正常对照.分别于造模后1,3,7,14,21和28 d取肾组织,应用免疫组化法检测肾组织TGF-β1、磷酸化Smad2/3和α-SMA表达.结果:正常大鼠肾组织具有基础的TGF-β1(4.32±1.72)%和磷酸化Smad 2/3(19.31±5.37)个/mm2的表达,α-SMA只表达于血管平滑肌,肾小管-间质无表达.UUO术后1 d,TGF-β1的表达无明显增加(5.15±2.08)%,第3 d明显增加(13.55±6.33)%,第7 d达高峰(26.78±8.77)%,此后表达减少;UUO术后3 d,磷酸化Smad2/3的表达明显增加(67.95±13.87)个/mm2,并持续增加到第7 d(150.61±27.34)个/mm2,此后表达减少;而UUO术后3 d,肾组织α-SMA表达亦明显升高(5.58±1.23)%,第7 d达到高峰(13.43±3.32)%,14 d表达开始下调.依那普利治疗可以明显抑制肾组织TGF-β1信号蛋白Smad2/3活性(降低39%～55%,P＜0.01),显著下调肾组织α-SMA的表达(降低44%～58%,P＜0.01),减轻肾间质纤维化.结论:依那普利可显著抑制梗阻肾肾组织α-SMA的表达,减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其抑制肾组织TGF-β1信号蛋白Smad2/3的活性有关.     

糖肾方改善单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的机制研究

目的:观察糖肾方对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的作用,并初步探讨其机制。方法:45只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO模型组(UUO)、糖肾方组(TSF);预先给药7 d,除Sham组外其余各组行UUO手术,术后7 d取肾组织进行HE染色及Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组化染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen typeⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原(Collagen typeⅢ,ColⅢ)表达,Western Blot法检测转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、E-钙连素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达。结果:与Sham组比,UUO组小鼠肾小管间质损伤评分及纤维化面积百分比均显著升高;与UUO组比,TSF组肾小管间质损伤评分及纤维化面积百分比均显著降低。免疫组化与Western blot结果显示,与Sham组比,UUO组小鼠肾组织TGF-β_1及ColⅠ、ColⅢ表达水平显著升高;肾小管上皮细胞间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志性分子α-SMA和vimentin蛋白表达水平明显升高,E-cadherin蛋白表达水平明显降低,TSF可显著逆转UUO小鼠肾组织上述蛋白表达。结论:糖肾方可改善UUO小鼠肾间质纤维化,其机制与其抑制TGF-β_1,减少EMT发生有关。     

维甲酸抑制大鼠单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化

目的探讨维甲酸对大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响。方法建立大鼠UUO模型前2d治疗组和对照组分别每天给予10mg/kg全反式维甲酸或溶媒皮下注射。观察模型第3、7和12天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质巨噬细胞数、肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅲ和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达。结果维甲酸显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.01)。治疗组肾间质巨噬细胞数和肾间质α-SMA表达显著低于对照组(P<0.01)。维甲酸显著抑制胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达(P<0.01)。结论维甲酸减少大鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达、抑制α-SMA蛋白的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

骨形成蛋白7重组腺病毒的构建及对TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞α-SMA表达的影响

目的 构建骨形成蛋白7重组腺病毒(adenovirus bone morphogenetic protein 7.Adeno-BMP-7)及观察其对转化因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾系膜细胞(MC)α-SMA表达的影响.方法 构建Adeno-BMP 7并转染(M.O.I=100)大鼠肾系膜细胞,48h后用Western印迹法检测BMP-7蛋白的表达;分空白组.TGF-β1处理组(TGF-β1刺激24h,5ng/ml),Adeno-BMP 7转染组(TGF-β1刺激24h,5ng/ml;Adeno-BMP 7转染M.O.I=100),48h后用RT-PCR方法分别检测各组α-SMA的表达.结果 Western-blot检测示转染骨形成蛋白7重组腺病毒后的大鼠肾系膜细胞可表达BMP-7蛋白;RT-PCR示Adeno-BMP 7转染组α-SMA表达较TGF-β1处理组明显降低(Adeno-BMP 7转染组α-SMA/GAPDH值0.108,TGF-β1处理组α-SMA/GAPDH值0.112,P<0.05).结论 成功构建Adeno-BMP7,其转染能降低由TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞α-SMA的表达.     

骨成形蛋白-7在大鼠肾小管间质损害中的作用

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠中骨成形蛋白-7(BMP-7)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾小管间质损害的关系。方法60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组、假手术组和单侧输尿管梗阻组,分别于术后1d、3d、7d、14d处死。采用RT-PCR方法检测BMP-7mRNA、TGF-β1.mRNA表达水平,免疫组化方法检测肾小管间质中BMP-7、TGF-β1、α-SMA的蛋白定位、表达及其与输尿管梗阻后肾小管间质损害的关系。结果与对照组相比,BMP-7mRNA于术后第1天即出现表达下降并随梗阻时间延长递减;而TGF-β1mRNA则随梗阻时间延长而递增(P均<0.05)。BMP-7蛋白在对照组中高度表达,主要分布在肾小管及肾间质,肾小球内基本无表达。在梗阻组随着肾间质损害的加重,BMP-7蛋白表达呈进行性下降,第14天表达量最弱,几乎没有明显的阳性表达,而TGF-β1、α-SMA蛋白表达则逐渐增加(P均<0.01)。BMP-7与TGF-β1蛋白表达阳性面积成显著负相关(r=-0.875,P<0.05)。BMP-7与α-SMA蛋白表达阳性面积亦成显著负相关(r=-0.843,P<0.05)。结论BMP-7于肾小管间质病变早期即出现表达下调,早于肾间质纤维化的出现,其表达量与肾间质TGF-β1、α-SMA表达负相关且随间质病变进展进行性下降。BMP-7表达下调可能参与介导肾小管间质损害的发生发展。     

己酮可可碱对大鼠胰腺纤维化及TGF-β1、α-SMA、MMP-1、TIMP-1表达的影响

目的探讨己酮可可碱(PTX)对大鼠胰腺纤维化及TGF-β1、α-SMA、MMP-1、TIMP-1表达的影响。方法通过胰管内注射2%三硝基苯磺酸的方法制备大鼠胰腺纤维化模型。随机分为对照组、模型组、PTX干预组。PTX干预组于术后第2天给予PTX腹腔注射,6mg/(kg·d),4周后收集各组胰腺标本。免疫组化SABC法检测各组胰腺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的表达同时做组织胶原纤维染色。部分胰腺组织液氮冻存,以Westernblot方法检测α-SMA的表达。结果模型组发生胰腺纤维化,PTX干预组有轻度纤维化。PTX干预组α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达均低于模型组(P<0.01)。MMP-1的表达无明显差异。PTX干预组胶原面积百分比明显低于模型组(P<0.01)。结论PTX抗大鼠胰腺纤维化的作用可能与其降低TGF-β1、α-SMA、TIMP-1表达有关。     

骨形态发生蛋白-7在幼年大鼠肾小管间质损伤中的表达及意义

目的：探讨单侧输尿管梗阻（UUO）幼年大鼠肾间质纤维化形成过程中骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的表达趋势及其与转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的相关关系;观察血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素受体拮抗剂（ARB）的干预作用。方法：采用单侧输尿管结扎制备UUO模型。3～4周龄幼年Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和干预组。于实验第3、7、14、28天取大鼠8只处死。HE及Masson染色观察肾组织的病理改变;免疫组化半定量检测各组大鼠肾组织BMP-7、TGF-β1及α-SMA蛋白表达。了解BMP-7与TGF-β1、α-SMA、肾间质纤维化程度的关系。结果：随梗阻时间延长,模型组BMP-7表达逐渐下降,TGF-β1、α-SMA表达进行性增高,干预组BMP-7表达较模型组显著增加（P〈0.05）;TGF-β1、α-SMA表达较模型组明显减少（P〈0.05）。模型组肾小管间质TGF-β1、α-SMA表达明显增高（P〈0.05）,BMP-7表达显著减少（P〈0.05）。与模型组相比,干预组肾小管间质TGF-β1、α-SMA表达显著减少（P〈0.05）,而BMP-7表达显著增多（P〈0.05）。BMP-7与TGF-β1、α-SMA、肾间质纤维化程度成负相关（r分别为-0.844、-0.787、-0.952,P均〈0.01）。结论：BMP-7表达减少伴随着肾小管上皮细胞转分化出现,提示BMP-7可能具有维持小管上皮细胞表型作用。苯那普利联合氯沙坦可能通过下调TGF-β1、α-SMA蛋白的异常高表达,上调BMP-7蛋白的异常低表达,直接或间接负性调控肾小管上皮细胞转分化,阻止肾间质纤维化进展。     

转化生长因子-β1 在梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化中的作用

目的探讨转化生长因子 (TGF) -β1在梗阻性肾病(UUO)大鼠梗阻肾中致肾小管间质进行性纤维化的作用.方法成年SD大鼠制成UUO模型,在梗阻后3、7、10、14 d处死.免疫组织化学染色法对其肾内α-平滑肌肌动蛋白(SMA)沉积量及侵入肾内的单核巨噬细胞数进行分析;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)对大鼠TGF-β1 mRNA、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1 mRNA及IV型胶原(Col-IV) mRNA转录量进行分析.结果随梗阻时间延长,侵入梗阻肾内单核巨噬细胞数、α-SMA沉积、Col-IV mRNA及TIMP-1 mRNA含量增加;示肾小管间质存在进行性纤维化.同时TGF-β1 mRNA含量明显增加,差异统计学意义(P<0.05).结论 TGF-β1促使梗阻性肾病大鼠肾小管间质进行性纤维化.     

骨成形蛋白7对人肾小管上皮细胞增殖和转分化的影响

目的观察骨成形蛋白7(BMP-7)对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响,以探讨其延缓小管间质纤维化病变的作用及其可能机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1 50ng/mlBMP-7组、TGF-β1 100ng/mlBMP-7组。应用MTT比色法测定BMP-7对人肾小管上皮细胞增殖的作用;间接免疫荧光法测定人肾小管上皮细胞α-SMA、角蛋白、波形蛋白的表达;流式细胞仪检测表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分率;RT-PCR检测细胞中α-SMAmRNA的表达。结果与空白对照组相比,不同浓度的BMP-7处理HK-2细胞24、48h后,HK-2细胞均明显增殖(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,经TGF-β1刺激后,角蛋白表达减弱,α-SMA和波形蛋白表达增强;加入50ng/mlBMP-7处理24、48h后,细胞中α-SMA和波形蛋白表达减弱。流式细胞仪检测发现,加入50ng/mlBMP-7处理24、48h后,表达α-SMA的HK-2细胞阳性率逐渐下降,与TGF-β1处理组相比差异有显著性意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,空白对照组无α-SMAmRNA表达,5ng/mlTGF-β1组与空白对照组相比,α-SMAmRNA表达明显上调(P<0.05),而TGF-β1 50ng/mlBMP-7组、TGF-β1 100ng/mlBMP-7组与TGF-β1组相比,α-SMAmRNA表达有下降趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论TGF-β1促进肾小管上皮细     

丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响及作用机制.方法:雄性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO).设假手术组、模型组、治疗组(丹酚酸B 30 mg·kg-1·d-1)术后第9天处死各组大鼠.采用光镜观察肾间质纤维化、炎细胞浸润,免疫组化观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Vimentin蛋白表达的变化.结果:(1)治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻;(2)UUO模型第9天时大鼠肾组织TGF-β、α-SMA和Vimentin表达明显增强,炎细胞浸润明显增加.采用丹酚酸B治疗后,肾组织TGF-β1、α-SMA和Vimentin表达的异常增强能得到有效抑制,炎细胞浸润明显减少.结论:丹酚酸B具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效抑制炎细胞浸润和TGF-β1过度表达,进一步阻押肾小管上皮细胞转分化(EMT)有关.     

依那普利对梗阻性肾病大鼠肾组织p38丝裂素激活蛋白激酶活性的影响

目的研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)依那普利对梗阻性肾病模型肾组织p38丝裂素激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,治疗组从造模前24h至造模后28d以依那普利10mg·kg-1·d-1灌胃,另设假手术组作正常对照。分别于造模后1h,3h,6h,12h,1d,3d,5d,7d,14d,21d及28d取肾组织,应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38MAPK活性;免疫组织化学法检测磷酸化p38MAPK在肾组织中的表达和定位;免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGF-β1mRNA和蛋白水平的表达。结果正常大鼠肾组织基础的p38MAPK活性(吸光度值)为0.22±0.06。UUO术后1h,p38MAPK即被激活(0.45±0.14,P<0.01),并呈进行性升高,12h时达第1个高峰(0.91±0.07,P<0.01),此后活性逐渐下降;第3天后又进行性升高,第7天达到第2个高峰(0.93±0.06,P<0.01)。TGF-β1的表达在UUO术后1h、3h、6h、12h及24h均无明显增加;在第3天有明显增加(A值,13.55±6.33比基础4.32±1.72,P<0.01);第7天达高峰(26.78±8.77,P<0.01)。梗阻肾肾组织p38MAPK的激活明显早于TGF-β1表达,且p38MAPK早期活性的强弱与肾组织TGF-β1的表达水平相一致。依那普利治疗可以明显抑制p38MAPK活性(下降36%～65%,P<0.01),显著降低肾组织TGF-β1表达(下降33%～4     

绞股蓝总皂苷防治单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨绞股蓝总皂苷(GPs)对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达及肾间质纤维化的影响。方法采用UUO大鼠模型,将大鼠随机分为3组假手术组、模型组、GPs组。假手术组和模型组仅给予标准饲料30g,GPs组于术前3d至术后9d每天给予GPs200mg·kg-1·d-1灌胃,第9d处死各组大鼠。免疫组化法检测各组肾组织CTGF、转换生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;RT-PCR方法检测各组CTGFmRNA含量;Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组CTGF、TGF-β1、α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而GPs组各项指标明显低于模型组(P<0.01)。各项指标作相关分析,CTGF与肾小管间质损伤指数(r=0.788,P<0.01)、TGF-β1(r=0.879,P<0.01)、α-SMA(r=0.940,P<0.01)为正相关关系。结论绞股蓝总皂苷可以抑制肾纤维化时结缔组织生长因子表达,从而遏制肾纤维化的进展。     

γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用

目的 了解γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕疙瘩Fh(KFb)中TGF-β/Smad信号通路的作用,探讨IFN一γ治疗病理性搬痕的可能机制. 方法 切取3例患者的瘢痕组织,体外分离培养KFb,实验选用第3～5代细胞.(1)将KFb分为:对照组,加无血清DMEM培养;TGF-β_1组,用10 ng/mL的TGF-β_1单独作用;IFN-γ组,用100 ng/mL的IFN-γ单独作用;TGF-β_1+IFN-γ组,10 ng/mL的TGF-β_1与100 nS/mL的IFN-γ联合作用.采用实时荧光定量RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光细胞化学染色法,分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA、蛋白表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达与阳性细胞表达情况.(2)另取KFb,用10 ng/mL的IFN-γ作用,于作用前及作用后30 min和1、2、4、6、8 h通过实时荧光定量RT-PCR检测Smad 3和Smad 7的mRNA表达,于作用前及作用后1、2、4、6、8 h用蛋白质印迹法检测Smad 3和Smad 7的蛋白表达.(3)另取KFb,根据添加的IFN-γ终浓度不同分为1、10、100 ns/mL IFN-γ组,均作用4 h;设立未添加IFN-γ的KFb为对照组.同前检测各组Smad 3和Smad 7的mRNA及蛋白表达. 结果 (1)IFN-γ组KFb CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.017±0.009与1.198±0.004,较对照组(0.024±0.013与1.229±0.011)显著减少(P<0.05);TGF-β1+IFN-γ组CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.634±0.138与1.204±0.010,较TGF-β_1组(1.331±0.298与1.727±0.004)显著减少(P<0.01).IFN-γ组KFb中,α-SMA阳性细胞荧光强度(0.922±0.059)和α-SMA蛋白表达量(0.3051±0.0031)较对照组(1.055±0.005与0.4513±0.0094)显著减少(P<0.01);TGF-β1+IFN-γ组SMA阳性KFb荧光强度(1.129±0.004)和SMA蛋白表达量(0.6734±0.0098)较TGF-β_1组(1.270±0.005与1.38420.0024)显著减少(P<0.01).(2)10 ng/mL IFN-γ作用后第1个时相点,Smad 3的mRNA和蛋白表达量均出现一过性增高,随后降低,mRNA表达量于作用后4 h降至最低点,随后缓慢上升,至作用后8 h仍低于作用前(P<0.01);其蛋白表达量于作用后2~8 h显著低于作用前(P<0.01).而Smad 7的mRNA和蛋白表达量在INF-γ作用后逐渐增高,分别于作用后2、4 h达峰值随后降低,至作用后8 h仍高于作用前(P<0.05).(3)与对照组比较,1、10、100 ng/mL IFN-γ组Smad 3的mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05或P<0.01),Smad 7的mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.05或P<0.01),且随IFN-γ浓度升高,减少或增高幅度愈为显著. 结论 IFN-γ呈时间和剂量依赖方式下调Smad 3、上调Smad 7,降低基础状态下或经TGF-β_1诱导后KFb的CTGF和α-SMA表达量,表现出对TGF-β/Smad 信号通路的显著拮抗作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制.     

肾衰饮对肾纤维化大鼠TGF-β_1/Smad信号通路的作用研究

目的:探讨肾衰饮抗肾纤维化分子生物学机制。方法:采用腺嘌呤肾病模型,随机将60只SD大鼠分为空白组、模型组、肾衰饮组与尿毒清组,采用RT-PCR观察肾衰饮对CRF大鼠TGF-β1mRNA表达的影响;ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达;免疫组化法检测α-SMA蛋白表达。结果:模型组与正常组比较TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7下降,治疗后肾衰饮组TGF-β1mRNA表达明显减少,Smad2、Smad3水平下降,Smad7升高,同时肾组织α-SMA表达下降,明显优于尿毒清(P0.05)。结论:肾衰饮抑制TGF-β1mRNA表达,提高Smad7水平,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,以抑制肾纤维化的发生、发展。     

益气清利化瘀方对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化作用机制研究

目的:研究益气清利化瘀方对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的影响及可能作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为6组，每组8只，分别为假手术组、模型组、科素亚组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组；大鼠采用UUO模型；中药组用益气清利化瘀方小、中、大剂量配方颗粒，西药用氯沙坦钾片，术后2 d开始给药，2周后处死大鼠，肾脏组织予光镜观察及免疫组化法检测α-SMA、TGF-β₁、Smad2和Smad7的表达；Western Blot方法检测肾组织TGF-β₁、Smad7蛋白的表达；血清予检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)和白蛋白(Alb)。结果:与模型组比较，中药大剂量组肾小管正常结构存在，炎症细胞浸润少。治疗后各组Scr、UA较模型组均有下降，其中血Scr下降明显，中药大剂量组和中剂量组优于其他组(P<0.01);免疫组化显示各治疗组α-SMA、TGF-β₁减少，Smad2表达减弱，Smad7的表达升高，以中药大剂量组改变最明显(P<0.01);Western Blot检测显...     

松果菊苷对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究

目的基于TGF-β1/Smads信号通路探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)的作用机制。方法自2019年3月至2020年2月新疆医科大学第一附属医院整形外科体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞;通过CCK-8法分析ECH作用24 h和48 h细胞的抑制活性。采用划痕试验检测HSFbs的迁移能力;流式细胞术检测ECH作用24 h后细胞周期的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测Smad2、Smad3、Smad7、Col1、Col3、Fibronectin和α-SMA的m RNA的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测Smad2/3、P-Smad2/3、Smad7、Col1、Col3、Fibronectin和α-SMA蛋白的表达。结果随着ECH质量浓度的增高,HSFbs的细胞存活率逐渐降低,且呈现浓度依赖性,其IC50值为52.26μg/ml;ECH作用于HSFbs 24 h后,可将HSFbs阻滞在G0-G1期;不同浓度的ECH均可抑制HSFbs的迁移;相比模型组,实验组25、50μg/ml ECH均能够降低TGF-β1诱导的Col1、Col3、Smad2、Smad3、Fibronectin和α-SMA m RNA表达,50μg/ml ECH可促进Smad7m RNA表达;在蛋白表达水平上25、50μg/ml ECH均可使Col3、Fibronectin蛋白表达明显降低,Smad7蛋白表达明显增加,50μg/ml ECH组可降低P-Smad2/3、Col1和α-SMA的蛋白表达。结论ECH的可通过阻断TGF-β1/Smad信号通路进而抑制HSFbs活化、增殖与迁移,并减少胶原的分泌。     

小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1在肝纤维化发生及发展中的作用

目的 探讨小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)在肝纤维化发生及发展过程中的作用.方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺制备小鼠肝纤维化模型,按时间将小鼠分为模型4、5、6周组(各10只),并分别设立正常对照组(各6只),采用Masson染色检测肝组织胶原沉积,免疫组织化学检测肝组织中IGFBPrP1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1和Smad3蛋白表达和分布,同时以Western blot检测IGFBPrP1、α-SMA和Smad3蛋白表达.采用单因素方差分析、Pearson等级相关检验进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 免疫组织化学检测结果发现,模型组小鼠肝组织中IGFBPrP1由0.21±0.03上升到5.03±0.09,α-SMA由0.11±0.04上升到10.09±0.18,Collagen Ⅰ由0.22±0.01上升到11.01±±0.16,FN由0.31±0.09上升到19.81±1.62,TGF-β1由0.49±0.02上升到5.97±0.19,Smad3由0.22±0.03上升到2.03±0.07,这些检测因子在模型组的表达与正常对照组比较,随时间的增加而明显增强(F=783.141,998.200,886.715,935.242,931.241,697.118,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、Collagen Ⅰ、FN、TGF-β1和Smad3的表达均呈正相关(r=0.906,0.927,0.988,0.947,0.977,P<0.05).Western blot检测结果发现,模型组小鼠肝组织的IGFBPrP1蛋白表达量由0.23±0.01上升到0.92±0.07,α-SMA蛋白表达量由0.36±0.02上升到1.39±0.03,FN蛋白表达量由0.03±0.00上升到0.12±0.02,Smad3蛋白表达量由0.09±0.01上升到0.56±0.04,模型组小鼠的蛋白表达量均较正常对照组明显升高(F=57.316,201.214,103.871,72.966,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、FN和Smad3的表达均呈正相关(r=0.982,0.924,0.965,P<0.05).结论 IGFBPrP1随着肝纤维化程度的加重,其表达水平逐渐上调,IGFBPrP1的促肝纤维化作用可能与促进肝星状细胞激活、使细胞外基质的重要组成成分Collagen Ⅰ和FN的合成与分泌增加及影响TGF-β1/Smad3信号通路有关.     

慢性马兜铃酸肾病患者肾小管上皮细胞转分化的研究

目的探讨慢性马兜铃酸肾病。肾小管上皮细胞转分化与肾间质纤维化的关系。方法以慢性马兜铃酸肾病患者的肾组织为标本,作常规Masson染色化病理检查;用天狼星红组织化学(组化)染色检查胶原Ⅰ、Ⅲ表达;用免疫组化染色检查角蛋白(CK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。对结果进行定量或半定量分析。结果 肾间质Masson染色纤维化面积及胶原Ⅰ、Ⅲ面积,与肾小管间质α-SMA及Vim阳性表达面积呈显著正相关(P<0.05),与肾小管CK阳性表达面积呈显著负相关(P<0.05);病变过程中健存肾小管TGF-β1表达明显增强。结论慢性马兜铃酸肾病患者的肾小管上皮细胞可转分化为肌成纤维细胞,参与肾间质纤维化,而这细胞转分化很可能与其自身高表达TGF-β1相关。     

苦参碱调控Snail2表达水平抑制转化生长因子β1诱导的人腹膜间皮细胞上皮间充质转分化

目的 研究苦参碱对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导腹膜间皮细胞上皮间充质转分化(EMT)后转录因子Snail2的影响.方法 采用TGF-β1刺激人腹膜间皮细胞并同时予不同浓度苦参碱干预处理,实验分为空白对照组、TGF-β1(5 ng/ml)诱导组、TGF-β1+0.4 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.6 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.8 mg/ml苦参碱干预组和TGF-β1+1.0 mg/ml苦参碱干预组.实时荧光定量PCR和Western印迹检测Snail2、上皮标志分子E钙黏蛋白(E-cadherin)和间质标志分子α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅲ(ColⅢ)的表达,Western印迹检测Smad2、Smad3和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的蛋白磷酸化水平.结果 TGF-β1(5 ng/ml)刺激能上调人腹膜间皮细胞Snail2、α-SMA、FN和ColⅢmRNA和蛋白的表达水平,上调Smad2、Smad3和ERK1/2的蛋白磷酸化水平,下调E-cadherinmRNA和蛋白的表达水平;苦参碱(0.4、0.6、0.8、1.0 mg/ml)干预处理后能下调Snail2和α-SMA、FN和ColⅢmRNA和蛋白的表达水平以及ERK1/2的蛋白磷酸化水平,上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平.结论 TGF-β1能诱导人腹膜间皮细胞EMT,苦参碱可能通过ERK1/2信号通路下调Snail2的表达水平来抑制TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞EMT.     

上调肾组织intermedin表达抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的观察上调肾组织intermedin(IMD)表达对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。 方法健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组、IMD＋UUO组、空质粒＋UUO组。IMD＋UUO组和空质粒＋UUO组在输尿管结扎前分别将IMD-pcDNA3.1真核表达质粒和空质粒转入肾组织,real-time RT-PCR及免疫组化法检测转染效率。各组分别于术后7 d、14 d留取梗阻侧肾组织。HE、Masson染色观察肾组织病理变化;real-time RT-PCR检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤连蛋白(Fn1)的mRNA表达;Western印迹法检测Fn1的蛋白表达;免疫组化法检测TGF-β1的蛋白表达。 结果与假手术组相比,UUO组肾脏出现明显的病理改变,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长加重(与假手术组比较,7 d, t＝11.927,P＝0.0003;14 d, t＝8.891,P＝0.0009);IMD＋UUO组肾脏病理改变及肾间质纤维化程度较同时间点UUO组明显减轻(7 d, t＝3.892,P＝0.018;14 d, t＝4.047,P＝0.016),而空质粒＋UUO组与UUO组无显著差别(7 d, t＝0.562,P＝0.604;14 d, t＝0.035,P＝0.974)。与同时间点假手术组相比,UUO组TGF-β1、Fn1的表达明显升高(TGF-β1 mRNA水平7 d, t＝4.432,P＝0.011;14 d, t＝4.873,P＝0.006;蛋白质水平7 d, t＝5.312,P＝0.006;14 d, t＝4.482,P＝0.011;Fn1 mRNA水平7 d, t＝6.053,P＝0.004;14 d, t＝7.345,P＝0.002;蛋白质水平7 d, t＝8.791,P＝0.009;14 d t＝8.027,P＝0.001);转染IMD质粒后Fn1的表达较同时间点UUO组明显下降(mRNA水平7 d, t＝3.103,P＝0.036;14 d, t＝2.913,P＝0.044;蛋白质水平7 d, t＝2.955,P＝0.042;14 d, t＝2.991,P＝0.040);而转染空质粒后Fn1的表达无明显变化(mRNA水平7 d, t＝0.095,P＝0.929;14 d, t＝0.158,P＝0.882;蛋白质水平7 d, t＝0.159,P＝0.881;14 d, t＝0.170,P＝0.874)。转染IMD和空质粒对TGF-β1的表达均无明显影响(转染IMD质粒mRNA水平7 d, t＝0.176,P＝0.869;14 d, t＝0.126,P＝0.906;蛋白质水平7 d, t＝0.198,P＝0.853;14 d, t＝0.196,P＝0.854;转染空质粒mRNA水平7 d, t＝0.100,P＝0.925;14 d, t＝0.097,P＝0.928;蛋白质水平7 d, t＝0.042,P＝0.968; 14 d, t＝0.060,P＝0.955)。 结论上调肾组织IMD的表达能明显减轻肾间质纤维化,但其作用不是通过直接抑制TGF-β1的表达实现的。