CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗？…

本研究以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胸嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｔｎ）基因体内联合转染，观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理。小鼠皮下接种结肠腺癌ＣＴ２６细胞后３天，肿瘤局部注射表达Ｌｔｎ的重组腺病毒ＡｄＬｔｎ和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胸嘧啶（５－ＦＣ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗，结果表明，联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制，小鼠存活期明     

SCF或（和）GM—CSF体内基因转染对“自杀基因”疗法抗肿瘤作用的增？…

目的 通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效,探讨其相关免疫学机理。方法 采用腺病毒介导的ＳＣＦ,ＧＭ－ＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌,观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果 一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭ－ＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染,能增强“自杀基因”疗法的疗效,在肿瘤局部出     

SCF或(和)GM-CSF体内基因转染对"自杀基因"疗法抗肿瘤作用的增强效应及其相关机理的研究

目的通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效，探讨其相关免疫学机理。方法采用腺病毒介导的ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌，观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期、不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染，能增强“自杀基因”疗法的疗效。在肿瘤局部出现新的细胞因子表达，包括ｍＩＬ４、ｍＩＬ２、ｍＩＦＮγ和ｍＴＮＦα。脾细胞对ＣＴ２６细胞的杀伤作用增强。结论ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的联合转染对“自杀基因”系统的疗效具有明显的增强作用，其与机体特异抗肿瘤免疫功能以及肿瘤局部分泌的细胞因子有关。     

腺病毒介导的CD／5FC自杀基因疗法对小鼠结肠腺癌的治疗？…

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶ＣＤ可以将前体药物５ＦＣ代谢为毒性产物５ＦＵ，具有抗肿瘤作用。本课题我们观察了腺病毒介导的ＣＤ／５ＦＣ自杀基因治疗对小鼠结肠癌生长的治疗作用并探讨其作用机理。结果表明，首次，ＣＤ／５ＦＣ自杀基因疗法小鼠结肠癌ＣＴ２６体内外生长均具有显著的抑制作用，４０％的荷瘤小鼠经过治疗后长期存活；其次，我们还研究了自杀基因疗法治疗肿瘤时可能涉及的免疫机理。结果发现在以ＣＤ／５ＦＣ系统治疗结肠     

生长抑素 SMS201-995 对小鼠结肠腺癌肝转移瘤的实验研究

目的本研究观察生长抑素衍生物ＳＭＳ２０１┐９９５对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠结肠腺癌（ＣＴ２６）肝转移瘤细胞周期的影响，检测血清ＣＥＡ水平的变化，并观察小鼠生存期的改变。方法采用流式细胞术。结果与对照组相比，ＳＭＳ２０１┐９９５治疗组的瘤细胞增殖指数和Ｓ期细胞百分比明显降低（Ｐ＜０．０１），而Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比则明显增加（Ｐ＜０．０１）。治疗组血清ＣＥＡ水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０５），生存期明显延长。治疗组细胞增殖指数，Ｓ期和Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比与血清ＣＥＡ的变化密切相关（相关系数与Ｐ值分别为：ｒ＝０．６６７７，Ｐ＜０．０５；ｒ＝０．７１７０，Ｐ＜０．０１；ｒ＝－０．６７０３，Ｐ＜０．０５）。结论ＳＭＳ２０１┐９９５对结肠腺癌（ＣＴ２６）肝转移性肿瘤的生长具有一定的抑制作用。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

瘤内/瘤周注射巨噬细胞集落刺激因子或(和)干扰素γ基因转染的巨噬细胞对肿瘤的治疗作用

目的观察巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）和干扰素γ（ＩＦＮγ）基因单独或联合转染的巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍ）对局部黑色素瘤的治疗效果及相关免疫机理。方法荷瘤小鼠经基因转染的巨噬细胞治疗后，观察其长期存活期并检测其体内抗肿瘤免疫功能。用４小时５１Ｃｒ释放法检测荷瘤小鼠脾细胞自然杀伤细胞（ＮＫ）、细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性，间接ＭＴＴ法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤活性，常规方法检测脾细胞诱导上清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素２（ＩＬ２）、γ干扰素（ＩＦＮγ）活性，局部肿瘤经治疗后行常规病理分析。结果经ＩＦＮγ基因及联合基因转染的巨噬细胞治疗后的荷瘤小鼠有２５％能长期存活，体外诱导的ＣＴＬ和小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性显著增强，脾细胞经诱导产生的细胞因子有不同程度的增加，与对照组相比差别显著。常规病理显示，ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ联合基因转染的巨噬细胞治疗的小鼠肿瘤局部有大量的淋巴细胞浸润。结论ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ基因转染的巨噬细胞瘤内瘤周注射对肿瘤有较好的治疗效果，其机制除了与巨噬细胞在局部直接接触杀伤瘤细胞有关外，宿主抗肿瘤免疫功能的增强亦起了重要的作用     

nm23蛋白在非小细胞肺癌患者肺癌组织和淋巴结表达的临床意义

目的探讨ｎｍ２３基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白－过氧化物酶（Ｓ－Ｐ）快速免疫组织化学法检测４９例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者肺癌组织和４９份配对淋巴结标本ｎｍ２３基因产物－核苷二磷酸激酶（ＮＤＰＫ／ｎｍ２３）。结果ＮＤＰＫ／ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ的肺癌组织表达为５７．１４％（２８／４９），其中鳞癌为６０．８７％（１４／２３），腺癌为５３．８５％（１４／２６）。２６例伴淋巴结转移的肺癌标本中阳性１６例（６１．５４％）。ＮＤＰＫ／ｎｍ２３表达与淋巴结转移没有负相关，在淋巴结转移灶有较高表达（５３．８５％，１４／２６）。结论ｎｍ２３基因在肺癌的发生、转移中可能起着不同的作用。     

T细胞及相关免疫分子在淋巴细胞趋化因子增强肿瘤自杀基因疗法中的作用

本室以往的研究表明,用腺病毒作为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Itn)基因联合体内转染,具有显著的抗肿瘤效应.本文对其免疫机理进行了进一步研究,发现CT26结肠腺癌细胞体外经过CD/Ltn基因转染并给予前体药物5-FC后,CT26结肠腺癌细胞表达CD80和CD54分子明显增加,提示经CD自杀基因和Ltn基因联转移后,肿瘤细胞免疫原性增加.荷瘤小鼠体内经联合治疗后,小鼠脾细胞分泌IL-2和IFN-γ明显增加.体内用抗CD4、CD8抗体阻断实验研究结果的表明,联合应用自杀基因和Ltn基因治疗主要通过诱导CD8~ T细胞发挥抗肿瘤作用.     

大肠癌原发灶和肝转移灶DCC基因存在状态的研究

目的：了解ＤＣＣ基因在大肠癌复发，转移过程中的变化及其与肝转移的关系。方法：采用免疫组化和聚酶链反应一单链构我态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对１３６例大肠癌术后复发患和３０例有肝多的大肠癌原发灶及肝转移灶进行了ＤＣＣ基因存在状态的研究。结果：大肠癌ＤＣＣ基因蛋白多数呈阴性表达，且与局部复发关系密切，局部复发ＤＣＣ表达下降明显，肝转移多数发生ＤＣＣ表达失活，ＤＣＣ蛋白阴性９２．９％（２６／２８）失支再手术的机会或虽勉强手术但不到１年内即复发，而ＤＣＣ蛋白阳性７１．４％（５／７）可再手术且术存活期较长，经ＳＳＣＰ分析，有肝转移的大肠癌原发灶ＤＣＣ基因ｃＤＮＡ疗列变异率为４０％（１４／３５），皆为ＤＣＣ蛋白阴性的患，肝转移灶变异率为４８．８％（１７／３５），结论：ＤＣＣ基因失活可能是影响大肠预后的重要因素这     

低剂量环磷酰胺增强MHC I类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏 …

目的：研究低剂量环磷酰胺（Ｃｙ）联合ＭＨＣ Ｉ类限制性肿瘤抗原多肽Ｍｕｔｌ致敏、白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的树突状细胞（ＤＣｓ）对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理。方法：制备小鼠骨髓来源的ＤＣｓ,用转移性Ｌｅｗｉｓ肺癌特异性多肽Ｍｕｔｌ预激经ＩＬ－２基因修饰的ＤＣｓ联合低剂量Ｃｙ治疗转移性肺癌小鼠。通过ＦＡＣＳ分析其脾细胞内Ｔ淋巴细胞比例的变化,＾５１Ｃｒ释放法检测ＣＴＬ和ＮＫ细胞杀伤     

mdr1基因在人肺腺癌多药耐药细胞系LC－3／DDP中的表达

目的研究多药耐药基因（ｍｄｒ１）表达与人肺腺癌多药耐药细胞系（ＬＣ－３／ＤＤＰ）耐药性产生的关系。方法应用地高辛标记的ｍｄｒ１ｃＤＮＡ探针，采用原位杂交方法，检测ｍｄｒ１基因在人肺腺癌多药耐药细胞系ＬＣ－３／ＤＤＰ中的表达水平。结果该细胞系与亲代细胞比较，存在ｍｄｒ１基因超表达。结论ｍｄｒ１基因表达是人肺腺癌多药耐药细胞系ＬＣ－３／ＤＤＰ产生耐药性的相关因素。     

人肺腺癌细胞经化疗药物作用后对LAK细胞的敏感性

在体外实验中研究了８种化疗药物作用后的个旧人肺腺癌细胞（ＧＬＣ－８２）对ＬＡＫ细胞的敏感性。ＧＬＣ－８２细胞本身对化疗药物不敏感，经药物作用２４小时后用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测ＬＡＫ细胞对其杀伤率。结果表明：顺铂（ＣＤＤＰ）、卡铂（Ｃａｒｂｏ）、阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）及长春新硷（ＶＣＲ）处理后的ＧＬＣ－８２细胞对ＬＡＫ细胞的敏感性增强；环磷酰胺（ＣＴＸ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）及５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）则无明显影响。实验提示：对化疗不敏感的肺腺癌用ＣＤＤＰ、Ｃａｒｂｏ、ＡＤＭ、ＭＭＣ及ＶＣＲ后加用ＬＡＫ细胞可提高肺癌治疗的有效率。     

联合应用MLV-rIL-2、TIL、CY抗鼠H22肝癌的实验研究

表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）基因的重组腺病毒ＡｄＣＤ体外转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６Ｆ１０，结果显示转梁了ＣＤ基因的Ｂ１６Ｆ１０细胞对５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性显著提高。将经ＡｄＣＤ／５ＦＣ系统处理的Ｂ１６Ｆ１０细胞止清倍比稀释后，加至野生型了Ｂ１６Ｆ１０细胞中，发现当上清仅占６．２５％时即可对野生型Ｂ１６Ｆ１０细胞发挥明显的杀伤作用，提示ＡｄＣＤ／５ＦＣ介导的旁观者效应可能是通过５ＦＣ经Ｃ     

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理研究

本研究以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)基因体内联合转染,观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理.小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞后3天,肿瘤局部注射表达Ltn的重组腺病毒AdLtn和表达CD的重组腺病毒AdCD,然后连续10天给予5一氟胞嘧啶(5-FC)300mg/kg进行治疗,结果表明,联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制,小鼠存活期明显长于单用AdLtn治疗组或单用AdCD/5-FC治疗组.经联合治疗后小鼠脾细胞的NK活性和对(37结肠腺癌细胞的CTL杀伤活性明显增强.瘤体细胞FACS分析结果表明,经联合基因治疗后,肿瘤组织CD4~ 、CD8~ 细胞浸润增加,结肠腺癌细胞表达H-2Kd和B7-1分子明显增加.提示经CD自杀基因和Ltn基因联合治疗后,肿瘤细胞免疫原性增加.本研究结果表明联合应用自杀基因和Ltn基因治疗可以提高机体对肿瘤细胞免疫的应答,增加机体的抗肿瘤作用,是肿瘤基因治疗中一条新的途径.     

诱导体外扩增的小鼠骨髓CD34+造血细胞分化为树突状细胞

诱导体外培养扩增后的小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞分化为树突状细胞（ＤＣ）。方法Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞采用血管内皮细胞共培养方法进行体外扩增，扩增后的ＣＤ３４＋细胞经磁性细胞分选技术纯化，并用ＧＭ┐ＣＳＦ等细胞因子诱导其向ＤＣ分化。结果小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞不论是否经过体外培养均可被诱导分化为ＤＣ，后者具有典型的树突状形态特征，表达高水平的ＭＨＣⅠ、Ⅱ类抗原和ＣＤ８６共刺激分子，在混合白细胞反应（ＭＬＲ）中能有效地刺激静息期Ｔ淋巴细胞增殖。结论小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞经体外培养扩增后仍然具有向ＤＣ分化的能力，通过骨髓细胞体外培养扩增可以显著提高ＤＣ产量。     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

MVP方案治疗非小细胞肺癌26例临床观察

我院１９９６年１月～１９９８年１０月，采用丝裂霉素（ＭＭＣ）、长春地辛（ＶＤＳ）、顺铂（ＤＤＰ），组成ＭＶＰ方案治疗非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）２６例，获得较好的近期疗效，现总结报告如下。１　资料与方法１．１　临床资料本组共２６例，男性１８例，女性８例，年龄３０～７６岁，平均５３岁。全部病例经病理组织学或细胞学证实。其中鳞癌１６例，腺癌１０例。全组病人均为Ⅲ～Ⅳ级，预期生存期超过３个月。所有病例治疗前Ｋａｒｕａｆｓｋｙ评分均在６０分以上。１．２　治疗方法ＭＭＣ６ｍｇ／ｍ２，静脉注射，第１天；ＶＤＳ…     

耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP的建立及耐药机制

采用递增顺铂（ＤＤＰ）浓度的方法，体外连续培养建成一株耐ＤＤＰ的人肺腺癌细胞系Ａ（５４９）ＤＤＰ，耐ＤＤＰ为亲代Ａ（５４９）的２４．４倍。在无ＤＤＰ的培养基中培养５月余，其耐药性仍稳定。Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞内谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平显著高于亲代细胞（Ｐ＜０．０１）。ＢＳＯ耗竭细胞内ＧＳＨ后，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ敏感性增加５倍，ＢＳＯ对亲代Ａ（５４９）细胞无增敏作用，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞ＧＳＴ酶同功酶ＧＳＴ—π含量较Ａ（５４９）高１．６倍，却无ＧＳＴ基因扩增，表明ＧＳＨ／ＧＳＴ解毒系统参与Ａ（５４９）ＤＤＰ耐药性的产生。实验结果亦示Ａ（５４９）ＤＤＰ与卡铂及氨甲喋呤间存在交叉耐药，而与易产生ＭＤＲ或ａｔＭＤＲ之ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＶＰ－１６、ＶＭ－２６无交叉耐药，Ａ（５４９）细胞无Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ研究Ａ（５４９）ＤＤＰ无ｍｄｒｌＴｏｐｏⅡ基因扩增，提示Ａ（４５９）ＤＤＰ细胞系与ＭＤＲ及ａｔ－ＭＤＲ无交叉耐药。     

人肺癌组织中C—Ha—ras,C—myc和C—sis基因的扩增

用同位素α－＾３２ＰｄＣＴＰ标记癌基因Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｖ－ｓｉｓ基因片段，通过点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测１７例鳞癌，９例腺癌６例其它类肺癌组织和６例非肺癌组织中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｓｉｓ基因扩增的情况，结果发现：４６．８％（１５／３２）的肺癌组织有Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，其中１０例（５８．８％）鳞癌，３例腺癌（３３．３％）出现Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，２５％（