乙型肝炎与载脂蛋白基因多态性相关性研究

目的探讨ApoAI-75Mspl、ApoB—Msp1、ApoCllI—Sst1、LRP5、ApoE基因多态性与乙型肝炎血清标志物不同模式之间的内在相关性。方法将乙型肝炎血清标志物不同模式分为9组,每组80人,共720人份,采用SnaPshot法检测上述基因的多态性,最后用测序法佐证检测结果的准确性。结果ApoAI-75Msp1、ApoE基因在乙型肝炎血清标志物不同模式之间差异有统计学意义（P〈0．05）,ApoCIII-Sst1、ApoB．Msp1、LRP5基因则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ApoAI-75Msp1、ApoE基因多态性与乙型肝炎血清标志物不同模式有相关性,ApoCIII-Sstl、ApoB—Msp1、LRP5与乙型肝炎血清标志物不同模式无相关性。     

载脂蛋白E多态性与脑梗死及脂类代谢关系的研究

目的:探讨载脂蛋白E(ApoE)多态性与脑梗死及脂类代谢的关系。方法:缺血性脑梗死组110例,健康对照组60例。ApoE表型采用等电聚焦(IEF)电泳及免疫印迹(Westernblotting)技术测定,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)采用酶法测定,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)按Fridwald公式计算,ApoAⅠ、ApoB用火箭电泳法测定,ApoE、脂蛋白(a)用ELISA法测定。结果:脑梗死组ApoEε4等位基因表达显著高于对照组(P＜0.05);脑梗死组TC、TG、LDL-C、ApoB、ApoE、Lp(a)水平显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),ApoAⅠ、HDL-C显著低于对照组(P＜0.05);脑梗死组各等位基因(ε2、ε3、ε4)之间血脂水平比较;含ε4等位基因者,TC、LDL-C、ApoB、Lp(a)水平高于含ε3者(P＜0.05),HDL-C、ApoAⅠ较低(P＜0.05);含ε2等位基因者,TG、HDL-C、ApoAⅠ、ApoE高于含ε3者(P＜0.05),TC、LDL-C、ApoB较低(P＜0.05)。结论:ApoEε4等位基因与脑梗死发病有关,ε2、ε4等位基因与脑硬死患者的脂类代谢改变有关。     

肿瘤坏死因子基因多态性与乙型肝炎的相关性研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF)基因多态性与乙型肝炎易感性的关系。方法 :以病例 对照的研究方法 ,采用PCR RFLP技术检测 14 6例乙型肝炎患者和 165名正常对照者TNF α和TNF β基因型。 结果 :TNF αG/G和G/A基因型在病例组各占 95%和 5% ,对照组中分别为 88%和 12 % ,二组比较 ,基因型和等位基因频率分布差异有显著性的意义 (P <0 .0 5)。而TNF βG/G、G/A和A/A基因型在病例组各占 3 0 %、40 %和 3 0 % ,对照组中分别为 2 6%、 51%和 2 3 % ,二组比较差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 :TNF αG等位基因可能是乙型肝炎易感性的遗传标记 ;TNF αG /G基因型个体乙型肝炎病毒感染的风险率增高     

北京地区汉族人载脂蛋白B基因多态性的观察

应用聚合酶链反应研究了１００例北京地区正常汉族人载脂蛋白Ｂ基因４个位点的多态性分布情况。在这一群体中，载脂蛋白Ｂ信号肽序列以Ｉｎｓ等位基因占优势，其频率达０．７６５，而Ｄｅｌ等位基因相对少见（０．２３５）．ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点以Ｘ－和Ｅ＋等位基因占绝大多数，其频率分别为０．９７５和０．９６，Ｘ＋和Ｅ－等位基因十分少见，其频率仅为０．０２５和０．０４．对可变数目串联重复序列共检出１０种等位基因（３＇β２９～３＇β４９），其中以３＇β３７等位基因最为常见，其次为３＇β３９等位基因，两者检出率达６８％。结果表明，北京地区汉族人的载脂蛋白Ｂ基因多态性分布与不同种族间存在明显差异，与白种人的差异尤为显著。揭示人类不同种族有其自己的遗传特点。     

HLA-DQA1基因多态性和HBV感染结局的关联

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)DQA1基因多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染临床结局的关联.方法 临床收集慢性乙型肝炎(120例)、慢性HBV携带者(60例)、自限性HBV感染者(60例)三组病例,前两组诊断均经肝活检证实.聚合酶链反应序列特异性引物(PCR-SSP)法检测HLA-DQA1基因型,比较组间基因频率的差异.结果 (1)HLA-DQA1*0201在慢性乙型肝炎组的分布频率显著高于自限性HBV感染组(38.3% vs 5.8%,P<0.001,A=10.04,95% CI:4.48～22.48);HLA-DQA1*0102的分布频率显著低于自限性HBV感染组(9.6% vs 36.7%,P<0.001,A=0.183,95%CI:0.10～0.32).(2)HLA-DQA1*0201在慢性乙型肝炎组的分布频率显著高于慢性HBV携带者组(38.3% vs 7.5%,P<0.01,A=7.667,95% CI:3.7～15.87);HLA-DQA1*0102的分布频率显著低于慢性HBV携带者(20% vs 9.6%.P<0.01,A=0.424,95% CI:0.23～0.79).结论 HLA-DQAI基因多态性影响HBV感染临床结局,其中DQA1*0102呈保护作用,DQA1*0201可能促进HBV感染的慢性化和肝炎的发生.     

雌激素受体β基因多态性与血脂水平的研究

目的:探讨中国人群雌激素受体β(ERβ)基因多态性的分布情况及其与血脂水平的关系。方法:采用PCR-RFLP技术检测湖北地区131例正常人的ERβ基因RsaI和AluI酶切多态性,同时检测血脂水平。结果:分析ERβ基因RsaI和AluI两个酶切位点的基因多态性,分别以Rr型、aa型最多,而以RR型、AA型最少,其分布在男女组间无显著性差异(P>0.05)。ERβRsaI和AluI不同基因型间血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoAI、apoB水平均有一定差异,但无统计学意义(P>0.05)。结论:ERβ基因RsaI和AluI酶切多态性可能不影响人群的血脂水平。     

阿尔茨海默病精神症状与载脂蛋白E基因多态性相关性研究

目的探讨载脂蛋白E基因与中国昆明地区汉族人阿尔茨海默病精神症状是否存在关联。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法,对58例无亲缘关系的中国昆明地区阿尔茨海默病患者及96例健康老年人,进行载脂蛋白E基因变异检测;采用神经精神量表(Neuropsychiatric Inventory Caregiver Distress Scale,NPI)评定患者的精神症状。结果AD组ε3/ε4基因型频率及ε4等位基因频率明显高于对照组(P<0.05);发现有妄想、抑郁心境、攻击行为症状组的ε4/x基因型频率及ε4等位基因频率高于无症状组,有幻觉症状组的ε4/x基因型频率及ε4等位基因频率低于无症状组,差异比较经χ2检验,均无统计学意义。结论ε4基因可能是AD的风险基因;ApoEε4等位基因与AD精神症状的发生并无关联。     

载脂蛋白E基因多态性与疾病的相关性研究

载脂蛋白E（ApoE）是一种重要的血浆脂蛋白,由3种等位基因构成：E2、E3和E4。ApoE作为一种载脂蛋白,在脂质运输和代谢过程中发挥重要作用,而目前越来越多的研究表明：ApoE在免疫调节方面发挥重要作用,从而参与到多种疾病的发生发展中。近年来发现,ApoE及其基因多态性与高脂血症、动脉粥样硬化、Alzheimer病、神经系统病变及脓毒血症等人类疾患的发生发展有着密切关系。     

乙型肝炎病毒C区基因多态性的检测分析

目的 探讨乙型肝炎患者和健康携带者乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）C区基因变异规律及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测乙肝患者和HBV健康携带者外周血HBV DNA载量;PCR结合DNA测序对HBV C区基因进行多态性检测,并应用DNAstar软件进行比对和分析。结果①与标准株相比,所有标本C区基因序列均出现变异。在≥2例标本中出现的突变31处,包括PreC基因3处,C基因28处;其中9处为错义突变,1处为终止突变,其余21处均为同义突变。nt 1827 c→a和nt 2221 c→t出现在所有标本,有6处同义突变出现于较多标本中。4例乙肝患者标本在nt1896位发生g→a突变,另有4例乙肝患者在HBcAgCTL识别表位84～101处发生2处突变即S87G和I97F或197L。②DNA扩增及测序的成功与否与HBV的DNA拷贝数密切相关,本次研究DNA扩增及测序成功的标本其DNA拷贝数多大于40 193/ml,DNA拷贝数较低的标本不易获得成功。结论HBV基因组极易发生突变,C区基因有2个位点的突变见于所有扩增成功标本,为此研究标本所特有,提示这些突变热点可能具有地域特异性。C区基因变异可引起HBeAg和HBcAg的结构及功能改变,进而导致病毒逃逸机体对病毒的免疫清除作用,或影响HBeAg的检出。     

慢性重型乙型肝炎与HLA-DRB1基因多态性的相关性研究

目的 探讨慢性重型乙型肝炎患者与HLA-DRB1基因多态性的相关性.方法 采用聚合酶链反应,序列特异性引物技术对河南地区26例慢性重型乙型肝炎患者和45例健康对照者进行HLA-DRB1等位基因的检测,应用统计学软件SPSS13.0对两组实验结果进行X2检验.结果 在慢性重型乙型肝炎组中,HLA-DRB1*1301/1302出现的频率明显高于对照组,差异有统计学意义;HLADRB1*150111502,*1201/1202在两组间出现的频率相比差异无统计学意义.结论 HLA-DRB1*1301/1302等位基因可能和慢性重型肝炎的发生有关,HLA-DRB1*1501/1502,*1201/1202与慢性重型肝炎的发生无相关性.     

粤东客家地区乙型肝炎病毒S基因序列多态性分析

 目的：探讨广东客家地区乙型肝炎病毒（HBV）S基因序列的多态性，了解该地区S基因的流行病学特征。 方法： 运用基因扩增技术对40例来自广东客家地区的乙肝表面抗原阳性及HBVDNA阳性的HBV感染者S基因进行扩增，再对扩增产物进行DNA测序，将该地区S基因序列与标准序列对比分析。 结果： 40例样本中，adw型36例，adr型4例。36例adw型中，第131位天冬酰胺（Asn）均被苏氨酸（Thr）替代，其它位点也不同程度存在着氨基酸密码的差异：第127位脯氨酸（Pro）被Thr替代，第133位蛋氨酸(Met)被亮氨酸(Leu)或Thr替代, 第134位苯丙氨酸（Phe）被酪氨酸（Tyr）替代, 第143位Thr被Met替代，更多位点的遗传密码存在着简并性。而4例adr型的氨基酸序列高度同源。 结论： HBV亚型的分布具有明显的域性，广东客家人感染的HBV亚型主要为adw型，只有少数为adr型。与参照序列相比，adw型存在较明显的多态性。     

HBV阳性孕妇DC—SIGN／DC—SIGNR基因多态性与宫内感染关系的研究

目的分析HBV阳性孕妇DC—SIGN与DC—SIGNR的表达水平及其编码基因的多态性与HBV宫内感染相关性。方法应用PCR技术、琼脂糖凝胶电泳检测HBV阳性孕妇DC—SIGN与DC—SIGNR基因的颈区重复序列分型,然后用卡方检验分析DC—SIGN与DC—SIGNR基因各亚型出现的频率在两组中的差异。结果①29例宫内感染组DC—SIGN基因型全部为7／7型的纯合子基因,54例非宫内感染组中出现2例7／5型的基因,其他52例均为7／7型的基因,两组之间差异无统计学意义（P=0．54）。②29例宫内感染组发现4种DC—SIGNR基因型,分别为7／7型、7／5型、9／7型、6／5型,基因型频率分别为0．3793、0．3448、0．2414、0．0345。54例非宫内感染组发现6种基因型,为7／7型、7／5型、9／5型、9／7型、7／6型、6／5型,基因型频率分别为0．5186、0．1481、0．0926、0．1852、0．0370、O．0185。7／5型基因型在宫内感染组（29例）和非宫内感染组（54例）中的分布的差异有统计学意义（P=0．038）,其他基因型两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论①DC—SIGN编码基因存在个体基因变异,但变异相对较少,在HBV阳性产妇宫内感染组和非宫内感染组中DC—SIGN基因型分布无明显差异。②DC—SIGNR编码基因存在个体基因变异,变异相对较大,DC—SIGNR基因型“7／5型”在HBV阳性产妇宫内感染组和非宫内感染组中分布差异有统计学意义（P=0．038）,可能是影响宫内感染的易感基因。     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性

目的　建立DNA芯片检测乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)基因多态性的研究方法并对实验条件进行优化。方法　设计多条寡核苷酸探针 ,在硅烷化芯片的特定位置上 ,用点样仪将探针固定 ,并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交 ,杂交结果影印至硝酸纤维素膜 ,经BCIP NBT避光显色 ,用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点 ,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果　通过 1次杂交反应可检测HBV前C C区 (nt 1896 1814 )、BCP区 (nt1762 1764)和P区 (nt 52 8 552 )等多个位点的变异 ,与测序分析结果完全一致 ,具有较好的检测灵敏度和重复性。结论　DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性 ,操作简便易行 ,技术要求不高 ,具有临床推广应用价值 ,而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针 ,扩大基因芯片的检测应用范围 ,为临床检测提供了新的方法     

慢性乙肝患者HBV核心基因一组单核苷酸多态性与血清HBV DNA水平的相关性研究

目的 研究慢性乙肝患者HBV核心基因的单核苷酸多态性(SNP)与血清HBV DNA水平的相关关系.方法 采用PCR-RFLP和限制性内切酶Tsp509I榆测HBV核心基因的SNP,采用双脱氧终止法对核心基因进行序列测定,实时荧光PCR技术用于HBVDNA水平的定量检测.结果 慢性乙肝人群中发现5种典型的PCR-RFLP图谱,分别是RFLP-C、RFLP-D、RFLP-E、RFLP-G和RFLP-C/G,各种RFLP图谱的分布频率依次为61.5%、2.6%、9.6%、16.7%和9.6%.A165T、A336C、A336T、T337C和T385C等5种SNP与RFLP图谱的变化有关,但是只有SNP A336C和A336T会导致HBcAg第83位的Glu被Asp所替代.RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组(P=0.02)和RFLP-C/G组(P=0 006),而且RFLP-C/G组患者血清ALT的阳性率显著低于RFLP-C、RFLP-E和RFLP-G组;当HBeAg阳性时,RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组(P=0.015)和RFLP-C/G组(P=0.008).结论 本研究中使用的PCR-RFLP能够用于检测核心基因的SNP,RFLP-C组患者的血清HBV DNA水平显著高于RFLP-G组和RFLP-C/G组,可能与Glu83 Asp突变有关.

Abstract：

Objective To investigate the relation between a set of single nucleotide polymorphisms (SNP) in core gene of HBV in chronic hepatitis B patients and HBV DNA levels. Methods PCR restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) assay and restriction enzyme Tsp509I were adopted to determine HBV SNP in HBV core gene. Nucleotide sequences of core gene were determined using the dideoxy chain termination method. HBV DNA levels were quantitated with real-time PCR. Results Five typical RFLP patterns, RFLP-C, RFLP-D, RFLP-E, RFLP-G and RFLP-C/G mixture were found and the distribution of HBV RFLP patterns was as follows: C, 61. 5% ; D, 2. 6% ; E, 9.6%; G, 16.7%; C/G mixture, 9.6%. Five SNPs, A165T, A336C, A336T, T337C and T385C, were found to be associated with RFLP patterns change and only SNP A336C or A336T caused the substitution of Glu-83 with Asp in HBcAg. The serum HBV DNA levels in RFLP-C group were higher than that in RFLP-G (P =0. 02) and RFLP-C/G group(P = 0. 006) , respectively, furthermore, the positive rate of serum ALT in RFLP-C/G group was lower than that in RFLP-C, RFLP-E and RFLP-G group, respectively. Under the condition of HBeAg-positive, the serum HBV DNA levels in RFLP-C group were higher than that in RFLP-G (P = 0. 015) and RFLP-C/G group(P =0.008) , respectively. Conclusion PCR-RFLP used in this study can be adopted to determine HBV SNPs, not genotypes in Chinese patients with chronic hepatitis B. The serum HBV DNA level in RFLP-C group higher than that in RFLP-G or RFLP-C/G group maybe associated with amino acid mutation, Glu83 Asp.     

乙肝病毒感染与乙肝病毒相关性肾炎间的关系分析

目的 探讨研究乙肝病毒(HBV)感染与乙肝病毒相关性肾炎之间的关系.方法 对124例资料完整的HBV相关肾炎(HBV-related glomerulonephritis,HBV-GN,)患者的血清病毒学、肾脏及肝脏病理学和常规实验室检查结果进行回顾分析研究.结果 124例血清HBsAg和/或HBeAg阳性的患者中,HBV-GN的发生率69.49％,男性发生率(45.0％)显著高于女性(24.49％),P＜0.05.血清HBeAg阳性组HBV-GN的发生率显著高于HBeAg阴性组.HBV DNA定量＞105 copies/mL组HBV-GN的发生率亦显著高于定量＜105 copies/mL组.HBV-GN患者血清HBeAg阳性与阴性组之间比较,24小时尿蛋白定量及内生肌醉清除率均无显著差异.血清HBV DNA定量＞105copies/mL组与定量＜ 105 copies/mL组之间比较24小时尿蛋白定量与内生肌酐清除率亦无显著差异.HBV-GN患者肾组织局部HBcAg沉积阳性组与阴性组相比较,24小时尿蛋白定量有显著性差异(P＜0.05),而内生肌酐清除率无显著性差异.结论 HBV感染及其复制状态与HBV-GN的发生密切相关;但HBV的复制状态可能并不明显影响HBV-GN患者肾、肝组织的病变程度.     

IL-1基因多态性对类风湿关节炎病情及IL-1蛋白表达影响

目的:探讨白细胞介素-1α(IL-1α)和白细胞介素-1β(IL-1β)基因多态性对类风湿关节炎(RA)病情及对IL-1β产生的影响。方法:检测136例RA病人及102例正常人的IL-1等位基因分布,其中72例病人系已明确患病2年内出现关节破坏者,IL-1基因多态性检测采用PCR-RFLP法,同时分析不同类型基因型病人外周血单个核细胞受刺激后分泌IL-1β水平的不同。结果:IL-1α等位基因1、2的频率和携带率在RA组及正常人组无显著差异。IL-1β纯合子等位基因2频率在2年内出现骨侵蚀组明显高于2年内未出现骨侵蚀组,IL-1β纯合子等位基因2携带病人组具有较高的血沉及关节肿胀、压痛指数,从携带IL-1β纯合子等位基因2病人中分离出的外周血单个核细胞经脂多糖刺激后分泌的IL-1β量明显高于其它组病人。结论:RA与IL-1β基因多态显著相关,IL-1β等位基因2促进IL-1β分泌,IL-1β等位基因2的检测可作为预测RA严重性的一个有用指标。     

乙型肝炎病毒感染者癌基因蛋白的表达及与HBeAg的关系

目的为了阐明癌基因蛋白异常表达与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制的关系。方法用链霉菌素－生物素（ＳＬＡＢ）免疫组织化学染色和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，检测了６４例慢性ＨＢＶ感染者肝细胞中Ｃ－ｅｒｂＢ－２Ｐ１８５、ｒａｓＰ２１和Ｐ５３等癌基因蛋白和血清乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。结果Ｃ－ｅｒｂＢ－２Ｐ１８５和ｒａｓＰ２１阳性组中，血清ＨＢｅＡｇ的阳性检出率分别为８９４％和８４６％，而阴性组ＨＢｅＡｇ的检出率分别为２０％和４８％，两组差异显著。结论表明癌基因蛋白Ｃ－ｅｒｂＢ－２Ｐ１８５和ｒａｓＰ２１的异常表达与ＨＢＶ复制密切相关。