离子对-反相高效液相色谱法测定人血清中美托洛尔的含量

目的离子对-反相高效液相色谱(HPLC)法测定人血清中美托洛尔浓度的评价。方法血清样品经蛋白沉淀剂(N,N-二甲基甲酰胺)沉淀后,高速离心,取上清液进行分析。测定使用C18色谱柱,甲醇-水(50:50,水相中含0.14%磷酸二氢钾)为流动相,以VP-16为内标,荧光检测Ex=277nm,Em=299nm。结果美托洛尔的浓度检测范围是2～1000pg/ml,r=0.9988;样品平均回收率为94.15%,相对标准差RSD为3.62%(n=6)。结论本方法选择性强,灵敏,重现性好。     

薄层扫描法测定妇安康胶囊中人参皂苷Re的含量

目的:建立妇安康胶囊中人参皂苷Re的含量测定方法.方法:双波长薄层扫描法,以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)为展开剂,测定波长533nm,参比波长700nm.结果:平均回收率96.61%(RSD=1.09%).标准曲线r=0.9992,线性范围0.4766-2.3830μg.结论:该法准确、重复性好,可作为妇安康胶囊的质控方法.     

高效液相色谱法测定兔玻璃体内美罗培南浓度的方法研究

目的:建立一种反相高效液相色谱法--紫外线检测法,测定玻璃体内的美罗培南浓度。方法:应用Agilent1100系列型高效液相色谱仪,色谱柱为EclipseXDB-C8,流动相为乙腈-水(乙腈:水=10∶90),检测波长298nm,参比波长:400nm,加入乙腈自然沉淀,提取剂为乙腈,内标物为对乙酰氨基酚,流速为0.8mL/min。结果:本方法测定的线性范围为0.05～2.5mg/mL,最低检测浓度是0.05mg/mL,回收率为98.93%,日内精密度≤3.03%,日间精密度≤5.49%。结论:该方法简单,准确,适合于玻璃体腔注射美罗培南的药物浓度测量。     

酶标仪单双波长对检测结果的影响

目的研究酶标仪采用单波长和双波长测定对检测结果的影响。方法分别采用450nm单波长和450nm、630nm双波长测定显色液吸光度，比较测定结果并观察其重复性。结果单波长和双波长测定吸光度存在较大差异，双波长测定结果变异系数（CV）小。结论酶标仪比色应首选双波长。     

利用荧光法测定血清、血浆和淋巴细胞糖基天冬酰胺酶诊断天冬氨酰葡糖胺尿症

受检者:健康人24例,天冬氨酰葡糖胺尿症(aspartylglycosaminuria,AGU)纯合子10例,AGU基因携带者29例,新生儿34例。AGU病人均经PCR分析白细胞DNA确诊。糖基天冬酰胺酶测定:血清100μl,加10mmol/L L-天冬氨酰-β-(7-氮基-4甲基)-香豆素乙二醇溶液10μl,50mmol/L、pH7.5的Tris-HCi(含乙二醇10ml/L)缓冲液90μl,置37℃60～250min。用350nm作激发光、450nm作发射光测定生成的7-氨基-4甲基香豆素荧光强度。结果用mu/L表示.淋巴细胞用密度梯度离心法分离,随后匀浆。用含蛋白100～500μg的勾浆替代血清测定糖基天冬酰胺酶活性,结果用mu/g蛋白表示。单位定义是:37℃每分钟催化释放lμmol7-氨基-4-甲基香豆素的酶活性为1单位。     

高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物

目的建立一种同时测定血清色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD),并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量。方法血清标本经0.624 mol/L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定。色谱柱为Hypersil C18柱,流动相为0.20mol/L醋酸锌、8.3 mmol/L醋酸和2.5%的乙腈;流速为1.5 ml/min;荧光检测激发波长和发射波长在0~11 min分别为365nm和480 nm,11~15.5 min变换为344 nm和404 nm,15.5~20 min为254 nm和404 nm。采用建立的方法测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量。结果Trp的线性范围为0.610~196μmol/L,最低检出浓度为0.005μmol/L,平均回收率为103.71%;Kyn线性范围为0.049~98μmol/L,最低检出浓度为0.025μmol/L,平均回收率为97.45%;Kyna线性范围为1.05...     

还原型辅酶Ⅰ荧光特性的初步观察

目的　了解NADH的荧光特性。方法　用荧光光度计扫描NADH 340～ 4 2 0nm范围确定其激发波长 ,扫描 390～ 5 6 0nm范围确定其发射波长。扫描氧化型辅酶Ⅰ (NAD)标准品激发波长范围及发射波长范围 ,再于NADH中加入NAD ,观察其对NADH的干扰。加入LD液及乳酸反应体系 ,观察其对NADH的干扰。结果　NADH激发波长为 382nm ,发射波长为 4 6 0nm。NAD在 2 80～ 4 2 0nm处无激发波峰 ,4 0 0～ 5 0 0nm处无发射波峰。NADH中加入NAD后激发波峰有改变。加入LD液后NADH的激发波峰及发射波峰无改变。加入乳酸反应体系后激发波峰有改变。结论　利用NADH的荧光特性 ,在检测中只需固定其发射波长 ,通过观察NADH荧光强度的变化 ,就可以对一些微量物质进行检测 ,可将其测定灵敏度提高 2～ 3个数量级     

不同光激发钙荧光探针的性质、选择标准及测定过程的标准化

目的:概括钙荧光探针的分类,选择钙荧光探针的基本思路以及细胞内钙测定的标准化。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库2000-01/2006-12相关钙荧光探针方面的文献,检索词“calcium fluorescent indicators,calcium measurement”,限定文献语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括钙荧光探针的文献,开始查找全文。纳入标准:与钙荧光探针及细胞内钙测定相关的文献。排除标准:重复研究、个案报告、综述、Meta分析的文献。资料提炼:共检索到103篇关于钙荧光探针及细胞内钙测定的文献,最终纳入30篇符合标准的文献。资料综合:钙荧光探针可分为定性探针及定量探针两类,定性探针多为可见光激发的单波长探针,其代表有Fluo3和Fluo4等,定量探针多为紫外激发的双波长探针,其代表为Fura2及Indo1等。选择钙荧光探针需考虑试验目的,探针进入细胞的方式,探针的离解常数及测定所用仪器等。测定细胞内钙时,应注重测定过程中的标准化,同时注意钙荧光探针测定过程中的潜在问题,避免混杂因素的干扰。本文主要综述如何选择钙荧光探针。结论:选择合适的钙探针,注意钙荧光探针测定过程中的标准化及其他潜在问题,可对细胞内钙离子浓度进行较为准确的测定。     

β-环糊精增敏荧光分光光度法检测血浆亚甲蓝

目的 建立检测血浆中微量亚甲蓝的增敏荧光分光光度法.方法 利用β-环糊精对亚甲蓝荧光信号的增敏作用,以665 nm为激发波长,685 nm为发射波长,用荧光分光光度法直接测定血浆中的微量亚甲蓝.结果 亚甲蓝浓度在0.089～3.57 μmol/L范围内,该增敏荧光光度法呈现良好的线性关系,r=0.998 8,日内变异系...     

丙氨酸氨基转移酶测定波长设置的实验研究

目的观察波长设置对含有不同干扰物丙氨酸氨基转移酶（ALT）标本测定的影响。方法对NADH纯品溶液、试剂样本及含不同干扰物的样品进行全波长扫描。依据吸收曲线设定不同的副波长,然后对含不同干扰物的定值血清进行测定,以定值血清所给的值为参照,确定最佳波长组合。结果定值血清测量结果,单波长340nm与双波长（340/380nm,340/404nm）差异无统计学意义（P〉0.05）;血红蛋白（Hb）和胆红素（BIL）干扰的ALT标本,340/404nm测定结果与靶值差异无统计学意义（P〉0.05）,340/380nm测定结果与靶值差异有统计学意义（tHb=2.144,PHb=0.042〈0.05;tBIL=2.453,PBIL〈0.05）;血脂（TG）干扰的ALT标本340/380nm测定结果与靶值差异无统计学意义（P〉0.05）,而340/404nm测定结果与靶值差异有统计学意义（t=-3.338,P〈0.01）。结论利用单波长即可准确测得低干扰程度丙氨酸氨基转移酶（ALT）标本的活性。若采用双波长时应视标本干扰物的种类而选择不同双波长,溶血、黄疸干扰应选择340/404nm,血脂干扰应选择340/380nm。     

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。     

高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的 建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法.方法 通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光（激发波长280 nm,发射波长340 nm）检测氨基酸浓度.用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH值6.00～6.25）和甲醇（46%）混合液（加入四氢呋喃2%）作流动相,流速为1 ml/min.结果 在0.1～40.0 μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数（r）均值为0.999 2,日内和日间变异系数（CV）分别为2.41%～5.23%、3.51%～6.48%,平均回收率为90.13%～98.47%.结论 本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定.     

高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法。方法通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光(激发波长280nm,发射波长340nm)检测氨基酸浓度。用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.00~6.25)和甲醇(46%)混合液(加入四氢呋喃2%)作流动相,流速为1ml/min。结果在0.1~40.0μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数(r)均值为0.9992,日内和日间变异系数(CV)分别为2.41%~5.23%、3.51%~6.48%,平均回收率为90.13%~98.47%。结论本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定。     

脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量测定分析方法

目的:建立高效液相色谱分离检测脑蛋白水解物注射液各种氨基酸的测定方法。方法:氨基酸含量测定采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化;色谱柱为C18柱(VP-DOS;150mm×4.6mm);流动相:A为0.1mol/L醋酸钠溶液(冰醋酸调节pH6.5)-乙腈(93:7),B为水-乙腈(1:4);检测波长:254nm;流速:1mL/min;柱温:40℃。结果:16种氨基酸在32min内完全分离,各种氨基酸之间没有出现干扰现象,且多次重复测定结果误差很小。结论:建立的高效液相色谱法准确性高、重现性好,可以有效地控制脑蛋白水解物注射液的质量。     

高效液相色谱法测定人血浆中同型半胱氨酸浓度

目的建立柱前衍生化反相高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)浓度的方法。方法以tris-(2-carboxylethyl)-phosphine hydrochloride(TCEP)为还原剂,以7-fluorbenzo-2-oxa-1,3-diazole-4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂,色谱柱为Xterra RP18柱,柱温35℃,流动相为甲醇︰磷酸二氢钠缓冲液(pH值3.0)=3︰97,激发波长380 nm,发射波长510 nm,外标法定量。结果 Hcy浓度在1.95～125μmol/L范围内线性关系良好(r=0.999 8)。日内和日间相对标准偏差均<7%,方法回收率为103.2%～111.9%。结论此方法准确、灵敏、快速,是一种适合于实验室研究和临床检测血浆中Hcy浓度的方法。     

空白值对MK_3半自动酶标仪使用双波长测定结果的影响

一般ELISA试剂说明书中均注明在进行结果测定时,如果用酶标仪单波长450 nm测定,需设空白对照1孔,但对用双波长450/630 nm进行OD值的测定时则没有说明需不需要设空白对照、及设定了空白对照后对检测结果有没有影响等.我们将设置空白对照对MK3半自动酶标仪使用双波长测定结果与没设置空白对照结果进行分析总结,报告如下.     

快速酶法测定血浆酪氨酸

本文介绍一种吸光度在可见光波长的酶法测定,适用于常规检验。反应原理:酪氨酸在酪氨酸脱羧酶和5-磷酸吡哆醛作用下生成酪胺,再经酪胺氧化酶作用生成对羟苯甲醛释放出过氧化氢(H_2O_2)经过氧化酶作用使TOOS(N-乙基-N-(2羟-3磺丙基)-邻甲苯胺)和4氨基安替比林产生醌亚胺染料,在570nm 波长比色测定。试剂:1.pH6.0MCI 缓冲液:内含0.2mol/LK_(?)HPO_4和0.1mol/L 枸橼酸。2.A 液:用1.缓冲液配制使每升内含3.75mmol TOOS,0.375mmol 4氨基安替比林,2.5Ku 过氧化物酶和1.25Ku 酪胺氧     

Getein 1600荧光免疫定量分析仪及N-端脑利钠肽前体检测试剂盒性能分析

目的评价Getein 1600荧光免疫定量系统测定血清中N-端脑利钠肽前体(NT-proBNP)的性能分析。方法按照WS/T 420-2013原卫生部标准对Getein 1600荧光免疫定量析仪及NT-proBNP检测试剂盒(荧光定量法)精密度、线性进行评价。按照美国临床与实验室标准协会(CLSI)方法学对比。结果高值Q1质控品重复标准差与期间标准差分别为88pg/mL与82pg/mL,低于厂家声称的标准差为263pg/mL,中值Q2质控品重复标准差与期间标准差分别为90pg/mL与96pg/mL,低于厂家声称的标准差为186pg/mL,低值Q3质控品重复标准差与期间标准差分别为33pg/mL与46pg/mL,低于厂家声称的标准差为55pg/mL,高中低质控品精密度满足要求;对NT-proBNP为21 212pg/mL与210pg/mL样本按照一定比例进行稀释,稀释后进行线性实验(r=0.9990.990),理论值与实测值偏差都低于10%,厂家声称的线性可靠;与ROCHE E602进行41例样本方法学比对(r=0.9970.975),回归方程为Y=0.898 X+55,根据3个年龄段参考值450、900和1 800pg/mL,偏移分别为2.02%、-4.09%、-7.14%,低于厂家声称偏移。结论 Getein 1600荧光免疫定量分析仪及配套NT-proBNP试剂的精密度、线性、准确度符合临床要求。     

不同参数及条件测定血浆二氧化碳的实验观察

目的酶法测定血浆二氧化碳在不同参数及条件下的实验观察并进行应用评价。方法全自动生化分析仪设置两点法(EP2POINTS)。梅里埃(bioMérieux)公司的二氧化碳试剂在380nm波长下作线性试验并作为对照组。华鑫公司的Dettolx二氧化碳试剂分别在405nm、380nm、340nm的波长下,相应使用原液及原液与水以2:1、1:1的比例稀释的应用液作线性试验。通过了精密度试验、线性试验和对比试验。结果精密度测定结果:批内CV为1.57～4.92%,批间CV为3.97～9.03%;线性试验结果:当二氧化碳浓度达37.5mmol/L以上时使用Dettolx的二氧化碳试剂检测的结果偏低。当二氧化碳浓度在37.5mmol/L以下时,Dettolx试剂原液与水以2:1比例稀释的应用液,在380nm波长下检测的结果与梅里埃试剂的对比试验结果相关系数为0.999。结论使用Dettolx二氧化碳试剂建议在标本HCO3ˉ浓度达到37.5mmol/L以上时稀释标本重新测定。使用Dettolx?二氧化碳试剂原液与水2:1稀释后使用380nm波长检测血浆二氧化碳浓度,可降低检测成本,有推广应用价值。     

用光学显微镜和干涉滤光片做荧光显微术快速诊断疟疾

荧光染色技术用于检测疟原虫诊断疟疾,被认为是比较敏感的方法,并且,对于缺乏经验的工作者来说,省时又比较容易掌握。但是,其主要弊端在于需要昂贵的荧光显微镜。本文作者采用一种新的干涉滤光片和一架普通光学显微镜,进行荧光显微术检查,既实用又经济,易于推广实验室应用。材料和方法:1.干涉滤光片:为获得430nm 和492nm—495nm 波长的激发光而研制的一种新的干涉滤光片。2.阻拦波长为515nm 的阻断滤光片:将其嵌入光学显微镜的目镜。3.吖啶橙(AO)溶液;将吖啶橙按10—50