5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮通过线粒体途径诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡

目的探讨5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮(5,2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxyflavone,TTF1)诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 TTF1作用HepG-2细胞后,采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率,采用Western blot检测bcl-2、bax、cyt-c、caspase-3和caspase-9蛋白表达。结果 TTF1能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖、诱导凋亡。Western blot结果显示,TTF1明显降低bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加bax、胞质cyt-c、caspase-3和caspase-9 mRNA及蛋白表达。结论 TTF1可以通过线粒体途径诱导人肝癌HepG-2细胞发生凋亡。     

云南琵琶甲提取物抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:研究云南琵琶甲粗提物对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,并进一步探讨其提取物抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法:用水提反复冻融法得到云南琵琶甲提取物,倒置显微镜观察、MTT法检测琵琶甲提取物对HeLa细胞的抑制作用,荧光染色观察、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测药物诱导细胞凋亡的作用。结果:云南琵琶甲粗提物对HeLa细胞有明显的增殖抑制作用,IC50为413μg/mL,荧光染色可见细胞皱缩,染色质凝集并边缘化,琼脂糖凝胶电泳可以看到梯状条带,流式细胞术发现S期细胞增多。结论:确定云南琵琶甲提取物可抑制HeLa细胞增殖,并初步推测云南琵琶甲粗提物能够诱导HeLa细胞凋亡。     

PhaseoloidesideE诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,探讨phaseoloideside E(PE)的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法,检测不同浓度的PE处理48 h后对HepG2细胞的细胞毒性效应;应用光学显微镜、荧光显微镜观察PE处理下的细胞形态学变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡,并用免疫印迹法检测PE对凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达水平的影响。结果:PE对HepG2细胞的生长有明显的细胞毒性效应;直接形态显微观察及Hoechst 33258荧光染色皆可见典型的凋亡细胞形态学特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示给药组出现明显的DNA梯状凋亡带,而对照组没有出现梯状条带;免疫印迹结果显示PE可以增加Bax表达并减少Bcl-2表达。结论:PE能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提示PE诱导的Bax,Bcl-2蛋白的表达水平变化可能与它的凋亡诱导效应紧密相关。     

羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)对人白血病HL-60细胞系增殖抑制和凋亡诱导作用。方法MTT法检测SFPS对HL-60细胞增殖的抑制作用;扫描电镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系;药物浓度为300 mg/L和500 mg/L作用HL-60细胞后,观察到典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳呈现梯状条带;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2/M期细胞比例增多。结论SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞有关。     

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状“条带。结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮类物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TUNEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡。结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强。     

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影晌

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspas-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带.结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮炎物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TLINEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡.结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强.     

开闭复方对内毒素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

内毒素能诱导小鼠胸腺细胞凋亡,表现为凋亡细胞及凋亡小体明显增多,凋亡细胞百分率及DNA断裂百分率明显升高,琼脂糖凝胶电泳出现明显的细胞凋亡特有的“梯状”条带.用中药开闭复方后上述表现明显减轻,“梯状”条带不明显.结果提示:开闭复方对内毒素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡有保护作用.     

去氢骆驼蓬碱诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡

目的：探讨去氢骆驼蓬碱（Harmine，HM）诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：MTT法检测HM对该细胞系的生存抑制率，光镜下观察凋亡细胞，流式细胞仪（FCM）检测凋亡率，基因组DNA琼脂糖凝胶电泳（DNALadder）检测凋亡梯状条带。结果：HM处理SGC-7901细胞后，细胞的存活率明显降低；细胞形态观察到有核固缩与核断裂的凋亡现象；流式细胞仪测定细胞周期的G1期前有亚二倍体的凋亡峰；基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论：HM能诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡。     

姜黄素对人肾癌786-O细胞凋亡和侵袭的影响

目的:通过体外实验研究姜黄素对人肾癌786-O细胞凋亡和侵袭影响的可能机制,为肾癌的临床药物治疗提供理论依据.方法:体外培养人肾癌786-O细胞,以5、10、20、40 μmol/L姜黄素处理48 h后,采用流式细胞技术(FCM)、DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL技术等方法观察786-O细胞凋亡率;用Western blot法研究不同浓度姜黄素对786-O细胞的MMPs表达影响.结果:不同浓度姜黄素处理的人肾癌786-O细胞,细胞的凋亡率随姜黄素浓度的增大而增加;DNA琼脂糖凝胶电泳分析,随浓度增大可见凋亡特征性的DNA梯形条带更加清晰.Western blot蛋白电泳条带显示,随姜黄素浓度的逐渐增加,MMP2和MMP9条带的灰度逐渐降低.结论:姜黄素可以诱导人肾癌786-O细胞的凋亡,细胞凋亡率随姜黄素浓度的增大而增加;姜黄素可以通过下调MMP2和MMP9的蛋白表达,发挥抗侵袭作用.     

构树叶总黄酮调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG-2细胞凋亡的研究

目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)诱导HepG-2细胞凋亡的机制。方法:采用体外细胞培养方法,取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,应用MTT法检测TFBP对人肝癌细胞HepG-2生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察各浓度TFBP作用细胞48 h后的细胞的形态变化;通过免疫细胞化学SP法检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果:TFBP在体外对人肝癌细胞HepG-2有较强的浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可分别达52.46%,64.72%,与对照组具有显著性差异(P<0.01),可诱导细胞凋亡,质量浓度9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞48 h后就可出现典型的凋亡小体,TFBP可升高caspase-3活性,并具有浓度效应,同时还可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2/Bax。结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2/Bax以及增强caspase-3的活性有关。     

小柴胡汤含药血清对肝癌HepG-2细胞的影响

目的:探讨小柴胡汤含药血清抑制HepG-2肝癌细胞增殖的作用机制.方法:大鼠灌服小柴胡汤3.69 g·kg-1,空白组给予等量蒸馏水,1次/d,连续7d,末次给药1h后腹主动脉取血制备小柴胡汤含药血清.以HepG-2肝癌细胞为研究对象,实验分为10％空白血清组,5％,10％,20％含药血清组.采用倒置显微镜观察含药血清对HepG-2细胞作用后的形态改变,噻唑蓝(MTT)法测定其对生长抑制的影响,流式细胞术分析细胞凋亡的情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察细胞线粒体膜电位的变化.结果:与空白血清组比较,小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,10％含药血清抑制细胞增殖具有时间依赖的特点;流式检测结果表明,10％小柴胡汤含药血清作用HepG-2肝癌细胞8h后,凋亡率从6.78％上升至19.51％;Rh123荧光染色显示,细胞线粒体膜电位明显降低.结论:小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,促进其凋亡,线粒体途径参与了该过程.     

珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖的实验研究

目的:观察珍珠梅提取物对肝癌HepG-2细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测其对HepG-2细胞周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色、透射电镜及免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因bcl-2、p53的蛋白表达,观察其诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的作用。结果:珍珠梅提取物可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;珍珠梅提取物可诱导细胞凋亡;同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01);用药前后凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白表达均有显著性改变(P<0.01)。结论:珍珠梅提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

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??OBJECTIVE To investigate the relationship between chemotherapy resistance and cancer stem cells, probe the way to reverse drug resistance, and guide the rational medical treatment. METHODS Hepatocellular carcinoma cell lines, parent and chemoresistant HepG-2, were cultured with fluorouracil (5-FU). CCK-8 cell proliferation assay was used to determine the inhibition of 5-Fu and all-trans retinoic acid (ATRA), a cell differentiation inducer. The content difference of cancer stem cells between parent and chemoresistant HepG-2 cell lines was examined by flow cytometry. Western blot and realtime PCR were preformed to probe the difference of related gene expression level between parent and chemoresistant HepG-2 cell lines. RESULTS Our data supported that the inhibitory effect of 5-Fu alone on chemoresistant HepG-2 cells proliferation was lower than on parent HepG-2 cells. After the addition of ATRA, chemoresistant HepG-2 cells proliferation was reduced obviously. Flow cytometry RESULTS revealed that compared with parent HepG-2 cells, the ratio of CD44 and CD326 positive cells in chemoresistant HepG-2 cells was much more than that in parent HepG-2 cells. Furthermore, realtime PCR and Western blot suggested that ABCG2, BMI and OCT4 expressions were increased in chemoresistant HepG-2 cells than those in parent HepG-2 cells, while ATRA could attenuate these differences on protein expressions. CONCLUSION Cancer stem cells enrichment relates to chemotherapy resistance, which can be reversed by ATRA through down-regulation cancer stem cells associated gene expression. This can provide new ideas for clinical rational use of anti-tumor drugs.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的：探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法：不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响；流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果：ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖；15,30,60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%；Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%；60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论：ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。     

红花注射液对HepG-2细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的: 研究红花注射液在体外对HepG-2细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Survivin基因转录和蛋白表达的影响,探讨红花注射液诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。 方法: 采用不同剂量的红花注射液(0,50,100,150,200,250 g·L^-1)体外作用于HepG-2细胞,利用MTT法观察红花注射液对HepG-2细胞增殖的抑制作用;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;通过实时荧光定量 PCR 技术 (real time-PCR) 以及蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子 Bcl-2和Survivin mRNA和蛋白的表达情况。 结果: 红花注射液对体外培养的人肝癌HepG-2细胞的增殖具有抑制作用(P<0.01),且具有剂量、时间相关性;细胞凋亡率随着红花注射液浓度的增加而逐步增高,细胞凋亡相关因子Bcl-2,Survivin的 mRNA 和蛋白表达均下调。 结论: 红花注射液能够抑制HepG-2人肝癌细胞增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2,Survivin的表达,这可能是红花注射液诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响

目的： 研究构树叶总黄酮（total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP）对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。 方法： 取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率。 结果： MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L^-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2%,29.44%,39.21%,43.96%;9 g·L^-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46%,与对照组具有显著性差异（P<0.05）;Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异（P < 0.01）,G₀/G₁期细胞逐渐减少,G₂/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性（P < 0.05）,细胞周期被阻滞在G₂/M期。 结论： TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关。     

构树叶总黄酮对人肝癌细胞HepG-2增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨构树叶总黄酮(TFBP)对人肝癌细胞(HepG-2)增殖和凋亡的作用。方法:采用细胞增殖实验(MTT法),取对数生长期HepG-2,随机分为药物组和对照组,用3,6,9,12 g.L-1不同质量浓度构树叶总黄酮作用HepG-2,分别干预24,48,72 h。通过流式细胞仪检测在以上质量浓度下作用细胞48 h后的细胞凋亡率,Western blont法检测以上质量浓度构树叶总黄酮作用细胞48 h后Bcl-2基因、促凋亡基因Bax表达的情况。结果:各质量浓度构树叶总黄酮对HepG-2的生长有显著的抑制作用,呈明显的时间和剂量依赖性,经不同质量浓度的构树叶总黄酮作用48 h后HepG-2凋亡率显著增加,药物组与对照组比较为(0.478±0.085 vs 0.498±0.014;0.354±0.004 vs 0.498±0.014;0.218±0.075 vs 0.498±0.014)有显著性差异,P<0.05,抑癌基因Bcl-2表达量呈逐渐下降的趋势,促凋亡基因Bax表达量随着质量浓度的升高表达量呈现上升趋势。结论:构树叶总黄酮可以有效的抑制HepG-2的生长,诱导细胞凋亡,其诱导该细胞凋亡的作用可能是通过下调抑癌基因Bcl-2的表达,可为肝癌的生物学治疗提供新的方法。     

八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡及其机制研究

目的：研究八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的作用和机制。方法：取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,用0.125,0.5,1 g·L^-1不同浓度八角莽草酸作用人肝癌HepG-2细胞,采用MTT法测定莽草酸对HepG-2细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测在以上浓度的莽草酸对肝癌HepG-2细胞周期的影响;通过免疫细胞化学检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax蛋白）表达的改变。结果：MTT实验结果表明,各质量浓度0.125,0.5,1 g·L^-1的莽草酸对人肝癌HepG-2的生长具有显著的抑制作用（P<0.05）,呈现时间依赖性和剂量依赖性;流式结果表明莽草酸将人肝癌HepG-2细胞阻滞在G₁期,使细胞不能顺利地进入细胞DNA合成期S期,从而抑制了该细胞的增殖。免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax表达明显增加;Bcl-2/Bax比例明显降低。结论：八角莽草酸在体外诱导人肝癌HepG-2细胞大量阻滞在G₁期,进入S期细胞减少,抑制细胞增殖,其作用可能通过降低Bcl-2/Bax比例来诱导细胞凋亡而实现的。     

野西瓜总皂苷诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的初步研究

[目的]探讨野西瓜总皂苷(CsS)对人肝癌HepG-2细胞的杀伤作用和诱导凋亡的作用.[方法]四甲基偶氮唑蓝(MTr)法研究CSS对HepG一2细胞的杀伤作用;荧光显微镜观察细胞凋亡形态;碘化吡啶(PI)单染经流式细胞仪检测CSS对HepG-2细胞周期及凋亡的影响.[结果]CSS对HepC-2细胞的生长增殖具有抑制作用;经CSS作用后.HepG-2细胞在出现特征性凋亡形态特征,并出现了G1期阻滞,G2期比例下降,高剂量组出现了G2期消失的现象,50 mg/L剂量作用48 h,凋亡细胞比率高达66.652%.[结论]CSS对人肝癌HepG-2有明显的杀伤和诱导凋亡作用,并出现细胞周期的改变.