环氧合酶-2与胃癌

环氧合酶(COX)是合成前列腺素(PG)过程中一个重要的限速酶,有COX-1和COX-2两种异构体.近年来的研究表明,COX-2与多种肿瘤的发生发展密切相关.此文就COX-2与胃癌的关系以及COX-2抑制剂治疗胃癌的研究进展作一综述.     

利用siRNA抑制环氧合酶-2对人胃癌裸鼠移植瘤的影响

目的 观察环氧合酶2(COX-2)对人胃癌裸鼠移植瘤的影响并探讨其机制.方法 构建靶向COX-2表达质粒和在BALB/c裸鼠皮下建立SGC-7901人胃癌细胞动物模型,用COX-2表达质粒基因转染治疗.结果 构建的COX-2表达质粒在体内、外均可稳定表达.COX-2基因治疗可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长和淋巴管的生成.COX-2基因转染下调血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达.结论 通过构建靶向COX-2 siRNA真核表达载体可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长和淋巴管生成,COX-2对抑制胃癌细胞(SGC-7901)治疗有确切效果.     

胃癌组织中核因子-kB和环氧合酶-2的表达及其临床意义

背景：有关核因子（NF）一KB和环氧合酶（COX）一2在肿瘤组织中表达的研究虽然较多．但其临床意义和相互关系尚无定论。目的：研究NF-kB和COX-2在胃癌组织中的表达及其关系。方法：采用免疫组化SP法检测142例胃癌组织中NF-kB和COX-2蛋白的表达，以相应的癌旁正常组织（30例）作对照。结果：NF-kB在胃癌组织中的阳性表达率为62．0％，显著高于对照组（P〈0．01）；NF-kB的表达与组织学类型、淋巴结转移和远处转移的临床指标呈显著相关（P〈0．05）。COX-2在胃癌组织中的阳性率为64．1％，在对照组中无表达，两者比较有显著性差异（P〈0．01），且在淋巴结转移组阳性率显著高于无转移组（P〈0．01）。胃癌组织中NF-kB和COX-2的表达呈显著正相关（r=0．380，P〈0．01）。结论：NF-kB和COX-2在胃癌的发生、发展中起重要作用，NF-kB可能促进了COX-2的表达。     

基质金属蛋白酶-2和环氧合酶-2在胃癌中的表达及意义

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在胃癌组织中的表达以及相互关系。方法收集外科胃癌手术患者30例，标本分别取自胃癌组织、癌旁3cm和6cm组织，同时取10例胃镜检查正常者的胃黏膜组织作为对照，用免疫组化法检测组织中COX-2和MMP-2蛋白的表达情况。结果30例胃癌组织中，26例COX-2表达呈阳性，而10例正常组织则无表达，两者间差异有统计学意义（P〉0．01）。30例胃癌组织中MMP-2的表达阳性率为83．33％（25／30），癌旁3cm组织为66．7％（20／30），癌旁6cm组织为3．3％（9／30），10例正常组织中仅2例有表达，癌旁6cm组织与正常组织比较差异无统计学意义（P〉0．05），胃癌和癌旁3cm组织与正常组织比较差异有统计学意义（P〈0．05）。在胃癌患者的癌旁3cm组织中，MMP-2、COX-2蛋白表达之间存在显著正相关（P〈O．01）。结论胃癌组织中有COX-2、MMP-2的高表达，且两者之间的表达强度具有等级相关性。COX-2蛋白可能通过诱导MMP-2蛋白的表达上调，增加胃癌细胞的侵袭力，从而成为其促进胃癌浸润、转移的途径之一。     

胃癌细胞中环氧合酶-2对延迟整流性钾通道调控机制的研究

目的 探讨胃癌细胞中环氧合酶(COX)-2对延迟整流性钾通道(HERG)电流的影响和相应的调控机制.方法 ①采用逆转录聚合酶链反应(PCR)、Western印迹和膜片钳技术检测环氧合酶(COX)-2反义载体转染胃癌细胞前后HERG mRNA、蛋白和电流的变化.②采用酶联免疫吸附试验检测COX-2反义载体转染胃癌细胞前后环磷酸腺苷(cAMP)水平的变化.③采用PCR技术构建缺失cAMP结合结构域的HERG突变体,并转染胃癌细胞.④应用COX-2抑制剂和前列腺素(PG)E2作用于胃癌细胞和HERG突变体转染的胃癌细胞,观察HERG电流的变化.⑤将cAMP的拟似剂和拮抗剂、蛋白激酶(PK)A抑制剂分别作用于胃癌细胞和HERG突变体转染的胃癌细胞,观察相应的HERG电流变化.结果 ①与亲本细胞相比,COX-2反义转染胃癌细胞的HERG mRNA和蛋白表达无变化,而HERG电流强度减弱(P<0.05).②与亲本细胞相比,COX-2反义转染胃癌细胞中的cAMP水平明显下降(P<0.05).③COX-2抑制剂减弱而PGE2增强HERG电流的强度.但在缺失cAMP结合域的HERG突变体转染后的胃癌细胞,COX-2抑制剂和PGE2对HERG电流未产生明显的影响.④cAMP拟似剂可增强SGC7901细胞的HERG电流,而cAMP拮抗剂则减弱其电流.但对于缺失cAMP结合结构域的突变体转染的胃癌细胞中的HERG电流,cAMP的拟似剂和拮抗剂均未显示出明显的增强或抑制作用.⑤PKA抑制剂对SGC7901细胞和突变体转染的胃癌细胞的HERG电流均无明显影响.结论 COX-2通过其代谢产物PGE2而影响HERG电流.PGE2通过与受体结合后影响cAMP浓度,而cAMP通过与HERG蛋白上的特殊结构域结合对HERG电流产生影响,此过程不受PKA的调控.     

骨桥蛋白与环氧合酶-2在胃癌中的表达及其相关性分析

目的研究骨桥蛋白（OPN）与环氧合酶-2（Cox-2）在胃癌中表达的相互关系,探讨它们在胃癌发生发展、浸润和转移中的作用。方法应用免疫组化SP法检测54例胃癌中OPN与Cox-2的表达情况,探讨OPN与Cox-2与胃癌临床病理因素的关系。结果 OPN在胃癌中的表达率明显高于正常胃组织（P〈0.01）。OPN的表达与浆膜浸润、淋巴结转移有关,与TNM分期、肿瘤大小及组织学分型无关。胃癌中Cox-2高表达（62.96%）,明显高于正常胃组织（P〈0.01）;Cox-2的表达与胃癌TNM分期、组织学分级和淋巴结转移显著相关（P〈0.05）。胃癌组织中OPN与Cox-2的表达呈正相关（r=0.296,P〈0.05）。结论 OPN和Cox-2在胃癌的发生发展中起重要作用,联合检测可作为判断胃癌恶性程度和预后的指标。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制胃癌细胞P-糖蛋白表达

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对胃癌细胞株SGC-7901 P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 胃癌细胞株SGC-7901经浓度分别为0、10、100μmol／L的NS-398处理后，酶联免疫吸附试验检测NS-398对胃癌细胞前列腺素E2（PGF2）分泌的影响，24、48h后用RT-PCR检测多药耐药（mdr）1 mRNA表达，48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp表达。结果 NS-398可显著抑制胃癌细胞株SGC-7901 PGE2分泌，并呈浓度依赖性（P〈0．05）。不同浓度NS-398作用于细胞后，胃癌细胞株SGC-7901的mdr1／P-gp表达受不同程度抑制，100μmol／L的NS-398对mdr1 mRNA表达抑制作用强于10μmol／L（P〈0．01）。不同浓度药物与测量时间为交互作用．作用48h与24h相比，NS-398对mdr1 mRNA表达的抑制作用更强（P〈0．01）。结论 NS-398可抑制SGC-7901的mdr1／Pgp表达，且呈剂量效应关系。NS-398可能通过抑制COX-2活性，抑制COX-2下游产物PGE2表达，从而抑制P-gp表达。选择性COX-2抑制削可能有助于减轻肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398依赖和不依赖环氧合酶-2途径抑制胰腺癌细胞作用机制的研究

目的 从依赖和不依赖COX-2途径探讨选择性COX-2抑制剂NS-398抗胰腺癌细胞作用的机制.方法 采用COX-2 RNA干扰 (RNAi)技术处理胰腺癌细胞系PC-3,沉默其mRNA表达;根据处理方式不同,可以分为:含有沉默COX-2基因片段载体的稳定转染的PC-3细胞株(SPC),含有空白对照载体的稳定转染的PC-3细胞株(NC).应用MTT法检测选择性NS-398对不同PC-3细胞株的生长的影响;采用RT-PCR和Western blotting方法检测COX-2、bcl-2、p21Waf1和p27Kip1的基因表达情况.结果 NS-398对PC-3、SPC和 NC均能发挥明显的生长抑制作用;NS-398干预后,PC-3、SPC和NC细胞bcl-2基因表达均明显降低,p27Kip1和p21Waf1基因表达均明显增加;不含有NS-398的培养液干预后,SPC的bcl-2基因表达低于NC和PC-3,p27Kip1和p21Waf1基因表达与NC和PC-3相比变化不明显.结论 NS-398对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,其作用机制可能与通过依赖COX-2途径抑制bcl-2基因表达,通过不依赖COX-2途径诱导p27Kip1和p21Waf1基因表达有关.     

选择性环氧合酶-2抑制剂治疗非小细胞肺癌的研究进展

环氧合酶-2（COX-2）在非小细胞肺癌（NSCLC）发生、发展、侵袭和转移中起着重要作用,因此选择性COX-2抑制剂治疗NSCLC的机制以及与化放疗结合用于NSCLC的临床治疗已经成为研究的热点。本文综述这方面的研究进展。     

重组腺病毒Ad/siRNA/环氧合酶-2的构建及其抑制食管癌细胞的效果

目的观察腺病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术对人食管鳞癌细胞（Eca-109）环氧合酶（COX）-2基因表达的抑制效果及其对Eca-109细胞生长的影响。方法采用含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER构建针对人COX-2 mRNA的重组质粒psiRNA COX-2。Not Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切psiRNA/COX-2 得到siRNA/COX-2表达片段．定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack的相同位点得到pAdTrack/siRNA／COX-2．后者与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到腺病毒Ad/siRNA／COX-2．经293细胞包装、扩增后转染Eca-109细胞。ELISA法测定培养液上清的前列腺素（PG）E2浓度，PCR法检洲细胞COX-2 mRNA水平．流式细胞仪检测细胞凋亡与周期分布．绘制细胞生长曲线。结果重组腺病毒Ad／siRNA/COX-2构建成功．转染Eca-109细胞后．细胞COX-2 mRNA水平下降71．7％（P〈0．01）．培养液上清PGE2浓度下降62．0％（P〈0．01）；细胞生长明显减缓．G0-G1期细胞比例增加、S期与G2-M期细胞比例减少（P〈0.01）．细胞凋产增多（P〈0.01）。结论腺病毒介导的RNAi技术可显著抑制人食管鳞癌细胞COX-2基因表达．从而导致肿瘤细胞增殖减缓、凋亡增加。     

核糖核酸干扰下调骨桥蛋白表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨骨桥蛋白（OPN）下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响。方法参考相关文献，设计并合成OPN的小干扰RNA（siRNA），通过荧光标记测定2株细胞的转染效率。Western印迹法检测OPN蛋白下调情况。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA对OPNmRNA的下调率及随时间的变化。流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法连续7d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化，并采用混合模型进行统计分析。Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析。结果2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90％以上。干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调。SGC7901细胞在siRNA转染后72hOPN mRNA表达下降最低，达47％；MKN28细胞在siRNA转染后48hOPN mRNA表达下降最低，达40％。OPN被干扰后，SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱（混合模型分析与未干扰组比较，P〈0．01）。OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响，其中SGC7901分裂期细胞比例由18．78％降至17．02％，MKN28分裂期细胞比例则由4．96％降至0．39％。2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡。OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降，穿过人工基底膜的细胞数明显减少（SGC7901：t=5．172，P〈0．01；MKN28：t=11．365，P〈0．01）。结论siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达，OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关。     

根除Hp前后胃窦粘膜COX-2表达的变化

目的检测胃窦粘膜在根除Hp前后环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平的变化,探讨COX-2表达与急、慢性炎症的关系.方法对我院1999.6-2000.3胃镜诊断为慢性胃炎、胃粘膜活组织尿素酶试验和14C尿素呼气试验均证实Hp阳性的14例住院病人,在根除Hp前后取胃粘膜活检组织,HE染色显示组织结构和炎性细胞浸润情况,用免疫组织化学方法(SP法)显示COX-2表达情况.结果感染区域的胃窦上皮细胞和相应的壁细胞、单核细胞均可检测到COX-2的阳性表达,与根除Hp后比较,COX-2的表达明显减少而不完全消失(P＜0.005),COX-2阳性表达率与胃粘膜的急性炎症程度无关,而与慢性炎性细胞浸润密切相关(r=0.74 P＜0.05).结论COX-2的高表达可能是Hp相关性胃炎发生的重要机制.     

运用siRNA抑制K562细胞中端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的建立利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中端粒酶活性的方法,为肿瘤的基因治疗提供理论依据。方法设计端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异性siRNA,用体外转录方法合成hTERT基因的siRNA并转染K562细胞,培养48小时后,收集细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测转染细胞中hTERT基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,并运用TRAP ELISA方法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,实验组hTERT mRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为75％和60％,同时。TRAP ELISA方法检测发现实验组端粒酶活性仅为对照组活性的45％。结论hTERT siRNA能特异性的抑制hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,因此运用siRNA来抑制hTERT的表达可达到降低端粒酶活性的效果。     

短发夹状RNA对人肝癌细胞环氧合酶-2的抑制作用

目的:构建针对人环氧合酶-2(COX-2)基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒,观察其在不同时间点对人不同肝癌细胞株COX-2表达的影响.方法:以人COX-2mRNA编码区作为RNA干扰靶点,构建shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体分别转染人肝癌细胞株HepG2和Bel7402,利用逆转录聚合酶链反应和Westernblot法分别观察两株细胞转染后24,48,72,和96hCOX-2mRNA和蛋白的表达变化,检测抑制效果.结果:质粒在HepG2细胞和Bel7402细胞中的转染率分别约为60%和54%.WBH1导入细胞24,48,72和96h后,逆转录聚合酶链反应检测COX-2mRNA表达抑制率,HepG2细胞分别为18.5%,88.6%,52.8%和42.4%(P<0.01).Bel7402细胞分别为9%,45.1%,70.1%和56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.     

小干扰RNA沉默bcl-2基因抑制胃癌细胞生长的研究

目的利用RNA干扰技术,研究靶向bcl-2的小干扰RNA(siRNA)在体内外对胃癌细胞生长的影响,探讨其对胃癌治疗的可行性。方法化学合成bcl-2基因的siRNA,脂质体法将bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞,采用实时定量PCR和Western印迹观察bcl-2 siRNA转染前后胃癌细胞bcl-2基因的表达变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、流式细胞检测技术和端粒重复序列扩增法(TRAP)分别检测胃癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性变化。并将转染bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种于裸鼠皮下,观察其在裸鼠体内成瘤及生长情况。结果数据经方差分析,bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,明显抑制bcl-2基因表达,并与其浓度和作用时间相关,以100 nmol/L bcl-2 siRNA对bcl-2基因表达抑制效果最佳。以该浓度的bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,bcl-2 mRNA和蛋白表达抑制分别为79．9%和85．3%；经bcl-2 siRNA作用的SGC 7901细胞生长明显缓于对照组(P＜0．05),细胞凋亡率高于对照组(P＜0．05),端粒酶活性明显低于对照组(P＜0．05)。转染100 nmol/L bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种裸鼠皮下后,肿瘤出现时间晚,体积小．生长受到明显抑制(P＜0．05)。结论靶向bcl-2的siRNA可明显下调靶基因bcl-2的表达,在体内外抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,为探索胃癌基因治疗提供新的策略。     

环氧合酶-2、基质金属蛋白酶-9和核增殖抗原在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及核增殖抗原(Ki67)在胃癌中的表达与胃癌发生、浸润和转移的关系.方法 选择2003年1月至2005年12月手术切除、病理证实的胃癌存档蜡块标本58例,其中男37例,女21例.年龄31～76岁,中位年龄58.2岁.另取上述胃癌根治术患者距肿瘤5～6 cm的癌旁组织作对照.采用免疫组化法检测胃癌组织中COX2、MMP-9、Ki67的表达.结果 COX-2、MMP-9在胃癌组织中的表达率分别为82.76%和68.9%,均高于对照组(37.93%和24.14%,P＜0.01).COX-2、MMP-9的表达与胃癌患者性别、年龄、部位及大小无相关性(P＞0.05),与胃癌浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05),MMP-9还与胃癌分化程度相关(P＜0.05).COX-2与MMP-9在胃癌组织中的表达有相关性(P＜0.05,C=0.359).MMP-9、COX-2表达阳性者Ki67表达水平高于阴性者,两者间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 COX-2、MMP-9、Ki67在胃癌浸润、转移过程中起重要作用,共同促进肿瘤的发生、发展.     

Suppression of eGFP expression in erythroid-specific transgenic mice by siRNA

We have studied the role of small interfering RNA (siRNA) in the suppression of the enhanced green fluorescent protein (eGFP) in vitro and in vivo. siRNA plasmids for suppressing the eGFP expression were constructed, in which H1 promoter amplified from human 293 T cells was used to drive the small interfering RNA (19-nt) synthesis. In vitro studies demonstrated that the constructed siRNA plasmids had an effective suppressive effect on eGFP expression in 293 T and Mel cells. When the siRNA plasmid was injected into erythroid-specific eGFP transgenic mice, the eGFP expression were significantly suppressed (over 20% reduction) in the recipient mice compared to the control mice and the suppressing effect lasted for 2 weeks after one single injection. Moreover, the suppressive effect could be re-generated or boosted with secondary injections. Our results demonstrate a tissue-specific gene suppression by siRNA treatment.     

Mechanism and clinical significance of cyclooxygenase-2 expression in gastric cancer

AIM: To determine the correlation between methylation status of 5' CpG island of cyclooxygenase-2 (COX-2) gene and protein expression in gastric cancer tissues for distinguishing the molecular characters of gastric cancers. METHODS: Methylation status of 5' CpG island of COX-2 gene was studied by PCR amplification after HpaⅡ and Hha I restrictive enzyme digestion;COX-2 expression was evaluated by immunohistochemical method. RESULTS: Hpa Ⅱ and HhaI site were all methylated in 12 normal gastric mucosa tissues, whereas they were demethylated in 77.27% (34/44) and 84.09% (37/44) gastric cancer tissues,respectively.Expression of COX-2 was detected in 68.18% (30/44) gastric cancer tissues, but no expression was found in normal gastric mucosa tissues. In gastric cancer tissues, COX-2 expression was correlated significantly with HpaⅡ site demethylation (29/30 vs 5/14, P<0.001 and HhaI site demethylation (28/30 vs 9/14,P<0.05). CONCLUSION: The demethylation of 5' CpG island of gene is necessary for COX-2 expression in human gastric cancer. The expression status of COX-2 may provide theoretical basis for COX-2 targeting gastric cancer treatments.