肝癌缺失基因1对人卵巢癌细胞OVCAR-3增殖和迁移的影响

目的:初步探讨肝癌缺失基因1(deleted in livercancer 1,DLC1)对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖和迁移的影响。方法:采用脂质体介导重组质粒pEGFP-C3-DLC1转染人卵巢癌OVCAR-3细胞后,RT-PCR及蛋白质印迹法检测DLC1mRNA和蛋白的表达。MTT法、FCM法和Transwell小室法分别评价DLC1基因转染前后细胞增殖、细胞周期和细胞迁移能力的变化,蛋白质印迹法检测黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)和c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun NH2-terminalprotein kinase,JNK)蛋白及其磷酸化水平的变化。结果:成功转染pEGFP-C3-DLC1后,OVCAR-3细胞中可检测到DLC1mRNA和蛋白的稳定表达。稳定转染DLC1基因后,OVCAR-3细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,而且停滞于G0/G1期的细胞比例增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。转染DLC1基因后的OVCAR-3细胞中p-FAK(Y925)和p-JNK(Thr183/Tyr185)蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:DLC1基因转染OVCAR-3细胞后可能通过下调p-FAK(Y925)和p-JNK(Thr183/Tyr185)蛋白表达水平,使OVCAR-3细胞停滞于G0/G1期,从而抑制OVCAR-3细胞的体外增殖和迁移能力。     

RNA干扰沉默基质金属蛋白酶2基因对卵巢癌OVCAR-3细胞诱导体外血管形成能力的影响

 目的　探讨沉默基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因对卵巢癌OVCAR-3细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,以及对细胞诱导的体外血管形成能力的影响。方法　合成特异性靶向基因的小干扰RNA （siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞（MMP-2沉默组）,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替转染siRNA的试剂作为空白对照组;采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后48 h MMP-2及VEGF的mRNA和蛋白表达水平,通过体外血管形成实验检测卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力。结果　与阴性对照组相比,MMP-2沉默组转染48 h,OVCAR-3细胞MMP-2和VEGF mRNA表达量分别下降了78.8 %和75.5 %（P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了81.2 %和78.3 % （P＜0.05）;体外血管形成实验显示,沉默MMP-2基因后卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力明显降低（P＜0.05）。结论　沉默MMP-2基因可抑制卵巢癌细胞VEGF表达,并能够抑制卵巢癌细胞诱导的体外血管形成能力,抑制MMP-2基因有助于抗血管形成,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

生长分化因子15 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖与迁移的影响

目的：探讨靶向生长分化因子15（growth differentiation factor 15,GDF15）基因siRNA 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖和迁移的影响。方法：根据基因数据库（GenBank）设计并合成3 条人GDF15 基因siRNA（GDF15-siRNA161、GDF15-siRNA290 和GDF15-siRNA860）和阴性对照NC-siRNA 序列,采用qPCR法测定转染不同GDF15-siRNA 的SPCA1 细胞中GDF15 mRNA表达水平,筛选有效抑制GDF15 基因表达的siRNA。CCK-8 法和划痕实验分别检测转染有效GDF15-siRNA 和NC-siRNA 的SPCA1 细胞增殖和迁移能力。结果：3 条GDF15-siRNA 对SPCA1 细胞GDF15 mRNA表达均有明显抑制（P<0.01）,其中GDF15-siRNA161抑制最为明显。和转染NC-siRNA 的SPCA1 细胞相比,转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞增殖明显减慢[ （0.46±0.03）vs（0.52±0.01）,P<0.01],转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞迁移速度明显低于转染NC-siRNA的SPCA1 细胞（P<0.01）。结论：有效沉默人肺腺癌SPCA1 细胞GDF15基因表达能抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,GDF15 可能成为人肺腺癌基因治疗的候选靶点。     

siRNA沉默HYAL1基因表达对人乳腺癌细胞生长和增殖的影响

背景与目的：有研究证实透明质酸酶（hyaluronidase,Hyase）与人乳腺癌的恶性潜能相关。本研究拟探讨RNA干扰是否能有效抑制Hyde基因HYAL1的表达以及人乳腺癌细胞的生长和增殖。方法：体外化学合成HYAL1序列特异性双链RNA（dsRNA）,在脂质体（SiPORT Lipid）的介导下转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30。荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,RT-PCR分析HYAL1 mRNA的表达,MTT测定细胞的增殖,流式细胞仪测定细胞周期。结果：（1）HYAL1-siRNA能有效地封闭HYALl基因的表达．使HYAL1 mRNA相对水平明显降低（P〈0．05）;（2）HYAL1-siRNA能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）;（3）HYAL1-siRNA使细胞周期G0／G1期细胞百分比明显增加,S期的细胞百分比显著减少（P〈0．05）。结论：siRNA-HYAL1能有效抑制人乳腺癌细胞株HYAL1基因的表达,抑制细胞增殖,将更多的细胞阻滞在G0／G1期。     

小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响

 目的　探讨靶向基质全属蛋白酶-2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法　合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果　与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8 %、78.8 %和78.4 %（均P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了72.6 %、81.2 %和76.4 %（均P＜0.05）,以48 h作用最强;细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P＞0.05）;60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0 %和44.8 %（均P＜0.05）;细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7 %和35.8 %（均P＜0.05）。结论　siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的 研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 siRNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果 肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-siRNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应著（P＜0.05）。细胞周期分析显示：siEZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降（P＜0.05）;凋亡分析显示：siEZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著（P＜0.05）。结论 沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。     

EZH2 基因在卵巢癌发生发展中的作用及其临床病理意义*

目的:探讨EZH 2 基因对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响,及其在卵巢癌组织中的表达与临床病理学意义。方法:运用EZH 2 小干扰RNA（siRNA ）转染卵巢癌OVCAR- 3 细胞株,Western blot方法分析OVCAR- 3 细胞中EZH 2 的蛋白表达;MTT 实验检测细胞增殖水平,Transwell 小室实验检测细胞侵袭和转移能力。另外,应用RT-PCR 和免疫组织化学法分别检测EZH 2 在卵巢癌组织中的mRNA 和蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,EZH 2 siRNA 能明显降低OVCAR- 3 细胞的EZH 2 蛋白表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖能力（P=0.032）;转染EZH 2 siRNA 的OVCAR- 3 穿膜细胞数,在侵袭实验中,siEZH 2 组为29.3 ± 5,与对照组（51± 6.8）比较,差异有统计学意义（P=0.027）;在迁移实验中,siEZH 2 组的迁移细胞数为51.6 ± 7.7,显著低于对照组（72.3 ± 11.7,P=0.036）。 RT-PCR 检测发现,卵巢癌组织中的EZH 2 mRNA 表达水平明显高于正常组织。在免疫组化实验中,61.0%的卵巢癌组织呈EZH 2 蛋白高表达,而且与卵巢癌的T 分期、N 分期以及FIGO分期显著正相关（P<0.05）。 另外,单变量生存分析发现EZH 2 高表达与卵巢癌患者短生存期密切相关（P=0.007）;多变量分析显示EZH 2 是卵巢癌的独立预后参数（P=0.047）。 结论:EZH 2 在卵巢癌的发生与进展中发挥着重要的作用,而且EZH 2 高表达是卵巢癌患者预后不良的独立分子指标。      

HMGA1基因小分子RNAi对卵巢癌转移抑制的实验研究

目的：探讨高迁移率蛋白家族A1（high mobility group A1,HMGA1）基因小分子干扰RNA对卵巢癌转移抑制的机理。方法：RT—PCR一步法检测3种不同的卵巢癌细胞株中HMGA1、E钙黏蛋白mRNA的表达水平;设计并合成HMGA1 siRNA,转染H08910PM细胞：半定量RT—PCR分析法观察HMGA1 siRNA转染对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞株体外侵袭、运动的抑制作用。结果：RT—PCR半定量分析结果显示：OVCAR-3细胞中HMGA1 mRNA表达量相对较低（0．64±0．13）,而E-钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR-3细胞中有表达;H08910PM细胞稳定转染HMGA1 siRNA后,转染组、对照组HMGA1 mRNA表达水平分别为0．16±0．08、0．47±0．11（P〈0．01）,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0．38±0．07、0．09±0.05（P〈0．01）;体外运动实验显示,跨膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．05）;重组细胞基底膜侵袭实验显示,穿透基底膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．01）。结论：HMGA1基因与卵巢癌转移密切相关,HMGA1基因siRNA可上调卵巢癌细胞中E钙黏蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的运动和侵袭,为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。     

siRNA干扰STAT3基因对食管癌Eca-109细胞生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况.结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确.RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制卒为35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞凋亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡.     

Specific inhibition of AKT2 by RNA interference results in reduction of ovarian cancer cell proliferation: increased expression of AKT in advanced ovarian cancer

The protein kinase AKT is involved in several signaling pathways that are important for tumor development and progression, suggesting that AKT might be an interesting target for a molecular tumor therapy. In this study, we investigated the AKT expression in ovarian carcinomas and the role of the AKT isoforms to ovarian cancer cell proliferation. We observed an increased AKT expression in 58% of the primary ovarian carcinomas as compared to normal ovaries by immunohistochemistry. AKT expression was significantly associated with positive lymph node status (P=0.002) and advanced FIGO stage (P=0.009). In western blot analysis, total AKT was expressed in all ovarian cancer cell lines and HOSE cells, while phosphorylated AKT was only observed in OVCAR-3 and SKOV-3 cells. The isoforms AKT1 and AKT2 were expressed at the mRNA level in all cell lines, while no relevant AKT3 mRNA levels were detected by conventional and quantitative RT-PCR. To determine the effects on cell proliferation, we used the unselective PI3K-inhibitor LY294002 as well as RNA interference to selectively inhibit the AKT isoforms. Treatment with LY294002 and the AKT2 siRNA reduced proliferation of OVCAR-3 cells. Our results show that AKT is expressed in a subpopulation of advanced ovarian carcinomas suggesting a role for this protein in the progression of this entity. Deactivation of AKT, especially AKT2 can result in reduction of cell growth. Accordingly, AKT is an interesting target for therapeutic intervention in ovarian cancer.     

Induction of G0/G1 cell cycle arrest in ovarian carcinoma cells by the anti-inflammatory drug NS-398, but not by COX-2-specific RNA interference

Cyclooxygenases, particularly COX-2, play an important role in tumor development and progression. We have previously shown that COX-2 expression is an independent prognostic factor in human ovarian carcinoma. In this study, we investigated the effects of the inhibition of COX isoforms by the NSAID NS-398 as well as by COX-isoform-specific RNA interference (RNAi) in the human ovarian carcinoma cell lines OVCAR-3 and SKOV-3. OVCAR-3 cells showed a constitutive expression of COX-1 and an induction of high levels of COX-2 and PGE(2) after stimulation with interleukin-1beta. In contrast, SKOV-3 cells were negative for both COX isoforms. In OVCAR-3 cells, PGE(2) production was inhibited by NS-398 in concentrations of 1 microM and by a COX-2-specific silencing RNA (siRNA), while a COX-1-specific siRNA did not have an effect. This suggests that COX-2 is the major source of PGE(2) in this cell line. To dissociate COX-2-specific and non-COX-2-specific effects on cell proliferation, a proliferation assay was performed after incubation of cells with NS-398 and COX siRNAs. NS-398 induced an inhibition of cell proliferation at concentrations of 50-500 microM, which are above the concentrations needed for the inhibition of PGE(2) production. This inhibitory effect was present in the COX-positive cell line OVCAR-3 as well as in the COX-negative cell line SKOV-3 and could not be reverted by addition of exogenous PGE(2). Neither COX-1- nor COX-2-specific siRNAs had an effect on cell proliferation of OVCAR-3 cells. Cell cycle analysis showed an increased accumulation of cells in the G0/G1 phase after treatment with NS-398, but not with COX siRNAs. These experiments suggest that NS-398 reduced cell proliferation in ovarian carcinoma cells by induction of G0/G1 cell cycle arrest independent of COX-2 inhibition. Our study shows that specific inhibition of COX isoforms by RNAi could be used to dissociate effects of NSAIDs. Furthermore, our results suggest that cell cycle arrest is one of the primary mechanisms responsible for the antiproliferative effects of NS-398 on ovarian carcinoma cells.     

siRNA转染复合物对卵巢癌细胞SKOV3裸鼠模型EZH2的影响

目的：利用siRNA载体介导的RNA干扰技术靶向沉默EZH2基因,从而观察对卵巢癌裸鼠模型中肿瘤组织EZH2 mRNA的表达水平,探讨siRNA转染之后,EZH2对肿瘤组织黏附、侵袭和转移的作用。方法：采用原位造模方式,即人卵巢癌细胞SKOV3移植方法构建卵巢癌裸鼠模型。将30只卵巢癌裸鼠随机分为3组（n=10）：siRNA干扰（EZH2-siRNA组）组、阴性对照组（NC-siRNA组）和空白对照组（Con组）,前两组每日分别腹腔注射100μl siRNA转染复合物和阴性对照转染复合物（1次,共注射5次。末次腹腔注射后48h断颈处死裸鼠,观察腹腔肿瘤组织病灶形成情况,取肿瘤病灶标本。RT-PCR和Western blotting检测肿瘤组织EZH2 mRNA与蛋白表达水平。结果：实验裸鼠共35只,30只造模成功。RT-PCR检测结果显示,与NC-siRNA组和Con组相比,EZH2-siRNA组EZH2 mRNA表达水平明显下降（P〈0.05）,而后两者之间差异无统计学意义（P〉0.05）。Western blotting结果显示,EZH2-siRNA组EZH2蛋白表达明显减弱（P〈0.05）,而后两者之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：EZH2基因siRNA转染之后的肿瘤组织中EZH2 mRNA与蛋白表达明显减弱siRNA转染之后的肿瘤组织的侵袭、转移能力明显下降,EZH2基因表达减弱可以作为基因治疗的新手段。     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响

目的：探讨Notch1在肾透明细胞癌株中的表达,采用短片段RNA（small interferhtg RNA,siRNA）干扰技术沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观察其对Caki-1增殖的影响。方法：体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2及人肾癌细胞786—0和Caki-1。实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测Notch1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测Notch1蛋白的含量。特异性Notch1 siRNA干扰肾癌Caki-1细胞,用Lipofectamine2000转染48h后,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测其中Notch1 mRNA、蛋白的表达变化,CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果：Notch1在肾癌细胞株中的表达要明显高于正常肾小管上皮细胞,差异具有统计学意义（P〈0.05）。siRNA—Notch1干扰以后可以明显降低Caki-1细胞中Notch1 mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）,同时检测Caki-1细胞增殖能力也随之下降（P〈0.05）。结论：Notch1在肾癌透明细胞癌中高表达,下调Notch1信号通路可以抑制肾细胞癌Caki—1的增殖,调节肾癌的生长。     

miR－300对人卵巢癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的：研究 miR－300对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法：通过荧光实时定量 PCR （qRT－PCR）检测卵巢正常上皮细胞及卵巢癌细胞中miR－300的表达水平和miR－300 siRNA的沉默效果;CCK－8法检测沉默miR－300对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测沉默miR－300对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响。结果：miR－300在卵巢癌细胞中的表达显著高于卵巢正常上皮细胞;miR－300 siRNA可有效沉默卵巢癌细胞中miR－300的表达;沉默miR－300的表达可以明显抑制卵巢癌细胞的增殖能力,增强卵巢癌细胞的凋亡能力,并使卵巢癌细胞的周期阻滞于G1期。结论：miR－300在卵巢癌细胞的增殖、凋亡和周期过程中起着重要的调控作用。     

RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究

目的：通过小分子干扰RNA（siRNA）技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中P13K／AKT信号通路关键基因蛋白激酶B（protein kinase B,PKB／AKT）基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKTsiRNA转染SKOV3细胞。荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKTmRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测P13K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪AnnexinV／pI法检测细胞凋亡率的变化。结果：siRNA干扰组AKTmRNA的表达量为（O．325±0．04）明显抑制,并显著低于对照组,q=58．96,P〈O．001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而P13K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0．637;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达（79．52±2．31）％,较对照组（27．35±2。01）％与空白载体组（28．64±1．96）％明显升高,约是空白载体组（q=60．880,P〈0．001）与对照组（q=58．553,P〈0．001）的3倍,差异有统计学意义。结论：AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法。