Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

不同强度运动对大鼠关节软骨缺损早期修复和MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的比较不同强度运动对大鼠髌股关节软骨缺损早期修复及血清基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶抑制
剂-1（TIMP-1）表达的影响。方法将24 只雄性SD大鼠建立双侧髌股关节全厚软骨缺损模型,后随机分为4 组：安静对照组
（SED）、低强度运动组（LIR）、中强度运动组（MIR）、高强度运动组（HIR）,后3组施行跑台运动6周。于实验前、后分别用ELISA
法测定血清MMP-3、TIMP-1浓度,并计算实验后TIMP-1/MMP-3浓度比值。实验后切开关节行大体观察评分,软骨缺损处组
织分别予蕃红O-固绿、甲苯胺蓝染色行组织学观察、O’Driscoll组织评分。结果（1）组织学切片显示：SED组软骨缺损处类透
明软骨填充,LIR组、MIR组均为纤维组织覆盖,HIR组软骨下骨破坏;大体评分与O’Driscoll组织评分：SED组均高于3运动组
（P<0.05）,HIR 组最低;（2）MMP-3、TIMP-1 浓度：实验前4 组MMP-3、TIMP-1 浓度差异无统计学意义（P>0.05）;实验后4 组
MMP-3、TIMP-1 浓度均明显高于实验前（P<0.05）,组间差异有统计学意义（P<0.05）,运动组MMP-3 浓度均高于SED组（P<
0.05）;（3）TIMP-1/MMP-3浓度比值：SED组明显高于3运动组（P<0.05）,HIR组最低,LIR与MRI组居中。结论中、低强度运动
均抑制大鼠髌股关节全厚软骨缺损的早期修复,高强度运动破坏软骨下骨,MMP-3、TIMP-1表达与运动相关,TIMP-1/MMP-3
值与软骨修复的程度一致。     

Kiss-1基因通过NF-κB信号传导通路抑制人结直肠癌HCT116细胞迁移

目的探讨Kiss-1 基因抑制人结直肠癌细胞转移能力与NF-κB信号传导通路的相关性。方法构建重组pGC-LV-Kiss-
1-EGFP慢病毒载体并转染人结直肠癌HCT116细胞,实验分为空白对照组（CON组）、慢病毒空载体阴性对照组（NC组）、Kiss-1
基因过表达组（OE组）。CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测转染前后细胞增殖能力的变化,Transwell法分别检测转染前后细
胞的侵袭和迁移能力的变化。Western-blot法检测转染前后NF-κB信号传导通路中抑制性蛋白I-κB以及下游效应蛋白MMP-9
表达量的变化。结果OE组HCT116细胞中I-κB的表达含量较CON组、NC组明显升高（P<0.05）,下游效应蛋白MMP-9的表
达量明显下降（P<0.05）,差异具有统计学意义。OE组较CON组、NC组细胞增殖受到明显抑制（P<0.05）,细胞侵袭、迁移能力
亦出现明显抑制（P<0.05）。结论重组pGC-LV-Kiss-1-EGFP慢病毒转染人结直肠癌HCT116细胞后,可能通过NF-κB信号传
导通路途径抑制其增殖、侵袭和迁移能力。
     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人胰腺癌细胞SW1990侵袭能力的影响

目的：观察信号转导与转录因子3（STAT3）siRNA表达载体对胰腺癌细胞侵袭能
力的影响,并探讨其机制。方法：实验分为空白对照组、阴性对照组及STAT3 siRNA组。以人
胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,将合成的STAT3 siRNA转染SW1990细胞后,采用RT-PCR及
Western blotting检测转染前后STAT3 mRNA及蛋白的表达变化,Transwell法检测其对胰腺癌
细胞侵袭能力的影响,RT-PCR及Western blotting检测其对胰腺癌细胞MMP-2和MMP-9表达
的影响。结果：STAT3 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,
与空白对照组及阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后胰腺癌细
胞的侵袭细胞数及MMP-2和MMP-9的表达显著减小,与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统
计学意义（P<0.05）。结论：STAT3 siRNA能特异地阻断胰腺癌细胞中STAT3信号的活
化,并进一步通过下调MMP-2和MMP-9的表达从而抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。     

艾灸关元穴对D-半乳糖诱导的衰老大鼠皮肤氧化应激及MMP-1、TIMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨艾灸关元穴延缓皮肤衰老的作用机制。方法通过皮下注射D-半乳糖建立皮肤衰老大鼠模型,造模过程中,各治疗组分别给予艾灸、针刺治疗,连续治疗21天后,测定大鼠血清及皮肤组织丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、过氧化氢（H2O2）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性、皮肤含水量及胶原蛋白含量,RT-PCR法检测皮肤组织MMP-1/TIMP-1 m RNA表达量。结果模型组血清及皮肤组织SOD、CAT活性显著低于艾灸关元穴组（P<0.05）,MDA、H2O2及ROS含量显著高于艾灸关元穴组（P<0.05）,皮肤组织中MMP-1表达量高于艾灸关元穴组（P<0.05）,TIMP-1表达量显著低于艾灸关元穴组（P<0.05）。结论艾灸关元穴通过调节氧化应激紊乱及MMP-1/TIMP-1在皮肤组织中的表达起到延缓衰老的作用。     

环巴胺对人食管癌EC109细胞转移的影响及作用机制

目的探讨环巴胺特异性阻断人食管癌EC109细胞Hedgehog（Hh）信号通路后对其转移能力的影响及其可能的机制。方
法环巴胺处理EC109细胞48h后,采用Transwell小室、血管生成实验观察细胞的迁移、侵袭及血管形成等转移能力,RT-PCR
检测Gli-1mRNA的表达,Western blot检测Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表达。结果环巴胺阻断Hh信号通路能显著减弱EC109
细胞迁移、侵袭及血管形成能力（P<0.05）;Gli-1mRNA表达量降低,Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表达量均降低,差异有统计学
意义（P均<0.05）。结论环巴胺能显著抑制EC109细胞的转移能力,其可能机制与抑制Gli-1进而使下游MMP-9、VEGF表达下
调有关。
     

PTEN基因对胶质瘤细胞增殖及侵袭性影响的体外研究

目的探讨PTEN基因转染人胶质瘤U251细胞后对其增殖及侵袭性的影响。方法应用脂质体转染技术,将含PTEN基因重组表达质粒转染U251细胞系,Western blot鉴定其蛋白表达;应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察对细胞株生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;应用免疫组化检测转染PTEN的U251细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达变化。结果 PTEN质粒成功转染U251细胞并有PTEN蛋白的表达。与对照组、空载体组相比,转染组细胞生长抑制率下降达52.46%;细胞周期改变,细胞从G1期到S期发生阻滞;转染组MMP-2、MMP-9表达显著下降,而TIMP-1、TIMP-2表达显著上升,两者呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。结论 PTEN转染人胶质瘤细胞系U251后,可抑制其增殖、促进凋亡;并可能通过抑制MMPs和促进TIMPs来抑制细胞侵袭性。     

胶质瘤浸润组织中MMP-2、MMP-9、VEGF、Flk-1和P16的表达及其临床意义

目的：检测人脑胶质瘤浸润组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体Flk-1和多种肿瘤抑制基因1 (multiple tumor suppressor 1,P16)的表达,
阐述其与胶质瘤浸润的相关性。方法：用原位杂交和免疫组织化学方法检测33例胶质瘤浸润组织中MMP-2、
MMP-9、VEGF、Flk-1和P16的表达,并比较不同分组胶质瘤间表达率及P16的缺失率。结果：在Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的浸润组织中,MMP-2和MMP-9的阳性表达率分别为20.00%、61.11％和13.33％、55.56%(P<0.01);VEGF和Flk-1阳性表达率分别为26.67％、66.67％和20.00％、72.22％(P<0.01);P16缺失率分别为13.33％和77.78％,两者之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论：基质金属蛋白酶降解构成血脑屏障的基底膜和血管内皮细胞的过度
增殖是胶质瘤浸润发生的必要条件。P16的缺失反映了恶性胶质瘤浸润组织具有增殖性生物学行为。     

靶向VEGF的miRNA对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向血管内皮生长因子（VEGF）基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据
VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测
序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4 个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR 检测转染细胞中
VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting 检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的
miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤
细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制
肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法
和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照
组比较差异具有显著性（P<0.05）,与空白组比较细胞增殖抑制更加明显（P<0.01）;肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率
也显著高于对照组（P<0.01）。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的
表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。
     

核因子I-C 降低皮肤成纤维细胞对TGF-β的敏感性

目的探讨核因子I-C（NFI-C）对血小板源性生长因子（PDGF）促进皮肤成纤维细胞表达TGF-β受体Ⅱ（TβRⅡ）作用的影
响。方法含有NFI-C序列的慢病毒转染人皮肤成纤维细胞（HFF-1）;根据细胞生长活性及转染效率筛选最佳转染复数（MOI）;
PDGF-BB刺激体外培养的HFF-1细胞、转染NFI-C的HFF-1细胞以及转染阴性病毒的HFF-1细胞,并设立转染NFI-C但不用
PDGF处理的细胞;以不做任何处理的HFF-1 细胞作为空白对照组;采用western blot、RT-qPCR测定各组细胞TβRⅡ的表达。
数据采用单因素方差分析、LSD-t及SNK-q检验对各组数据进行分析。结果慢病毒转染HFF-1最适MOI为50。PDGF处理的
HFF-1细胞表达TβRⅡ高于空白对照组（P<0.05）;在PDGF作用下,转染NFI-C的HFF-1细胞表达TβRⅡ低于未转染的细胞（P<
0.05）;阴性病毒无明显抑制作用（P>0.05）;单纯转染NFI-C的HFF-1细胞表达TβRⅡ与空白对照组无显著性差异（P>0.05）。结
论NFI-C能抑制PDGF对TβRⅡ的上调作用,降低皮肤成纤维细胞对TGF-β的敏感性。
     

MMP-9、TIMP-1在皮肤恶性黑色素瘤的表达及意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)在皮肤黑色素瘤中的表达及临床病理学意义。方法:采用免疫组织化学S-P方法观察MMP-9和TIMP-1在51例皮肤黑色素瘤及15例色素痣石蜡切片中的表达,使用图像分析技术对免疫组化结果进行定量分析。结果:与色素痣比较,皮肤黑色素瘤中MMP-9表达较强(P<0.05),MMP-9/TIMP-1比值较高(P<0.05)。MMP-9和TIMP-1的表达及MMP-9/TIMP-1比值与黑色素瘤浸润深度有关(P<0.05)。有淋巴结转移者MMP-9表达较强(P<0.05),MMP-9/TIMP-1比值较高(P<0.05)。结论:MMP-9、TIMP-1蛋白的表达与皮肤黑色素瘤的侵袭性有关,MMP-9/TIMP-1比值增高提示肿瘤具有较高侵袭转移能力。     

Activity of Matrix Metalloproteinase in Airway Epithelial Cells of COPD Patients

Chronic obstructive pulmonary disease(COPD) is characterized by the air flow limitationthat is progressive and not fully reversible. Thecondition is believed to be associated with the ab normal inflammatory responses of lung to theharmful gases and particles. The exact mechanismof COPD is not completely understood and itspathological features included chronic inflammationof bronchi, small airway disease and serious cen tro lobular emphysema[1]. The pulmon…     

低氧应激对人肝癌细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9表达的影响

目的 探讨低氧应激对人肝癌细胞(HepG-2细胞)甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响.方法 低氧(5% O2、5% CO2、90% N2)和常氧培养HepG-2细胞.逆转录-多聚酶链式反应技术测定HepG-2细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9 mRNA的表达.酶联免疫吸附法测定HepG-2细胞培养上清VEGF、TIMP-1、MMP-9蛋白含量,放射免疫测定法测定HepG-2细胞培养上清AFP蛋白含量.结果 低氧组AFP、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白表达量显著高于常氧组;TIMP-1 mRNA和蛋白表达量显著低于常氧组(P＜0.01).结论 低氧应激上调人HepG-2细胞AFP、VEGF、MMP-9基因表达,下调TIMP -1基因表达.     

纳米微囊-VEGF复合体对创伤组织中MMP-9及TIMP-1mRNA表达的影响

目的探讨纳米微囊-VEGF复合体对创伤组织中MMP-9及TIMP-1mRNA表达的影响。方法利用纳米微囊-VEGF复合体作用于兔耳慢性创面,实验分为转基因组(CW+VEGF)、慢性创面组(CW)、非缺血创面组(NW),通过反转录PCR方法依次观察术后1d、3d、7d、10d、14d损伤组织中MMP-9及TIMP-1mRNA表达的变化情况。结果1MMP-9mRNA在CW组3~14d的表达水平高于NW组在相应时间点的表达水平,具有显著差异(P<0.05);CW+VEGF组在10d及14d表达水平显著高于CW组,具有显著性差异(P<0.05)。2TIMP-1mRNA在NW组和CW+VEGF组3~14d的表达水平均高于其在CW组相应时间点的表达水平,具有显著性差异(P<0.05)。结论MMP-9的高表达及TIMP-1的低表达是慢性创面难愈合的重要机制;外源性VEGF基因通过上调TIMP-1的表达促进了慢性创面的愈合。     

子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的异常生物学特性

目的:探讨子宫内膜异位症(EM)患者在位子宫内膜细胞在侵袭、新生血管形成、增殖、凋亡诸多方面是否有别于正常内膜细胞。方法:1.应用ELISA方法对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的培养基中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度进行测定。2.应用逆转录聚合酶链反应对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和Bax的mRNA表达进行观察。3.应用流式细胞技术对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的增殖和凋亡状况进行观察。结果:EM体外培养的在位内膜细胞分泌的VEGF和MMP-3均显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1显著低于对照组(P<0.01);VEGF mRNA、MMP-9 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1 mRNA和Bax mRNA的表达均低于对照组(均P<0.05);增殖指数显著高于对照组(P<0.05);凋亡指数显著低于对照组(P<0.05)。结论:EM在位内膜细胞在表达分泌VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、Bax,PI、ApI等诸多方面均有别于正常对照内膜细胞,进一步支持了"在位内膜决定论"。     

Relationship between Eukaryotic Translation Initiation Factor 4E and Malignant Angiogenesis in Non-Hodgkin Lymphoma

The relationship between angiogenesis and eukaryotic translation initiation factor 4E （EIF4E） expression level in non Hodgkin lymphoma （NHL） was studied. Mean microvessel density （MVD） and EIF4E were detected in 52 lymph node samples paraffin sections of patients with newly diagnosed NHL by the way of immunohistochemistry. Antisense EIF4E cDNA was cloned into plasmid pcDNA3.1 （＋） and transfected into Raji cells. A series of angiogenesis related factors,including vascular endothelial growth factor （VEGF）, matrix metalloproteinases 9 （MMP-9） and tissue inhibitor of metalloproteinases-2 （TIMP-2） proteins were detected by Western blot. The results showed that： （1） The Expression of EIF4E and MVD was higher in aggressive lymphomas than in indolent lymphomas（P〈0.05）and the expression of EIF4E was positively correlated with MVD in lymph node of NHL（r=0. 695, P〈0.01）. （2） Antisense EIF4E eukaryocytic expression vector （pcDNA3. 1-EIF4Eas） was constructed successfully. （3） EIF4E, VEGF and MMP-9 were expressed at high levels in Raji cells as compared to normal human peripheral blood monocular cells （NHPMC）, and blockage of EIF4E expression brought down the expression of VEGF and MMP-9. However, TIMP-2 was undetectable in Rail cells, although a moderate level of TIMP-2 was detected in NHPMC. It was concluded that the increased EIF4E expression was associated with aggressive property of NHL.     

基质金属蛋白酶MMP-9基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1与血管内皮生长因子在非小细胞肺癌侵袭转移过程中的关系研究

目的:检测不同的非小细胞肺癌组织中MMP-9、TIMP-1及VEGF的表达情况,观察比较它们的表达特点,分析三种物质在非小细胞肺癌侵袭转移过程中的关系.方法:收集不同分化程度的原发性非小细胞肺癌患者手术标本60例.采用免疫组化SP法对其染色,光镜下分别观察以上不同组织中MMP-9、TIMP-1、VEGF的表达情况.结果...     

基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1和血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤组织中的表达

目的探讨视网膜母细胞瘤(RB)组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与新生血管形成、视神经浸润和RB分化程度的关系。方法收集2010年1月至2014年3月在湖北医药学院附属襄阳医院接受治疗的RB患者的RB组织标本和癌旁正常组织标本各30例,采用免疫组织化学法测定VEGF、TIMP-1和MMP-9的表达。结果 RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);但RB组织与癌旁正常组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。未分化型RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于分化型RB(P<0.05,P<0.01);未分化型RB组织与分化型RB组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。有视神经浸润的RB组织中MMP-9和VEGF的阳性表达率显著高于无视神经浸润的RB(P<0.01);有视神经浸润与无视神经浸润的RB组织中TIMP-1的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF和MMP-9可能与RB的发生发展、新生血管形成、视神经浸润及RB分化程度有关。