四种苦豆子生物碱对巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α的影响

目的：研究苦参碱（matrine MT)、氧化苦参碱（oxymatrine OMT)、槐果碱（sophocarpine SC)、槐定碱（sophoridine SRI)四种苦豆子生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的影响,来探讨它们的抗炎、调节免疫作用机理。方法：用LPS刺激体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞,使之剂量依赖性地产生肿瘤坏死因子,观察四种苦豆子生物碱对巨噬细胞产生肿瘤坏死因子影响。结果：在一定剂量范围内,四种苦豆子生物碱均能剂量依赖性地抑制巨噬细胞经LPS刺激产生TNFα。结论：四种苦豆子生物碱均抑制小鼠腹腔巨噬细胞生成TNFα,这可能是它们抗炎、免疫调节作用的机制之一。     

六种苦豆子生物碱对炎症介质白三烯的影响

目的：研究苦参碱(matrine MT)、氧化苦参碱(oxymatrine OMT)、槐果碱(sophocarpine SC)、氧化槐果碱(oxysophocarpine OSC)、槐定碱(sophoridine SRI)、氧化槐定碱(oxysophoridine OSRI)6种苦豆子类生物碱对炎症介质白三烯巴和白三烯134的影响，来研究其抗炎作用机制。方法：以大鼠腹腔白细胞为材料，采用高效液相色谱法(HPLC)测定白细胞内白三烯C4和白三烯B4水平。结果：SRI对LTC4的生物合成影响很小，但对LTB4的生物合成有明显的抑制作用。其余5种生物碱对LTC4和LTB4的生物合成均有明显的抑制作用，且有良好的剂量-效应关系。结论：6种苦豆子生物碱对白三烯(LTC4和LTB4)的生物合成均具有不同程度的抑制作用，这可能是它们抗炎作用的机制之一。     

HPLC同时测定苦豆子总碱中8种生物碱含量

目的:建立苦豆子总碱中生物碱的含量测定方法.方法:采用HPLC,乙腈-0.05 mol· L-1磷酸二氢钾(三乙胺调pH ＞6.45),梯度洗脱,柱温35℃,检测波长205 nm,流速1.0 mL·min-1.结果:8种生物碱分离良好,8种生物碱含量＞50％.结论:该方法简便,可以作为苦豆子总碱的含量测定方法,比原标准中的滴定法测定总碱含量更方便、精确.     

苦豆子生物碱体外抗柯萨奇B3病毒的作用

目的：研究苦豆总碱和6种单体生物碱(苦参碱、氧化苦参碱、苦豆碱、槐定碱、氧化槐定碱、槐果碱)的体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用。方法：以盐酸胍作为阳性对照药物，采用细胞病变效应(CPE)抑制法、噻唑蓝(MTT)比色法、组织培养半数感染(TCID50)微量法观察苦豆总碱和6种单体生物碱的体外抗CVB3作用。结果：苦豆总碱和6种单体生物碱均有明显的抗CVB3作用，对CVB3的抑制指数均＞2，细胞保护率最高可达95％，其中感染后给药及药物与病毒先作用2h然后加入细胞层的给药方法抗病毒效应较强。结论：苦豆总碱和6种单体生物碱在体外有明显抗CVB3、抑制细胞病变的作用。从不同给药方式分析可能是直接灭活CVB3和进入细胞内干扰病毒复制的作用较强。     

苦豆子总碱及4种单体生物碱对幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究

目的 探讨苦豆子总碱、苦参碱、苦参素、槐定碱、槐果碱体外抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的作用.方法 选用5种苦豆子生物碱,纸片扩散法粗测抑菌浓度范围;依据粗测范围,液体倍比稀释法测定5种生物碱的最小抑菌浓度(MIC).结果 苦豆子总碱的MIC为32 mg/ml,在体外对Hp有一定的抑制作用.苦参碱、苦参素的MIC为64 mg/ml,槐定碱的MIC为128 mg/ml,体外抑菌活性微弱.槐果碱在体外对Hp无明显抑制作用.结论苦豆子总碱有可能成为替代抗生素的抗Hp候选药物.     

苦豆子总碱及四种生物单碱体外触杀阴道毛滴虫的实验研究

目的 :探索苦豆子总碱、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱体外触杀阴道毛滴虫的作用 ,为治疗滴虫性阴道炎寻找更为有效的中草药。方法 :将苦豆子总碱及其四种生物单碱稀释为 4 0 0、 2 0 0、 10 0、 5 0 μg/ml的不同浓度对体外培养的阴道毛滴虫进行杀虫实验 ,并与对照药(甲硝唑 )比较 ,确定疗效。结果 :苦豆子总碱、氧化苦参碱在高浓度 (4 0 0 μg/ml)时对阴道毛滴虫的生长、繁殖有一定的抑制作用 ;槐果碱、槐定碱无抑制作用 ;苦参碱 4 0 0、 2 0 0、 10 0 μg/ml对阴道毛滴虫具有明显的触杀作用 ,与甲硝唑比较两者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;与其他四种生物碱各个浓度比较均有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :苦参碱有明显的触杀阴道毛滴虫的作用 ,是一种高效具有开发价值的生物碱。     

HPLC同时测定苦豆草中7种生物碱的含量

目的:建立了用HPLC对苦豆草中苦豆碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱和莱曼碱同时定量的方法.方法:采用HPLC检测方法,色谱柱Waters X-Brige C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol·L-1的磷酸二氢钾溶液(2.0 mL·L-1三乙胺),进行梯度洗脱;检测波长为205 nm,柱温25℃,进样量10 μL,流速1.0 mL·min-1.结果:苦豆碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱和莱曼碱的浓度与峰面积,分别在20.66～103.32gμ(Γ=0.998 8),22.82～114.12 μg(Γ=0.999 7),25.10～125.52μg(Γ=0.999 1),23.88～119.40μg(Γ=0.997 5),5.00～24.99μg(Γ=0.9986),4.69～23.46μg(Γ=0.9996)和4.60～23.01μg(Γ=0.9978)范围呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.12%,97.47%,96.21%,94.64%,98.04%,96.24%和101.31%;RSD分别为7.3%,3.0%,4.5%,5.2%,5.4%,5.8%,4.3%.结论:该方法准确、简便,灵敏,为苦豆草的质量评价提供了依据.     

苦豆子抗内毒素效应的实验研究

目的:研究苦豆子中提取的苦豆子总碱及氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱对内毒素肺损伤小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法:以清开灵注射液作为本研究的阳性对照药物。分别连续3天腹腔注射给予ICR小鼠各个生物碱及清开灵,均末次给药后1 h腹腔注射LPS(E.coil,055∶B5)9 mg/kg造成小鼠内毒素性肺损伤,观察小鼠一般状况、白细胞数量、肺W/D比值、肺组织病理形态学改变,以及免疫组织化学法检测肺组织CD14和清道夫受体(SR-A)的表达,放免法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:预防性给予内毒素肺损伤小鼠苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱,均不同程度改善了模型鼠的一般状况,并可不同程度地升高外周血白细胞,降低肺脏W/D比值,减轻肺组织病理改变,降低模型鼠肺组织CD14表达,增加SR-A表达,降低血清中TNF-α和IL-6的水平。结论:苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱可不同程度地减轻内毒素肺损伤小鼠的病理损害,它们的抗内毒素机制可能与调节LPS的识别受体,并进而影响下游炎症因子表达有关。     

HPLC同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量

目的：建立同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱及氧化苦参碱含量的HPLC测定法。方法：色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈(46 mm×250 mm,5 μm),以甲醇(A)-02%磷酸水(B)为流动相,检测波长205 nm,流速1 mL·min^-1,柱温30 ℃。结果：在线性范围内3个对照品的标准曲线呈良好的线性关系(r≥0999 7)。平均回收率分别为1000%,970%,970%。结论：可通过HPLC同时测定苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材的质量控制。     

HPLC同时测定苦参药材中5种生物碱含量

目的使用高效液相色谱法测定不同产地苦参药材中槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、氧化苦参碱的含量。方法使用Agilent ZORBAX NH2(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(84∶10∶6),流速为1 mL/min,检测波长为210 nm。结果槐果碱在0.02288～0.1144μg(r＝0.9997)、苦参碱在0.0832～0.4160μg(r＝0.9997)、氧化槐果碱在0.3762～1.8360μg(r＝0.9998)、槐定碱在0.1044～0.522μg(r＝0.9992)、氧化苦参碱在0.4912～2.456μg(r＝0.9999)范围呈良好的线性关系,加样回收率分别为101.63%(RSD＝2.08%)、98.29%(RSD＝1.87%)、101.89%(RSD＝1.97%)、99.87%(RSD＝2.06%)、102.66%(RSD＝1.34%)。结论该方法简便、灵敏、准确,可用于苦参药材的质量控制。     

HPLC同时测定苦参不同年份、不同部位中3个生物碱的含量

目的:采用高效液相色谱法测定苦参不同年份、不同部位药材中槐果碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量。方法:采用EliteHypersilNH2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(82∶10∶8),流速:1mL/min,检测波长:220nm,柱温:26℃,进样量:5μL。结果:槐果碱、槐定碱、氧化苦参碱的线性范围分别为0.00499～0.1497μg(r=0.9999),0.02508～0.75225μg(r=0.9999),0.07538～2.26125μg(r=0.9999);回收率分别为99.91%,99.26%,100.27%,RSD分别为1.11%,0.82%,2.18%。结论:该方法精密度、重现性和分离效果好,苦参不同年份、不同部位中3种生物碱成分含量存在明显差异。研究结果对苦参药材质量评价及苦参全草的有效开发利用具有重要的参考价值。     

苦参总生物碱及其单体在Caco-2细胞模型的吸收特征研究

目的 建立同时测定Caco-2细胞模型中苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的HPLC方法,探讨苦参总生物碱在Caco-2细胞模型的吸收机制.方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,研究苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱由细胞绒毛膜面供给侧(AP)→基底外侧(BL)和BL→AP侧两个方向的转运过程;HPLC-UV法测定上述3个生物碱的量;计算转运参数和表观渗透系数(Papp).结果 苦参总碱给药后,苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱由AP→BL侧的Papp分别为(1.098±0.092)×10-5、(1.434±0.098)×10-5、(3.87±0.64)×10-6cm/s,由BL→AP侧的Papp分别为(1.104±0.098)×10-5、(1.034±0.079)×10-5、(2.75±0.33)×10-6 cm/s,与文献报道的单体化合物给药相比,氧化槐果碱和氧化苦参碱双向转运的Papp明显增大.苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的表观渗透率值分别为1.01、0.72、0.71.结论 苦参总生物碱中苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱仍主要以被动吸收方式进入体内,但比各单体给药吸收更好.     

桂皮醇对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE2释放的影响

 目的观察桂枝汤中分离获得的单体成分桂皮醇对发热相关的环氧酶(COX)和前列腺素E₂(PGE₂)的影响。方法建立大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同终浓度的桂皮醇(0.093,0.186,0.372,0.744,1.488 mmol·L^-1)孵育3 h,之后以30μg·L^-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1,COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于质量浓度为30μg·L^-1IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性变化无统计学差异(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醇后,随浓度增加可下调COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈浓度依赖关系;至浓度为0.744mmol·L^-1时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组相比均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异(P>0.05)。结论桂皮醇能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE₂,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。     

邻甲氧基桂皮醛对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE2释放的影响

目的：观察桂枝汤有效部位A分离的邻甲氧基桂皮醛对发热相关的环氧酶（COX）和前列腺素E₂（PGE₂）的影响。方法：建立大鼠脑微血管内皮细胞（rCMEC）培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同含量的邻甲氧基桂皮醛（12.5,25,50,100,200 μg·mL^-1）孵育3 h,之后以30 ng·mL^-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1和COX-2的活性。结果：Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90％以上的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于30 ng·mL^-1 IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE₂量显著增加,COX-1活性变化无统计学差异。加入不同含量的邻甲氧基桂皮醛后,随含量增加可下调COX-1,COX-2活性及PGE₂量,且呈剂量依赖关系；至含量为200 μg·mL^-1时,COX-2活性及释放的PGE₂与IL-1单独作用组相比均有显著性差异,COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异。结论：邻甲氧基桂皮醛能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE₂,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。     

女贞子对正常大鼠肝脏COX活性的影响及其DNA甲基化调节机制的初步研究

探讨女贞子对大鼠肝脏细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性的影响及可能的DNA甲基化机制。实验采用女贞子的水提物按2.0 g·kg~(-1)和6.0 g·kg~(-1)灌胃大鼠30 d,处死大鼠后,取肝脏测定COX活性、COX的亚基之一COX4I1蛋白浓度、测定Cox4i1,Dnmt3a,Tet1基因mRNA表达水平、TET1和DNMT3A的蛋白水平以及检测Cox4i1DNA甲基化频率。结果显示女贞子低剂量和高剂量能显著性升高COX的活性和COX4I1的浓度(P0.05);有降低TET1蛋白和DNMT3A的蛋白表达量的趋势;但未显著改变Cox4i1,Dnmt3a,Tet1基因mRNA表达。与空白对照组相比,女贞子高剂量组甲基化频率有降低的趋势但未达到显著水平。该研究表明:女贞子对大鼠肝脏的COX酶活性有促进作用,其可能通过促进COX4I1的蛋白量增加实现;女贞子对DNMT3A的蛋白表达有降低趋势,其可能是Cox4i1DNA甲基化频率有降低趋势的原因。女贞子对于DNMT3A和TET1的蛋白表达可能有同向调节作用,具体机制仍不明确。     

硒云芝多糖对巨噬细胞一氧化氮的影响

目的：研究了硒云芝多糖（Se-PSK)对巨噬细胞一氧化氮（NO）含量的影响。方法：用Grisse法测定Se-PSK在不同剂量,不同作用时间与NO的产量,并与云芝多糖（PSK）作同步比较。结果：Se-PSK在400μg/mL作用48h达到NO释放的峰值,与PSK比较效果更为明显。结论：Se-PSK能显著促进巨噬细胞释放NO,并有明显的剂量依赖关系。     

二苯乙烯苷对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响。方法:分别以正常糖(NG)、高糖(HG)、糖基化终产物(AGE)及过氧化氢(H2O2)孵育大鼠肾小球系膜细胞,CCK细胞计数法检测大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-Px)的活性、丙二醛(MDA)含量的变化。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测方法检测培养细胞上清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白浓度,Western Blot检测系膜细胞中环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:HG、AGE和H2O2能明显诱导系膜细胞增殖和氧化应激增强,而TSG可明显改善系膜细胞增殖和氧化应激状态,同时三种诱因均可使肾小球系膜细胞MCP-1、ICAM-1和COX-2蛋白分泌增加;TSG预处理后可抑制上述因素诱导的炎症因子分泌。结论:TSG可抑制糖尿病大鼠系膜细胞增殖和调控炎症因子表达,从而在防治糖尿病肾病发生发展过程中发挥重要作用。     

探针药物法评价苦参对大鼠细胞色素P450 2E1代谢活性的影响

目的以氯唑沙宗作为探针药物,研究苦参对大鼠细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)体内代谢活性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、苦参组、苯巴比妥阳性对照组。苦参组大鼠ig给予苦参颗粒(100 mg/kg)溶液,对照组ig给予等体积的生理盐水,阳性对照组ip苯巴比妥注射液50 mg/kg,各组均每日给药1次,连续5 d。第6天各组大鼠尾iv氯唑沙宗(5 mg/kg)溶液,于给药前及给药后不同时间点眼内眦静脉取血0.8 mL,HPLC法测定氯唑沙宗血药浓度。结果与对照组相比,苦参组给予苦参5 d后,氯唑沙宗的AUC和Cmax明显降低(P<0.05、0.01),CL明显升高(P<0.05);而苦参组的主要药动学参数与苯巴比妥组比较无显著差异(P>0.05)。结论苦参可明显诱导大鼠CYP 2E1的体内代谢活性,其作用强度与苯巴比妥相当。