PCR方法快速检测一些常见医学真菌

目的 为选择一种快速、敏感和特异的方法来检测临床感染的真菌。方法 选取真菌１８ＳｒＤＮＡ序列中两个片段设计引物,对１２种菌株进行ＰＣＲ扩增,均扩增出长约３１０ｂｐ产物。对一些临床常见细菌扩增均无反应。对酶母相真菌白念珠菌、新生隐球菌进行敏感性实验检测。结果 发现二者ＰＣＲ最小检出量均为菌体数达每个反应体系１０＾３。本实验过程总耗时３６ｈ以内。结论 本实验方法可快速特异性检测一些常见医学真菌。     

真菌特异性通用引物的聚合酶链反应系统的实验与临床研究

目的　为了判断临床和实验室标本中是否存在病原性真菌。方法　设计了一个以热启动聚合酶链反应 (PCR)为基础的实验方法 ,以一段真菌特异性DNA序列作为通用引物进行检测。引物序列为 :①AACTTAAAGGAATTGACGGAAG ;②GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC。结果　该法能在 3小时之内对所用的全部 2 3种共 42株重要病原性真菌及经培养证实有真菌的 2 2份临床标本成功地扩增出一条310bp的DNA片段 ,但对其它微生物和人体细胞均未扩增出类似片段。该法敏感性高 ,特异性强。结论　采用通用性强的引物系统配合特异性高的热启动PCR技术检测临床和实验室标本中是否存在病原性真菌的方法有重要的应用潜力。     

PCR法快速检定模拟体液中致病真菌的研究

研究表明,念珠菌已成为所有真菌感染菌种的第1位(78.3%)致病菌,隐球菌为第2位(7.3%),曲霉为第3位(1.3%)^[1].另据统计,侵袭性曲霉病患者从被检测出到死亡普遍少于14d^[2],因此迫切要求我们不仅要早期、快速诊断深部真菌病,还要在最短的时间里将致病菌鉴定到种,以选择敏感有效的药物进行治疗.虽然以往我们建立的检定方法^[3]可以将致病菌鉴定到种,但它是建立在临床标本真菌培养阳性的基础上,这意味着必须等待数天到数周的时间才能进行下一步的菌种检定.而据统计,临床上45%～75%的播散性念珠菌病患者及更多的侵袭性曲霉病患者血培养阴性^[4],这就限制了该方法的应用范围,使得培养阴性的含菌标本无法被用来检定菌种.因此,我们尝试应用新建立的方法在体外对血液、尿液、肺泡灌洗液和脑脊液中悬浮的致病真菌进行快速检定,以期解决上述难题,更好地服务于临床.     

某些致病真菌的聚合酶链反应检测

分子生物学技术的发展为深部真菌感染的诊断提供了新的手段.我们建立一种比其它常规方法更为快速、稳定的体系,以协助临床的早期诊断和治疗.     

差异显示逆转录PCR技术在医学真菌研究中的应用

mRNA差异显示逆转录PCR技术是一种在转录水平上研究基因差异表达的方法,该方法已成为医学真菌分子生物学研究的良好工具。运用该技术已经寻找到白念珠菌、曲霉等真菌的一些致病相关基因。并有助于了解系统性真菌病的致病机制、开发新的抗真菌药物、真菌疫苗的研制、真菌病的早期诊断和早期治疗。     

原发性病原真菌和条件性真菌所致的甲真菌病

近40年间在易感或免疫受损个体中原发性和条件性真菌感染显著增多。其发病率的增加与艾滋病的流行和医疗技术的重大发展,尤其是器官移植、肿瘤及免疫性疾病新的治疗方法相关。在真菌性疾病中,尽管某些人群更易患甲真菌病,但每一个体均可能患该病。虽然甲真菌病呈慢性经过且并不威胁生命,但可严重影响患者的身心健康。甲真菌病的患病率在许多国家似乎呈上升趋势,范围在3%～15%。尽管临床表现可提示有真菌感染,但保证诊断正确和治疗合理仍依赖实验室检查。尽管酵母和霉菌也可成为单独或混合感染的病原菌,但大多数甲真菌病是由皮肤癣菌引起的。…     

致病性真菌DNA提取方法的实验研究

聚合酶链反应(PCR)技术可用于真菌感染的早期诊断和菌株分型^[1]。为保证PCR技术及其相关技术的顺利开展,要求提取的真菌DNA完整,纯度高,不含TaqDNA聚合酶抑制剂,并且快速,简便,费用低。为探讨提取真菌DNA的最佳方法,本研究对3种提取真菌DNA的方法进行了比较,结果显示用尿素裂解法提取的真菌DNA完整性好,纯度高,操作步骤简便,缩短了工作时间,所需费用低,适用于多种真菌DNA的提取,现报道如下。     

应用聚合酶链反应检测某些机会致病真菌的初步探讨

目的 探讨快速检测某些机会致病性直菌的方法。方法 以源于医学机会致病性真菌１８ｓｒＲＮＡ保守区的一对寡核苷酸序列为引物,利用聚合酶链反应对医学上重要机会致病性真菌ＤＮＡ进行扩增。结果 ３属７种２９株重要机会致病性直菌,经扩增均出现一条１９７ｂｐ的ＤＮＡ片段,而对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、人白细胞则不扩增。以溴化乙啶染色,该ＰＣＲ方法对白念珠菌ＤＮＡ的最低检出限为１ｐｇ。３０份临床标     

1516株病原真菌菌种分析

为了解杭州地区病原真菌菌种分布,作者对我院自 1997年 12月至 2000年 1月分离出的 1516株病原菌进行了分析,现将结果报道如下。 1病例和方法：除孢子丝菌外, 1516株真菌全部来自直接镜检阳性的患者,其中男性 890例,女性 626例,男女之比为 1.42∶ 1。每份标本接种至 2支沙堡氏培养基,龟头分泌物和白带直接接种于念珠菌显色培养基。浅部标本置 26℃,深部标本置 26℃和 37℃培养。丝状菌主要依靠菌落和镜下形态,必要时辅以特殊培养基来鉴定。酵母菌则主要依靠芽管试验和同化碳源试验。 2结果：分离出 1516株真菌,共 28个菌种。浅部…     

中国致病真菌10年动态流行病学研究

１９８６年１月１日－１２月３１日和１９９６年１月１日－１２月３１日在全国２５个省,市,自治区４０多个有代表性的单位对临床或现场的致病真菌进行了动态研究,就病原菌变迁,各区动态情况和具体疾病等作了较详细分析。发现１０年间较易治疗的皮肤癣菌比例下降,而难治疗的酵母和霉菌比例升高,提示今后应对这些菌加以重视,并研制更广谱的抗真菌药物。     

病原真菌外排转运蛋白与真菌耐药的研究进展

病原真菌通过对抗机体防御系统和抗真菌药物的攻击,从而成功定植于宿主体内并最终导致机体感染,真菌外排转运蛋白在上述过程中起着重要作用,主要包括ATP结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporters,ABC)与主要易化子超家族(the major facilitator super family,MFS),分别通过与ATP水解酶或质子梯度耦合来运输并清除真菌胞内的毒性物质。与其它生物相比,真菌基因组中具有更多转运蛋白家族编码基因,这些转运蛋白不仅对真菌致病过程中所产生的代谢产物和宿主细胞分泌的抗菌成分起外排作用;同时,在病原真菌对抗临床抗真菌药物中也发挥着重要作用。本文就这两个超家族的转运蛋白在主要病原真菌耐药性中所发挥的作用进行综述。     

菌落PCR技术快速鉴别丝状真菌的实验研究

目的 探讨菌落PCR在检测病原性丝状真菌方面的应用价值。方法 初步建立用于丝状真菌的菌落PCR检测技术,用19种丝状真菌标准株进行验证,所有菌落PCR扩增产物进行测序,并选取8种菌株的菌落PCR产物和酶切结果与常规PCR进行比较,检测其准确性和可靠性。结果 19株菌中有16株（84.2%）菌落PCR成功扩增内转录间隔（ITS）区,ITS区基因序列分析鉴定菌种正确,与NCBI数据库中相同菌种的相似度为96% ~ 100%;与常规PCR进行比较的8株菌中,除构巢曲霉菌落PCR扩增结果为阴性外,其他菌种菌落PCR产物及酶切条带与常规PCR基本一致。结论 与常规PCR相比,菌落PCR检测丝状真菌操作简单,省时省力,鉴定菌种具有较高的准确性和可靠性,可以用于丝状真菌的快速鉴定。     

厦门地区儿童甲真菌病临床及病原菌分析

目的分析厦门地区儿童甲真菌病的临床特点、危险因素及病原菌分布情况。方法收集两所医院112例儿童甲真菌病的临床资料,分析其临床特点、危险因素及病原菌特点。结果 112例甲真菌病患儿,发病的主要年龄段为10~12岁,临床类型最多的是远端侧位甲下型,趾甲的患病率明显高于指甲。真菌培养阳性率为80.36%,分离出病原菌90株,其中皮肤癣菌76株,占84.44%,而红色毛癣菌为主要致病菌。结论儿童甲真菌病在临床特点及病原菌分布上有其自身的特点,要注意避免其发病的危险因素。     

多重PCR快速诊断甲真菌病

目的探讨多重PCR技术从临床标本中检测甲真菌病病原真菌的方法。方法采用蛋白酶K消化法和煮沸法处理临床标本，从中提取致病菌DNA，然后用真菌通用引物NS，皮肤癣菌特异性引物CHS1和酵母特异性引物ACT1同时进行PCR扩增检测，并与直接镜检和培养法作对比。结果共收集104例临床标本，PCR检测、直接镜检和培养的敏感度分别为93．3％、100％和64．4％，特异度分别为100％、86．4％和100％，阳性预测值分别为100％、84．9％和100％，阴性预测值分别为95．2％、100％和78．7％。PCR方法在24小时内即可完成从标本处理至结果判读的全过程。结论多重PCR检测具有较好的特异性和准确性，可初步将甲真菌病的三大类病原菌区分开，且比培养缩短了近2周的时间，为临床快速诊断和及时、合理地治疗甲真菌病提供参考。     

用内转录间隔区通用引物的聚合酶链反应快速测定念珠菌菌种

目的：应用内转录间隔区（ITS）通用引物建立一种较为快速、简便的检测和鉴定念珠菌的聚合酶链反应（PCR）方法。方法：采用两对ITS通用引物ITS1、ITS4和ITS86、ITS4对7种（8株）念珠菌菌县液进行PCR扩增。结果：两对引物3.5h内对7种念珠菌的菌县液扩增出种特异的DNA多带，而第2对引物其种特异性更强。结论：采用ITS通用引物结合快速PCR检测法，可快速、简便、特异、敏感地检测出念珠菌，并能同时鉴定到种，这将在今后念珠菌病的早期诊断和治疗上有潜在的应用价值。     

武汉地区994株致病真菌分析

为了解近３年武汉地区致病性真菌的种类，作者采用不同的真菌鉴别培养基对取自人体不同部位的病变标本进行培养鉴定。结果显示红色毛癣菌和念珠菌属上引起皮肤浅表真菌病的主要病原菌，深部真菌病中心念珠菌病为主，滥用皮质类固醇激素软膏、抗生素是诱发念珠菌病增多的一个重要原因。     

兰州地区105例头癣的发病情况及其病原菌种分析

目的:了解兰州地区头癣的发病情况及其病原菌的分布特点。方法:对临床拟诊为头癣的患者进行真菌镜检、培养及分离鉴定。设计统一的调查表,登记镜检阳性患者的相关临床资料,分析头癣的发病特点。结果:105例真菌镜检阳性的头癣患者男72例,女33例,男女之比为2.18:1;白癣92例(87.62%),脓癣13例(12.38%);年龄1~34岁,平均(6.13±2.92)岁;72例有宠物接触史,41例有头癣患者接触史;培养菌株93株(阳性率88.57%),其中犬小孢子菌90株(占培养菌株的96.77%),红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、白念珠菌各1株(各占1.08%)。结论:兰州地区头癣的临床类型以白癣为主,脓癣次之;传染方式主要为动物到人、人到人;致病菌以亲动物性的犬小孢子菌为主。     

63例成人头癣的病原菌分析

目的:了解湖北赤壁市人民医院近12年成人头癣的病原菌分布情况。方法:对2002年1月至2012年12月确诊的成人头癣患者的临床类型及病原菌进行回顾性分析。结果:63例成人头癣患者中男4例,女59例,年龄18~89岁;好发于45~74岁的女性。主要病原菌为紫色毛癣菌41株(65.08%)。结论:63例成人头癣的病原菌以亲人性的紫色毛癣菌为主要致病菌。     

4 018例浅部真菌病及其致病菌种分析

 目的 了解广州及周边地区浅部真菌病病种及其致病菌种的构成与分布情况。方法 对2013年1月至2020年12月来南方医科大学皮肤病医院就诊并且真菌培养鉴定阳性的4 018例病例进行病种及致病菌分析。结果 4 018例浅部真菌病病种前三位依次是甲真菌病2 353例（58.00%）、足癣546例（13.46%）、股癣319例（7.86%）;致病真菌前三位分别是红色毛癣菌2 197株（54.15%）,念珠菌1 161株（28.62%）,须癣毛癣菌316株（7.79%）;男性体癣、股癣、头癣和足癣的比例均高于女性(均P<0.05),而女性甲真菌病的比例高于男性（X²=189.23,P<0.05）。结论 广州及周边地区浅部真菌病及致病菌谱的分布大体符合国内的流行趋势,主要致病菌为红色毛癣菌,0～10岁年龄段是头癣和面癣的发病高峰。临床应重视以上特点,有针对性地为浅部真菌病的防治提供指导。