玻璃珠－盐析法提取常见致病真菌DNA的研究

目的 进一步提高提取ＤＮＡ的效率并减少污染和毒性,以适应临床ＰＣＲ检测的需要,建立玻璃珠－盐析法快速提取常见致病真菌ＤＮＡ。方法 分别采用玻璃珠－盐析法和经典的酶解－酚氯仿法比较从白念珠菌、乳酒念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉和马内菲青霉等８种常见致病真菌中提取ＤＮＡ,同时行ＰＣＲ以评价其可靠性。结果 本方法从８种常见致病真菌均提取浓度较高且较完整的ＤＮＡ,用于ＰＣＲ也     

真菌病

２００１０７９０重要条件致病真菌感染组织免疫组化研究／狄梅（北京大学一院皮肤科）…／／中华皮肤科杂志．－２０００，３３（５）．－３２４～３２６ 对实验小鼠白念珠菌感染组织的可疑念珠菌、隐球菌和曲霉感染的临床组织病理标本进行ＰＡＳ染色和免疫组化染色，并比较了两种方法的敏感性。结果表明，兔抗白念珠菌多抗、新生隐球菌多抗和鼠抗曲霉单抗可分别鉴定组织中的白念珠菌、新生隐球菌和曲霉。免疫组化和ＰＡＳ染色的敏感性差异无显著性。说明免疫组化方法有助于临床诊断。参９（张孝友）２００１０７９１玻璃珠－盐析法提取常…     

重要条件致病真菌感染组织免疫组化研究

目的 探索在组织中鉴定重要条件致病真真的组织病理学方法。方法 以实验小鼠白念珠菌感染组织和可疑念珠菌、隐球菌和曲霉感染的临床组织病理标本进行ＰＡＳ染色和免疫组化染色，并比较了两种方法的敏感性。结果 兔抗白念株菌多克隆抗体、兔抗新生隐球菌多克隆抗体和鼠抗曲霉单克隆抗体可以分别鉴定组织中的白念珠菌、新生隐球菌和曲霉。免疫组经和ＰＡＳ染色的敏感性差异无显著性。结论 免疫组化为组织中确定真菌和鉴定真菌种属     

脑脊液对新生隐球菌和念珠菌的抗真菌活性研究

隐球菌性脑膜炎是隐球菌病中最严重的一型 ,尽管从隐球菌性脑膜炎患者脑脊液 (ＣＳＦ)中可分离出新生隐球菌 ,但对ＣＳＦ影响病原真菌生长的因素知之甚少。作者参照血清抑制新生隐球菌生长因素的研究方法 ,探讨了ＣＳＦ对新生隐球菌和念珠菌的体外抗真菌活性。材料与方法 :新生隐球菌 8株、白念珠菌 2株、光滑念珠菌 1株、克柔念珠菌 1株、乳酒念珠菌 1株。ＣＳＦ过滤除菌后用乳酒念珠菌作生物测试以排除其中的抗真菌药物活性。用ＲＰＭＩ-1 64 0培养液将ＣＳＦ倍比稀释后加入微测量平板中 ,同时用ＲＰＭＩ-1 64 0作对照 ,然后在上述培养基…     

致病隐球菌DNA中鸟嘌呤加胞嘧啶摩尔百分比含量的研究

用热变性法测定了致病隐球菌DNA核普酸组成中的硷基比率.结果罗伦隐球菌最低,新型隐球菌最高,新型隐球菌上海变种介于罗伦隐球菌和新型隐球菌格特变种之间.其变异范围为47.82-61.98.用蜗牛酶辅以十二烷基磺酸钠(SLS)破壁,克服了隐球菌壁厚且有夹膜难以提取DNA的问题.     

免疫磁性技术分离提纯酵母样真菌的研究

用包被有羊抗鼠ＩｇＧ的磁珠结合鼠抗白念单抗后，对白念珠菌，类星形念珠菌，类星形念珠菌，热带念珠菌，新生隐球菌，光滑念珠菌菌悬液及白念珠菌与新生隐球菌两菌混悬液进行了分离纯化研究。结果：免疫磁球和白念珠菌，类星形念珠菌结合尤为明显，与热带念珠菌少量结合而不和新生隐球菌，光滑念珠菌结合。     

几种隐球菌酶扩增核糖体DNA图谱及快速基因鉴定

DNA的聚合酶链式反应(PCR)和核糖体DNA(rDNA)位点内限制酶切片段长度的多态性分析(RFLP)是遗传学分析的新方法,作者将这两种方法用于隐球菌rDNA的分析.受试菌种含新生隐球菌(19株)、浅白隐球菌(5株)、指甲隐球菌(2株)、罗伦隐球菌(4株)、黑隐球菌(1株)、白念珠菌(2株).将经土豆浸汁培养基中     

某些真菌的限制性片段长度多态性分析

传统的病原真菌的鉴定主要通过分离株的形态和生理特征进行鉴定。这些方法比较费时,常常需要数天到数周才获得分离培养结果,而且这种依据菌株表型特征获得的结果往往存在不稳定、重复性差和操作繁琐等缺点。本实验将聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术应用于病原真菌的鉴定分析,现将结果报道如下。一、材料和方法(一)菌株:实验所用菌株均为标准菌株:白念珠菌ＡＴＣＣ76615、067,白念珠菌Ｂ型Ｃ1,克柔念珠菌Ｒ5,高里念珠菌Ｄ10,热带念珠菌Ｄ9,乳酒念珠菌Ｄ12,光滑念珠菌Ｃ2,新生隐球菌Ｄ48、ＲＶ45981、ＲＶ59939、ＲＶ52642、ＲＶ45977。罗伦特隐球菌…     

野生鸽作为劳伦梯隐球菌、单咽隐球菌及汉逊德巴利酵母菌的携带者

Ｅｍｍｏｎｓ等认为鸟类是病原真菌携带者 ,曾从Ｃｏｌｕｍｂａｌｉｖｉａ野生鸽的排泄物中培养得到了新生隐球菌新生变种。许多研究表明人类被感染通常是在暴露于鸟类粪便 ,尤其是栖息于人类住所周围的野生鸽粪便之后发生。为更好地了解携带新生隐球菌新生变种的野生鸽对人类健康的潜在威胁 ,该研究主要调查了瑞典的Ｍａｌｍｏ市的野生鸽对隐球菌的携带率。令人惊奇的是 ,未发现该城市的野生鸽携带有新生隐球菌新生变种 ,但分离到劳伦梯隐球菌、汉逊德巴利酵母菌及单咽隐球菌 ,其中前两种为人类条件致病菌。方法 :作者在 1 998年 3月 1 2日…     

用改进的PCR方案测定PCR指纹条带序列后设计的特异引物对新生隐球菌新生变种作基因分型

新生隐球菌新生变种通过用 (ＧＡＣＡ) 4 引物采用ＰＣＲ指纹法可产生 4条主要条带 (42 0、4 75、5 4 0和80 0ｂｐ) ,根据它们不同的组合可以被再分为 6种基因型 (ＶＮ1～ＶＮ6 )。该研究的目的是确定能扩增这4条主要条带的特异性引物。首先须测定这 4条主要条带的核苷酸序列 ,为此作者建立了一种无需克隆载体的改进的ＰＣＲ测序方案以克服用 (ＧＡＣＡ) 4作单循环测序引物的缺陷 ;而后以获得的序列设计新引物 ,通过对新生隐球菌和其他酵母株的扩增 ,以证实新引物具有种的特异性 ,可用作新生隐球菌的分子分型。材料和方法 :①抽提 12株新生…     

PCR检测深部致病真菌感染的研究

目的探讨PCR在可疑深部真菌感染临床标本检测中的应用。方法对60份临床标本分别进行传统真菌培养以及真菌通用引物PCR和三重PCR检测。结果真菌培养阳性共19份，其中白念珠菌10份、烟曲霉2份、新生隐球菌2份、其他菌株5份（包括光滑念珠菌2份、热带念珠菌2份、克柔念珠菌1份）；真菌通用PCR检测共有21份阳性，经三重PCR检测共有15份阳性，分别为白念珠菌10份、烟曲霉3份、新生隐球菌2份。PCR方法与传统培养方法相比，检出率差异无统计学意义。结论PCR检测可疑深部真菌感染临床标本快速简便，稳定性好，敏感性和特异性均较理想，适合临床实验室常规使用。     

应用PCR-RFLP进行申克孢子丝菌的分子生物学鉴定

目的　探索一种简单、快速的申克孢子丝菌的鉴定方法。方法　应用真菌通用引物ITS1和ITS4对来源于不同地区及不同临床型别孢子丝菌病的 2 8株申克孢子丝菌以及 9种其他临床上重要的真菌进行PCR扩增 ,利用限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物进行酶切分析鉴定。结果　所有 2 8株申克孢子丝菌和其他 9种真菌均扩增出一条约 3 5 0bp的片段 ,其中 2 8株申克孢子丝菌RFLP带型一致 ,与 9种其他临床上重要的真菌RFLP带型差异较明显。 结论　PCR RFLP可以为建立一种简单、快速鉴定申克孢子丝菌的方法提供依据。     

聚合酶链反应检测深部致病真菌的实验研究

目的 建立能用于临床实践的检测常见致病真菌的聚合酶链反应(PCR)方法.方法 设计了以热启动PCR为基础的实验方法,首先用真菌通用引物对标本进行单重PCR,若阳性,再用白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的种特异性引物进行三重PCR来检测这3种常见致病真菌.结果 对9属55种78株常见深部真菌均扩增出260bp的DNA片段,而对细菌和人DNA均未扩增出目的 片段,具有高度特异性和敏感性,该方法操作简便且成本低.结论 以热启动PCR为基础的单重PCR和三重PCR方法可能成为临床上深部真菌感染理想的快速诊断工具.     

新生隐球菌格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的多重聚合酶链反应鉴定

目的 建立一种基于核糖体基因内间隔区（IGS）的多重聚合酶链反应（PCR）,用于快速鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌。方法 选取新生隐球菌和格特隐球菌IGS中变异度最高的Ⅰ区（IGS1）为靶点,经ClustalW2多重比对,并结合Oligo6软件在不同序列位点设计针对新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌的引物用于多重PCR分析。通过51株新生隐球菌（VNⅠ-VNⅣ和VNB基因型）和41株格特隐球菌（VGⅠ-VGⅣ基因型）对该方法进行验证,并将该方法与已报道的CGB显色培养和采用特异性引物GPA1A、CLA4D和SOD1gattii扩增格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的单一引物PCR方法进行比较。结果 基于IGS的多重PCR分析成功鉴定所有92株新生隐球菌和格特隐球菌,对其他常见致病酵母的扩增均阴性,显示所设计引物较高的特异性;已报道的基于GPA1A和CLA4D引物PCR分别在鉴定2株和1株格特隐球菌时出现假阳性结果;CGB培养基在鉴定1株格鲁比变种和1株新生变种时出现假阳性结果。上述方法在鉴定时均未出现假阴性结果。结论 建立的多重PCR可快速准确地鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种、AD杂合子和格特隐球菌,且优于已报道的单一引物PCR 或CGB显色培养法。     

白念珠菌、烟曲霉及新生隐球菌感染的宿主特异性免疫应答研究进展

白念珠菌、烟曲霉及新生隐球菌是3种机会致病真菌。这些真菌一旦感染人体,即与机体免疫系统相互作用,激活机体的天然免疫,继而产生特异性细胞免疫及体液免疫应答,其中特异性细胞和体液免疫应答对宿主抵御感染和防止菌体免疫逃逸发挥重要作用。概述近几年有关白念珠菌、烟曲霉及新生隐球菌感染的特异性免疫应答的研究现状,并分析3种真菌免疫的异同点,以期为开展此类研究提供有益借鉴。     

PCR检测部分病原真菌的实验研究

为探讨和评价ＰＣＲ技术在检测和鉴定病原真菌方面的作用,重点是引物的选择。首先比较了来自ｒＤＮＡ基因序列的通用引物的通用性,并用３对种特异性引物进行２次套式扩增。结果表明３对通用引物均能扩增出预期的靶ＤＮＡ带,平均大小分别为６２０ｂｐ,４８５ｂｐ和５８０ｂｐ;３对种特异性引物分别扩增出白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉ＤＮＡ,并提高了敏感性。说明用通用引物和种特异引物进行ＰＣＲ扩增可以用于病原真菌的检测和     

新生隐球菌28S rDNA的基因型特征与序列分析

目的 探讨新生隐球菌各变种、血清型与基因型的关系。方法 新生隐球菌标准株10株、新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10以及临床分离株19株,采用变性梯度胶电泳(DGGE)结合DNA序列分析,对以上菌株的28S rDNA片段进行研究。结果 经过DGGE和DNA序列分析,所有新生隐球菌新生变种(A、D型)具有一致的基因带型和序列,格特变种(B、C型)具有不同于新生变种的独特一致的带型和序列;AD型的基因型和序列与格特变种完全相同,新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10(D型)的基因型类同于新生变种;19株临床分离菌在DGGE上可分为2型,17株与A、D型完全相同,2株与B、C型相同。结论 DGGE结合DNA序列分析,对于探讨新生隐球菌各变种、血清型的基因型特征、关系具有重要价值;我国非艾滋病隐球菌病感染以新生变种为主,AD型在系统发育上更类同于格特变种,而不是新生变种;本研究不支持A血清型为新生变种以外的新变种即grubii变种的观点。     

新型隐球菌核型的脉冲电泳分析

用脉冲电泳技术分离了包括３个变种、５种血清型在内的２０株新型隐球菌染色体ＤＮＡ，发现其基因组由１０～１２条染色体组成，大小在０．４～２．１Ｍｂ之间，总长度约１５Ｍｂ。特别是注意到电泳核型与血清型之间有相关性，并观察到菌株间的带型也存在不同程度的差异，提示电泳核型分析可作为变种鉴别和种内分型的新的基因型方法。     

木姜子油试管内抗致病性真菌实验研究

本文报告了木姜子油试管内抑制某些致病性真菌的实验结果.本品对我国常见的浅部和深部真菌均有较强的抑菌作用.最低抑菌浓度,对9种常见的皮肤癣菌为0.01-0.005%;对白念珠菌、新型隐球菌、孢子丝菌及几种皮肤着色霉菌为0.1-0.033%;对烟曲霉和黄曲霉为1%.     

Kleine Gewebsformen (Mikroformen) von Cryptococcus neoformans

Zusammenfassung Beschreibung von Mikroformen des Cryptococcus neoformans (in Hautherden) und ihre Differentialdiagnose gegenüber entsprechenden Gewebsformen anderer Pilzarten.

---

Small forms (Microforms) of Cryptococcus neoformans

Summary Microforms of Cryptococcus neoformans are described (in skin lesions) and differences among corresponding tissue forms of other fungal species are pointed out.