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1.
【目的】 探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制65377;【方法】 将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡65377;【结果】 重组慢病毒载体pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%65377;野生型SHIP基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染SHIP基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P < 0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3 ± 6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7 ± 4.2)](P < 0.01)65377;细胞形态观察发现凋亡增加,Western blot检测发现转染SHIP基因组前凋亡酶pro-caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡65377;IL-3作用不同时间段(3 h, 6 h, 12 h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P < 0.05)65377;【结论】 SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化65377; 相似文献
2.
目的 通过慢病毒载体介导外源性5'肌醇磷酸酶(SH2 domain contaihing inositol 5'-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响.方法 以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR方法检测ship转录水平,Western blot方法检测转染后SHIP蛋白表达变化;比较ship基因表达前后细胞增殖、形态的变化.结果 FQ-PCR和Western blot结果显示,携带ship基因的慢病毒载体pReceiver-Lv31能高效转染K562细胞,阳性率(74.6±5.8)%;细胞生长曲线显示SHIP可显著抑制K562细胞生长,抑制率(35.0±3.1)%;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[K562/SHIP组集落形成率(36.7±7.1)%,K562/FIV组为(77.7±6.3)%,(P<0.05)];细胞形态观察发现凋亡增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡.结论 外源性ship基因表达抑制白血病细胞系K562的增殖活性,并促进其凋亡. 相似文献
3.
目的 通过小干扰RNA(siRNA)沉默K562细胞bcr/abl基因使SH2肌醇磷脂酶(SHIP)基因表达增加,探讨SHIP基因缺失对K562细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 构建bcr/abl基因的化学合成siRNA,并转染到K562细胞,分为转染特异性siRNA实验组、转染非特异性siRNA对照组、空白对照组。Western blotting法检测转染后K562细胞p210表达量,实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞中SHIP mRNA表达量;Western blotting法检测SHIP、磷酸化蛋白激酶B 308(p-Akt308)和磷酸化蛋白激酶B 473(p-Akt473)的表达量;MTT比色法检测K562细胞增殖率;流式细胞仪检测K562细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测核因子(NF)-κB活性。结果 转染特异性siRNA实验组K562细胞p210表达量、p-Akt308表达量、p-Akt473表达量较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低,SHIP mRNA表达量、SHIP表达量、细胞凋亡率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组升高(P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞p210表达量、SHIP mRNA表达量、SHIP表达量、p-Akt308表达量、p-Akt473表达量、细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第1天、第3天、第5天转染特异性siRNA实验组K562细胞增殖率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低(P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞增殖率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第3天、第5天转染特异性siRNA实验组NF-κB活性较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低(P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组NF-κB活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SHIP基因表达受bcr/abl基因的调控,SHIP表达缺失可能是K562细胞过度增殖和凋亡减少的重要因素。 相似文献
4.
【目的】探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响。【方法】将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、CyclinD1、CyclinD2、CDK4、P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。【结果】与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示:G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4 mRNA及Cyclin D1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加。【结论】PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期。 相似文献
5.
【目的】 探讨survivin基因表达对人肺纤维母细胞(humanlungfibroblast,HLF)增殖、凋亡的影响。【方法】 构建survivin基因真核表达质粒peDNA3.1/SVN;利用脂质体转染法将其转入不表达survivin mRNA的HLF细胞系。连续培养10周。筛选出稳定表达的阳性克隆(HLF/SVN)及转空质粒对照(HLF/K)。用RT-PCR、免疫组化、Western blot检测细胞中survivin、bel-2和caspase3mRNA表达:通过观察细胞生长曲线、细胞凋亡指数。探讨转染survivin基因对HLF细胞生长、凋亡的影响。【结果】转染peDNA3.1/SVN后。在4、6、8和10周HLF/SVN细胞查见survivinmRNA表达;免疫组化和Westernblot见HLF/SVN细胞survivin阳性表达;转染后caspase3mRNA受到抑制,表达减弱或消失。HLF/SVN细胞凋亡指数(0.3%、1.0%、1.5%)皆低于HLF(0.9%、4.3%、2.1%)及HLF/K(0.8%、1.4%、2.8%)。细胞生长曲线示HLF/SVN细胞生长快于HLF和HLF/K,差异有统计学意义(P〈0.05)。【结论】survivin基因能促进HLF细胞生长。可能通过抑制凋亡和促进细胞分裂而发挥作用。 相似文献
6.
目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562/G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法检测FM—Nov17对K562及K562/G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562/G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562/G01细胞增殖,半数抑制率(IC50)分别为(58.28±0.31)和(62.36±0.14)μmol/L,并减少K562及K562/G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。/M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2/M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562/G01细胞的增殖。 相似文献
7.
【目的】探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖的影响及其可能机制。【方法】利用CCK-8法检测药物对细胞生长的影响;利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况。【结果】VPA对K562细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用;同时引起细胞凋亡增加(11.47%±0.25%),与正常对照组(4.77%±0.40%)比差异有统计学意义(P〈0.05);G0/G1期细胞增多(82.30%±9.41%),S期细胞减少(12.88%±6.99%),细胞被阻滞在在G0/G1期(P〈0.05)。【结论】VPA能够阻滞K562细胞于G0/G1期,最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。 相似文献
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【【目的】 探讨survivin基因表达对人肺纤维母细胞(humanlungfibroblast,HLF)增殖、凋亡的影响。【方法】 构建survivin基因真核表达质粒peDNA3.1/SVN;利用脂质体转染法将其转入不表达survivin mRNA的HLF细胞系。连续培养10周。筛选出稳定表达的阳性克隆(HLF/SVN)及转空质粒对照(HLF/K)。用RT-PCR、免疫组化、Western blot检测细胞中survivin、bel-2和caspase3mRNA表达:通过观察细胞生长曲线、细胞凋亡指数。探讨转染survivin基因对HLF细胞生长、凋亡的影响。【结果】转染peDNA3.1/SVN后。在4、6、8和10周HLF/SVN细胞查见survivinmRNA表达;免疫组化和Westernblot见HLF/SVN细胞survivin阳性表达;转染后caspase3mRNA受到抑制,表达减弱或消失。HLF/SVN细胞凋亡指数(0.3%、1.0%、1.5%)皆低于HLF(0.9%、4.3%、2.1%)及HLF/K(0.8%、1.4%、2.8%)。细胞生长曲线示HLF/SVN细胞生长快于HLF和HLF/K,差异有统计学意义(P〈0.05)。【结论】survivin基因能促进HLF细胞生长。可能通过抑制凋亡和促进细胞分裂而发挥作用。 相似文献
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目的 研究干扰素(IFN)和小剂量阿糖胞苷(Ara-C)联合应用对K562细胞的诱导凋亡作用,并探讨其机制。方法 以IFN-α 2b和小剂量Ara-C单独和联合作用后,MTT法检测K562细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测野生型p53基因的表达,免疫细胞化学法检测野生型P53蛋白的表达。结果 IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用可以有效抑制K562细胞的增殖,联合作用后K562细胞的抑制率可达42.85%,与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比,差异均有显著性意义(均P〈0.05)。IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用72h后,可以使K562细胞凋亡率提高到39.03%,与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比,差异均有显著性意义(均P〈0.05)。两药联合作用可以促进野生型p53基因mRNA和蛋白的表达上调。结论 联合使用IFN和小剂量Ara-C可以协同诱导K562白血病细胞的凋亡,促进野生型p53基因和蛋白表达上调可能是其机制之一。 相似文献
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c—cbl对于K562细胞增殖作用的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的,研究P120参与的领带转导途径与CML细胞增殖的关系。方法:利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,从人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562细胞中扩增包括c-cbl基因上游控区及5′翻译起始区的一段共523bp cDNA序列,反向插入真核表达载体P^cDNA3.1( ),转染K562细胞系,通过MTT及集落形成实验检测转基因K562细胞增殖能力的变化,研究c-cbl反义RNA封闭c-cbl转录产物对于K562细胞增殖的影响。结果:该种反义封闭作用使K562细胞增殖及集落形成速度明显减慢。结论:p120CBL与CML细胞的增殖有关。 相似文献
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目的研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因对白血病细胞系K562细胞生长和侵袭的影响。方法通过脂质体法将TFPI-2基因转染到K562细胞,用实时定量RT—PCR和Western blot分别检测转染前后TFPI-2mRNA和其蛋白质的表达。生长曲线测定,平板克隆和(Transwell)小室穿透实验测定转染前后3组细胞生长、恶性增生能力以及体外侵袭能力的差异。结果转染成功TFPI-2基因的K562细胞(K562-T)有TFPI-2mRNA及其蛋白质的表达,与对照组K562组、K562-V组细胞相比,K562-T细胞生长速度缓慢,克隆形成率明显低于前2组(P〈0.05),有统计学意义;其穿膜细胞数(16±4.51)明显低于前两者(33.67±4.51)及(28.67±3.51),P〈0.05,有统计学意义。结论TFPI-2基因对K562细胞的生长和侵袭能力有抑制作用。 相似文献
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目的研究重组人IFNγ腺病毒(Ad/hIFNγ)在CML病人骨髓基质细胞(BMSCs)中的转染效率、IFNγ表达,并进一步观察转染Ad/hIFNγ的骨髓基质细胞体外抗白血病细胞株K562增殖和诱导K562细胞凋亡的作用。方法以Ad/hIFNγ重组腺病毒按感染复数(MOI)为50转染CML病人骨髓基质细胞,RTPCR、ELISA及Westernblot分别检测转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞(BMSCs)中IFNγmRNA和IFNγ的表达;转染Ad/hIFNγ的骨髓基质细胞与K562细胞共培养,通过绘制K562细胞生长曲线分析其对K562细胞增殖的影响;并进一步通过流式细胞学分析其对K562细胞周期的影响和诱导凋亡的作用。结果RTPCR、Westernblot及ELISA方法都分别检测到转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞(BMSCs)中IFNγmRNA和IFNγ的表达;与对照组相比,转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞的实验组具有明显的抑制K562细胞增殖的作用(P=0.000),在细胞周期G1期的K562细胞比例明显增加,而S期K562细胞比例显著下降(P<0.01),并显著诱导K562细胞的凋亡(P<0.01)。结论Ad/hIFNγ转染人骨髓基质细胞后可获得IFNγ有效的表达,并在体外能有效地发挥抗白血病细胞作用。 相似文献
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【目的】 探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响65377; 【方法】 将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K56265377;MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率65380;细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN65380;Cyclin D165380;Cyclin D265380;CDK465380;P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化65377; 【结果】 与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示:G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D165380;Cyclin D265380;CDK4 mRNA及CyclinD1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加65377; 【结论】 PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D165380;Cyclin D265380;CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期65377; 相似文献
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目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的增殖、凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2及Caspase-3/7及-9的影响.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病K562细胞系.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞仪分析转染效率、细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时观察光镜、电镜下细胞形态,DNA ladder、荧光染色等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及Bcl-2 mRNA水平变化,Western Blotting检测PTEN及Bcl-2蛋白变化,应用试剂盒检测Caspase-3/7及-9蛋白活性.结果 以感染复数为200的Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,最大生长抑制率为37.1%,早期和中晚期凋亡率均高于转染Ad-GFP组和未转染组(P<0.05),转染PTEN基因3 d后Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平分别是Ad-GFP组的0.27倍和 0.58倍,Caspase-3/7及-9蛋白活性在转染PTEN基因后3 d内呈时间依赖性升高.结论 过表达PTEN基因可能通过抑制抗凋亡分子Bcl-2表达,增强Caspase-3/7及-9活性从而抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡. 相似文献
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【目的】探讨PTEN基因在子宫内膜癌PI3K/AKT通路中的作用,评估PTEN基因在抗肿瘤治疗中的意义。【方法】利用慢病毒载体系统, 构建人PTEN基因RNA干扰慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体,分别转染PTEN野生型的HEC-1A细胞和PTEN突变型的Ishikawa细胞, 建立PTEN 基因敲减及过表达的细胞模型,Western Blot方法检测PTEN基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况, MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化,流式细胞术检测慢病毒转染前后细胞周期及细胞凋亡率的变化。【结果】1. HEC-1A细胞转染PTEN基因干扰慢病毒载体后,细胞的增殖曲线和细胞凋亡率与对照组比较无明显变化。但Ishikawa细胞转染PTEN基因过表达慢病毒载体后,增殖曲线和细胞凋亡率显示其生长呈明显抑制状态。2.当HEC-1A细胞转染了RNA干扰病毒后(HEC-1A-RNAi),Western Blot 结果显示PTEN蛋白表达下调,其EGFR, p-EGFR, mTOR, p-mTOR, AKT, p-AKT蛋白表达增强,当Ishikawa细胞转染了过表达载体病毒后(Ishikawa-PTEN),Western Blot 结果显示其PTEN蛋白表达上调,p-EGFR,p-mTOR,AKT,p-AKT蛋白表达减弱。3.HEC-1A-RNAi细胞周期中G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,Ishikawa-PTEN细胞周期中G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。【结论】PTEN 基因可以抑制细胞增殖过程, 有可能成为子宫内膜癌患者基因治疗的选择之一。 相似文献
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目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期. 相似文献
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PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期. 相似文献
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目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显(P〈0.05);AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡(P〈0.05)。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变(P〉0.05),而c-myc的表达水平明显降低(P〈0.05)。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。 相似文献