血友病乙患儿一家系基因突变分析

目的探讨凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变致血友病乙的分子机制。方法回顾分析1例确诊血友病乙并经家系基因检测患儿的临床资料。结果先证者男,2岁4个月,反复皮肤瘀斑、鼻衄。查活化部分凝血活酶时间118. 3 s,凝血酶原时间15 s,血小板287×10~9/L,FⅨ2. 3%。明确诊断血友病乙型。收集其家系临床资料,提取家系DNA,运用PCR扩增及Sanger双脱氧链终止法对其FⅨ基因8个外显子及其侧翼序列进行测序,先证者FⅨ基因突变为c. 129 delGp.Pro 44 Glnfs*60,突变位于2号外显子,家系中5例女性为该位点的杂合突变,先证者大姨的胎儿经产前诊断提示未携带该致病基因。结论 c.129delG p.Pro44Glnfs*60是该家系FⅨ基因突变类型,基因检测有助于产前诊断。     

新生儿血友病二例

例1患儿男,7天,因"发现头颅血肿6天"入院,系第1胎第1产,胎龄39周顺产,出生体重3500 g,无窒息。生后第2天无明显诱因出现头部血肿,当地医院行头颅血肿穿刺术,约抽出30 ml暗红色液体,而后包块又增大,转入我院。入院查体:T 37.3℃,P 150次/min,R 45次/min,易激惹,皮肤苍黄、干燥、弹性差,头颅右侧颞顶部皮下10 cm×10 cm×2 cm血肿,心肺腹及神经系统无异常。患     

Prader-Willi综合征的临床筛查和基因诊断

目的 探讨临床疑似Prader-Willi综合征（PWS）患儿的临床筛查、基因诊断及确诊病例临床诊断评分结果的差异。方法 选取2016年7月至2018年12月收治的临床疑似PWS患儿94例为研究对象,应用甲基化特异性多重连接依赖性探针扩增（MS-MLPA）技术进行检测,对确诊患儿采用临床诊断评分进行评估,并分析确诊患儿的围生期特征。结果 MS-MLPA技术确诊PWS患儿11例,检出率为12%;其中男7例,女4例;中位确诊年龄3岁4个月（范围：25 d至6岁8个月）。11例PWS患儿中仅5例（45%）满足临床诊断标准。PWS患儿围生期主要特征有胎动减少9例（82%）、剖宫产11例（100%）、新生儿期肌张力低下11例（100%）、喂养困难11例（100%）及哭声低下11例（100%）。结论 对临床疑似的PWS患儿应及早进行基因检测确诊,单纯依靠临床诊断评分可能导致PWS漏诊。     

多重连接依赖性探针扩增方法在脊髓性肌肉萎缩症基因诊断中的应用

目的探讨多重连接依赖性探针扩增(MLPA)方法在脊髓性肌肉萎缩症(SMA)基因诊断中的应用,指导SMA的遗传咨询。方法收集3例疑似SMA的患儿及其父母的外周血标本,提取基因组DNA,应用MLPA技术进行分析。结果3例患儿均存在运动神经元存活基因端粒侧(SMN1)的纯合缺失,拷贝数为0;患儿父母均存在SMN1基因的杂合缺失,拷贝数为1。结论 MLPA技术可以应用于SMA患儿的基因诊断,不仅快速、简便,还可辨别携带者致病基因杂合缺失情况,可筛查携带者。     

Prader-Willi综合征的临床筛查和基因诊断

目的 探讨临床疑似Prader-Willi综合征（PWS）患儿的临床筛查、基因诊断及确诊病例临床诊断评分结果的差异。方法 选取2016年7月至2018年12月收治的临床疑似PWS患儿94例为研究对象,应用甲基化特异性多重连接依赖性探针扩增（MS-MLPA）技术进行检测,对确诊患儿采用临床诊断评分进行评估,并分析确诊患儿的围生期特征。结果 MS-MLPA技术确诊PWS患儿11例,检出率为12%;其中男7例,女4例;中位确诊年龄3岁4个月（范围：25 d至6岁8个月）。11例PWS患儿中仅5例（45%）满足临床诊断标准。PWS患儿围生期主要特征有胎动减少9例（82%）、剖宫产11例（100%）、新生儿期肌张力低下11例（100%）、喂养困难11例（100%）及哭声低下11例（100%）。结论 对临床疑似的PWS患儿应及早进行基因检测确诊,单纯依靠临床诊断评分可能导致PWS漏诊。     

儿童血友病的治疗

血友病是一种由于FⅧ/FⅨ基因突变所引起的X-连锁隐性遗传性疾病,包括血友病A(由于凝血因子Ⅷ缺陷)和血友病B(由于凝血因子Ⅸ缺陷).根据血浆内凝血因子Ⅷ/Ⅸ浓度,血友病被分为重型(FⅧ/Ⅸ浓度<2%)、中型(FⅧ/Ⅸ浓度2%～5%)、轻型(FⅧ/Ⅸ浓度>5%～40%).     

儿童血友病的治疗

血友病是一种由于FⅧ／FⅨ基因突变所引起的X-连锁隐性遗传性疾病,包括血友病A（由于凝血因子Ⅷ缺陷）和血友病B（由于凝血因子Ⅸ缺陷）。根据血浆内凝血因子Ⅷ／Ⅸ浓度,血友病被分为重型（FⅧ／Ⅸ浓度〈2％）、中型（FⅧ／Ⅸ浓度2％～5％）、轻型（FⅧ／Ⅸ浓度〉5％～40％）。     

血友病B的基因突变研究

为探讨血友病B基因突变，以指导产前诊断，应用聚合酶链反应（PCR）及基因扩增转录序列（GAWTS）检测了8例血友病B患儿及7例家系女性成员的因子Ⅸ基因突变，结果是4例为单碱基替换；3例为单碱基、双碱基或三碱基的丢失；1例为碱基插入。其中6例是文献上未曾报告过的新发现突变病例。5例患儿的母亲及1例患儿的姐和妹携带有与患儿相同的突变基因。提示此研究对本病的产前基因诊断具有重要意义。     

儿童血友病的急救处理

普通门诊和急救科医务人员通常缺乏血友病诊治经验,因此,建立针对血友病的急救体系和诊疗标准十分必要.急救科医务人员需要识别未获诊断的出血性疾病患儿,对急诊就诊的血友病患儿应进行出血状况评估,尽快给予凝血因子替代治疗等止血措施,并要警惕抑制物的生成.     

血友病的诊断治疗研究进展

血友病是由于基因缺陷而使相关凝血因子含量不足或功能缺陷所致,发病率约５／１０００００－１０／１０００００。血友病分子遗传学的研究进展,高纯化和基因重组凝 因子的使用及对该类病人管理的加强,提高了血友病的基因诊断,治疗水平,降低了输血相关疾病的发生,改善了病人生活质量。     

A survey of the management of newborns with severe hemophilia in Canada

OBJECTIVE

To determine the practice patterns of Canadian hematologists and neonatologists/paediatricians who care for newborns with hemophilia, with regard to vitamin K administration, use of empirical clotting factor replacement therapy, neuroimaging and timing of hematology consultation.

METHODS:

Hematologists and neonatologists/paediatricians, identified from membership lists of Canadian professional organizations, were provided electronic and/or paper versions of the survey instrument. Questions were posed in the context of specific clinical scenarios. Differences in response proportions between groups were compared for selected questions.

RESULTS:

There were 171 respondents among 616 eligible persons who were sent the survey; 58 respondents had recent experience managing a newborn with hemophilia. There was a consensus not to provide empirical treatment to well newborns after uncomplicated deliveries, to provide empirical treatment to symptomatic newborns and to obtain neuroimaging for symptomatic newborns. Systematic differences between hematologists and neonatologists/paediatricians existed with regard to the timing of hematology consultation when the diagnosis of hemophilia had not been confirmed antenatally, the route of vitamin K administration for newborns with hemophilia and the choice of product to use for empirical treatment of a symptomatic newborn.

CONCLUSIONS:

The observed lack of consensus regarding important management decisions indicates a need for ongoing research in the care of newborns with hemophilia. Systematic differences between hematologists and neonatologists/paediatricians suggest a role for improved communication and collaboration between these two groups of practitioners.     

自行设计的多重链接探针扩增组合对多发畸形患儿的诊断价值

目的 尝试基于多重链接探针扩增（MLPA）技术设计的探针组合对多发畸形(MCA)患儿的诊断价值。方法 以临床发现≥2个的畸形表型患儿为病例,基于MLPA技术选择13种常见的MCA的关键基因和关键区域自行设计MLPA探针组合（SIGMA公司合成）,以微阵列比较基因组杂交（aCGH）作为金标准,检验该探针组合的诊断准确性,再以MLPA探针组合行MCA临床诊断效果评估,对MLPA探针组合阳性的病例结合临床资料进行分析。结果 ①MLPA探针组合涉及的13种常见MCA,包括：21-三体综合征（KCNJ6、DYRK1A、RCAN1基因）、18-三体综合征（MC2R、DTNA、TCF4基因）、13-三体综合征（EDNRB、CENPJ、ERCC5、FREM2基因）、1p36区域缺失综合征（GABRD、SKI、TP73基因）、 5q35.3区域缺失综合征（Sotos综合征,NSD1基因）、CHARGE综合征（CHD7基因）、7q11.23区域缺失综合征（Williams Beuren综合征,CLIP2、ELN、LIMK1基因）;22q11.21区域缺失、重复综合征（DiGeorge综合征,SNAP29、TBX1、ZNF74基因）、17p11区域缺失综合征（Smith-Magenis综合征,RAI1、MFAP4基因）、5p15.2区域缺失综合征（Cri du Chat综合征, CTNND2、TERT基因）、15q11-13区域缺失综合征（Prader-Willi综合征,OCA2、UBE3A、GABRB3基因）、4p16.3区域缺失综合征（Wolf Hirschhorn综合征,MSX1、WHSC1、LETM1基因）、17q21.31区域缺失综合征（MAP3K14、MAPT基因）。②35例MCA中,aCGH检测阳性11例（31.4%）,共诊断9种;MLPA探针组合检测阳性6例（17.1%）,共诊断4种;MLPA组合探针检测阳性的6例微缺失和重复与11例aCGH检测阳性一致,6例MLPA探针组合检测阳性的变异位点均位于设计的MLPA探针组合中,122例临床MCA中,MLPA探针组合检测阳性21例（17.2%）,诊断6种。③在157例MCA患儿中,应用MLPA探针组合共诊断阳性病例27例,共检出7种（53.8%）,分别为21-三体综合征8例,18-三体综合征1例,5p15区域缺失综合征3例,22q11区域重复综合征1例、缺失综合征9例,5q35区域缺失综合征1例,15q11-q13区域缺失综合征3例,7q11.23区域微缺失综合征1例。结论 自行设计合成的MLPA探针组合对非典型临床表型的MCA病例有较好的诊断价值。     

Studies on factor VIII activation potential in hemophilia A-plasma and its significance for the comprehension of hemophilia

In a factor VIII exchange test experiment higher factor VIII activities are measurable than would be expected from the single activities of the used plasmas. The same goes for the use of plasmas from carriers of hemophilia A, but not for plasmas from patients with v. W.J.S. (von-Willebrand Jürgens syndrome). In plasmas from hemophilic adults activation obviously proceeds at a slower rate than in plasmas from hemophilic children.The experimental results lead to the hypothesis that factor VIII for its activation needs a specific activator or activator system. This process can be stopped by natural inhibitors.Contrary to existing opinion, the coagulation defect of hemophilia A is not to be sought in an inability to be activated or even in absence of factor VIII, but in a previous step, in its activator. This activator is absent or defective. In patients with v.W.J.S. disease the activator or activator system is intact, but factor VIII is missing.The experiments were carried out with support from the Firm Immuno, Heidelberg.     

Menkes病临床及ATP7A基因突变和拷贝数改变分析

目的通过ATP7A基因突变及拷贝数改变（CNV）分析,了解13例临床诊断为经典型Menkes病患儿的临床表型以及ATP7A基因型特征,探讨其基因型、表型的相关性。方法收集并分析13例Menkes病患者的临床资料,采用DNA直接测序进行ATP7A基因突变检测,发现突变后用DNA限制性内切酶酶切进行验证;应用多重连接依赖的探针扩增技术（MLPA）对未发现突变的患儿行CNV分析,阳性患者用长片段PCR进行验证,并进行基因型、表型相关性分析。结果临床特点:（1）13例均为男性,有典型的毛发改变、癫发作、肌张力减低、智力运动发育迟缓和结缔组织异常,3例有阳性家族史;（2）起病年龄早,均在出生7个月内（3 d～7个月）,除1例患儿以智力运动发育落后起病外均以癫起病,伴严重发育停滞和倒退;（3）均呈进行性加重,随访5例患儿,均于14个月内死亡;（4）12/12例患儿（100%）铜蓝蛋白降低;6/8例患儿（75%）血清铜降低;4/4例患儿（100%）脑血管成像见血管走行紊乱,呈螺丝锥样改变,1例为47XXY/46XY嵌合体。基因突变确诊9例:（1）DNA直接测序检测到6种突变,包括2种缺失突变,2种错义突变及2种剪切位点突变,其中3种为国际上未报道过的新突变,均位于高度保守区,100例健康男性对照中相应位点均未发现上述突变;（2）MLPA检测发现1例患儿为第10外显子缺失突变,长片段PCR验证其断点为c.2173-346₂407-346del,共1 783 bp,导致p.F725_K802del,其母亲为表型正常的携带者。基因型-表型关系:同为c.2179G>A（p.G727R）突变患儿,47XXY/46XY嵌合体起病年龄早于核型正常者,且临床症状较重。结论 Menkes病ATP7A基因大片段缺失或重复突变检测中ML-PA方便、快捷,Menkes病的致病机制可能与ATP7A基因剂量关系密切。     

弥凝治疗儿童轻型血友病A的临床观察

目的：探讨1-去氨基-8-D-精氨酸加压素（DDAVP,商品名：弥凝)治疗对轻型血友病A患儿血浆凝血因子Ⅷ（FⅧ）、活化部分凝血活酶时间（APTT）的影响。方法：轻型血友病A患儿18例,用DDAVP静脉注射治疗（每日0.3 μg/kg）,每24 h一次,连续用5次。观察患儿临床疗效,并于DDAVP注射前及注射后测定血浆FⅧ水平及APTT。结果：DDAVP治疗后,18例患儿中16例出血症状明显减轻,关节肌肉血肿肿痛减轻或消失。首日用药后60 min 血浆FⅧ 达（27±4）%,APTT时间缩短至（66±10）s;DDAVP治疗的第3~4日FⅧ水平维持在有效止血水平（25%~30%）;与前4日比较,第5日FⅧ浓度明显下降［(21±3)%］,APTT也随之延长。结论：DDAVP可显著提高轻型血友病A患儿血浆FⅧ水平,明显缩短其APTT,临床出血症状得到较好控制,建议DDAVP疗程以3~4日为宜。     

STR遗传标记在广西地区血友病A携带者诊断中的应用

目的：建立理想的STR遗传标记体系,对广西地区血友病A携带者进行快速简便的基因诊断。方法：选取广西地区10个血友病A家系作为研究对象,运用荧光PCR联合毛细管电泳的方法,对家系成员中FⅧ基因内外具有高度遗传性的3个STR位点F8Int13、DXS1073、DXS9901进行等位基因分型,评估该体系用于家系中血友病A携带者的诊断效率,并对待检者进行携带者诊查。结果：10个血友病A家系中,11例肯定女性携带者均含有与相应先证者完全一致的3个STR等位基因（F8Int13、DXS1073、DXS9901）片段长度;在待检的8例女性中,5例检出3个STR等位基因片段与相应家系中先证者完全相同,被诊断为血友病A携带者。结论：联合应用3个STR位点F8Int13、DXS1073、DXS9901进行遗传分析能够快速检出血友病A携带者,给血友病A产前诊断提供可靠的依据。     

中国Phelan-McDermid综合征1例患儿的临床及分子遗传学分析

目的 对1例不明原因的生长过快、发育迟缓患儿进行临床特征及基因诊断分析.方法 描述患儿临床特点;实验室检查采用常规G显带分析染色体核型,进一步通过多重连接依赖探针扩增(MLPA)对微小缺失片段进行拷贝数变异(CNVs)检测,同时应用比较基因组杂交芯片技术(array CGH)检测全染色体微小改变,并采用荧光原位杂交技术(FISH)对新发现的缺失片段进行实验验证.结果 1.患儿,男,1.5岁,宽额,尖下巴,生长过快,全面的发育迟缓,语言发育障碍、孤独症样表现.2.常规G带染色体核型示46,XY,MLPA结果显示患儿22q13段的SHANK3基因的9～23外显子及ACR、RABL2B基因的杂合性缺失,比较基因组杂交芯片分析证实22q13段杂合性缺失,并排除其他染色体的微改变,FISH进一步证实22q13段的缺失.结论 根据临床表现,结合各项实验室检查结果可诊断患儿为Phelan-McDermid综合征;针对性的CNVs适宜采用MLPA技术,而array CGH更宜作为全染色体CNVs的筛查.     

PAX5缺失对于儿童无特殊重现染色体异常B系急性淋巴细胞白血病的预后意义

目的 初步了解PAX5 缺失在无特殊重现染色体异常的B 系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿中的发生情况,并进一步分析PAX5 基因缺失与ALL 预后的相关性.方法 用多重连接探针扩增(MLPA) 技术检测2008 年4 月至2013 年4 月初诊无特殊重现染色体异常的B-ALL 患儿及对照组(同期非血液系统疾病及肿瘤儿童)的PAX5 基因拷贝数情况.根据有无PAX5 基因缺失分为缺失组和非缺失组.结果 86 例患儿中18例(21%)发生了PAX5 缺失.缺失组初诊时白细胞总数明显高于非缺失组(P=0.001).Kaplan-Meier 法分析显示:缺失组无病生存(DFS)率明显低于非缺失组(0.69±0.12 vs 0.90±0.04,P=0.017),但两组患儿的总生存(OS)率差异无统计学意义(P=0.128).Cox 法分析显示,PAX5 缺失为影响DFS 的不利因素(P=0.03).结论 PAX5 缺失为无特殊重现染色体异常B-ALL 患儿DFS 的独立危险因素.     

SCN1A基因突变与相关癫(癎)综合征的研究进展

SCN1A基因编码电压门控钠离子通道a1亚单位,是引起可兴奋细胞如神经细胞动作电位的基本单位.SCN1A基因是与癫(癎)综合征相关的最重要的基因之一.SCN1A基因突变导致癫(癎)表型异质性,临床表现多样化,轻者表现为热性惊厥,重者表现为婴儿严重肌阵挛性癫(癎).通过检索SCN1A基因突变数据库,发现约900多种与癫(癎)综合征相关的基因突变.该文就SCN1A基因突变与相关癫(癎)综合征及SCN1A基因筛查的重要意义作一综述.