抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌关系的研究进展

CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活,在某些情况下可能是抑癌基因失活的惟一机制,直接导致肿瘤的发生.笔者对Syk,p15,hMLH1,APC,DCC,p16等抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌的关系进行简要综述,并提出存在的问题和展望.     

肝癌患者E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的探讨抑癌基因E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化与人原发性肝癌(简称肝癌)发生、发展的关系,及其在肝癌早期诊断中的意义。方法用巢式甲基化特异性PCR对34例肝癌患者的癌组织、距离癌灶边缘>3 cm的远癌组织及10例未发生肝癌的肝硬变患者的肝硬变组织中E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测。结果 E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化阳性率,在34例肝癌组织中为61.76%(21/34),明显高于远癌组织中的29.41%(10/34),P<0.05;在10例无肝癌的肝硬变组织中为50.00%(5/10),与肝癌组织和远癌组织比较差异均无统计学意义(P>0.05);在4例正常肝组织中均为甲基化阴性。联合检测癌组织E-cadherin基因CpG岛甲基化与血清甲胎蛋白两种分子标志物,肝癌的检出率可达82.35%。结论抑癌基因E-cadherin启动子区CpG岛甲基化可能在肝癌的发生、发展中起到重要作用,并且可能是早期事件,其在肝癌的临床诊断及治疗中的意义值得进一步深入研究。     

胰腺癌中基因的CpG岛甲基化异常

基冈CpG岛甲基化异常包括甲基化过度和甲基化不足，以甲基化过度为主。在恶性肿瘤中甲基化过度主要发生在抑癌基因，从而使抑癌基因不能表达，细胞发生转化并向恶变发展。另一方面，一些原癌基因甲基化不足或去甲基化，癌蛋白大量表达，进一步使抑癌基因甲基化过度导致的恶变加剧。     

肝细胞癌的CpG岛甲基化表型研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一.目前,已在人类多种恶性肿瘤中发现了以多个基因同时甲基化为特征的CpG岛甲基化表型(CpG island methylator phenotype,CIMP)的存在.CIMP对肝癌的发生、发展、转移、复发等过程具有重要作用.检测肝癌相关基因的甲基化状态可以为肝癌的早期诊断、肝癌分型,预测肝癌复发、转移和预后判断提供非常有价值的信息.     

人原发性肝癌中多种基因CpG岛甲基化研究进展

1概述在表观遗传学(epigenesis※)这个发展非常快的领域,DNA甲基化,组蛋白去乙酰化和RNA介导是基因沉默(silencing)的三大主要原因。在人类基因组DNA中,约3%～4%的胞嘧啶碱基以5甲基胞嘧啶形式存在,结果导致在人类正常组织细胞DNA中,5甲基胞嘧啶占所有核甘酸碱基的0.75%～1%。大约70%～80%的5甲基胞嘧啶存在于CpG序列中,CpG二核甘酸集中的区域称之为CpG岛,这部分通常是未甲基化,这些CpG岛跨过许多基因的5’末端———包括启动子,未翻译区和第一外显子。现在知道的哺乳类基因组中至少一半基因的启动子区存在CpG岛,其甲基化只发生在…     

胰腺癌中基因的CpG岛甲基化异常(文献综述)

基因CpG岛甲基化异常包括甲基化过度和甲基化不足 ,以甲基化过度为主。在恶性肿瘤中甲基化过度主要发生在抑癌基因 ,从而使抑癌基因不能表达 ,细胞发生转化并向恶变发展。另一方面 ,一些原癌基因甲基化不足或去甲基化 ,癌蛋白大量表达 ,进一步使抑癌基因甲基化过度导致的恶变加剧     

结直肠癌γ-synuclein基因启动子CpG岛的去甲基化及其临床意义

目的 探讨结直肠癌中γ-synuclein基因的表达与启动子区CpG岛甲基化修饰之间的关系,以及γ-synuclein基因去甲基化水平与结直肠癌临床病理特征的关系.方法 采用半定量RT-PCR法检测30例结直肠癌和相应癌旁组织中γ-synuclein基因的表达及去甲基化试剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-C）干预对结直肠癌细胞COLO205、LoVo和SW480的γ-synuclein基因表达的影响.采用亚硫酸氢盐修饰测序（BSP）法检测5-Aza-C处理前后CpG岛的甲基化情况.采用巢式甲基化PCR（NMSP）及实时荧光定量MSP法检测67例结直肠癌组织和30例相应癌旁组织中γ-synuclein基因的甲基化状态,并分析其与临床病理特征的关系.结果结直肠癌组织中γ-synuclein mRNA的表达水平0.66±0.34,高于相应癌旁组织的0.45±0.26,差异有统计学意义（P=0.011）.5-Aza-C处理后,COLO205、LoVo和SW480细胞γ-synuclein mRNA表达水平明显上升,同时γ-synuclein基因启动子区CpG岛的甲基化水平明显降低.80.0%（24/30）的结直肠癌组织和50.0%（15/30）的相应癌旁组织的γ-synuclein基因被去甲基化,结直肠癌组织中γ-synuclein基因去甲基化的趋势明显强于相应癌旁组织（P=0.030）.γ-synuclein基因的去甲基化水平与结直肠癌的淋巴结转移、临床病理分期及远处转移有关.结论 结直肠癌中γ-synuclein基因的上调表达与启动子区CpG岛的去甲基化状态有一定关联,γ-synuclein基因的去甲基化水平有望成为结直肠癌患者判断预后的潜在标志物.     

乳腺癌WWOX基因表达缺陷的意义及其与CpG岛甲基化的关系

目的 研究WWOX蛋白在乳腺癌组织和细胞系中的表达变化,分析其与WWOX基因启动子和第一外显子CpG岛甲基化的关系.方法 应用免疫组织化学染色检测乳腺癌组织和细胞系中WWOX蛋白表达,采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)分析乳腺癌组织和细胞系中WWOX基因CpG岛甲基化状况.结果 32.2%的乳腺癌组织和5.4%正常乳腺组织中WWOX蛋白表达缺失,差异有统计学意义(P＜0.01).乳腺癌组织WWOX表达异常与绝经后状态(P＜0.01)关系密切.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中WWOX蛋白表达缺失的比例分别为23.1%、28.6%和46.2%.55%的乳腺癌组织WWOX启动子CpG岛甲基化扩增,45%的乳腺癌组织WWOX第一外显子CpG岛甲基化扩增,癌旁组织中未出现CpG岛甲基化扩增.MDA-MB-231细胞WWOX基因CpG岛完全甲基化,而MCF-7细胞无甲基化产物扩增.结论 乳腺癌中广泛存在着WWOX基因CpG岛甲基化,是WWOX表达缺陷的重要机制,并且可能通过性激素受体信号途径在乳腺癌的发生、发展中发挥作用.     

ER基因CpG岛甲基化的表达及其临床意义

目的:研究ER基因表达及CpG岛甲基化状况与胃癌生物学行为和预后的关系.方法:分别应用免疫组化SP法和限制性内切酶PCR法分析91例胃癌ER的表达和30例胃癌ER墓因CpG岛甲基化的状况.结果:胃癌ER阳性率为38%(35/91),其中高分化腺癌10%(3/30),分别与低分化腺癌43%(13/30)、未分化腺癌53%(8/15)、粘液癌63%(5/8)及印戒细胞癌75%(6/8)比较皆具有显著性差异(P＜0.05);伴淋巴结转移组为55%(11/20),未转移组22.5%(9/40),差异有显著性(P＜0.05).正常胃粘膜ER基因CpG岛未甲基化,而胃癌呈高度甲基化40%(12/30)(P＜0.05).结论:ER在胃癌中的表达与浸润、转移有关,ER阳性胃癌生物学行为差,ER基因CpG岛甲基化可能是胃癌中ER失表达的分子机制.     

p16基因启动子甲基化与结直肠癌发生发展的关系

目的　探讨p16基因启动子甲基化在结直肠癌发生、发展过程中的作用及其临床意义。方法　采用RT PCR、免疫组化方法检测p16基因表达 ,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测p16基因启动子甲基化。结果　 5 8例结直肠癌中 ,癌旁肠粘膜、原发灶、肝转移灶中p16表达阳性率分别为97% (5 6 /5 8)、31% (18/5 8)、7% (2 /2 8) ,原发灶、肝转移灶中p16表达明显降低 (P <0 0 1)。癌旁肠粘膜组织中未发现p16基因启动子甲基化 ,而癌原发灶、肝转移灶中p16甲基化阳性率分别为 5 0 %(2 9/5 8)、75 % (2 1/2 8) ,3种组织p16基因启动子甲基化率的差别有显著性意义 (P <0 0 1)。在 2 8例出现肝转移者外周静脉血、胆汁中可检测到p16甲基化启动子序列者分别为 2 3例 (82 % )、2 0例 (71% )。结论　p16基因启动子甲基化导致p16抑癌基因失活与结直肠癌的发生、转移有密切关系。     

外周血Runx3基因CpG岛甲基化在结肠癌病情及预后评估中的价值

目的:研究外周血Runx3基因CpG岛甲基化在结肠癌病情及预后评估中的价值。方法:选择结肠癌患者(观察组)和正常人(对照组)为研究对象,检测两组外周血Runx3基因CpG岛甲基化,分析结肠癌患者不同临床病理因素外周血Runx3基因CpG岛甲基化的差异,比较外周血Runx3基因CpG岛甲基化与未甲基化患者5年生存率及总生存时间的差异。结果:观察组外周血Runx3基因CpG岛甲基化率显著高于对照组(P<0.05)。观察组结肠癌低/中分化、肿瘤最大径≥6 cm、有淋巴结转移、有远处转移、Ⅲ/Ⅳ期和非根治性手术患者Runx3基因CpG岛甲基化率显著高于高分化、肿瘤最大径<6 cm、无淋巴结转移、无远处转移、Ⅰ/Ⅱ期和根治性手术患者(P<0.05)。观察组结肠癌患者Runx3基因CpG岛甲基化患者3年生存率及总生存时间均显著低于未甲基化患者(P<0.05)。结论:结肠癌患者外周血Runx3基因CpG岛处于高甲基化状态,在结肠癌病情及预后评估中具有重要价值。     

散发性结直肠癌CpG岛甲基子表型和基因组遗传学不稳定性的关系

目的探讨散发性结直肠癌CpG岛甲基子表型和基因组不稳定性的关系。方法对采用甲基化特异性PCR的方法对71例散发性结直肠癌组织进行P14^ARF、hMLH1、P16^INK4a、MGMT和MINT1共5个基因启动子甲基化的检测,确定CpG岛甲基子表型;选择BAT25和BAT26两个位点进行微卫星不稳定检测和流式细胞术检测分析倍体类型;分析散发性结直肠癌中CpG岛甲基子表型和微卫星不稳定、染色体不稳定的关系。结果全组结直肠癌组织中CpG岛甲基子表型的阳性率为21.1%（15/71）;微卫星不稳定的阳性率为9.9%（7/71）;异倍体的阳性率为73.5%（50/68）。CpG岛甲基子表型阳性者,微卫星不稳定的阳性率高于阴性者（20.0%vs7.1%）,但差异无统计学意义（P=0.158）。hMLH1基因启动子甲基化阳性者微卫星不稳定的比例为57.1%,高于阴性者的4.7%（P=0.001）。CpG岛甲基子表型阳性者二倍体的比例高于阴性者（61.5%vs.18.2%,P=0.003）。结论CpG岛甲基子表型阳性的散发性结直肠癌具有显著的二倍体倾向,多基因同时甲基化和染色体不稳定可能是两种相互独立的基础性发病机制。     

人原发性肝癌中多种基因CpG岛甲基化研究进展

在表观遗传学(epigenesis)这个发展非常快的领域，DNA甲基化，组蛋白去乙酰化和RNA介导是基因沉默(silencing)的三大主要原因。在人类基因组DNA中，约3％～4％的胞嘧啶碱基以5-甲基胞嘧啶形式存在，结果导致在人类正常组织细胞DNA中，5-甲基胞嘧啶占所有核甘酸碱基的0．75％～1％。大约70％～80％的5-甲基胞嘧啶存在于CpG序列中，CpG二核甘酸集中的区域称之为CpG岛，这部分通常是未甲基化，     

SFRP1基因启动子甲基化在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)组织中SFRP1基因启动子DNA甲基化状态,分析其与临床特征和生化指标的相关性及对mRNA表达的影响,探究其在临床应用中的价值。方法选择2017年10月至2019年10月在烟台市烟台山医院行手术治疗的97例初发PTC患者作为研究对象,取患者的PTC组织(观察组)和癌旁组织(对照组),采用甲基化特异性PCR(methylation special PCR,MSR)检测组织中SFRP1基因启动子区甲基化状态,采用荧光定量PCR法检测SFRP1基因mRNA表达量,使用甲基转移酶抑制剂5-Azacytidine处理PTC细胞株,且进行生化指标的检测和临床特征的收集。结果PTC组织的SFRP1基因启动子区甲基化阳性率(70.1%)显著高于癌旁组织的甲基化阳性率(33.0%)(χ2=26.747,P<0.001);PTC组织的SFRP1基因mRNA表达量显著低于癌旁组织的mRNA表达量(t=2.886,P=0.007),甲基化阳性PTC组织的mRNA表达量也显著低于甲基化阴性PTC组织mRNA的表达量(t=2.065,P=0.038)。随着5-Azacytidine浓度的增加,CGTHW-3细胞SFRP1基因mRNA表达量也逐渐上升。此外,PTC组织中甲基化阳性率与TNM分期(χ2=5.487,P=0.019)和是否有淋巴结转移(χ2=4.659,P=0.031)有关,且甲基化组的血清TSH和TGAb水平均高于非甲基化组(TSH:t=2.234,P=0.023;TGAb:t=2.312,P=0.021)。结论SFRP1基因启动子区高DNA甲基化可通过下调该基因mRNA表达,参与到PTC的发生、发展中。     

SFRP2基因超甲基化与结直肠癌临床病理关系的研究

目的 通过对SFRP2基因在结直肠癌和癌旁组织中的超甲基化水平的测定,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系.探讨SFRP2基因与结直肠癌浸润、转移等的关系.方法 用实时定量聚合酶链反应技术检测分析30例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织中SFRP2基因超甲基化水平,并统计学分析其与临床病理特征的关系.结果 在癌组织和癌旁组织中均有SFRP2基因超甲基化发生;TNM分期中结直肠癌Ⅲ、Ⅳ期(7.24±1.13)组织中甲基化水平明显高于结直肠癌Ⅰ、Ⅱ期(5.92 ±0.97)组织中甲基化水平(P＜0.05);在低分化结直肠癌组织中(7.31±1.11)甲基化水平明显高于中高分化结直肠癌癌组织(6.23±1.03),差异有统计学意义(P＜0.05);与性别、年龄、肿块位置及大小差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SFRP2基因超甲基化对结直肠癌恶性程度、浸润、转移和预后判定具有重要的意义.     

散发性结直肠癌患者血RASSF2和sFRP1启动子区甲基化检测

目的检测散发性结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1启动子区甲基化情况．从而为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。方法使用甲基化特异性PCR检测59例散发性直结肠癌患者和59例健康对照血清sFRP1和RASSF2基因启动子区甲基化的情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果59例结直肠癌患者中RASSF2和sFRP1甲基化者分别为16例（27．1％）和18例（30．5％）;而59例健康对照无一例发现RASSF2或sFRP1基因甲基化,差异有统计学意义（均P〈0．01）。29例（49．2％）结直肠癌患者有至少1个基因甲基化,其甲基化率明显高于RASSF2和sFRP1单-基因甲基化率（均P〈0．05）。结直肠癌患者血清RASSF2和sFRP1基因甲基化率与结直肠癌临床病理特征均无明显关系（均P〉0．05）。结论血清RASSF2和sFRP1基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织异常升高,联合两基因的血清甲基化检测可为散发性结直肠癌的早期筛查提供参考。     

抑癌基因甲基化检测结直肠癌患者的研究

目的 应用甲基化特异的聚合酶链反应(PCR)法(MSP)法分析抑癌基因高甲基化对诊疗结直肠癌的应用价值。方法 应用MPS法检测20例结直肠癌患者血清、术中癌旁组织及癌组织中的抑癌基因hLMH1、p15、p16甲基化的发生率。结果 20例结直肠癌患者术前血清及术中癌组织的hLMH1、p15、p16甲基化发生率为61％—97％；癌旁组织略低；术后1周血清中hLMH1、p15、p16与术前比较明显下降(P＜0．01)，而正常对照组抑癌基因甲基化发生率均为0。结论 MSP法的建立，直接检测结直肠癌患者的抑癌基因的高甲基化状态，有助于临床判断和动态观察治疗效果。     

粪便隐血与TFPI-2基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值

目的:研究粪便隐血与组织因子途径抑制物-2(tissuefactor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值.方法:将我院收治的100例结直肠癌患者作为观察组,另选同期健康体检志愿者48名作为对照组,收集2组人员的粪便作为检测标本,检测2组人员粪便标本T FPI-...     

ING1启动子甲基化在散发性结直肠癌中的研究

具有完整活性的抑癌基因可有效地抑制肿瘤发生。p53是目前研究得比较透彻的抑癌基因。文献报道p53发挥抑癌作用．需要ING1（inhibitor of growth）的参与。若ING1表达缺失或受到拮抗，p53的抑制生长作用即明显受到抑制。ING1具有抑制细胞生长、促进凋亡，参与细胞衰老调控等作用。我们发现，在散发性结直肠癌中，ING1基因的异常改变少见，癌组织中ING1的表达强度比相应的正常组织明显降低。     

结直肠癌侵袭性与脾酪氨酸激酶基因Syk启动子甲基化的关系

目的　探讨脾酪氨酸激酶 (Syk)基因启动子甲基化与结直肠癌侵袭转移之间的关系。方法　采用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测Syk基因在 12 0例结直肠癌肿瘤组织、癌旁正常组织中的甲基化和表达情况。 结果　 12 0例结直肠癌患者中 ,48例未检测到SykmRNA的表达 ,而癌旁正常组织均有表达。癌旁正常组织未检测到Syk基因启动子甲基化 ,3 7例肿瘤组织发生Syk基因启动子甲基化(3 0 .8% ) ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 0 0 5 )。在淋巴结转移的 5 6例中 ,2 4例发生Syk基因启动子甲基化 ,而无淋巴结转移的 64例中 ,13例发生甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化发生率显著高于无淋巴结转移组 (P =0 .0 0 8)。发生甲基化的肿瘤组织中 ,均无SykmRNA的表达。结论　结直肠癌中 ,SYK基因启动子过甲基化导致其mRNA的失表达 ,从而引起结直肠癌的侵袭性增强 ,它可能是结直肠癌发生侵袭转移的又一种机制。