Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17在粉尘螨致敏哮喘小鼠中的变化

目的探讨Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在粉尘螨致敏哮喘小鼠中的变化及其意义。方法 20只BALB/c小鼠随机均分为哮喘组和健康对照组。哮喘组小鼠于第0、7和14天每鼠腹腔注射200μl致敏液[含粉尘螨粗浸液提取物50μg,Al(OH)32 mg]致敏。末次免疫后1周采用粉尘螨粗浸液提取物连续进行滴鼻激发,每天1次,每次50μg,激发7次,健康对照组给予等体积的PBS[含Al(OH)32 mg]处理。末次激发后24 h内处死小鼠,取血清和肺泡灌洗液,无菌取脾脏。ELISA检测血清中Ig G1、Ig E和肺泡灌洗液中IL-17的含量;流式细胞仪检测脾脏中Th17细胞百分率。结果哮喘组小鼠血清中Ig G1和Ig E水平分别为(0.10±0.01)pg/ml和(1.15±0.10)pg/ml,高于健康对照组的(0.06±0.01)pg/ml和(0.04±0.01)pg/ml(P0.05);哮喘组小鼠肺泡灌洗液IL-17水平(85.13±2.36)pg/ml高于健康对照组(48.27±4.14)pg/ml(P0.01);哮喘组小鼠脾脏Th17细胞百分率(5.19±0.68)%高于健康对照组(0.95±0.19)%(P0.01),且脾脏Th17细胞百分率与肺泡灌洗液中IL-17水平呈正相关(r=0.851,P0.01)。结论粉尘螨致敏哮喘小鼠较健康小鼠肺泡灌洗液IL-17水平和脾脏Th17细胞数量均升高。     

屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

目的 探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型,PBS组以PBS缓冲液代替,Der p2 T组分别于小鼠致敏第25~27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。最后一次雾化激发24 h后,收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平,并行肺组织切片HE染色。结果 哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为(5.57±0.64)×10~5个/ml,高于PBS组[(0.50±0.30)×10~5个/ml](P0.01)和Der p2 T组[(3.45±0.36)×10~5个/ml](P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN-γ含量分别为(267.00±21.98)、(155.80±20.53)pg/ml和(234.40±24.46)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN-γ水平(P0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量分别为(23.40±5.96)、(53.28±8.26)pg/ml和(30.00±5.50)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量显著降低(P0.01)。与哮喘组[(308.10±28.32)pg/ml]比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-13含量[(174.50±25.99)pg/ml]显著下降(P0.01);PBS组鼠BALF中IL-13含量为(95.99±31.14)pg/ml。肺组织切片显示,Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻,且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症,可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。     

尘螨1类嵌合变应原TAT-IhC-R8的致敏效果分析

目的探讨尘螨1类嵌合变应原TAT-Ih C-R8的致敏效果。方法将40只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组(PBS组)、OVA致敏组(OVA组)、R8致敏组(R8组)和TAT-Ih C-R8致敏组(TIR8组)4组,每组10只。上述3个致敏组分别用OVA、R8和TAT-Ih C-R8于第0、7、14天进行腹腔注射致敏(剂量为10μg/ml);自第21天起,分别用上述致敏液(剂量为10μg/ml)雾化吸入30 min,连续7 d。PBS组则用PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24 h后将小鼠脱臼处死,分别收集支气管肺泡灌洗液(BLAFs)和血清,并进行脾细胞培养。以ELISA法检测BALFs及脾细胞培养上清液(SCSs)中细胞因子IFN-γ和IL-13水平,以及血清中特异性抗体Ig E(s Ig E)、Ig G1和Ig G2a水平;并对BALF进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数。此外,制作小鼠肺组织病理切片,经HE染色后进行观察。结果与PBS组相比,OVA、R8组和TIR8组小鼠肺部炎症均明显,表现为肺组织炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落、血管炎等,而PBS组小鼠未见明显病理改变。TIR8组小鼠BALF中白细胞总数和EOS数均显著高于OVA组和R8组(P均0.01),其BALF及SCSs中IL-13水平亦明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但IFN-γ含量则显著低于该两组(P均0.01)。TIR8组小鼠血清s Ig E和Ig G1抗体水平明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但其Ig G2a抗体水平则显著低于该两组(P均0.01)。结论TAT-Ih C-R8可有效激发小鼠肺部炎症,且其致敏效果明显优于R8。     

屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果

目的探讨以屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)1类变应原T细胞表位融合肽(TAT-Ih CDPTCE)为疫苗,评价其对过敏性哮喘小鼠特异性免疫治疗的效果。方法 120只SPF级BALB/c小鼠随机均分为PBS组(阴性对照,A组)、Pro Der p 1变应原致敏组(B组)、Pro Der p 1变应原免疫治疗组(C组)、DPTCE蛋白免疫治疗组(D组)、TAT-DPTCE蛋白免疫治疗组(E组)和TAT-Ih C-DPTCE蛋白免疫治疗组(F组),每组20只。分别于第0、7、14天,A组小鼠腹腔注射PBS,B~F组小鼠均腹腔注射屋尘螨变应原提取液10μg。第21天起,A组小鼠雾化吸入PBS,B~F组小鼠均吸入0.5μg/ml屋尘螨变应原提取液,1次/d×30 min,连续7 d。C~F组小鼠于第25~27天雾化前30 min分别腹腔注射100μg/ml Pro Der p 1、DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-Ih CDPTCE溶液各200μl,进行特异性免疫治疗,A、B组小鼠分别注射200μl PBS。最后1次雾化后24 h,处死各组小鼠。HE染色观察小鼠肺组织病理变化。分别收集各组20只小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素13(IL-13)、IL-10和β转化生长因子(TGF-β)的水平,并计数嗜酸粒细胞数量(EOS)。分别取各组5只小鼠眼眶血,ELISA检测血清中变应原特异性Ig E、Ig G_1和IgG_(2a)的抗体水平。结果 HE染色镜检结果显示,与B组比较,F组小鼠支气管周围嗜酸粒细胞增多、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大等肺部炎症明显减轻。小鼠BALF中,F组的IFN-γ水平为(298.75±26.09)pg/ml,高于B组(158.71±20.89)pg/ml、C组(210.38±18.92)pg/ml、D组(229.44±13.00)pg/ml和E组(233.24±20.39)pg/ml(P0.01);IL-10和TGF-β水平与IFN-γ相似,F组IL-10和TGF-β水平分别为(105.32±7.24)和(119±9.33)pg/ml,均高于B组(23.29±3.18)和(41.19±4.63)pg/ml、C组(43.54±4.28)和(60.19±6.47)pg/ml、D组(51.33±6.19)和(69.34±8.27)pg/ml、E组(52.78±7.83)和(71.22±7.94)pg/ml(P0.01);而C、D、E和F组的IL-13水平分别为(47.35±4.71)、(41.90±4.28)、(41.05±6.50)和(18.53±5.67)pg/ml,均低于B组(66.68±6.63)pg/ml(P0.01),其中F组IL-13水平最低。B组小鼠BALF中的EOS数量为(5.65±0.91)×10~5/ml,高于A组(0.45±0.39)×10~5/ml(P0.01),而C、D、E和F组的嗜酸粒细胞数量均显著下降,分别为(4.00±0.59)×10~5/ml、(3.39±0.63)×10~5/ml、(3.24±0.69)×10~5/ml和(1.42±0.49)×10~5/ml(P0.01)。血清中抗体水平的ELISA检测结果显示,F组小鼠血清Ig E水平为(5.26±1.72)ng/ml,低于B组(32.81±2.98)ng/ml、C组(20.06±3.17)ng/ml、D组(17.06±3.18)ng/ml和E组(16.23±3.61)ng/ml(P0.01);F组中血清Ig G_1水平为(9.85±1.42)ng/ml,亦低于B组(43.72±3.05)ng/ml、C组(31.54±4.25)ng/ml、D组(25.20±2.91)ng/ml和E组(23.96±4.12)ng/ml(P0.01或P0.05);F组中血清Ig G_2a水平为(43.10±1.34)ng/ml,高于B组(12.61±1.87)ng/ml、C组(23.37±2.67)ng/ml、D组(25.60±2.10)ng/ml和E组(25.91±1.33)ng/ml(P0.01)。结论通过TAT-Ih C-DPTCE免疫治疗小鼠哮喘,可有效改善小鼠变态反应性气道及肺部炎症。     

烟曲霉提取物诱导小鼠哮喘模型的建立

目的:探讨小鼠哮喘模型建立的方法,为开展哮喘发生机制或药物治疗研究奠定基础。方法:40只,SPF级C57BL/6小鼠,雌雄各20只,随机分成对照组和模型组两组。模型组小鼠采用气管滴注烟曲霉提取物,隔天给药,对照组小鼠采用无菌0.9%氯化钠溶液气管滴注。给药21天后,最后一次给药24小时后收取肺泡灌洗液,离心后灌洗液上清检测炎症因子水平,灌洗细胞做Giemsa染色分类计数;取左肺做AB-PAS染色,右肺提取mRNA;腹主动脉取血ELISA检测Ig E水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠可见典型的哮喘症状,肺泡灌洗液中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞较对照组显著增多,肺泡灌洗液IL-3、IL-4、IL-5、IL-6及IL-17表达上调,与对照组相比分别为P<0.05和P<0.01。血清Ig E较对照组明显增加[(23.84±3.65)vs.(6.22±1.06)mg/L,P<0.01];AB-PAS染色黏液分泌较对照组明显加重。结论:烟曲霉提取物气管滴注可成功诱导小鼠哮喘模型。     

细胞因子IL-4、IL-9和IgE在肠道蠕虫感染者中的水平及临床意义

目的检测肠道蠕虫感染者外周血中细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-9和Ig E的水平,并分析其与临床症状和虫种之间的相关性。方法收集2010年1月至2014年7月河南省人民医院儿科收治的肠道蠕虫感染者55例,包括蛔虫感染者18例(32.7%)、钩虫感染者8例(14.5%)、鞭虫感染者7例(12.7%)和蛲虫感染者22例(40.0%)。ELISA检测该55例肠道蠕虫感染者治疗前后以及健康对照组外周血中IL-4、IL-9和Ig E水平,并分析其与临床症状和虫种之间的相关性。结果肠道蠕虫感染组药物治疗前外周血中IL-4、IL-9和Ig E水平分别为(157.42±41.0)pg/ml、(59.9±21.7)pg/ml和(316.6±129.0)IU/ml,均高于健康对照组的(39.0±23.5)pg/ml、(21.3±12.5)pg/ml和(127.7±117.6)IU/ml(P0.01);治疗后外周血中IL-4、IL-9和Ig E水平显著降低,分别为(98.1±41.7)pg/ml、(38.7±14.1)pg/ml和(253.1±94.0)IU/ml,但仍高于健康对照组(P0.05)。55例患者中,消化道出血者IL-9水平为(76.1±23.5)pg/ml,明显高于腹部不适和排便习惯改变者(54.3±22.1)pg/ml(P0.05),但低于并发过敏性皮炎者(108.5±33.4)pg/ml(P0.05),3组不同症状患者Ig E和IL-4水平差异无统计学意义(P0.05)。此外,蛲虫、蛔虫、钩虫和鞭虫感染组IL-9水平分别为(120.3±41.0)pg/ml、(90.1±29.7)pg/ml、(77.3±18.3)pg/ml和(62.5±24.3)pg/ml,蛲虫感染组高于蛔虫、钩虫和鞭虫感染组(P0.01),各虫种感染组IL-4和Ig E水平差异无统计学意义(P0.05)。蛔虫和钩虫感染者IL-9的水平差异无统计学意义(P0.05),但均高于鞭虫感染者(P0.01),3者之间IL-4和Ig E水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 IL-4、IL-9和Ig E水平与肠道蠕虫感染明显相关,IL-9水平因感染虫种和临床症状不同存在较大的差异。     

虫草多糖对哮喘模型大鼠血清白细胞介素-17和IgE水平动态变化的影响

目的研究虫草多糖对哮喘模型大鼠血清白细胞介素(IL)-17和Ig E水平动态变化的影响。方法选取SPF级雄性SD大鼠80只,随机分为两组,其中实验组60只,给予50μg卵清蛋白(OVA)+150μl氢氧化铝干粉+50μl生理盐水腹腔注射,建立支气管哮喘大鼠模型,正常对照组20只,予等量生理盐水灌胃;造模成功过后,将实验组随机分为模型组30只和虫草组30只。虫草组大鼠予150 mg/kg虫草多糖每日一次灌胃,连续14 d;模型组大鼠给予等量的生理盐水每日一次灌胃,连续14 d。实验结束后,对比实验前后各组大鼠血清IL-17和Ig E水平、支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞比例、嗜酸性粒细胞比例及总细胞数。结果 1实验组大鼠的血清IL-17含量明显高于正常对照组(P0.05);治疗后,虫草组大鼠血清IL-17含量与模型组(13.01±1.65)比较明显较低(P0.05);2实验组大鼠血清Ig E含量明显高于正常对照组(P0.05);治疗后,虫草组大鼠血清Ig E含量与模型组比较明显较低(P0.05)。3实验组大鼠肺泡灌洗液细胞总数、中性粒细胞比例以及嗜酸性粒细胞比例均明显高于正常对照组(P0.05);治疗后,虫草组大鼠肺泡灌洗液细胞总数、中性粒细胞比例以及嗜酸性粒细胞比例明显低于模型组(P0.05)。4大鼠血清IL-17与Ig E水平存在明显的正相关关系(r=0.963,P0.01)。结论虫草多糖能够明显降低哮喘模型大鼠血清IL-17和Ig E水平,减轻炎症反应。     

粉尘螨Ⅲ类重组变应原致敏的小鼠哮喘模型致敏效果分析

目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原（Der f3）诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果。方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组（阴性对照组）、卵清蛋白（OVA）组（阳性对照组）和Der f3组（实验组）,OVA组和Der f3组分别使用OVA和纯化Der f3蛋白于第0、7、14天进行腹腔注射致敏,于第21d开始雾化吸入,连续7d,PBS组则换成PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24h后,分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞计数,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF和脾细胞培养上清中IL-4、IL-2、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化;结果OVA组和Der f3组小鼠肺部支气管、血管粘膜下及周围肺组织有明显的炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落,血管壁明显水肿等,而PBS组未见明显病理改变;Der f3组的BALF中白细胞总数[(19.99±1.03)×106个/ml]及嗜酸性粒细胞（EOS）[(1.81±0.07)×106个/ml]计数均明显高于PBS组（P<0.01）;与PBS组相比：BALF中IL-4 [(80.99±9.06) pg/ml]、IL-17 [(209.69±31.86) pg/ml]呈高水平表达（P<0.01）,而IL-2 [(8.29±1.27) pg/ml]和IFN-γ [(55.04±18.85) pg/ml]含量则显著下降（P<0.01）;上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化。Der f3组血清中IgE [(31.92±2.68) U/ml]、IgG1 [(16.46±4.32) μg/ml]的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和Der f3组间所有指标差异均无统计学意义（P>0.05）;结论 粉尘螨重组Der f3蛋白可成功建立小鼠变态反应性气道及肺部炎症动物模型。     

转录激活因子3对绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液炎症因子的影响

目的 探讨转录激活因子3(ATF3)对绿脓杆菌致急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡灌洗液炎症因子的影响。方法 以荧光标记的绿脓杆菌(PA)(1.5×108CFU/ml,50μl)经鼻滴入C57BL/6野生型和ATF3敲基因小鼠气管构建急性肺损伤模型;ELISA检测WT小鼠和ATF3-KO小鼠肺泡灌洗液中前炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果 经鼻滴入绿脓杆菌6 h后小鼠肺组织病理检测表现为:中性粒细胞大量浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血以及肺间质水肿,证实成功构建了经鼻滴入绿脓杆菌(PA)诱导的急性肺损伤模型。野生型小鼠在绿脓杆菌滴入后肺泡灌洗液中IL-1β的浓度于3、6、12和24 h时分别为(198.36±20.85)pg/ml,(131.93±8.23)pg/ml,(130.10±15.65)pg/ml,(67.04±2.77)pg/ml;肺泡灌洗液中IL-6的浓度于3、6、12和24 h时分别为(1 657.59±77.13)pg/ml,(1 232.78±31.85)pg/ml,(103.33±1.75)pg/ml,(24.44±5.79)pg/ml;肺泡灌洗液中TNF-α的浓度于3 h,6 h,12 h和24 h时分别为(542.12±49.12)pg/ml,(347.89±34.38)pg/ml,(42.23±9.63)pg/ml,(19.45±3.23)pg/ml。野生型小鼠急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度均于3 h表达最高,故选择3 h时相点对敲基因小鼠进行检测,ATF3敲基因小鼠在绿脓杆菌滴入后3 h时肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度分别为(321.25±7.81)pg/ml、(2 479.69±127.4)pg/ml、(840.75±22.97)pg/ml,表达明显高于野生型小鼠急性肺损伤组及对照组,均存在显著差异(P0.05)。结论 ATF3对绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠的炎症反应有抑制作用。     

南蛇藤素对哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫干预的研究

目的观察南蛇藤素对小鼠哮喘模型胸腺基质淋巴生成素(TSLP)介导的气道炎症的影响及机制。方法 24只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分成4组。哮喘组、甲强龙组及南蛇藤素组分别予OVA致敏,然后腹腔注射等体积药物(分别为生理盐水、甲强龙及南蛇藤素),再予以雾化吸入1%OVA激发。对照组使用等剂量生理盐水。末次激发24h后,检测各组小鼠血清总Ig E及TSLP含量,支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13水平,HE染色肺组织病理学检测炎症浸润。结果南蛇藤素组小鼠哮喘表现较哮喘组明显改善;其血清总Ig E、TSLP含量及BALF中IL-4、IL-13水平均低于哮喘组(P0.05);且小鼠肺组织气道炎症明显减轻,但与甲强龙组无异(P0.05)。结论南蛇藤素组可以通过抑制哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫改善其临床症状。     

白细胞介素-33在过敏性哮喘小鼠体内的变化及作用

目的探讨白细胞介素-33(IL-33)在粉尘螨1类变应原(Der f 1)诱导的过敏性哮喘小鼠中的变化及作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠用随机数字表法分为哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和阴性对照组(PBS组),每组10只。哮喘组、免疫治疗组和抑制剂组分别在第0、7和14天腹腔注射100μl粉尘螨变应原提取液(含100μg/ml Der f 1),抑制剂组小鼠同时注射抑制剂(可溶性ST2 100μl,用于抑制IL-33),PBS组注射等量PBS。第21天起,各组小鼠雾化吸入粉尘螨变应原提取液(0.5μg/ml),30 min/次,1次/d,连续7 d。免疫治疗组小鼠第25天起于雾化前0.5 h,分别用200μl的Der f 1蛋白溶液(100μg/ml)腹腔注射进行免疫治疗,PBS组用PBS代替粉尘螨变应原。第27天雾化吸入后24 h处死小鼠,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和眼球血,并对BALF中嗜酸粒细胞进行计数,制作肺组织病理切片。ELISA法检测BALF中IL-5、IL-13和γ干扰素(IFN-γ)的含量及血清中特异性Ig E和Ig G2a水平。结果除PBS组小鼠外,其他组小鼠自第21天开始出现不同程度的哮喘症状。自第25天开始,免疫治疗组小鼠的哮喘症状开始缓解。哮喘组和PBS组小鼠BALF中嗜酸粒细胞总数分别为(4.41±0.36)×10~5/ml和(0.37±0.08)×10~5/ml,两组差异有统计学意义(t=24.50,P0.01);免疫治疗组和抑制剂组小鼠的嗜酸粒细胞总数分别为(1.43±0.14)×10~5/ml和(2.73±0.33)×10~5/ml,均明显低于哮喘组(F=129.72,P0.01)。ELISA检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组BALF中IFN-γ的水平分别为(83.06±11.38)、(277.97±22.46)、(175.13±13.41)和(224.77±19.97)pg/ml,免疫治疗组和抑制剂组均明显高于哮喘组(t=17.31,t=11.71,P0.01)。哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组小鼠BALF中IL-5水平分别为(208.64±11.55)、(106.87±11.39)、(140.71±14.58)和(90.15±9.49)pg/ml,哮喘组的水平明显高于其他各组(F=97.19,P0.01)。哮喘组和免疫治疗组BALF中IL-13水平分别为(308.37±13.67)pg/ml和(175.66±11.79)pg/ml,两者差异有统计学意义(P0.01);抑制剂组小鼠的为(221.12±21.08)pg/ml,明显低于哮喘组(t=16.44,P0.01);PBS组为(97.57±18.38)pg/ml。免疫治疗组与哮喘组相比,小鼠肺部炎性症状均减轻,几乎无炎症细胞。抑制剂组小鼠的支气管周围也有嗜酸粒细胞增多症、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大,但较哮喘组要减轻许多。血清Ig E抗体水平的检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组分别为(31.97±3.48)、(12.86±2.22)、(18.43±2.30)和(9.68±1.27)IU/ml,免疫治疗组和抑制剂组均低于哮喘组(t=-7.77,P0.01)。Ig G2a抗体水平的变化和Ig E相反,哮喘组、免疫治疗组和PBS组分别为(26.94±2.96)、(35.06±2.57)和(10.31±1.48)μg/ml,免疫治疗组高于哮喘组(t=6.55,P0.01)。结论 ELISA检测结果表明IL-33/ST2信号通路在小鼠过敏性哮喘中发挥着重要的作用。     

白介素17抗体减轻吸烟所致慢性阻塞性肺疾病模型小鼠的气道炎症

目的 研究白介素17(interhukin-17,IL-17)抗体在吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型小鼠气道炎症中的作用.方法 C67/BL6雄性小鼠随机分为COPD组(8只)、COPD+IL-17抗体干预组(简称COPD+干预组,8只)和正常对照组(10只).对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数、染色和分类;用酶联免疫吸附试验检测小鼠肺组织匀浆IL-17水平,观察各组小鼠气道病理改变.结果 COPD组与COPD+干预组相比肺功能差异无统计学意义.COPD组、COPD+干预组小鼠与正常对照组相比BALF细胞总数显著增高[分别为(19.64±1.89)×104/ml,(15.47±2.99)×104/ml和(5.13±1.00)×104/ml,P＜0.01];COPD+干预组较COPD组细胞总数下降(P＜0.01);中性粒细胞比例[分别为(8.58+6.77)%,(22.98±8.46)%]及绝对值[(1.28±0.96)×104/ml,(4.53±1.73)×104/ml]显著下降(P值均＜0.01).肺组织HE染色病理评分COPD+干预组(73.25±18.58)较cOPD组(106.13±36.27)炎症有所减轻(P＜0.05).COPD+干预组小鼠肺组织匀浆中IL-17含量(0.084±0.041)pg/mg pro与COPD组(0.221±0.081)pg/mg pro相比显著降低(P＜0.01).结论 吸烟所致COPD小鼠模型中IL-17参与了中性粒细胞引起的气道炎症,抑制IL-17的表达,可以减少气道内中性粒细胞的数量,减轻气道炎症.     

支气管肺泡灌洗对重症肺炎合并呼吸衰竭患者正五聚体蛋白－3水平的影响

目的探讨纤维支气管镜引导下支气管肺泡灌洗对重症肺炎伴呼吸衰竭患者血气指标及正五聚体蛋白-3(PTX3)水平的影响。方法回顾性分析泰州市人民医院重症医学科2016年2月至2018年1月收治的重症肺炎伴呼吸衰竭患者60例,根据是否纤维支气管镜引导下行支气管肺泡灌洗分为对照组31例和研究组(支气管肺泡灌洗)29例。2组患者均给予辅助通气、抗感染、化痰、维持内环境稳定等对症治疗,研究组患者在上述治疗基础上给予经鼻腔或经气管插管纤维支气管镜引导下支气管肺泡灌洗治疗,比较2组患者支气管肺泡灌洗前和灌洗后24 h氧合指数(OI)、动脉血二氧化碳分压(PaCO_2)和动脉血氧饱和度(SaO_2),支气管肺泡灌洗前和灌洗后第1天(D1)、第3天(D3)、第7天(D7)C-反应蛋白(CRP)和PTX3水平及入住重症监护室(ICU)时间。采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析。结果相比治疗前研究组灌洗24 h后和对照组OI[(280.2±22.3)vs(180.5±12.9)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);(228.4±18.5)vs(183.4±13.8)mmHg]、PaCO_2[(39.3±5.5)vs(47.7±7.3)mmHg;(43.5±6.2)vs(47.2±7.9)mmHg]和SaO_2[(94.2±2.9)%vs(85.8±5.0)%;(90.4±4.3)%vs(86.9±4.5)%]均改善,研究组灌洗24 h后相比对照组OI和SaO_2水平高,PaCO_2水平低,差异均有统计学意义(P0.05)。相比支气管肺泡灌洗前,2组患者D1时CRP水平上升,而D3和D7时CRP明显下降,D1、D3和D7时PTX3水平均下降,差异均有统计学意义(P0.05)。研究组相比对照组D1、D3和D7时CRP[(108.4±21.5)vs(117.5±30.4)mg/L;(66.9±13.5)vs(74.5±16.3)mg/L;(25.1±9.2)vs(34.6±7.3)mg/L]与PTX3[(18.3±4.0)vs(20.8±3.6)ng/ml;(12.5±3.1)vs(15.9±3.5)ng/ml;(5.2±2.3)vs(9.0±2.9)ng/ml]水平明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。相比对照组患者,研究组住ICU时间明显缩短[(8.3±3.7)vs(13.5±5.4)d],差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗治疗重症肺炎合并呼吸衰竭患者可改善呼吸功能,降低PTX3水平,缩短ICU住院时间。     

日本血吸虫感染对过敏性哮喘影响的实验研究

目的 建立日本血吸虫感染并发过敏性哮喘实验动物模型及探讨日本血吸虫感染对过敏性哮喘的作用. 方法 取25只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为日本血吸虫感染并发过敏性哮喘组,B组为单纯过敏性哮喘组,C组为健康对照组.A组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(23±3)条.8周后,以卵白蛋白(OVA)分别对A组、B组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型.12周后,取小鼠脾脏制成单细胞悬液并培养72 h,收集脾细胞上清液,检测细胞因子IL-4和IFN-γ水平;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),观察嗜酸性粒细胞(EOS)所占的百分比;取小鼠肺组织作病理切片,观察小鼠肺组织的炎症变化. 结果 与B组比较,A组小鼠BALF涂片中EOS数减少(P＜0.05),A、B两组EOS百分比分别为(7.30±5.01)%和(43.60±2.53)%,而C组小鼠BALF中仅见少数气管上皮细胞,无炎细胞;ELISA法检测A、B、C组小鼠脾细胞培养上清IL-4水平分别为(96.02±38.54) pg/ml、(414.86±175.12) pg/ml和(13.55±1.66) pg/ml,IFN-γ水平分别为(11.60±4.18) pg/ml、(7.43±3.60)pg/ml和(7.55±1.57) pg/ml.与B组比较,A组小鼠IL-4水平降低(P＜0.05),IFN-γ水平无显著性变化(P＞0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P＜0.05).肺部病理改变A组小鼠较轻,B组较重,C组无炎症反应. 结论 日本血吸虫感染对过敏性哮喘的发生有抑制作用.     

HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清IL-32和IL-10水平变化及意义

目的探讨HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清IL-32和IL-10水平的变化规律及临床意义。方法选取2012年9月-2014年3月在苏州大学附属第一医院住院治疗的38例HBV-ACLF患者、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者及20例健康对照者,采用ELISA法动态监测血清IL-32和IL-10水平变化,同时比较HBV-ACLF早中晚期、感染组与非感染组、存活组与死亡组IL-32、IL-10水平。计量资料2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步2组间比较采用SNK-q检验。结果 HBV-ACLF组IL-32水平[(500.98±152.33)pg/ml]显著高于CHB组[(281.72±99.28)pg/ml]及健康对照组[(178.16±50.54)pg/ml](P值均<0.05);HBV-ACLF组IL-10水平[(4.82±1.03)pg/ml]显著高于CHB组[(3.15±0.98)pg/ml]及健康对照组[(1.62±0.43)pg/ml](P值均<0.05)。动态监测HBV-ACLF组IL-32水平显示,HBV-ACLF早期高于中期[(540.69±155.71)pg/ml vs(498.43±135.56)pg/ml,P<0.05],中期高于晚期[(498.43±135.56)pg/ml vs(450.77±102.33)pg/ml,P<0.05];比较IL-10水平,HBV-ACLF早期低于中期[(1.94±0.44)pg/ml vs(2.83±0.97)pg/ml,P<0.05],中期低于晚期[(2.83±0.97)pg/ml vs(3.69±1.23)pg/ml,P<0.05]。HBV-ACLF感染组IL-32水平高于非感染组[(553.41±158.65)pg/ml vs(482.54±110.16)pg/ml,P=0.021];HBV-ACLF存活组IL-32水平低于死亡组[(481.95±100.67)pg/ml vs(540.62±112.45)pg/ml,P=0.011],存活组IL-10高于死亡组[(4.21±1.27)pg/ml vs(3.61±1.05)pg/ml,P=0.038]。结论细胞因子网络在HBV-ACLF发病机制中发挥重要作用,血清IL-32及IL-10参与疾病的进展过程,动态监测其水平有助于判断预后。     

慢性心力衰竭患者血浆BNP、IL-27水平及其临床意义

目的探讨血浆脑钠肽(BNP)、白介素-27(IL-27)的水平变化在慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)发生发展中的临床意义。方法选取50例CHF患者作为观察组,50例健康人作对照组。采用酶联免疫吸附法检测血浆中BNP、IL-27水平变化,观察不同程度CHF患者左心室射血分数(LVEF)与血浆BNP、IL-27的关系。结果观察组血浆BNP的表达水平[(512.42±324.43)pg/ml]明显高于对照组[(30.50±20.30)pg/ml](P0.05),血浆IL-27表达水平[(0.58±0.21)pg/ml]低于对照组[(0.89±0.43)pg/ml],且BNP与IL-27的表达水平呈负相关(r=-0.54,P0.05)。血浆BNP水平从心功能Ⅱ级[(756.45±184.82)pg/ml]、心功能Ⅲ级[(1090.78±220.32)pg/ml]、心功能Ⅳ级[(2130.26±265.89)pg/ml]依次上升,差异有统计学意义(P0.05);IL-27表达水平从心功能Ⅱ级[(0.51±0.18)pg/ml]、心功能Ⅲ级[(0.32±0.15)pg/ml]、心功能Ⅳ级[(0.18±0.10)pg/ml]依次降低,差异有统计学意义(P0.05);LVEF与血浆BNP、IL-27相关性分别为(r=-0.51,r=0.61,P0.05)。结论血浆BNP、IL-27水平变化均可反映CHF程度,而BNP表达的更为敏感,且两者之间有一定影响。     

两种尘螨1类变应原嵌合基因的原核表达及生物活性鉴定

目的原核表达尘螨1类变应原(粉尘螨1类变应原Derf1和户尘螨1类变应原Derp1基因)的嵌合基因R8,并检测其生物活性。方法以含嵌合基因R8的pUCm-T重组质粒为模板,用Derf1的特异性引物进行PCR扩增,产物经酶切后与载体pET28a(+)连接,连接产物转入大肠埃希菌(E.coli)BL21感受态细胞,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测;纯化后的蛋白用ELISA检测其与粉尘螨过敏患者血清(IgE)的结合能力,同时以重组rDer f 1和rDer p 1蛋白作为对照。为检验嵌合蛋白R8的免疫原性,将75只BALB/c小鼠随机均分为5组,分别为PBS组(阴性对照组)、rDer f 1组、rDer p 1组、R8组和哮喘组(阳性对照组)。除PBS组外,其余各组分别于第0、7和14天每鼠腹腔注射(0.1μg/μl)粉尘螨注射液100μl,第21~27天每鼠每天雾化吸入0.5μg/ml粉尘螨注射液悬浊液,30 min/d。rDer f 1组、rDer p 1组和R8组于第25~27天雾化前30 min,分别腹腔注射100μg/ml的rDer f 1、rDer p 1和R8蛋白各200μl进行特异性免疫治疗,PBS组用等量PBS进行腹腔注射和雾化吸入。所有小鼠于第27天雾化吸入后24 h气管切开,用1 ml PBS进行肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液(BALF),检测γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平。结果 SDS-PAGE结果显示,R8表达产物的蛋白相对分子质量(Mr)约为35 000。ELISA检测结果显示,嵌合蛋白R8与粉尘螨过敏患者血清IgE的结合力为(37.03±12.46)μg/ml,显著低于rDerf 1[(80.44±15.50)μg/ml]和rDer p 1[(90.79±10.38)μg/ml](P<0.01)。动物实验结果显示,R8组IFN-γ水平[(343.43±38.79)pg/ml]与rDerf1组[(322.98±30.36)pg/ml]和rDer p 1组[(314.97±33.89)pg/ml]的相比,差异均无统计学意义(P>0.05);与PBS组[(393.93±50.68)pg/ml]和哮喘组[(208.44±46.11)pg/ml]相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。R8组IL-4水平显著低于其他各组水平(P<0.05或0.01)。结论表达了具有低变应原性和高免疫原性的尘螨1类变应原嵌合基因R8。     

重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗哮喘小鼠效果研究

目的探讨热带无爪螨重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗哮喘小鼠的效果。方法将30只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和免疫治疗组3组,每组10只。哮喘组和免疫治疗组小鼠分别于第0、7、 14天腹腔注射200μl热带无爪螨变应原粗提液[含蛋白10μg, Al (OH)32 mg],第21天开始,在每天同一时间用热带无爪螨变应原粗提液(蛋白浓度为0.5μg/ml)雾化激发小鼠,连续雾化7 d,每次30 min。免疫治疗组在第25～27天雾化激发前30 min,腹腔注射重组蛋白Blo t 21 T 200μl (含蛋白10μg)。对照组用PBS替代。最后一次雾化24 h后,水合氯醛麻醉小鼠,眼球采血并收集肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。刘氏染色法计数BALF中嗜酸粒细胞, ELISA检测BALF中细胞因子白细胞介素4 (IL-4)、 IL-13、 IL-17和γ干扰素(IFN-γ)水平,以及血清中的Ig E和IgG_(2a)抗体水平。制作肺组织病理切片, HE染色观察。多组数据的统计分析采用单因素F检验,两组数据的统计分析采用SNK检验。结果免疫治疗组小鼠BALF中嗜酸粒细胞数量为(1.23±0.35)×105/ml,低于哮喘组的(5.32±1.22)×105/ml (P 0.05); 3组小鼠BALF中嗜酸粒细胞数量差异有统计学意义(P 0.05)。ELISA检测结果显示,免疫治疗组小鼠BALF中IL-4、 IL-13和IL-17水平分别为(70.96±17.62)、(159.20±21.08)和(220.80±25.95) pg/ml,低于哮喘组的(111.96±13.62)、(321.40±31.88)和(425.40±34.83) pg/ml (P 0.05),高于对照组的(12.57±3.62)、(109.62±15.38)和(114.38±18.43) pg/ml (P 0.05);免疫治疗组IFN-γ水平为(316.80±29.12) pg/ml,高于哮喘组和对照组的(72.84±10.10)、(125.60±22.38) pg/ml (P 0.05)。免疫治疗组小鼠血清中IgG_(2a)、 IgE抗体水平分别为(49.73±10.95)、(316.80±29.12)μg/ml,高于哮喘组的(27.30±4.83)、(57.40±15.96)μg/ml (P 0.05)。肺组织HE染色观察显示,哮喘组可见较明显的气管壁增厚,血管黏膜和肺组织周围有较多的炎症细胞浸润;免疫治疗组与哮喘组相比,上述症状减轻,支气管壁增厚减少,炎症细胞和分泌物均较少。结论热带无爪螨重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗可以减轻哮喘小鼠症状。     

关于经皮冠脉介入术后并发急性肺损伤的原因

目的:探讨经皮冠脉介入术(PCI)后并发急性肺损伤的原因,寻找防治方法。方法:175例PCI术后患者,根据血气分析、胸部影像学检查被分为急性肺损伤组(ALI组,62例)和非急性肺损伤组(非ALI组,113例);以高效液相色谱法测定围术期血浆肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)浓度,另测定血浆白介素(IL)-6水平、原降钙素(PCT)浓度;进行胸部CT影像学检查,以荧光免疫法测定血浆脑型利钠肽(BNP)水平评估心功能。结果:与非ALI组相比,术后1dALI组血浆NE[(2.51±0.31)nmol/L比(6.91±0.39)nmol/L]、E[(1.23±0.11)nmol/L比(6.03±0.37)nmol/L]水平明显升高(P均<0.01),血浆IL-6[(119.81±17.23)pg/ml比(252.28±34.23)pg/ml]、PCT[(0.88±0.01)pg/ml比(4.99±0.87)pg/ml]、血浆BNP[(927.82±89.72)pg/ml比(3936.55±131.78)pg/ml]水平明显升高(P均<0.01),胸部CT显示肺组织炎症病变严重。结论:经皮冠脉介入并发急性肺损伤与机体交感活性亢进、术后炎症、心功能状态等因素有关。     

BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴致敏模型的建立和相关免疫细胞变化的研究

目的构建BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴致敏模型,探讨小鼠相关免疫细胞的变化。方法 18只BALB/c小鼠随机均分为3组,每组6只,分别为致敏组、未致敏组和对照组。将培养的羊源细粒棘球蚴微囊腹腔注射接种感染致敏组和未致敏组小鼠(50个/鼠),建立细粒棘球蚴感染模型,对照组注射等量生理盐水。感染后6个月,致敏组经腹腔注射细粒棘球蚴粗制囊液致敏,未致敏组和对照组注射等量生理盐水。致敏后,采用症状评分表,每隔5 min对小鼠进行症状评分和肛温测定。致敏后1 h,取各组小鼠内眦静脉血和脾脏,制备脾单细胞悬液。流式细胞术检测小鼠体内树突状细胞(DC)、调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞17 (Th17)、白细胞介素-10 (IL-10)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、 IL-17A的变化。采用Graphad Prism 7.0软件进行作图和统计学分析。结果流式细胞术检测结果显示,小鼠DC细胞比例在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(3.2±0.5)%、(0.2±0.1)%、(1.5±0.2)%,致敏组DC细胞比例低于对照组(P 0.01),高于未致敏组(P 0.01)。小鼠Treg细胞比例在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(5.7±2.1)%、(15.9±3.4)%、(7.4±2.6)%,致敏组低于未致敏组(P 0.05)。小鼠Th17细胞比例在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(4.5±0.6)%、(2.8±0.1)%、(8.6±1.6)%,致敏组高于对照组和未致敏组(P 0.01)。小鼠IL-10含量在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(116.88±15.60)、(1 261.2±208.3)、(386.7±126.5) pg/ml,致敏组高于对照组而低于未致敏组(P 0.05)。小鼠TGF-β1含量在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(36.0±10.2)、(225.9±64.3)、(91.7±15.7) pg/ml,致敏组高于对照组而低于未致敏组(P 0.05)。小鼠IL-17A含量在对照组、未致敏组、致敏组中分别为(57.3±14.1)、(15.1±1.6)、(168.6±50.6) pg/ml,致敏组高于对照组和未致敏组(P 0.01)。结论 BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴致敏后,Treg细胞数量增多,促进IL-10和TGF-β1的分泌;而DC、 Th17细胞数量减少,抑制了IL-17A的产生,从而导致过敏反应。