干扰素α对胃癌多药耐药细胞耐药性的影响

目的:研究干扰素α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞耐药性的影响。方法:用不同浓度的干扰素α(IFN-")(0、103、104、105U/mL)以不同时间(0、12、24、48、96h)长度作用于SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞,收集作用后的细胞,用RT-PCR方法检测多药耐药1(MDR1)基因mRNA随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况,用流式细胞仪检测MDR1蛋白表达随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况。用MTT方法检测经IFN-α(105U/mL)作用SGC7901/VCR细胞48h后,与不经过IFN-α作用的SGC7901/VCR细胞相比耐药谱的变化。结果:随作用时间增加和IFN-α浓度增大,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少,在α=0.05水平均有统计学意义;在IFN-α浓度为105U/mL,作用时间为48h,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少最明显。SGC7901/VCR细胞被IFN-α作用后,其对各化疗药物耐药性的变化为,对长春新碱和羟喜树碱的逆转倍数最大,IC50分别减少了22倍和12倍,最明显;其次为对5-氟尿嘧啶的耐药的变化;对丝裂霉素和卡铂的耐药性的逆转倍数不是很大。结论:IFN-α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞的耐药性有部分逆转的作用,但对不同抗癌机制的化疗药物逆转效果不同。其机制可能为抑制MDR1基因RNA的合成,进而影响MDR1蛋白的合成,最终减少MDR1蛋白对化疗药物的泵出效应。     

胃癌形成中细胞凋亡与Fas蛋白、P糖蛋白的表达及相关性研究

目的：探讨癌前病变发展至胃癌过程中细胞凋亡、Fas蛋白、P糖蛋白（P－gp）表达的变化规律及相互关系。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口原位末端标记法（TUNEL）与免疫组织化学S－P法，分别检测胃良恶性病变细胞凋亡指数（AI）及Fas蛋白和P糖蛋白的表达。结果：AI、Fas蛋白、P－gp的表达在30例慢性浅表性胃炎组、36例癌前病变组（11例慢性萎缩性胃炎、12例重度肠上皮化生、13例中重度不典型增生）中的比较差异无显著性（P＞0．05）；而在36例癌前病变组与32例胃癌组中的比较差异有显著性（P＜0．05或P＜0．01），AI、Fas蛋白表达依次减少，P-gp表达增加；FI与Fas表达呈正相关、与P－gp呈负相关（P＜0．01）；Fas蛋白与P－gp的表达呈负相关（P＜0．01）。结论：癌前病变转化成胃癌的过程与细胞凋亡和Fas蛋白、P-gp的表达变化有关，Fas蛋白具有促凋亡作用，P－gp具有抗凋亡、耐药的双重作用。     

肿瘤及白血病细胞肺耐药相关蛋白基因的表达

肺耐药相关蛋白是最新发现的又一种与多药耐药腾的蛋白质，它量种非糖蛋白，与Ｐ糖蛋白及多药耐药相关蛋白的作用机制不同，它在某些肿瘤及急性髓系白血病中过度表达与临床化疗敏感性及预后有关。     

胃癌组织中P-糖蛋白和p53表达的临床意义

胃癌是我国常见的消化系统肿瘤,晚期常需化疗,但胃癌细胞对化疗药物会产生耐药性,如能克服耐药性,就能成功地进行肿瘤化疗,因此,我们探讨耐药机制有着重要的临床价值.     

肿瘤及白血病细胞肺耐药相关蛋白基因的表达

肺耐药相关蛋白是最新发现的又一种与多药耐药有关的蛋白质,它是一种非糖蛋白,与P糖蛋白及多药耐药相关蛋白的作用机制不同。它在某些肿瘤及急性髓系白 血病中过度表达与临床化疗敏感性及预后有关。     

细胞酸化对K562／A02耐药细胞株中P-糖蛋白的影响

本研究探讨细胞酸化对K562／A02细胞中P-糖蛋白（P—glycoprotein,P—gP）的影响,为抗白血病多药耐药（multidrugresistance,MDR）提供新方法。利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定K562及K562／A02细胞内pH值（intracellularpH,pHi）;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对K562／A02细胞中P—gp功能的影响;分别采用Westernblot及实时定量RT—PCR技术检测P—gP的蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化。结果表明：细胞酸化3小时对K562及K562／A02细胞的活力影响较小。在K562／A02细胞中,P—gP的功能随pH,的降低而减弱,细胞酸化明显增加了细胞对罗丹明123（Rhodamine123,Rhl23）的累积,并抑制了P—gP介导的Rh123外排。细胞酸化还分别在蛋白水平和mRNA水平抑制了K562／A02细胞中P—gP的表达,并且这种抑制具有pH,及时间的依赖性。结论：细胞酸化能够抑制K562／A02耐药细胞株中P—gP的表达和功能。     

白血病原始细胞P-糖蛋白和肺耐药相关蛋白的表达和功能

为研究P-糖蛋白(PGP)、肺耐药相关蛋白(LRP)及多药耐药相关蛋白(MRP)在白血病原始细胞中的表达,及MDR逆转剂SDZ PSC 833(PSC)对细胞内柔红霉素(DNR)蓄积和罗丹明(Rhodamine,Rh)123贮留的影响,作者在65例白血病患者(急性非淋巴细胞白血病38例,急性淋巴细胞白血病8例,Ph阳性慢性粒细胞白血病急变期19例)采用上述3种蛋白相应的单抗MRK-16,LRP-56和MRPm6,经流式细胞仪检测PGP、LRP和MRP表达和功能。     

As2O3对人胃癌多药耐药细胞模型的逆转耐药作用

目的体外建立人胃癌细胞多药耐药模型,研究多药耐药机制及三氧化二砷（As2O3）对其逆转耐药作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADM,MTT法检测SGC7901/ADM细胞对ADM、长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）的敏感性及As2O3对其逆转耐药倍数,免疫细胞化学法（PV法）检测细胞P-糖蛋白（P-gp）、Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SGC7901/ADM细胞对ADM、VCR和TAX均耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33。在As2O3作用48h后,3种抗癌药物对SGC7901/ADM细胞生长抑制50%时的浓度（IC50）明显降低,差异有显著性（F=169.766-1 199.812,q=6.86-70.40,P〈0.01）;耐药细胞经As2O3及环孢素A（CsA）作用后,P-gp表达明显下调,差异有显著性（F=42.870,q=7.70-21.50,P〈0.01）;As2O3高浓度组细胞中Caspase3表达上调,差异有显著性（F=7.220,q=6.63,P〈0.05）。As2O3作用组SGC7901/ADM细胞凋亡率随As2O3浓度增加而增加（F=1 986.63,q=21.23-95.08,P〈0.05）。结论 SGC7901/ADM细胞具有多药耐药性,As2O3可逆转其耐药,并呈剂量依赖性。     

白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白基因的表达及其临床意义

目的：探讨白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin)基因的表达及其与临床耐药和疗效的关系。方法：应用半定量RT－PCR检测95例急性白血病患者、27例非白血病患者和健康人的Sorcin基因表达水平，并分析了Sorcin基因表达的临床意义。结果：白血病患者Sorcin基因表达高于对照组，差异有显著性（P＜0．001）；急性髓系白血病（AML）复发难治组高于初诊组和完全缓解（CR）组；临床耐药组Sorcin基因表达显著高于非临床耐药性（P＜0．001）；Sorcin基因阳性表达的CR率为20．0％，Sorcin基因阴性表达的CR率为80．0％，差异有显著性（P＜0．001）；AML各亚型Sorcin基因过度表达存在差异，以M5的阳性表达率最高。结论：Sorcin基因过度表达与白血病患者临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。     

一种新的肿瘤相关耐药蛋白--乳腺癌耐药蛋白

乳腺癌耐药蛋白(BCRP)是1998年才发现的一种与多药耐药(MDR)相关的肿瘤耐药蛋白,它与P-gp和多药耐药相关蛋白(MRP)同属ABC转运蛋白超家族成员.本文就BCRP近两年的研究情况作一综述.     

雷公藤内酯醇对人胃癌细胞SGC7901增殖及表达血管内皮生长因子的影响

目的:研究雷公藤内酯醇(TL)对人胃癌细胞SGC7901增殖及表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用增殖抑制试验(MTT法)了解TL对SGC7901细胞的增殖抑制作用,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)了解TL对VEGFmRNA表达的影响,采用免疫组织化学方法了解TL对VEGF蛋白表达的影响。结果:12.5～200ng/mL的TL作用于人胃癌细胞SGC790112～48h,其生长和增殖都受到一定程度的抑制,并且呈剂量和时间依赖性;TL作用于人胃癌细胞SGC790124h,下调VEGFmRNA及VEGF蛋白的表达(P<0.01)。结论:TL可以通过抑制肿瘤细胞VEGF的表达而发挥抗肿瘤作用。     

miR-9对SGC-7901胃癌细胞株侵袭能力的影响

目的探讨miR-9表达对SGC-7901胃癌细胞株侵袭力的影响及其可能的作用机制。 方法培养SGC-7901胃癌细胞株,分组转染miR-9阴性对照（miR-9 NC）、miR-9模拟物（miR-9 mimics）和miR-9抑制剂（miR-9 inhibitor）,上调或下调细胞中miR-9表达水平。采用Transwell实验评价胃癌细胞侵袭能力,应用SYBR Green荧光实时定量聚合酶链反应和Western blot实验检测SGC-7901细胞中MMP-2 mRNA和蛋白表达水平。对miR-9空白对照组、miR-9 mimics组和miR-9 inhibtor组miR-9的相对表达量、MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量,Transwell侵袭实验SGC-7901细胞中侵袭细胞数量,多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（15.375±3.097）,P=0.012］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（0.279±0.039）,P=0.022］。与空白对照组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显减少,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（23.6±4.2）,P=0.026］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显增加,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（102.4±7.6）,P=0.037］。与空白对照组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白的相对表达量比较：miR-9 mimics组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（0.371±0.132）,P=0.011;（0.573±0.063）vs（0.261±0.159）,P=0.024］;miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（2.995±0.701）,P=0.015;（0.573±0.063）vs （0.708±0.079）,P=0.016］。 结论在SGC-7901胃癌细胞株中,miR-9可下调MMP-2的表达,抑制细胞的侵袭能力。     

塞来昔布对胃癌细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响

目的:探讨塞来昔布(celecoxib)对胃癌细胞株MGC803凋亡的影响,为寻求新的胃癌治疗策略提供理论依据.方法:MGC803细胞经塞来昔布处理后,用AO/EB荧光染色检测细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因survivinmRNA的表达.结果:荧光染色法显示塞来昔布可诱导MGC803细胞凋亡,并呈时间、剂量依赖性;RT-PCR检测发现塞来昔布可抑制凋亡相关基因survivinmRNA的表达.结论:塞采昔布诱导MGC803凋亡可能与survivinmRNA表达下调有关.     

Foxp3在胃癌细胞中的表达

目的:观察胃癌细胞株及人胃癌组织中Foxp3基因和蛋白的表达水平和分布特点,探讨胃癌细胞通过表达Foxp3直接参与免疫逃逸的机制。方法:应用实时荧光定量PCR技术,分别检测3株胃癌细胞株(MGC-803、BGC-823、SGC-7901)中的Foxp3mRNA表达水平,并采用流式细胞术破膜染色检测其Foxp3蛋白表达水平。对30例胃癌病理切片进行免疫组织化学染色,观察Foxp3在胃癌组织中的分布特点。结果:3株胃癌细胞株中均检测到有Foxp3基因表达,Foxp3的相对表达强度依次为BGC-823>SGC-7901>MGC-803,Foxp3蛋白表达水平与mRNA表达水平一致。30例胃癌病理切片中27例胃癌细胞表达Foxp3,且细胞质和细胞核都有表达。结论:Foxp3作为调节性T细胞发挥特异性免疫抑制功能的关键基因,在胃癌细胞中也有表达,这可能是其直接参与胃癌细胞免疫逃逸的重要机制之一。     

The anti-proliferative effects of recombinant human lysozyme on human gastric cancer cells

We investigated the anti-proliferative effects of recombinant human lysozyme (rHlys) on gastric cancer cell lines and normal human lung fibroblasts. Using conventional molecular cloning techniques we purified rHlys, which we incubated with cultured cells and measured the effects on cell proliferation and viability. At concentrations of 100 and 1000 microg/l, rHlys significantly inhibited the growth of human gastric cancer cell lines. In contrast, 10 and 50 microg/l of rHlys stimulated gastric cancer cell growth. None of the concentrations of rHlys affected cell viability. Only the highest concentration of rHlys (1000 microg/l) inhibited human lung fibroblast growth. Our results suggest that 100 microg/l is the optimum growth inhibiting concentration, which inhibited cancer cell growth but not normal cell growth. Our in vitro findings suggest that genetically engineered rHlys might inhibit human gastric cancer cell proliferation in vivo, so it might warrant further investigation as a potential novel anti-cancer agent.     

iNOS、NF-κB在胃癌组织中的表达及意义

目的 :研究iNOS与NF κB在胃癌中的表达 ,探讨两者与胃癌发生、发展之间的关系及意义。方法 :采用免疫组化法对5 3例胃癌组织和 2 0例正常胃黏膜组织标本进行检测 ,观察iNOS和NF κB的表达情况。结果 :iNOS及NF κB在胃癌组织中均呈高表达状态 (71 70 %、83 0 2 % ) ,其阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。同时 ,iNOS和NF κB在胃癌中的高表达与组织学分型无关 (P >0 0 5 ) ,而与浸润深度和有无淋巴结转移有关 (P <0 0 5 ) ,且两者之间存在显著相关性 (r =0 .60 8,P <0 0 1)。结论 :iNOS及NF κB参与了肿瘤的形成 ,且与胃癌的侵袭、转移及预后也有一定关系     

巨噬细胞活化的huc-MSC对胃癌细胞PDGFD的调控作用

目的探讨巨噬细胞(THP-1)活化的人脐带间充质干细胞(huc-MSC)对胃癌细胞系HGC-27中血小板源性生长因子(PDGFD)的调控作用。方法将THP-1与huc-MSC直接共培养,观察共培养前后细胞的形态变化;western blot检测huc-MSC中肿瘤相关成纤维细胞(CAF)相关指标;将HGC-27分为阴性对照组、huc-MSC间接共培养组及THP-1活化的huc-MSC间接共培养组,ELISA法检测各组上清液中PDGFD含量;免疫荧光法检测HGC-27中PDGFD的表达;western blot检测HGC-27中JAK1-STAT3通路活化情况。结果与huc-MSC直接共培养后THP-1细胞部分呈纤长形。huc-MSC中E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),N-cadherin(P0.01)和vimentin(P0.01)表达上调,呈现CAF样活化。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC均促进HGC-27中PDGFD的表达,THP-1活化的huc-MSC较huc-MSC促进作用更显著(P0.01)。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC处理组HGC-27中JAK1和STAT3蛋白水平均显著增加(P0.01),THP-1活化后huc-MSC组较huc-MSC组增加更显著(P0.01)。结论 THP-1促进huc-MSC呈CAF样活化,可上调胃癌细胞HGC-27中PDGFD的表达,可能与JAK-STAT3通路活化有关。     

Effect of hypoxia on the expression of fractalkine in human endothelial cells

CX3CL1/fractalkine is a chemokine with a unique CX3C motif. Hypoxia mediates the expression of various genes, such as vascular endothelial growth factor (VEGF), cyclooxygenase-2, and plasminogen-activator inhibitor-1, in vascular endothelial cells. We studied the effect of hypoxia on the expression of fractalkine induced by interferon-gamma (IFN-gamma) in endothelial cells. Human umbilical vein endothelial cells were cultured, and the stimulation of the cells with IFN-gamma was found to induce the expression of fractalkine. Hypoxia inhibited the expression of fractalkine mRNA and protein by IFN-gamma, and this effect was observed with concomitant increase in VEGF expression. Desferrioxamine, an iron chelator that mimics hypoxia in vitro, also inhibited the fractalkine production induced by IFN-gamma. Hypoxia did not affect the degradation of fractalkine mRNA. The inhibition of fractalkine expression by hypoxia was reversed on returning the cultures to reoxygenation condition. Inhibition of IFN-induced fractalkine expression by hypoxia was not affected by the presence of a radical scavenger, N-acetyl-L-cysteine, and the involvement of reactive oxygen species may be excluded. Inhibition of fractalkine expression by hypoxia may be involved in the pathophysiology of ischemic diseases.     

transgelin基因在幽门螺杆菌感染胃癌细胞及人胃癌组织中的表达

目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染胃癌细胞及人胃癌、淋巴结组织中转凝蛋白基因(transgelin)的表达水平,探讨HP感染、transgelin基因与胃癌发生、发展的相关机制。方法用HP感染胃癌细胞系AGS和SGC-7901,同时收集胃癌患者手术切除的胃癌组织、切缘组织和淋巴结组织,提取及纯化总RNA。实时荧光定量PCR检测transgelin mRNA的表达水平,分析其与临床病理参数的关系。结果 transgelin mRNA在HP感染的AGS、SGC-7901细胞中的表达量增加,分别为对照细胞的11.39倍(t=30.025,P=0.000)、3.41倍(t=5.677,P=0.005);transgelin mRNA在胃癌组织、淋巴结组织中的表达增加,分别是切缘组织的6.48倍(t=2.290,P=0.026)、2.64倍(t=2.043,P=0.046);Ⅳ期胃癌组织transgelin mRNA表达量增加,是Ⅰ~Ⅱ期的2.32倍(t=2.111,P=0.049);淋巴结转移组是无淋巴结转移组的2.93倍(t=2.123,P=0.043)。结论HP可上调transgelin基因的表达,transgelin基因可能参与胃癌的发生、发展,且与p TNM分期及淋巴结转移相关。