华支睾吸虫ICT和PCR检测方法的建立及其应用研究

目的建立华支睾吸虫的免疫胶体金(ICT)和实时荧光定量PCR检测体系,比较两者检测华支睾吸虫的效果。方法以华支睾吸虫成虫抗原包被胶体金,检测血液样本中的相应抗体,建立华支睾吸虫ICT检测方法;以华支睾吸虫18S r RNA基因作为靶基因,设计RT-PCR的特异性引物和探针,检测粪便样本中的核酸实时荧光定量PCR方法;以两种检测体系与商品化的酶联免疫(ELISA)检测试剂盒平行测定比较,考核检测体系的应用价值。结果对200份华支睾吸虫重点人群样本进行检测,ELISA法检出的华支睾吸虫Ig G抗体阳性例数为20例,阳性率为10.0%;ICT法为16例,阳性率为8.0%,灵敏度为80.0%,特异度为100.0%,符合率为98.0%,ICT和ELISA两种检测方法差异无统计学意义(χ2=2.25,P0.05);RT-PCR法检出的粪便样本中华支睾吸虫核酸阳性例数为18例,阳性率为9.0%,灵敏度为90.0%,特异度为100.0%,符合率为99.0%,RT-PCR和ELISA两种检测方法差异无统计学意义(χ2=0.05,P0.05)。说明ICT、RT-PCR两种检测方法与ELISA的测定结果比较一致。结论建立的ICT及RT-PCR两种检测方法特异性好、灵敏度高,两种检测方法均适用于华支睾吸虫现场的快速检测及定量分析。     

免疫球蛋白检测在华支睾吸虫病诊断上的应用价值

华支睾吸虫病是我区主要寄生虫病之一。以往诊断此病主要依靠粪检,近年来,血清学检测技术已应用于华支睾吸虫病的诊断。为了评价各类免疫球蛋白在华支睾吸虫病诊断中的应用价值,1990年5月,我们应用ELISA法同时检测华支睾吸虫病人血清中的特异性IgG、IgM和IgA抗体.现将结果报告如下。材料、方法和结果一、可溶性蛋白抗原的制备:从实验感染的家兔肝胆管内获取华支睾吸虫成虫,用     

快速ELISA检测华支睾吸虫与粪检查虫卵结果分析

目的 探讨快速ELISA在华支睾吸虫病临床诊断中的价值。方法 应用快速ELISA诊断试剂盒检测华支睾吸虫抗体呈阳性的118份标本与粪便清水沉淀查虫卵比较。结果 快速ELISA检测华支睾吸虫抗体阳性118例中，粪便找到虫卵63例(53．3％)。结论 快速ELISA诊断试剂盒在华支睾吸虫病临床诊断中有一定应用价值，其方法操作简单、快速、无需特殊仪器设备，适合基层应用。     

重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白用于检测特异抗体的研究

目的 评价重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白(rCs26GST)在华支睾吸虫病血清学诊断上的价值。方法使用rCs26GST抗原,以酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫增强化学发光法(immuno-enhanced chemilmninescence,immuno-ECL)检测华支睾吸虫病者、其它寄生虫感染者及健康人血清特异性IgG和IgE抗体,分析rCs26GST抗原用于检测的敏感性和特异性。结果使用rCs26GST抗原,ELISA法检测了30份华支睾吸虫感染者血清、肺吸虫病人血清15份、日本血吸虫病人血清20份、无寄生虫感染的健康人血清40份,华支睾吸虫感染者血清IgG的阳性检出率为73．3％(22／30),健康人、肺吸虫病和日本血吸虫病人的阴性率分别为92．5％(37／40)、80．0％(12／15)、85．0％(17／20)。hnmuno-ECL法检测华支睾吸虫感染者血清rCs26GST-特异性IgE的阳性检出率为867％(26／30),肺吸虫病为26．7％(4／15),日本血吸虫病人和阴性对照组的血清未测出,此法的特异度是95．5%。结论 rCs26GST蛋白用于血清特异性IgG和IgE抗体的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于华支睾吸虫病的血清学诊断,组合成“鸡尾酒”式的复合诊断抗原之一。     

华支睾吸虫重组蛋白应用于ABC-ELISA检测特异性循环抗体的研究

目的 评价重组蛋白在华支睾吸虫病诊断上的价值，探索以重组蛋白替代天然抗原用于ELISA等血清学方法诊断华支睾吸虫感染的可能性。方法 分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA)，以ABC-ELISA检测华支睾吸虫病、其它寄生虫感染及健康人血清特异性IgG．比较两种抗原用于检测的敏感性与特异性。结果 共检测了112份华支睾吸虫感染血清，使用重组抗原CysB与成虫粗抗原CAA的阳性检出率分别为92．9％(104／112)及94．6％(106／112)；分别检测健康人血清56例、日本血吸虫病血清20例及肺吸虫病血清10例．对于两种抗原，华支睾吸虫特异性IgG检测阴性率均相同．上述三类血清的阴性率分别为96．5％(54／56)、95％(19／20)及90％(9／10)。结论 华支睾吸虫重组蛋白CysB用于血清特异性抗体检测具有较高的敏感性及特异性，与成虫可溶性抗原(CAA)的诊断应用价值相近，有望成为应用于华支睾吸虫病诊断的替代抗原之一。     

IEST和快速ELISA诊断华支睾吸虫病的效果比较

应用成虫石蜡切片抗原作免疫酶染色试验(IEST)和快速酶联免疫吸附试验(Q—ELISA)对比检测了52份华支睾吸虫病患者和50份健康人血清,两法的阳性率分别为96％和94％,假阳性率分别为4％和6％。应用IEST和Q—ELISA检测50份血吸虫病患者和20份卫氏并殖吸虫病患者血清,其交叉反应率分别为6％、8％和5％、5％。结果表明两法诊断华支睾吸虫病均有较高的敏感性和特异性。Q—ELISA更适台于现场应用。     

IHA和SPA-ELISA检测华支睾吸虫病效果的比较

本文报道了IHA和SPA-ELISA在实验室和现场同时检测华支睾吸虫病效果的比较。26份正常人和11份华支睾吸虫病人血清,IHA的阴性及阳性符合率分别为100％和90.9％;SPA—ELISA分别为92.3％和90.9％,两者符合率无显著差别。现场对比研究表明,IHA与粪检的阳性及阴性符合率分别为85.88％和70.58％;SPA-ELISA分别为90.6％和79.3％,两者阳性符合率无显著性差别,而阴性符合率的差别有高度显著性,提示SPA-ELISA现场诊断华支睾吸虫病比IHA更具有可信性。     

华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展

华支睾吸虫寄生于人和犬、猫等动物的肝胆管内，造成肝胆的一系列疾病，是一种重要的人兽共患寄生虫病。选择快速、准确的诊断方法对防治该病十分重要，免疫学检测方法现已广泛用于华支睾吸虫病的诊断，本文就目前华支睾吸虫病免疫学检测方法的研究进展作一概述。     

江门市新会区华支睾吸虫病流行现状调查与分析

目的 了解江门市新会区华支睾吸虫病的流行现状,确定华支睾吸虫病的高危人群,提供当地华支睾吸虫病感染因素的线索.方法 采用免疫酶联吸附法检测血清中华支睾吸虫特异性抗体;采用改良加藤氏法检测粪便虫卵;采用消化法检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴;进行问卷调查华支睾吸虫感染相关的生活和行为方式;同时采用病例对照方法分析影响华支睾吸虫感染的相关流行因素.结果 共调查1 720人,华支睾吸虫平均感染率为18.14%,男性感染率高于女性(P<0.001).各年龄组均有感染,感染率差异有统计学意义(P<0.001).共调查常见淡水鱼6种共273尾,6种淡水鱼体内均查到华支睾吸虫囊蚴.病例对照研究显示,吃半熟鱼习惯及外出饮食等行为是最重要的危险因子.结论 新会区华支睾吸虫病流行范围广,感染率高,已经成为一个严重的公共卫生问题,应积极开展综合性防控工作.     

广州花都地区华支睾吸虫病流行现状及防治对策

[目的]了解广州市花都区华支睾吸虫病的人群感染现状及流行特征,研究当地华支睾吸虫病的感染因素,为当地华支睾吸虫病的防治工作提供科学依据.[方法] 2011年8月～10月对花都区各乡镇常住居民进行华支睾吸虫病流行病学调查.采用酶联免疫吸附法检测血清中华支睾吸虫特异性抗体;改良加藤厚涂片法检测粪便虫卵;同时通过问卷调查了解与华支睾吸虫感染相关的内容.[结果]共调查1 800人,粪检检获华支睾吸虫卵者705人,平均感染率为39.17％,平均每克粪便虫卵数(EPG)为367.男性感染率为43.06％,女性感染率34.51％,差异有统计学意义(P＜0.01).各年龄组均有感染,成年人感染率较高,各年龄组华支睾吸虫的感染率差异有统计学意义(P＜0.01).不同职业人群华支睾吸虫感染存在显著差异,以渔民、饮食服务人员和商人感染率最高.问卷调查结果显示,69.2％的被调查者吃过淡水鱼生,48.5％的家庭生熟食物所使用的刀具、砧板没有分开,80％以上的居民对华支睾吸虫病防治知识知之甚少.[结论]广州市花都区仍然是华支睾吸虫重点流行区之一,居民的不良饮食及生活习惯是华支睾吸虫流行的重要因素,应加强宣传教育,积极开展综合性防控工作.     

粪检华支睾吸虫卵方法的比较研究

粪检虫卵是确诊华支睾吸虫病和进行流行病学调查的主要方法,常规检查方法易漏检,国内屡有因诊断不明乃至延误治疗者。为寻求检出率高、简便易行、适用于大规模流行病学调查的诊断方法,本文对下列6种粪检华支睾吸虫卵方法进行了比较研究。方法:①直接涂片法。②沉淀法。称取感染华支睾吸虫家猫的粪便1g,置青霉素瓶内,加水5ml混匀,去浮渣,吸粪液0.3ml分别作顺置沉淀(即水洗沉淀、氢氧化钠消化、水洗氢氧化钠沉淀3种方法);③倒置沉淀(即清水倒置沉淀和氢氧化钠倒置沉淀2种方法),分10min、20min、30min组,各检查20份粪便,进行比较。     

华支睾吸虫病137例临床分析

目的 探讨华支睾吸虫病在临床上有效的诊断与治疗方法。方法对137例经临床诊断为华支睾吸虫病患者进行流行病学个案调查及回顾性分析。结果137例华支睾吸虫病患者中有食鱼生史占96．35％;无鱼生史占3．65％。其中49例为胆囊炎、胆结石、胆息肉等肝胆管疾病,需要手术治疗,在手术中均发现华支睾吸虫成虫;88例实验诊断及B超辅助检查诊断为华支睾吸虫病,经及时治疗后痊愈。结论应提高华支睾吸虫病的认识,减少误诊漏诊,在并发症出现前尽早治疗效果最为理想。     

南宁市城区人群华支睾吸虫感染调查

目的 了解南宁市城区居民华支睾吸虫病感染情况。方法 以ELISA法和改良醛醚法检查来自门诊和现场采集的血清和粪便样本的华支睾吸虫抗体和虫卵。结果 调查共1388例，其中门诊就诊者772人，感染率61．66％，现场调查人群616人，感染率25．65％，前者明显高于后者；有吃鱼生史、鱼生史不详和无鱼生史者的感染率分别为58．83％、32．77％及1．88％，三者差异高度显著。以ELISA法与改良醛醚法检测门诊就诊者华支睾吸虫病感染率的差异不显著。结论 南宁市华支睾吸虫病流行严重，对市民健康已造成严重威胁。     

两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性

目的寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值.方法选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性.结果CysA与CysB均获得成功克隆与表达,Western blot分析显示CysA与华支睾吸虫病阳性血清有强反应,与日本血吸虫病阳性血清只有很弱的交叉反应,而CysA与华支睾吸虫感染血清无反应.免疫组化显示,被表达的两个半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫体内的免疫定位无显著不同,主要在成虫肠道及虫卵.结论成功表达的两个半胱氨酸蛋白酶中,CysB针对华支睾吸虫病血清有良好的抗原活性,值得视为诊断抗原候选做进一步的研究.     

基于荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测美洲钩虫方法研究

目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增（recombinase polymerase amplification, RPA）技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法，并评价其效能，为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑。方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及探针并进行筛选，建立荧光RPA检测方法。将美洲钩虫卵基因组DNA稀释至100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL、0.1 fg/μL等7个浓度梯度以测定荧光RPA法的最低检出值，利用荧光RPA法检测日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫DNA样本进行交叉反应实验。采集44例人粪样并进行DNA提取，运用改良加藤厚涂片法（Kato-Katz）、半巢式PCR法、荧光RPA法同时检测，评价荧光RPA法的灵敏度和特异度。结果 建立的荧光RPA法可在20 min内特异性扩增出美洲钩虫cox1基因长度为194 bp的片段，最低检出值为10 fg/μL，与日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫均无交叉反应。通过对44份人粪便样本进行检测，Kato-Katz法和半巢式PC...     

武鸣县二唐村华支睾吸虫病血清学调查

华支睾吸虫病是由华支睾吸虫寄生于人或哺乳动物肝胆管内引起的一种常见寄生虫病[1],它主要是由于生吃或吃未煮熟的鱼或虾所引起的.武鸣县是广西华支睾吸虫病流行比较严重的县份之一,为观察血清学方法检查华支睾吸虫病的现场应用效果,笔者于2005年10月选择该县二唐村的人群进行检测,结果报告如下.     

广州市黄埔区部分人群华支睾吸虫感染调查

目的了解广州市黄埔区不同人群的华支睾吸虫病的感染情况及流行特点,为今后防治策略的制定提供科学依据。方法采用改良加藤氏厚涂片法粪检华支睾吸虫卵。结果本次共粪检512人,感染29人,感染率为5.66%;感染人群居民感染率最高,感染率为13.51%,感染人群以大于50岁的感染率最高,感染率为16.67%。结论黄埔区部分人群的华支睾吸虫感染率低于广州市的平均感染率,而高于全国、全省的感染率,应加强对黄埔区居民华支睾吸虫病预防的健康教育工作,改变不良的饮食习惯,提高自我防护意识。     

广西本地华支睾吸虫饱和硫酸铵纯化抗原的应用研究

目前,华支睾吸虫病的确诊一般靠粪检查找虫卵,费时费工常误诊、漏诊.虽然近年来有人采用未经纯化的成虫粗抗原作ELISA,敏感性和特异性有所提高,但效果不太理想,我们参照张夏英等(1)用饱和硫酸铵纯化成虫抗原,所得硫酸铵纯化抗原(AW)与成虫粗抗原作ELISA比较,检测血清中特异性抗体,现将结果报告如下.     

超声诊断华支睾吸虫病的临床意义探讨

目的探讨超声诊断华支睾吸虫病的临床意义。方法通过对华支睾吸虫病超声声像图诊断分析与粪便查虫卵作对照。结果61例华支睾吸虫病患者,有53例(占86.9%)超声检查肝胆系统有特异性改变。肝内中、小胆管弥漫性轻度扩张,管壁不均匀性增厚,回声增强,不同切面呈现小点状、小等号状、斑状、条索状等形态各异的强回声,后方无声影。结论超声检查可作为华支睾吸虫病的快捷而准确的影像学首选诊断方法,具有重要的临床实用价值。     

快速检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立和应用

目的 :建立一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的快速、敏感和特异的新方法。方法 :以斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原为上样抗原 ,胶体金标记羊抗人IgG为显色剂 ,建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以ELISA作平行对照。结果 :DIGFA和ELISA分别检测 83例斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 95 .2 % (79/ 83)和 91 .6 % (76 / 83) ,两法差异无显著性 (P >0 .0 5 )。DIGFA分别检测正常人血清32例、华支睾吸虫病患者血清 2 3例和日本血吸虫病患者血清 36例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 4 .3% (1 / 2 3)和 8.3% (3/ 36 ) ;DIGFA和ELISA两法的总符合率达 92 .3% (36 / 39)。结论 :DIGFA的特异性和敏感性与ELISA相近 ,但方法快速、试剂稳定 ,且不需特殊设备 ,适用于各级医疗单位和血清流行病学调查