U0126对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的]探讨U0126对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖、迁移及侵袭的影响.[方法]用不同浓度MEK/ERK抑制剂U0126(25,50,100μmol/L)处理Tca8113细胞24,48,72 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell实验检测48 h时的细胞侵袭率,细胞免疫荧光染色和Western blot法检测48h时的细胞ERK1/2,p-ERK1/2,MEKK1,p-MEKK1在细胞内定位和蛋白表达情况及E-cadherin和Vimentin表达水平.[结果]U0126对细胞的增殖、迁移和侵袭具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈现出浓度和时间依赖性;细胞中磷酸化的ERK1/2主要表达在细胞核膜和核内,U0126对磷酸化的ERK1/2表达具有明显的抑制作用(P<0.01);与对照组比较,U0126各剂量组E-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),而Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),且均呈现出浓度依赖性.[结论]U0126可抑制Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制认为可能与抑制ERK1/2活化、促进E-cadherin表达及抑制Vimentin表达有关系.     

鹦鹉热衣原体Ⅲ型分泌蛋白SINC通过激活MAPK/ERK信号通路促进宿主细胞自噬

目的 探讨鹦鹉热衣原体（Cps）SINC蛋白对宿主细胞自噬的影响,及MAPK/ERK信号通路在其中的调控作用。方法 用重组的SINC蛋白刺激小鼠单核巨噬细胞（RAW 264.7）,Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的水平及ERK1/2的磷酸化程度,并用间接免疫荧光法检测SINC蛋白刺激后细胞LC3的水平,透射电镜检测自噬特殊结构。用50μmol MEK1/2抑制剂U0126预处理RAW 264.7细胞后1 h,再用不同浓度SINC蛋白刺激不同时间,用间接免疫荧光检测LC3的水平,并用Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结果 Western blot检测结果显示,以2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞12 h时,LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平显著上调,并达到峰值;间接免疫荧光检测发现SINC刺激后可使细胞内LC3荧光斑点数明显增多,透射电镜下可见更多的自噬小体和自噬溶酶体。2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞15 min时p-ERK1/2/ERK1/2比值明显上调;加入抑制剂U0126后,LC3...     

MAPKs阻断剂U0126对神经细胞α7尼古丁受体表达的影响

目的：研究老年性痴呆发病中α7尼古丁受体（nAChR）与ERK MAPK信号转导通路之间的关系。方法：用MEK阻断剂U0126阻断SH-SY5Y细胞ERK蛋白的活化及表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting方法测定α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平。结果：细胞经U0126处理后p-MEK和p-ERK1/2的水平明显降低,提示MEK和ERK 1/2的磷酸化被阻断,同时U0126处理组α7 nAChR mRNA及蛋白的表达量降低。结论：U0126能抑制SH-SY5Y细胞ERK MAPK信号转导通路,ERK MAPK信号转导通路的活化可能与神经细胞α7尼古丁受体的正常分泌及胆碱能信号传递密切相关。     

乙型肝炎病毒X蛋白诱导p16~(INK4A)基因启动子甲基化及其机制研究

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对p16~(INK4A)基因启动子甲基化的影响及机制。方法以Hep G2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的Hep G2/GFP-HBx为实验细胞,Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤;设计合成靶向HBV X的si RNA(X-si RNA)和对照si RNA,用X-si RNA、5-N-2-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)单独或联合处理细胞及裸鼠;甲基化PCR检测细胞及移植瘤组织p16~(INK4A)基因甲基化;RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的m RNA表达。结果甲基化PCR检测显示Hep G2/GFP-HBx组细胞及移植瘤组织均存在p16~(INK4A)甲基化而Hep G2/GFP组均未检出p16甲基化;X-si RNA、5-Aza-Cd R处理的细胞及移植瘤组织中p16~(INK4A)基因甲基化均减低;RT-PCR检测显示GFP-HBx/Hep G2组DNMT1、DNMT3A较Hep G2组显著升高,差异有统计学意义(P=0.000 2、P=0.000 5),较GFP/Hep G2细胞组也显著升高,差异有统计学意义(P=0.001 1、P=0.000 5),而DNMT3B在Hep G2、GFP/Hep G2、GFP-HBx/Hep G2细胞组组间检测值差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBX蛋白可能通过上调DNMT1、DNMT3A m RNA的转录表达而诱导p16~(INK4A)基因启动子的甲基化。     

抑制 MEK／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响

目的：探讨抑制 MEK ／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响。方法大鼠怀孕12．5 d 后采用一次性腹腔注射丙戊酸钠（VPA）制备孤独症幼大鼠模型。 U0126处理组于 VPA 注射后每天给大鼠口服400μg／kg MEK ／ERK 通路抑制剂U0126直至断奶。将出生幼鼠分为4组：对照组、VPA 处理组、U0126处理组、VPA 联合 U0126处理组。在幼鼠出生后35 d 进行社会交往行为检测、神经行为学检测,并分离提取脑组织蛋白通过 Western blot 分析 MEK／ERK 通路关键蛋白 MEK 与 ERK表达情况。结果与对照组比较,VPA 处理组社会交往能力下降、在中央区活动时间增加、站立次数减少,符合孤独症行为特征;U0126处理组无明显行为学变化;但 VPA 联合 U0126处理组能明显改善 VPA 处理导致的孤独症行为症状。 Western blot 结果显示,与对照组比较,VPA 处理可增强大鼠前额叶、海马及小脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平;而 VPA 联合 U0126处理组则能抑制上述脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平。结论 U0126可改善孤独症模型大鼠的病症行为,机制可能与抑制脑组织中MEK ／ERK 通路相关。     

ERK通路对PHA诱导人外周血单个核细胞中USP22基因表达的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)对植物血凝素(PHA)诱导人外周血单个核细胞USP22基因表达的调控作用.方法 不同浓度PHA刺激人外周血淋巴细胞,Western blot检测ERK1/2的磷酸化水平及USP22蛋白表达;ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059预处理细胞,Western blot和RT-PCR分别检测PHA诱导的USP22蛋白及mRNA的表达.结果 Western blot显示受PHA刺激后,人外周血单个核细胞USP22和p-ERK1/2蛋白的表达水平均高于对照组;而p-ERK1/2抑制剂阻断ERK磷酸化水平,进而下调USP22蛋白及mRNA表达水平.结论ERK1/2信号通路参与PHA对人外周血单个核细胞USP22基因的转录激活.     

HBx与microRNA-21在肝细胞肝癌中的相互作用及其机制研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因编码的X蛋白(HBx)与micro RNA21(mi R-21)在肝细胞癌Hep G2细胞中的作用。方法:选取人肝癌细胞株Hep G2细胞,随机分为Hep G2细胞组、GFP腺病毒组和HBx腺病毒组,其中GFP腺病毒组和HBx腺病毒组细胞分别感染GFP腺病毒和HBx腺病毒,采用流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测ER蛋白表达,RT-PCR检测HBx m RNA和mi R-21表达。结果:HBx腺病毒组HBx m RNA相对表达量为(0.805±0.030),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组细胞G1期比例为(34.24±2.10)%,明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而S期细胞比例为(56.80±2.09)%,明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组mi R-21表达为(1.892±0.038),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而ERα蛋白表达为(0.21±0.03),明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组穿膜细胞数为(78.12±8.78),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05)。结论:HBx可促进肝癌细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与上调mi R-21表达和下调ER表达有关。     

C5a激活Akt1⁃ERK1/2通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移

目的：探讨C5a对非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及其潜在的分子机制。方法：RT?PCR和Western blot检测人正常支气管上皮细胞系BEAS?2B和3种NSCLC细胞系（H1703、PC9、H1299）中C5a受体（C5aR）的表达;CCK?8和划痕实验检测C5a对PC9细胞增殖和迁移的影响;Western blot检查C5a刺激PC9细胞后蛋白激酶Akt1、细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal?regulated kinase,ERK1/2）和蛋白激酶C?α（protein kinase C?α,PKC?α）表达及磷酸化水平;用Akt1抑制剂Perifosine和ERK1/2抑制剂U0126分别处理PC9细胞后再给予C5a刺激,Western blot检测Akt1和ERK1/2的表达和磷酸化及其上下游调控关系,CCK?8和划痕实验检测Perifosine和U0126对细胞增殖和迁移的影响。结果：PC9细胞C5aR的表达水平显著高于其他细胞;C5a可明显促进PC9细胞的增殖和迁移能力;C5a刺激PC9细胞后,可显著增强Akt1和ERK1/2的磷酸化;Akt1和ERK1/2抑制剂均能明显降低C5a刺激PC9细胞后引起的细胞增殖和迁移,且Akt1抑制剂不仅能减弱Akt1的磷酸化,还能减弱ERK1/2的磷酸化,而ERK1/2抑制剂则仅能阻断其自身的磷酸化。结论：C5a刺激NSCLC细胞后可能通过激活Akt1?ERK1/2通路促进细胞的增殖和迁移。     

U0126对TGF-β1诱导足细胞炎症因子分泌和miR-155表达的影响

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(erk)1/2通路抑制剂U0126对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导足细胞炎症因子分泌和微RNA(microRNA,miR)-155表达的影响。方法体外培养小鼠足细胞,随机分为正常对照组、TGF-β1组和TGF-β1+U0126组,使用Western blot法检测erk1/2磷酸化水平,ELISA法检测足细胞上清TNF-α及IL-6蛋白表达水平,RT-qPCR法检测足细胞miR-155表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1诱导足细胞后,erk1/2磷酸化水平明显上升,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌增多,足细胞miR-155表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组相比,TGF-β1+U0126组erk1/2磷酸化水平被抑制,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌减少,足细胞miR-155表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 erk1/2通路抑制剂U0126可抑制足细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌,下调足细胞miR-155的表达。     

基于ERK信号通路研究补阳还五汤促糖尿病足溃疡愈合的作用机制

目的 基于细胞外调节激酶（ERK）信号通路研究补阳还五汤对人永生化表皮（HaCaT）细胞增殖和迁移的作用。方法 CCK-8法检测不同浓度补阳还五汤（0、5、10、15、25、50 mg/mL）对HaCaT细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度补阳还五汤作用下HaCaT细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达水平;划痕实验检测HaCaT细胞的迁移情况;CCK-8法检测适宜浓度补阳还五汤联合ERK抑制剂（U0126）作用下HaCaT细胞增殖的情况,Western blot法检测适宜浓度补阳还五汤以及ERK抑制剂（U0126）作用下HaCaT细胞p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果 CCK-8法实验结果表明,5、10、15、25、50 mg/mL补阳还五汤细胞的吸光度值分别为（1.1704±0.076）、（1.2642±0.078）、（1.3845±0.060）、（1.6996±0.080）、（1.7211±0.088）,与空白组（1.0514±0.080）比较,25 mg/mL时促增殖效果最佳（P<0.01）。Western blot实验结果表明...     

金属镉促进甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的作用及机制

目的 探讨金属镉对甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的影响及其作用机制.方法 Western blot法检测FRO、MCF-7和MAD-MB-231细胞中G蛋白偶联受体1(G protein-coupled estrogen receptor,GPER1)表达水平.不同浓度(0、0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L)镉(CdC12)处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,MTF法检测细胞增殖率.0.5 mmol/L镉分别处理FRO细胞0、5、10、15、30 min,Western blot法检测ERK1/2和Akt的磷酸化水平.GPER1抑制剂G15处理FRO细胞后,设计合成针对GPER1的小干扰RNA(GPER-siRNA)并转染FRO细胞,采用Western blot再次检测ERK1/2和Akt磷酸化水平.分别用GPER1抑制剂G15、ERK1/2抑制剂(PD98059)和PI3 K-Akt抑制剂(LY294002)、GPER-siRNA处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率.结果 GPER1在MAD-MB-231细胞中表达水平明显低于MCF-7、FRO细胞.不同浓度CdC12处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,低浓度CdCl2促进FRO、MCF-7细胞增殖,对MAD-MB-231细胞增殖无显著影响;高浓度CdC12对细胞均具有抑制作用.0.5 mmol/L CdC12处理FRO细胞不同时间后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平在15 min达最大值.GPER1抑制剂G15处理FRO细胞,ERK1/2与Akt的磷酸化水平显著降低(P＜0.05).GPER1的小干扰RNA干扰后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平明显降低(P＜0.05).G15、PD、LY和GPER-siRNA处理FRO细胞,细胞增殖率均显著下降.结论 金属镉通过GPER1-ERK/Akt信号通路促进FRO细胞的增殖.     

雌激素促进ER阴性乳腺癌细胞中IL-6的表达

目的 :探讨雌激素作用下G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)信号通路的活化对ER阴性乳腺癌细胞中白介素(interleukin,IL)-6表达的影响。方法:药物处理SKBR-3与MDA-MB-453细胞后,实时定量荧光PCR法检测细胞中IL-6 m RNA的变化,ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的分泌量,Western blot法检测细胞中p-ERK与p-AKT的蛋白表达水平。结果:17-β雌二醇(E2)和GPER特异性激动剂(G1)显著促进SKBR-3与MDA-MB-453细胞中IL-6的m RNA表达以及细胞上清液中IL-6的分泌量,GPER特异性拮抗剂(G15)可显著抑制以上变化(P<0.05)。E2及G1药物处理SKBR-3细胞后显著活化细胞内GPER/AKT信号通路以及GPER/ERK信号通路(P<0.05),上调p-AKT与p-ERK的蛋白表达水平,p-AKT的相对表达量分别为对照组的(4.16±0.65)、(3.21±0.45)倍,p-ERK分别为对照组的(2.87±0.42)、(2.64±0.24)倍,在MDA-MB-453细胞中也可得到类似结果。用MEK特异性抑制剂(U0126)可明显阻断E2及G1所引发的IL-6表达变化(P<0.05),PI3K特异性抑制剂(Wortmannin)则不能。结论 :雌激素可促进ER阴性乳腺癌细胞中IL-6的m RNA表达及细胞上清液中IL-6的分泌量,其机制可能与GPER/ERK信号通路的上调有关,由GPER介导的炎症微环境可能在ER阴性乳腺癌进展中发挥重要作用。     

ERK1/2通路介导米诺环素促进PC12细胞氧糖剥夺后血红素加氧酶-1的表达

目的探讨米诺环素（minocycline, MC）对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）缺氧缺糖（oxygen glucose deprivation,
OGD）损伤的保护作用及其机制。方法采用氧糖剥夺6 h方法建立PC12细胞缺氧缺糖损伤模型,并将细胞随机分为正常对照
组、模型组、米诺环素组及MEK1/2抑制剂组,在OGD/复氧24 h后,采用MTT比色法测定PC12细胞的存活率,Western blotting
法检测血红素加氧酶-1（HO-1）及胞外信号调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化水平。结果OGD组PC12细胞存活率显著低
于正常对照组,米诺环素（0.1~10 μmol/L）能缓解OGD损伤导致细胞存活率的下降,同时上调HO-1蛋白的表达及增加ERK1/2
的磷酸化水平,其中1 μmol/L浓度最佳。其次,ERK1/2上游激酶MEK1/2特异性抑制剂U0126（10 μmol/L）能阻断米诺环素诱
导HO-1蛋白表达的增加。结论米诺环素可减轻OGD导致PC12细胞的损伤并上调抗氧化蛋白HO-1的表达,其作用机制可能
与激活ERK1/2信号通路有关。
     

ERK1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌Hep-2细胞株增殖中的作用

目的:探究ERK 1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌Hep-2细胞株增殖的潜在机制。方法:采用细胞计数的方法统计经ERK 1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48 h时Hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα)。采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在Hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2。采用免疫印迹(Western Blot)的方法检测不同处理情况下ERK 1/2、p-ERK 1/2、P53、PKM2的蛋白水平。结果:抑制ERK 1/2的磷酸化可抑制Hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK 1/2导致的Hep-2细胞生长变缓。同时,抑制ERK 1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53。过表达PKM2可阻断抑制ERK 1/2引起的Hep-2细胞生长变缓。结论:抑制ERK 1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制Hep-2细胞生长。     

U0126对实验性脑出血大鼠脑内水通道蛋白4表达的影响

目的 研究水通道蛋白4在出血性脑损伤大鼠脑内的表达,及丝裂原活化蛋白激酶 (MAPKs)信号转导通路阻滞剂U0126对其表达的影响.方法 大鼠缓慢注射自体血出血模型,测定脑组织含水量及伊文斯蓝含量,并采用免疫组织化学,Western blot检测AQP4的表达.测定预先经尾静脉给予U0126后MAPKs信号通路关键蛋白ERK1/2磷酸化水平,同时观察U0126对脑水肿和AQP4表达的影响.结果 假手术组AQP4表达较低,在出血损伤后表达升高,脑组织含水量及伊文斯蓝含量增加,给予U0126后AQP4的表达和脑组织含水量降低,同时ERK1 /2磷酸化水平降低.结论 出血性损伤后AQP4表达上升,脑水肿明显,预先给予U0126可抑制AQP4的表达,减轻脑水肿.     

MEK基因在黑米花青素抗HER-2阳性乳腺癌转移中的作用研究

目的 探究丝裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)基因在黑米花青素(black rice anthocyanins,BRACs)抗HER-2阳性乳腺癌转移中的作用.方法 MDA-MB-453细胞经过BRACs、MEK抑制剂U0126、SiRNA沉默MEK单独或联合处理24 h,采用划痕愈合实验、Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力,使用免疫沉淀法、免疫印迹法检测MEK磷酸化水平及其与HER-2蛋白的相互作用,利用RT-PCR检测MEK mRNA在MDA-MB-453细胞中的表达.结果 与对照组比较,BRACs、U0126及MEK-SiRNA单独或联合处理的实验组均能有效抑制MDA-MB-453细胞转移及侵袭能力,差异有统计学意义(P＜0.05).MEK蛋白磷酸化水平经BRACs处理后显著降低,MEK蛋白与HER-2蛋白之间的相互作用减弱,U0126联合BRACs处理MDA-MB-453细胞较BRACs单独处理更明显地抑制MEK磷酸化水平(P＜0.05).MDA-MB-453细胞MEK mRNA和蛋白的表达水平经MEK-SiRNA、BRACs单独或联合处理后均下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MEK基因与HER-2阳性乳腺癌的侵袭、转移有密切关系,其在BRACs抗HER-2阳性乳腺癌转移中起重要作用.     

阿霉素可通过MAPK信号转导通路促进成骨肉瘤细胞凋亡

目的: 探讨阿霉素在适宜的加药浓度、作用时间下诱导成骨肉瘤细胞凋亡的分子机制.方法: 首先通过FCM,MTT等方法探讨引起成骨肉瘤细胞凋亡的最佳药物作用浓度及时间;在此条件下应用不同信号转导通路的抑制剂观察导致细胞凋亡的可能通路;最后应用Western-Blotting来检测在成骨肉瘤细胞凋亡过程中相关信号分子的表达水平及磷酸化水平的变化.结果: 0.4 mg/L阿霉素作用成骨肉瘤细胞12 h即可引起细胞凋亡,并呈时间依赖性;用p38的抑制剂SB203580和MEK4/7的抑制剂U0126可明显抑制细胞的凋亡;Western Blotting检测发现阿霉素作用于细胞后,MAPK家族成员JNK、ERK和p38等各激酶的表达水平未发生明显变化,但JNK,p38的磷酸化水平提高了ERK的磷酸化水平有所下降;用Western Blotting检测到阿霉素作用后p53蛋白的表达水平有提高.结论: 阿霉素可导致成骨肉瘤细胞凋亡,而且此凋亡过程与MAPK通路有关.     

睾酮对乳腺癌细胞中FEN1表达的影响

目的 探讨睾酮(testosterone,T)在乳腺癌细胞中对瓣状核酸内切酶(flap endonuclease 1,FEN1)表达的影响及其机制.方法 以MCF-7作为研究对象,采用RT-PCR观察雌二醇(17 β-estradiol,E2)单独作用以及分别与雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182,780(ICI)和MAPK途径抑制剂U0126共同作用时FEN1表达的变化.以MCF-7aro(芳香化酶过表达的MCF-7)作为研究对象,采用RT-PCR观察加入单独的睾酮以及睾酮和芳香化酶抑制剂来曲唑(letro-zole)共同作用时FEN1表达的变化；采用Western blot观察睾酮单独作用以及分别与来曲唑和U0126共同作用时FEN1、p-ERK和p-Elk的变化.结果 与对照组比较,加入雌二醇后MCF-7细胞中FEN1 mRNA的表达升高2.04倍(P＜0.01),加入ICI和U0126后分别降低10.63倍和2.17倍(P＜0.01).加入睾酮后MCF-7aro细胞中FEN1 mRNA的表达升高1.66倍(P＜0.01),蛋白的表达升高1.80倍(P＜0.01)；加入来曲唑后FEN1 mRNA的表达下降2.38倍,蛋白的表达降低1.84倍,加入U0126后蛋白的表达降低2.28倍(P＜0.01)；加入睾酮后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别升高2.28倍和2.60倍(P＜0.01),加入来曲唑后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低2.60倍和2.37倍(P＜0.01),加入U0126后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低10.38倍和119.50倍(P＜0.01).结论 睾酮可通过MAPK途径上调MCF-7 aro细胞中FEN1的表达.     

乙肝病毒X蛋白诱发肝癌细胞内miRNA表达谱异常改变

摘要：目的乙肝病毒X蛋白(HBx)通过调控宿主细胞蛋白编码基因表达而促进人原发性肝细胞肝癌(肝癌)的发生发展。本研究将HBx的多能调控作用从蛋白编码基因拓展到非编码RNA领域,探讨HBx能否调控肝癌细胞内miRNA表达谱改变。方法构建HBx及质粒空载体稳定转染的Hep G2子代细胞系;利用miRNA芯片及qRT-PCR方法检测HBx在Hep G2细胞中引起的miRNAs表达变化。结果构建了稳定表达HBx的Hep G2-hbx/Hep G2-2.1细胞系以及空载体对照细胞系Hep G2-vc。miRNAs芯片和qRT-PCR证实外源表达的HBx可在Hep G2肝癌细胞中诱发大量miRNA异常表达,大量miRNAs低表达,少数促癌miRNA如miR-21升高。结论 HBx可在体外导致Hep G2细胞内非编码的miRNAs表达谱异常改变。