白细胞介素2基因修饰的鼠肝细胞脾内移植对肝脏免疫功能的影响

目的 观察白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的小鼠肝细胞经脾内移植后对肝脏免疫功能的影响以及对肝癌小鼠的治疗作用。方法将ＩＬ－２基因修饰的小鼠胚胎肝细胞ＢＮＬＣＬ．２做小鼠脾内移植（２×１０６／只）后２周，分离肝巨噬细胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞），检测其杀伤活性、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和一氧化氮（ＮＯ）分泌水平及Ⅰａ抗原的表达，并观察其对Ｃ２６结肠癌肝转移小鼠的治疗作用。结果 实验组小鼠Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞对不同靶细胞的杀伤活性显著增强，ＴＮＦ和ＮＯ分泌水平明显升高，Ⅰａ抗原的表达增加；经此方法治疗后，转移性肝癌小鼠的存活期显著延长。结论ＩＬ－２基因修饰的肝细胞脾内移植是肝癌基因治疗的有效途径，肝细胞脾内移植是肝脏靶向性基因治疗的途径之一。     

腺病毒介导的细胞因子基因转染对小鼠巨噬细胞功能的影响

探讨重组腺病毒介导的细胞因子基因转染对巨噬细胞体外抗肿瘤免疫功能的影响。方法通过重组腺病毒的介导，将白细胞介素４（ＩＬ－４）及巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）基因转染至小鼠腹腔内巨噬细胞，并检测其上清中ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ的水平；同时检测基因转染后巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，及其分泌的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、ＩＬ－１、一氧化氮（ＮＯ）水平与主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）Ⅱ类分子的表达情况。结果基因转染后４小时，巨噬细胞即可表达较高水平的ＩＬ－４和（或）Ｍ－ＣＳＦ，转染后１８小时，巨噬细胞上清中ＩＬ－４水平为９５Ｕ／ｍｌ，Ｍ－ＣＳＦ为３５Ｕ／ｍｌ；转染后巨噬细胞杀伤活性明显升高，两者联合应用并以内毒素脂多糖（ＬＰＳ）协同刺激时，这一升高更为明显；其上清中ＴＮＦ、ＩＬ－１及ＮＯ水平均有不同程度的升高；ＭＨＣⅡ类分子的表达在ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ联合转染组有所增强。结论巨噬细胞中ＩＬ－４及Ｍ－ＣＳＦ基因的表达可以增强其抗肿瘤免疫功能。     

成纤维细胞介导的白细胞介素2基因疗法的免疫增强作用及其抗肿瘤效果

为了使白细胞介素２（ＩＬ－２）在体内持续有效地发挥生物学效应，作者探讨了成纤维细胞为介导途径的ＩＬ－２基因疗法以及该疗法在小鼠体内的抗肿瘤作用。将基因转染后、高分泌ＩＬ－２的成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋）包裹入胶原后移植入小鼠腹腔内，可使小鼠血清中持续性地存在一定水平的ＩＬ－２，并能非常显著地增强小鼠脾细胞的增殖反应、天然杀伤细胞（ＮＫ）活性和淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性、分泌细胞因子（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＩＬ－２）的水平，尤其有意义的是诱导出内源性的ＬＡＫ活性。ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋腹腔内移植后对腹水型肝癌小鼠有较显著的治疗效果，当与ＬＡＫ细胞腹腔内注射联合应用后，治疗效果更佳，表明成纤维细胞介导的ＩＬ－２基因疗法能通过增强机体的免疫功能发挥显著的抗肿瘤作用，而且当其与ＬＡＫ细胞过继回输合用后抗肿瘤作用更强。     

艾灸对荷瘤鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子、一氧化氮的影响

目的：观察艾灸对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）分泌能力的影响,探讨其抑瘤作用机理。方法：应用肿瘤细胞株制作移植瘤小鼠模型,施以艾灸治疗,采用结晶紫染色、双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、硝酸还原酶法检测Ｍφ分泌肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素１（ＩＬ－１）、一氧化氮（ＮＯ）水平。结果：艾灸明显抑制移植瘤小鼠肿瘤的生长,肿瘤抑制率达４１．０８％,并显著提高荷瘤小鼠Ｍφ分泌能力。结论：艾灸抑制肿瘤生长的作用与促进ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＮＯ的释放有密切关系。     

体内IFN—γ基因转染巨噬细胞对化疗小鼠免疫功能的影响

采用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法，将ＩＦＮ－γ真核表达质粒直接注射至经大剂量化疗后的小鼠腹腔内，可成功地转染腹腔巨噬细胞（ＭΦ），并表达基因产物，能刺激脾脏增生，促进淋巴细胞增殖，增加腹腔巨噬细胞数量，提高腹腔ＭΦ的细胞毒活性，诱导腹腔ＭΦ产生ＩＬ－１，ＴＮＦ和ＮＯ。实验结果提示：ＩＦＮ－γ基因转染ＭΦ可增强化疗后受损机体的免疫功能。     

银耳多糖对小鼠IL－2、IL－6、TNF－α活性及其mRNA表达的影响

目的：观察银耳多糖（ＴＰ）对小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ活性及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：分别用ＣＴＬＬ、７ＴＤ１和ＷＥＨＩ－１６４细胞株测小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ-α活性，用Ｎｏｒｔｈｅｒｒｎｂｌｏｔ印迹杂交法测上述细胞因子的ｍＲＮＡ表达。结果：银耳多糖（ＴＰ）１００ｍｓ／Ｌ可促进ＣｏｎＡ诱导的脾细胞培养上清１Ｌ－２的活性，该作用１２ｈ即可出现，２４ｈ达到高峰。单用仅呈现类似但较弱的作用。ＴＰ１００ｍｇ／Ｌ从１２ｈ起明显增强ＬＰＳ活化的小鼠腹腔巨噬细胞产生ＩＬ－６的能力。ＴＰ２５、１００ｍｇ／Ｌ可明显增强小鼠腹腔巨噬细胞ＴＮＦ－α的活性。ＴＰ可促进小鼠脾细胞中细胞因子ＩＬ－２、ＩＬ－６ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ的表达量，并且具有一定的剂量反应关系和时效关系，最适剂量为２００ｍｇ／ｋｇ，给药９ｄ，表达量最高。结论：ＴＰ通过促进ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ表达，而促进上述细胞因子的生成。     

联合应用白介素2和白介素6基因转染瘤苗抗肿瘤的实验研究

为了提高细胞因子基因转染瘤苗治疗肿瘤的效果，本实验观察了联合应用白细胞介素２（ＩＬ－２）基因转染瘤苗和白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染瘤苗治疗黑色素瘤实验性肺转移小鼠的效果，结果表明，联合治疗组荷瘤小鼠的肺转移结节数显著地少于单用瘤苗治疗组，其存活期也显著长于单一瘤苗治疗组，其脾脏细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性、天然杀伤细胞（ＮＫ）活性、淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性以及ＩＬ－２和ＴＮＦ分泌水平均非常显著地高于单一瘤苗治疗组水平。实验结果说明，ＩＬ－２基因转染瘤苗与ＩＬ－６基因转染瘤苗联合应用后，能更有效地激活免疫功能达到更佳的抗肿瘤效果。     

黄芪对小鼠免疫功能的影响

目的：观察黄芪对小鼠免疫功能的影响。方法：通过灌胃给药，建立免疫抑制模型，测定黄芪对三种细胞因子的影响。ＮＫ细胞活性用ＬＤＨ－释放法、ＴＮＦ－α用双抗体夹心法、ＩＬ－２用ＭＴＴ比色分析法测定。结果：黄芪可明显提高ＮＫ细胞活性、ＴＮＦ－α和ＩＬ－２水平。结论：黄芪对免疫功能有正向调节作用。     

头孢地秦对细胞因子及细胞因子mRNA表达的影响

目的：探讨头孢地对正常及金黄色葡萄球菌感染的败血症小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭ）肿瘤坏死因子与白细胞介素６（ＩＬ－６）分泌及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采集小鼠ＰＭ，体外给药，分离细胞培养上清。生物检测法测定ＴＮＦα，ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ－６；ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：头孢地秦使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性降低，使金黄色葡萄球菌感染小鼠ＰＭ４８ｈ２上清中ＴＮＦα活性升高。２００ｍ     

去氧萍蓬草碱在体外对免疫功能的影响

本实验发现去氧萍篷草碱（ｄｅｏｘｙｎｕｐｈａｒｉｄｉｎｅ，ＤＯＮ）在体外能浓度依赖性地抑制小鼠脾细胞和人扁桃体单个核细胞（ｈＴＭＮＣ）因丝裂原刺激的增殖反应，台盼蓝拒染法证明这种作用并非ＤＯＮ的细胞毒作用；ＤＯＮ对同种异型小鼠脾细胞诱导的增殖反应（双向或单向混合淋巴细胞反应）也有抑制作用。进一步研究表明，ＤＯＮ对小鼠脾细胞或ｈＴＭＮＣ培养上清中ＩＬ－２水平无明显影响，但对小鼠腹腔Ｍφ因ＬＰＳ刺激而产生ＩＬ－１和ＴＮＦ的水平有减低作用，该抑制作用可部分地解释ＤＯＮ抗炎作用的免疫学机理。     

IL-18联合IL-2诱导NK92细胞的实验研究

目的：探讨白细胞介素18（IL 18）联合白细胞介素2（IL 2）对自然杀伤细胞系NK92抗卵巢肿瘤作用的影响。方法：用不同浓度的IL 18联合IL 2（5?U/ml）体外诱导刺激NK92细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化。乳酸脱氢酶释放试验观察刺激前后NK92细胞及培养上清对SKOV3体外生长的抑制作用。ELISA测定NK92细胞杀伤活性最大时IFN γ、TNF α含量。结果：IL 18（25?ng/ml）+IL 2（5?U/ml）刺激后的NK92细胞与对照组比较,S期细胞增多,G0/G1期减少（P＜0.05）。效靶比为10∶1时,诱导后NK92细胞对SKOV3细胞作用4?h杀伤活性最高,IL 18+IL 2刺激前后的NK92细胞杀伤率分别为（42.3±4.82）%、（77.63±5.27）%。NK92培养上清36?h对SKOV3杀伤作用达到最高峰,刺激前后上清杀伤率分别为（21.2±3.49）%、（37.14±2.69）%。NK92细胞杀伤活性最大时,上清中IFN γ、TNF α水平明显升高（P＜0.05）。结论：IL 18联合IL 2可提高NK92细胞的抗肿瘤活性,为临床应用NK92细胞免疫治疗卵巢肿瘤提供了实验依据。     

Expression and cytotoxicity of a hum an interleukin-6 tum or necrosisfactor derivative fusion protein (5′ I L6- T N F~△) in vitro

Objective:To develop an agent that is more active against receptor bearing target cells without increasing the toxic effect on non target cells.Methods:By the use of molecular biology techniques,we designed and constructed a fusion protein 5′IL6 TNF △ by connecting the human interleukin 6 (hIL 6) gene and a human tumor necrosis factor α derivative (TNF △) gene through a synthetic linker sequence followed by subsequent expression in E.coli .Results:In cytotoxicity assay with myeloma cell line U266,the normal type of 5′IL6 TNF △ showed an antitumor activity 3 times higher than that of TNF △;and the antitumor activity of 5′IL6 TNF △ blocked by IL 6R was only 1/30 of that of normal type of 5′IL6 TNF △.Meanwhile,the 5′IL6 TNF △ blocked by anti TNF antibody did not show any cytotoxicity to U266 cells.In activity assay with L929 cells,the toxic effect of the fusion protein was found 1/22 of that of TNF △.Conclusion:The 5′IL6 TNF △ fusion protein might be a useful cytotoxic agent in cancer treatment.     

对 MEDLINE与 CBM disc光盘数据库收录白求恩医科大学论文的统计分析

生物医学文献分析检索系统(MEDLINE)和中国生物医学文献光盘数据库(CBMdisc)以其检索快捷、灵活方便颇受广大医学科技情报工作者及科工作者的欢迎.已广泛用于临床医学文献检索和科学研究[1].而医学论文的发表是医学科研成果转化为生产力的重要传播手段,亦是记载医教研信息的重要形式,因此,发表论文的数量与质量可作为客观评价一个部门或一个研究机构学术水平的主要标之一[2].就此本文作者对白求恩医科大学在MED-LINE光盘数据库(1986～1998.10)和CBMdisc光盘数据库(1983～1998.9)载文情报进行统计分析,并提出了建议.     

NO影响CAP化疗损伤效应及其机制研究

目的 探讨一氧化氮是否提高CAP对L1210细胞损伤效应及其机制研究。方法 将L1210细胞加入隔离培养器内与3T3细胞共培养，收集各组L1210细胞12、24、48、72h的标本，台盼蓝染色观察直接损伤的作用，TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况，流式细胞检测细胞周期观察细胞的增殖状态。结果 质粒转染组L1210细胞较空载体组台盼蓝拒染率下降更快，12h开始两组差异有统计学意义（P〈0．05）。DEVD-CHO在24h后能够提高台盼蓝拒染率（P〈0．05）。质粒转染组的L1210细胞凋亡率升高更快，与空载体转染组各时相点有显著差异（P〈0．05）。DEVD-CHO能够使细胞凋亡率下降（P〈0．05）。CAP作用4h后各组L1210细胞周期G1期显著升高，S期迅速下降，质粒转染组比空载体转染组G1期升高快，加入DEVD-CHO4h后G1期上升较单纯质粒转染组慢（P〈0．05）。结论 NO可增强CAP对L1210细胞的直接损伤作用：促进细胞凋亡，使CAP对细胞G1期的阻滞作用更敏感、持续时间更长。上述作用也与Caspase-3的活化有关。     

抗Mac-1单克隆抗体和细胞因子对利什曼原虫入侵和细胞内生存的抑制作用

目的：探索细胞内利什曼原虫的入侵、生存机制,为研制阻断利什曼原虫与巨噬细胞结合的新型抗利什曼药物以及利什曼病免疫预防和免疫治疗的研究提供理论基础。方法：采用抗Ｍａｃ １单克隆抗体（Ｍ１／７０和Ｍ１８／２）和重组的ＩＦＮ γ,ＴＮＦ α和ＩＬ ３处理巨噬细胞,观察经上述因子处理后的巨噬细胞对杜氏利什曼原虫前鞭毛体入侵和无鞭毛体在细胞内生存的影响。结果：经Ｍ１／７０和Ｍ１８／２单抗处理后巨噬细胞对杜氏利什曼原虫的易感性明显降低,其原虫感染率和受染巨噬细胞内入侵的原虫数量减低,原虫对巨噬细胞的入侵过程和速度也减慢。Ｍ１／７０和Ｍ１８／２两种单抗同时应用,则对原虫入侵巨噬细胞的抑制作用更为显著。通过对实验中所用的三种细胞因子活化巨噬细胞能力的观察发现,重组的ＩＦＮ γ或ＴＮＦ α均可激活巨噬细胞,提高巨噬细胞的杀原虫活性,且上述两种细胞因子联合对巨噬细胞的活化具有协同增强作用。但重组的ＩＬ ３不仅不能激活巨噬细胞而且尚抑制ＩＦＮ γ对巨噬细胞的活化作用。通过测定活化巨噬细胞内氧化氮产物（ＮＯ２）的生成量,观察ＮＯ２生成与巨噬细胞对原虫杀伤活性的关系,进一步探索了活化巨噬细胞对细胞内原虫的杀伤机制。结论：作用于巨噬细?     

Expression and cytotoxicity of a human interleukin-6 tumor necrosis factor derivative fusion protein (5＇IL6-TNF△) in vitro

Objective :To develop an agent that is more active against receptor-bearing target cells without increasing the toxic effect on non-target cells. Methods :By the use of molecular biology techniques,we designed and constructed a fusion protein 5＇IL6-TNF△ by connecting the human interleukin-6 (hIL-6) gene and a human tumor necrosis factor α derivative (TNF△) gene througha synthetic linker sequence followed by subsequent expression in E. Coli. Results: In cytotoxicity assay with myeloma cell line U266, the normal type of 5＇ IL6-TNF△ showed an antitumor activity 3 times higher than that of TNF△;and the antitumor activity of 5＇IL6-TNF△ blocked by IL-6Rwas only 1/30 of that of normal type of 5＇ IL6-TNF△. Meanwhile,the 5＇IL6-TNF△ blocked by an ti-TNF antibody did not show any cytotoxicity to U266 cells. In activity assay with L929 cells ,the toxic effect of the fusion protein was found 1/22 of that of TNF△. Conclusion: The 5＇IL6-TNF△fusion protein might be a useful cytotoxic agent in cancer treatment.     

灼伤病人外周血IL—6、TNF的水平与休克相互关系的研究 

采用Ｂ９细胞增殖的ＭＴＴ法及Ｌ９２９细胞结晶紫比法，对１０例Ⅱ度以上的灼伤病人检测４个不同时期外周血ＩＬ—６、ＴＮＦ含量。结果表明，正常人血清中ＩＬ—６、ＴＮＦ含量＜１０ｋＵ／Ｌ（１２例），与灼伤病人区别明显（Ｐ＜０．０１）。灼伤病人外周血ＩＬ—６、ＴＮＦ的水平与灼伤的面积、严重程度、临床分型以及休克发生发展有密切的相关性，而ＩＬ—６、ＴＮＦ含量变化早于休克的发生，其变化有良好的规律性．提示外周血ＩＬ—６、ＴＮＦ含量变化可作为判断灼伤休克的一个指标。     

一株IL—11 cDNA转染的成纤维细胞体外促造血活性的鉴定

目的：为了探讨ＩＬ－１１基因修饰成纤维细胞的体外促造血活性及其在造血系统基因治疗中的应用前景。方法：将含ＩＬ－１１ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３细胞，获得了高表达ＩＬ－１１的亚克隆１Ｅ７，通过造血祖细胞集落形成实验及细胞增殖实验对１Ｅ７在体外的促造血活性做了初步的鉴定。     

以逆转录病毒为载体的IL-2基因转染K562细胞的研究

目的研究以逆转录病毒为载体将IL-2基因转入K562细胞及表达情况.方法应用脂质体介导的基因转移法,将质粒PGEN/IL-2导入包装细胞PA317,将K562细胞与PA317/IL2细胞共培养,检测IL-2cDNA整合,mRNA转录情况,以IL2依赖性CTLL-2细胞测定培养细胞上清中IL-2产量,比较转染前后细胞的体外生长情况和致瘤性.结果IL2 cDNA成功整合入K562细胞基因组中并稳定表达,K562/IL-2细胞培养24h上清中IL-2活性为100U/ml,体内外观察均见细胞生长减慢.结论以脂质体介导的以双顺反子逆转录病毒为载体的基因转移方法,可成功地将人IL2基因转入人白血病细胞株K562,并持续分泌高活性的IL-2,为下一步将IL-2基因转入CML造血细胞的研究打下基础.     

黄芩苷对小鼠巨噬细胞干扰素基因刺激因子通路活化的影响

目的: 研究黄芩苷对小鼠骨髓源巨噬细胞（bone marrow derived macrophages,BMDMs）中干扰素基因刺激因子（stimulator of interferon genes,STING）通路的效应。方法: 将C57BL/6小鼠骨髓细胞经巨噬细胞集落刺激因子诱导,培养制备BMDMs,将细胞分为6组：对照组（二甲基亚砜）、黄芩苷组、环鸟苷酸-腺苷酸（cGAMP）组、黄芩苷+cGAMP组、脂多糖组、黄芩苷+脂多糖组。用显微镜观察各组BMDMs的细胞形态;流式细胞术检测各组BMDMs表面CD80、CD86的表达;Griess法检测BMDMs培养上清液中一氧化氮的含量;ELISA法检测BMDMs IL-6、TNF-α和IFN-β的分泌。结果： 黄芩苷对BMDMs 的形态和生长状态无明显影响;黄芩苷抑制活化BMDMs的一氧化氮产生,负向调控BMDMs表面CD80、CD86的表达水平,抑制STING通路活化后巨噬细胞IL-6、TNF-α和IFN-β的分泌。结论： 黄芩苷抑制BMDMs中cGAMP激活的STING通路活化。