电针对脑缺血再灌注大鼠神经黏蛋白表达和脑含水量的影响

目的 观察电针对易卒中型肾血管性高血压大鼠脑(RHRSP)缺血后再灌注不同时间神经黏蛋白表达、脑组织含水量的干预作用.方法 将180只SD大鼠先用环形银夹狭窄双侧肾动脉,制成RHRSP,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)脑缺血再灌注模型.随机分为空白组、假手术组、电针组和对照组,分别观察缺血2 h后再灌注1 d、7 d、14 d、30 d大鼠神经黏蛋白、脑组织含水量的变化.结果 脑缺血再灌注1 d,对照组脑缺血区周围出现神经黏蛋白阳性表达细胞,7 d明显增多,14 d表达到高峰,30 d下降.电针组神经黏蛋白阳性表达细胞在7 d、14 d、30 d时较对照组明显减少(P<0.05或P<0.01),脑缺血1 d、7 d,电针组大鼠脑组织含水量明显小于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 电针减轻脑缺血再灌注损伤后脑水肿,促进缺血损伤区神经功能修复,可能与其下调神经抑制因子神经黏蛋白的表达机制密切相关.     

电针调节脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层Nrf2蛋白的表达

目的观察电针对大脑中动脉缺血再灌注模型大鼠Nrf2蛋白表达的影响。方法根据数字随机表将15只SD健康雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各5只。用改良线栓法制备大鼠局灶性缺血再灌注模型,再灌注的同时给予电针组大鼠"百会"、"大椎"两穴30 min电针(深度均为10 mm,连续波,频率3 Hz,电流强度1³ m A),免疫组织化学法检测Nrf2蛋白的表达,采用图象分析系统测定视野中Nrf2蛋白阳性细胞的平均灰度、平均光密度。结果与假手术组相比,模型组大脑皮层锥体细胞层表达Nrf2蛋白的阳性细胞数稍有增多,但尚未有统计学意义,着色亦无明显改变;而电针组可见到大量的Nrf2蛋白阳性细胞数,与模型组、假手术组相比,有显著统计学差异(P<0.01,P<0.05),平均灰度显著降低,平均光密度显著升高(P均<0.01)。结论电针可通过增加Nrf2蛋白的表达来发挥其调节抗氧化酶水平以达到保护机体,免受自由基损伤的目的。     

天麻及电针对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨天麻及电针对大鼠脑缺血／再灌注损伤的保护作用。 方法 SD成年大鼠38只,体重250~300 g。采用2×2析因设计,将大鼠随机分为脑缺血／再灌注组、天麻组、电针组、电针中药结合组,每组8只大鼠;另设假手术组,为6只大鼠作为空白对照 按Zea Longa等的线栓法制作大鼠脑缺血模型。模型制造成功后,腹腔注射天麻超微粉及针刺大鼠"人中、百会"八,分别用放射免疫法、黄嘌呤氧化法、硫代巴比妥酸法测定血浆中的内皮素、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果 电针组和天麻组大鼠血浆内皮素[(187±16)μmol／L.(178±27)μmol／L]和丙二醛[(6.6±1.01)μmol/L,(5.9±0.9)μmol／L)]均明显低于脑缺血／再灌注组大鼠[(239±24)μmol/L.(8.9±1.3)μmol／L].P<0.01;而电针组、天麻组大鼠的SOD则显著高于脑缺血／再灌注组大鼠(P<0.05).电针中药结合组内皮素明显低于电针组(P<0.05),丙二醛不仅明显低于天麻组(P<0.05)和电针组(P<0.05),而且与假手术组差异无显著性意义。SOD明显高于电针组(P<0.05),并与假手术组比较差异无显著意义。天麻与电针联台应用对降低内皮素有交互作用,而对丙二醛和SOD的影响则表现为独立作用。结论 天麻及电针可明显提高脑缺血／再灌注损伤大鼠血浆中的SOD,降低内皮素及丙二醛含量,对脑     

低分子肝素对局灶性脑缺血大鼠再灌注后细胞凋亡及NMDA受体I型亚单位mRNA表达的影响

目的研究低分子肝素(LMWH)对局部脑缺血再灌注后脑组织中NMDA受体I型亚单位(NR1) mRNA表达及细胞凋亡的影响,探讨LMWH对缺血再灌注后神经元的保护作用及可能机制。方法参照Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),140只SD大鼠被随机分成假手术组、缺血再灌组(MCAO组)和LMWH干预组。每组大鼠再随机分成4组:分别在再灌注后6h、24h、48h、96h处死。进行TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡情况,并用原位杂交方法检测NR1 mRNA。结果MCAO组大鼠大脑皮质梗死灶的凋亡细胞和NR1 mRNA表达与假手术组比较明显增强(P<0.01),而LMWH干预组未能阻止再灌注后凋亡的发生,且阳性细胞数48h最多,与6h、24h比较有统计学意义(P<0.01),但与MCAO组比较有凋亡细胞数明显减少(P<0.01)。结论再灌注后脑组织中NR1 mRNA表达增强,与细胞凋亡密切相关。低分子肝素可能通过抑制NR1 mRNA的表达,抑制缺血半暗区的细胞凋亡。     

低分子肝素对局灶性脑缺血大鼠再灌注后细胞凋亡及NMDA受体Ⅰ型亚单位mRNA表达的影响

目的研究低分子肝素（LMWH）对局部脑缺血再灌注后脑组织中NMDA受体Ⅰ型亚单位（NR1）mRNA表达及细胞凋亡的影响，探讨LMWH对缺血再灌注后神经元的保护作用及可能机制。方法参照Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO），140只SD大鼠被随机分成假手术组、缺血再灌组（MCAO组）和LMWH干预组。每组大鼠再随机分成4组：分别在再灌注后6h、24h、48h、96h处死。进行TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡情况，并用原位杂交方法检测NR1 mRNA。结果MCAO组大鼠大脑皮质梗死灶的凋亡细胞和NR1mRNA表达与假手术组比较明显增强（P〈0．01），而LMWH干预组未能阻止再灌注后凋亡的发生，且阳性细胞数48h最多，与6h、24h比较有统计学意义（P〈0．01），但与MCAO组比较有凋亡细胞数明显减少（P〈0．01）。结论再灌注后脑组织中NR1mRNA表达增强，与细胞凋亡密切相关。低分子肝素可能通过抑制NR1mRNA的表达，抑制缺血半暗区的细胞凋亡。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TLR4表达的影响

目的 探讨眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑组织中TLR4蛋白表达的影响及作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.RT-PCR及免疫组化方法检测大鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA和蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组与模型组相比,TLR4 mRNA和蛋白表达则下调(P＜0.05).结论 眼针抑制脑皮层组织中TLR4的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

电针对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨电针对脑缺血再灌注大鼠皮质细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其mRNA表达的影响。方法雄性清洁级SD大鼠72只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组和电针组各24只。用改良Longa线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉脑缺血模型,缺血2 h,于再灌注开始后电针组针刺"百会"和"大椎"穴。各组于缺血再灌注24 h后行神经行为学评分和脑含水量测定,免疫组化染色法检测缺损侧皮层组织Bcl-2、Bax的蛋白表达,qRT-PCR检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的变化。结果模型组、电针组神经行为学评分均低于假手术组(P<0.01),与模型组比较,电针组的神经行为学评分升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组脑含水量明显增高(P<0.01),电针组的差异无统计学意义(P>0.05),较之模型组,电针组的脑含水量显蓍降低(P<0.01)。与假手术组比较,模型组、电针组Bcl-2蛋白及mRNA的表达均显著增多(P<0.05或P<0.01),电针组又高于模型组(P<0.05);较之假手术组,模型组Bax蛋白及mRNA表达显著上升(P<0.01),电针组无明显差异(P>0.05),电针组较模型组显著降低(P<0.01);Bcl-2/Bax及Bcl-2 mRNA/Baxm RNA的比值,模型组降低而电针组升高(P<0.01)。结论电针可以通过提升Bcl-2/Bax的比值使抗凋亡基因占据优势,从而抑制缺血再灌注区的细胞凋亡,减轻脑水肿,促进神经功能恢复。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织FADD表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠大脑皮层组织中FADD的表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。RT-PCR、免疫组化及Western印迹方法检测大鼠缺血侧脑皮层FADD的mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层FADD mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P<0.01),眼针组同模型组相比,FADD mRNA和蛋白表达则下调(P<0.05)。结论眼针抑制脑皮层组织中FADD的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。     

大鼠全脑缺血再灌注后脑红蛋白的表达

目的探讨大鼠全脑缺血/再灌注损伤后大脑皮质及海马回中脑红蛋白(NGB)的演变。方法将60只标准健康大鼠随机分为对照组(30只)与实验组(30只)。实验组采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血/再灌注损伤的模型。用免疫组织化学SABC法,原位杂交法检测大鼠皮质及海马区NGB的表达,测量其光密度值,用苏木素-伊红染色检测存活锥体细胞数。结果两组大鼠大脑海马区NGB及NGBmRNA表达在12、24、48h时与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05);实验组大鼠大脑皮质NGB及NGBmRNA光密度在缺血再灌注后3h较对照组无明显变化(P0.05),灌注后24h达高峰,与3、6、12、48h比较差异均有统计学意义(P0.05);实验组大脑海马区存活锥体细胞数随再灌注时间的延长而减少,各时间点两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论大鼠全脑缺血/再灌注后,NGB表达上调参与了脑神经元的保护。     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ICAM-1表达的影响

目的观察眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞间黏附因子(ICAM-1)表达的影响。方法 64只SD大鼠随机分为4组:正常组(未处理)、假手术组(同模型组,仅鱼线插入深度1 cm)、模型组(应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,鱼线插入深度1.8～2 cm)和眼针组(模型成功后取肝区、上焦区、下焦区、肾区进行眼针治疗20 min,每日2次),每组16只。于再灌注后3 h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达的变化。结果眼针治疗后可使大鼠神经功能缺损评分明显下降,并显著降低脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达(P<0.01)。结论眼针具有明显地改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与下调脑组织ICAM-1表达有关。     

电针治疗对大鼠脑缺血再灌注中Annexin A1表达的影响

目的探讨电针治疗在大鼠脑缺血再灌注损伤中对Annexin A1表达的影响。方法 SD大鼠32只,随机分为对照组、缺血再灌注组、电针组、假手术组,每组8只。检测Annexin A1在大鼠脑组织中的表达变化及AnnexinA1转位结果。结果大鼠大脑中动脉栓塞60 min再灌注24h后,可出现明显的神经缺损性行为,在脑缺血前后以电针治疗可明显改善大脑损伤性行为异常。在海马CA1、CA2、CA3、齿状回、皮质区,缺血再灌注组大鼠Annex-in A1的表达较对照组明显升高,电针组大鼠Annexin A1的表达较缺血再灌注组明显下降(P<0.05)。在海马CA1、CA3、皮质区,缺血再灌注组大鼠Annexin A1核转位和膜转位较对照组明显上升;在海马CA1、CA3区,电针组大鼠Annexin A1核转位和膜转位较缺血再灌注组明显下降(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后Annexin A1表达上调,Annexin A1出现核转位和膜转位现象,电针可以逆转Annexin A1表达和转位。电针有可能通过调节Annexin A1的核转位和膜转位来改变神经元的凋亡。     

电针对脑缺血再灌注后大鼠脑缺血区生长相关蛋白-43与神经蛋白聚糖表达的影响

目的 探讨电针治疗对脑缺血再灌注后大鼠脑缺血区不同时间点生长相关蛋白(GAP)-43及神经蛋白聚糖(Neurocan)表达的影响.方法 将60只健康成年SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=10)、大脑中动脉闭塞再灌注(MCAOR)组(n=25)和治疗组(n=25).用线栓法建立右侧MCAOR模型,治疗组选取人中、百会穴给予电针刺激.选取1、3、7、14、21 d五个时间点,应用免疫组化、RT-PCR方法检测缺血区皮层GAP-43及Neurocan阳性细胞及其mRNA的表达情况.结果 GAP-43及Neurocan在假手术组不表达,MCAOR后表达增加,且电针治疗组较MCAOR组表达差异显著(P<0.01).缺血2 h再灌注1 d MCAOR组出现GAP-43及Neurocan阳性表达细胞,并且呈先递增后减少的趋势.再灌注后7 d时,MCAOR组的GAP-43阳性细胞及其mRNA表达达到高峰,14 d时降至接近初始水平,但治疗组GAP-43表达仍维持较高水平.MCAOR组的Neurocan阳性细胞及其mRNA 7 d明显增多,14 d达高峰,21 d时下降,但仍高于假手术组水平(P<0.01);治疗组 Neurocan表达在缺血再灌注3、7、14、21 d较对照组显著减少(P<0.01).结论 电针上调脑缺血区GAP-43表达与下调Neurocan表达,可能是其促进脑损伤区中枢神经修复的重要机制之一.     

NMDA receptor surface mobility depends on NR2A-2B subunits

The NR2 subunit composition of NMDA receptors (NMDARs) varies during development, and this change is important in NMDAR-dependent signaling. In particular, synaptic NMDAR switch from containing mostly NR2B subunit to a mixture of NR2B and NR2A subunits. The pathways by which neurons differentially traffic NR2A- and NR2B-containing NMDARs are poorly understood. Using single-particle and -molecule approaches and specific antibodies directed against NR2A and NR2B extracellular epitopes, we investigated the surface mobility of native NR2A and NR2B subunits at the surface of cultured neurons. The surface mobility of NMDARs depends on the NR2 subunit subtype, with NR2A-containing NMDARs being more stable than NR2B-containing ones, and NR2A subunit overexpression stabilizes surface NR2B-containing NMDARs. The developmental change in the synaptic surface content of NR2A and NR2B subunits was correlated with a developmental change in the time spent by the subunits within synapses. This suggests that the switch in synaptic NMDAR subtypes depends on the regulation of the receptor surface trafficking.     

小檗碱对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的 探讨小檗碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能评分及脑梗死体积,以及Bcl--2、Caspase-3表达的影响.方法 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠随机分为模型组、小檗碱低、高剂量组(50,150 mg·kg-1·d-1)、假手术组(持续给药7 d,每日1次灌胃给药),脑缺血2 h再灌注24 h;分别在再灌注后3和24 h进行神经行为评分;并再灌注24 h后断头取脑.采用连续切片免疫组化技术检测脑组织中Bcl-2、Caspase-3表达的部位及数量.结果 小檗碱组神经功能评分明显低于手术对照组.脑梗死体积较模型组显著缩小.小檗碱组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Caspase-3免疫阳性细胞数与模型组相比差异明显(P<0.05);同时小檗碱高剂量组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Caspase-3免疫阳性细胞数与低剂量组比较差异显著(P<0.05).结论 小檗碱能明显减轻脑缺血再灌注损伤所造成的行为障碍,缩小梗死体积.可能通过上调皮质Bcl-2的表达、抑制Caspase-3的表达发挥脑保护作用.     

银丹心脑通对脑缺血再灌注大鼠海马区Bcl-2表达的影响

目的探讨银丹心脑通对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的保护作用机制。方法将40只SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组、对照组、药物组,每组10只。对照组及药物组造模前分别给予尼莫地平和银丹心脑通连续灌胃7d;采用线栓改良法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型;用免疫组织化学染色法测定各组脑组织中Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,药物组、对照组及模型组Bcl-2阳性细胞明显升高(P<0.01);与模型组比较,药物组和对照组Bcl-2阳性细胞明显升高(P<0.01);与对照组比较,药物组Bcl-2阳性细胞明显升高(P<0.01)。结论上调Bcl-2的表达,可能是银丹心脑通减少脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的作用机制之一。     

环维黄杨星D对高血压大鼠脑缺血再灌注神经肽mRNA表达的影响

目的 观察中药单体环维黄杨星D(cyclovirobuxine D,CVBD)对易脑卒中型肾血管性高血压大鼠 (RHRSP)脑缺血再灌注不同时间点脑组织神经肽Y(NPY)mRNA表达的影响.方法 应用环形银夹钳夹SD大鼠的双侧肾动脉,制成RHRSP 80只,再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型,并随机分为4组:空白组10只、假手术组10只、治疗组30只和对照组30只,治疗组和对照组分别于脑缺血6 h后,再灌注6 h、3、7天3个时 间点分别给予CVBD和生理盐水腹腔注射.用原位杂交等方法观察CVBD对脑缺血6 h后,再灌注6 h、3、7天大鼠脑组织NPY mRNA表达的影响.结果 治疗组大鼠脑缺血再灌注6 h、3、7天后,脑组织NPY mRNA阳性细胞表达均明显高于空白组和假手术组各相同时间点,但低于对照组同时间点(P<0.05,P<0.01).结论 CVBD对RHRSP脑缺血再灌注细胞损伤的保护作用,可能与其下调NPY mRNA表达等机制有关.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase—3蛋白表达的影响

目的在大鼠脑缺血再灌注损伤发生后,用自由基清除剂依达拉奉对其进行治疗,监测再灌注不同时间点脑组织Cas-pase-3蛋白表达情况。研究依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作短暂、局灶性脑缺血再灌注模型。分为正常组及假手术组(对照组)、脑缺血再灌注对照组(缺血组)、依达拉奉治疗组(治疗组),分别于缺血1h后进行再灌注。治疗组于再灌注后30min腹腔内及皮下各注射依达拉奉1次(按依达拉奉3mg/kg),30min后重复一次。设再灌注后2h、6h、12h、24h、48h不同时间点,各时间点以0.4%戊巴比妥钠深度麻醉后快速断头法将大鼠处死,以4%多聚甲醛灌注固定后取脑,行免疫组化检测各时间点脑组织Caspase-3表达阳性细胞数。结果缺血组再灌注后2h在大脑额叶和顶叶皮质和海马即可见到Caspase-3蛋白表达的阳性细胞,12h达高峰,24h后开始下降。治疗组各时间点Caspase-3表达水平较对照组明显降低(P<0.01)。结论依达拉奉可抑制Caspase-3的表达,对缺血再灌注损害的脑组织有明显的保护作用。     

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的：探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶（MPO）含量。结果：大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加（P〈0.05）,应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降（P〈0.05）。结论：纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。