5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡机制影响的初步探讨

Objective To investigate the of 5-fluorouracil effects on the expression of Smad7,TGF-β receptorⅠ,Bcl-2 and Bax in keloid fibroblasts.Methods After primary culture of keloid fibroblasts,4-6 passages of cells were inoculated in 5 different concentrations of 5-fluorouracil(10,20,40,80,160μmol/L)for 24,48 and 72 hours.Proliferative ability of keloid fibroblasts was detected by MTT assay.Expression of Smad 7,TGF-βreceptorⅠ,Bcl-2 and Bax in keloid fibroblasts was measured by Western blot.Results During MTT,5-fluorouracil did not affect cell viability at 24 hour at the concentration of 10 and 20 μmol/L.Compared with the control group,no significant difference was detected(P＞0.05).At other concentrations,fibroblast death was visible in each group(P＜0.01).Western blot analysis showed that the expression of Smad7 significantly decreased and the expression of TGF-β receptor Ⅰ significantly increased in the TGF-β1 group compared with the blank control group(P＜0.0 1).5-fluorouracil could significantly enhance the expression of Smad7(P＜0.01).There was a remarkable decrease of the Bcl-2 expression and marked increase of the Bax expression in different concentrations of 5-fluorouracil compared with the control group(P＜0.05).But,5-fluorouracil did not show any effect on the synthesis of TGF-β receptor Ⅰ.Conclusion 5-fluorouracil could inhibit proliferation and induce apoptosis on human keloid fibroblasts in vitro.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态。方法 采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术，检测24例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态。以每10个高倍镜（400倍）视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数，利用配对t检验进行统计学处理。结果 24例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数／平均增殖指数，经配对t检验具有高度显著性差别。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的　探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态。方法　采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术 ,检测 2 4例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态。以每 10个高倍镜(40 0倍 )视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数 ,利用配对t检验进行统计学处理。结果　 2 4例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数 /平均增殖指数 ,经配对t检验具有高度显著性差别。结论　瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态.方法采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术,检测24例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态.以每10个高倍镜(400倍)视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数,利用配对t检验进行统计学处理.结果 24例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数/平均增殖指数,经配对t检验具有高度显著性差别.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用.     

氧化苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究氧化苦参碱(OMT)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFB)的影响及其机制.方法 将不同浓度的OMT作用于HKFB,分别培养24、48、72h后采用四唑盐比色法(MTT)检测HKFB增殖活性,末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 当氧OMT浓度大于1.0mg/ml时,体外培养HKFB增殖受到抑制、出现凋亡;当OMT浓度小于1.0mg/ml时,其对HKFB的增殖及凋亡无明显影响.结论 一定浓度的OMT可以抑制HKFB增殖并促进其凋亡,提示OMT具有潜在的治疗瘢痕疙瘩作用.     

RNA干扰Survivin基因表达对瘢痕疙瘩中成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰Survivin基因表达对癜痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的基因治疗提供实验依据.方法 构建靶向Survivin的siRNA表达质粒,利用Lipofectamine TM 2000转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞;采用RT-PCR、Western blot技术检测成纤维细胞中Survivin基因的被干扰情况及Caspase-3基因的表达情况;利用MTT法、流式细胞仪检测成纤维细胞的增殖与凋亡情况.结果 靶向Survivin的序列特异件的siRNA对成纤维细胞中Survivin基因表达的抑制率:在mRNA水平为59.86%和82.57%,在蛋白质水平分别为48.76%和72.53%.Caspase-3基因的表达和活性显著增加(P＜0.01).转染靶向Survivin的RNAi表达质粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制较显著(P＜0.05).Annexin V-FITC/P1双染法显示,干扰Survivin基因表达后成纤维细胞的调亡率高于对照组(56.36%,P＜0.05).结论 所构建的靶向Survivin的RNAi质粒可有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Survivin基因的表达,通过Survivin基因表达的下调激活Caspas-3基因活性,可显著抑制成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,为瘢痕疙瘩的基因治疗开辟一新途径.     

冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其诱导凋亡的机制.方法 采用不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的成纤维细胞,在不同的时间用MTT法检测冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖抑制作用,用Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化,用比色法检测Caspase-3活性变化.结果 浓度为20、40、80 μmol/L冬凌草甲素加入瘢痕疙瘩成纤维细胞中48 h,其抑制率[(20.47±2.29)%、(25.44 d-2.62)%、(44.37±0.59)%]和凋亡率[(10.23±1.83)%、(16.03±2.21)%、(30.83 4-3.43)%]呈明显的浓度依赖性,与空白对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.01);而线粒体膜电位的荧光强度(564.43±27.17、421.54±18.94、288.43±15.29)呈明显下降趋势,与空白对照组(757.24±28.86)比较,其差异有统计学意义(P<0.01);Caspase-3活性(33.46±3.97、45.43±10.87、68.44±15.32)呈明显增强趋势,与空白对照组(19.76±2.43)比较,其差异有统计学意义(P<0.01).结论 冬凌草甲素可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并呈明显的时间和浓度依赖性.其机制与降低线粒体膜电位继而诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡有关.     

反义TGF-β1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的研究

目的 应用反义技术抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）体外增殖,为应用基因治疗手段改善创伤愈合提供实验依据。方法 应用脂质体将反义TGF－β1转染至KF,通过细胞计数绘制细胞生长动力学曲线,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 ①转染反义TGF－β1的KF体外增殖明显降低。②与未转染反义TGF－β1的KF相比,转染反义TGF－β1的KF凋 亡发生率明显增高（差异有显著性意义,P＜0．05）。结论 反义TGF－β1可抑制体外培养的KF增殖,并促进KF的凋亡。     

手术联合5-氟尿嘧啶与糖皮质激素治疗儿童腹股沟瘢痕疙瘩

目的探讨手术联合5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracll，5-FU）与糖皮质激素注射治疗儿童腹股沟瘢痕疙瘩的效果。方法18例患者．共19个腹股沟瘢痕疙瘩，平均病史2、7年。手术切除瘢痕疙瘩，术后2～3周将0.05ml 5-FU注射液与1ml复方倍他米松注射液和1ml 2％利多卡因混合后适量注射入伤口内，以后逐渐降低5-FU和复方倍他米松注射液浓度并延长注射间歇期。平均治疗时间为8个月。结果手术联合5-FU与糖皮质激素混合注射治疗儿童腹股沟瘢痕疙瘩有效率为100％，其中完全治愈者72.2％，效果良好者27．8％。结论手术联合5-FU与糖皮质激素注射是治疗儿童腹股沟瘢痕疙瘩安全有效的方法。     

自制中药提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨自制中药提取物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）增殖的影响。方法：在体外培养的人KFB、正常皮肤成纤维细胞（NFB）培养液中加入不同浓度的自制中药水提物、醇提物,采用倒置显微镜、CCK-8试剂盒及生化分析仪对成纤维细胞的形态、增殖活性、生长状况及乳酸脱氢酶（LDH）活性进行观察与测定。结果：在一定浓度中药提取物的作用下,KFB形态发生改变,增殖活性降低,LDH活性增高;其中醇提物抑制KFB增殖较水提物更有效,KFB对中药的抑制反应比NFB更敏感。结论：自制中药可能通过抑制KFB增殖、细胞毒性作用等而发挥治疗瘢痕疙瘩的作用。     

抗血管生成对瘢痕疙瘩成纤维细胞增生和凋亡的影响

目的 探讨人工抗血管生成对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增生和凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的抗血管治疗提供实验依据.方法 手术切除人瘢痕疙瘩1条,将其分成30块,分别种植于裸鼠皮下,其中24块成活,分成3组,应用促血管内皮生长因子(VEGF组)、血管内皮抑制素(Endostar组)和0.9%的氯化钠溶液(对照组)干预瘢痕疙瘩微血管数量...     

TRADD基因转染增生性瘢痕与瘢痕疙瘩成纤维细胞并诱导其凋忘的实验研究

目的 探讨含有TRADD基因的重组腺病毒转染增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞,对纤维细胞凋亡特性的影响.方法 利用分子克隆技术将TRADD基因转入Adeasy腺病毒载体中,经TNF预处理后,用重组腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞、增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞,观察其对3种细胞凋亡率的影响.利用生长曲线、流式细胞仪检测转染前后3种成纤维细胞凋亡的情况.结果 含有TRADD基因的腺病毒载体转染增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞后,细胞生长速度变慢,流式细胞仪显示细胞凋亡率增加.结论 在TNF预处理的情况下,TRADD能提高增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡率.     

灵菌红素通过促进Bim调控人乳腺癌细胞凋亡

目的探讨Bim在灵菌红素调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡中发挥的作用。方法培养人乳腺癌MCF-7细胞、采用灵菌红素处理MCF-7细胞,应用MTT检测细胞活力增殖及流式细胞计数检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot检测Bim mRNA和蛋白表达情况。结果灵菌红素能抑制MCF-7细胞增殖,并诱导MCF-7细胞凋亡,效果呈时间和浓度依赖性(P0.05)。灵菌红素处理后MCF-7细胞S期显著减少、增殖指数下降,G1期显著增加(P0.05)。灵菌红素促进MCF-7细胞内促凋亡蛋白Bim表达升高,细胞凋亡率亦显著上升;沉默Bim能拮抗灵菌红素对MCF-7细胞凋亡的促进作用(P0.05)。结论灵菌红素通过上调Bim从而抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和促进其凋亡。     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨复方消瘢醑对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗瘢痕提供实验依据. 方法以氢化可的松为实验对照,在体外培养的6例瘢痕疙瘩和6例正常皮肤成纤维细胞培养液中加入不同剂量的消瘢醑,利用3H-TdR掺入法检测12 h,24 h,48 h瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)增殖活性.结果 10、100、1 000 μg/ml消瘢醑和1×10-7 mol/L氢化可的松在12、24、48 h均可抑制NFB和KFB的增殖,P＜0.05.氢化可的松对KFB的抑制作用与NFB相似.10 μg/ml和100 μg/ml消瘢醑对NFB和KFB增殖的抑制与氢化可的松相似. 结论消瘢醑能抑制成纤维细胞的增殖,可能起到治疗瘢痕过度增生的作用.     

腺病毒介导的Wt-p53基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨野生型p53（wtp53）基因对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）增殖的影响。方法 通过腺病毒载体将wt-p53基因转染至KFB中，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测转染组与非转染组KFB中wt-p53的mRNA表达；通过间接免疫荧光法检测转染组与非转染组KFB中wt-P53蛋白表达；转染后1～6d用台盼蓝染色法计数活细胞数，并绘制生长曲线；采用流式细胞仪检测两组细胞生长周期各时相分布。结果 两组细胞中wt-p53的mRNA表达相差明显，转染组细胞中wt-P53蛋白表达明显强于非转染组；转染组细胞G0～G1期比例明显高于非转染组（P〈0．05），而G2～M期比例明显低于非转染组（P〈0．05）。结论 wt-p53基因能明显抑制体外培养的KFB增殖。     

高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞Smad7的表达及姜黄素对其表达的影响

目的：观察高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞（MC）smad7的表达及姜黄素对Smad7表达的影响。方法：MC分6组，对照组给予正常培养液，4组给予含30mmol／L葡萄糖的培养液，分别于6、12、24、48h后收集细胞，另1组给予含30mmol／L葡萄糖和33．33μmol／L姜黄素的培养液共孵育6h后收集细胞。分别用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）和Western杂交分析法检测各组系膜细胞Smad7 mRNA和蛋白的表达情况。结果：正常MC有丰富的Smad7 mRNA表达，高糖刺激后表达明显增加，于6h达到高峰，Smad7蛋白的变化趋势与mRNA相同。MC加姜黄素共孵育后，Smad7 mRNA表达增加，高糖刺激6h组加或不加姜黄素，其吸光度相对值分别为1．113±0．124、2．235±0．356，Smad7蛋白吸光度值分别为12556±1335、24336±1866。结论：高糖刺激下，系膜细胞Smad7mRNA和蛋白表达呈时间依赖性，姜黄素可诱导高糖刺激下的系膜细胞Smad7表达，从而抑制转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）目的基因的转录。