HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果雷公藤内酯醇在5~120μg/mL,线性关系良好(r=0.9981)。平均回收率96.5%(n=9)。RSD3%。结论本方法重现性好,灵敏度高。     

雷公藤内酯醇抑制脂多糖诱导的PC-12细胞COX-2的表达

 目的　了解雷公藤内酯醇(TP)对PC-12细胞增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)及合成前列腺素E₂ (PGE₂ )的影响 ,探讨TP应用于痴呆治疗的可能机制。方法　采用神经生长因子 (NGF)诱导培养PC-12细胞 ,用不同浓度的TP(0,0.28×10^-6,2.8×10^-6,2.8×10^-6mol·L^-1)预处理后 ,加或不加脂多糖(LPS),分别用氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法及蛋白免疫印迹 (Western-blot)法检测PC-12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE² 的水平、细胞COX-2mRNA及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 (NF-κB)活性。结果　TP对LPS诱导的PC-12细胞的COX-2mRNA ,蛋白表达 [空白对照与不同浓度下分别为[(0.34±0.12 )×10^-6,(1.92±0.26)×10^-6,(1.78±0.32)×10^-6,(1.14±0.22)×10^-6,(0.48±0.14 )×10^-6mol·L^-1,P <0.01]及PGE₂ 的合成 [分别为(2.28±0.32)×10^-6,(32.86±6.23)×10^-6,(31.28±5.44)×10^-6,(18.43±3.92)×10^-6,(4.18±1.79)×10^-6mol·L^-1,P<0.01]具有不同程度的抑制作用,与TP浓度(0～28×10^-6mol·L^-1)呈明显正相关性(分别为r=0.94和r=0.92),且对LPS激活的PC-12细胞的核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用[分别为(0.16±0.08)×10^-6,(1.39±0.18)×10^-6,(1.09±0.14)×10^-6,(0.52±0.15)×10^-6,(0.28±0.09)×10^-6mol·L^-1,P<1.01]。实验未观察到TP对PC-12细胞增殖的影响。结论TP可显著抑制LPS诱导的PC-12细胞COX-2细胞COX-2的表达及其产物PGE₂的合成,这种作用可能通过TP抑制PC-12细胞核转录因子NF-κB活性而实现。     

雷公藤氯内酯醇研究进展

雷公藤氯内酯醇是从雷公藤值物中分离得到的环氧二萜内酯化合物，足雷公藤中的主要活性物质，本文从生源、半合成、药理等三个方面对该化合物进行全面介绍。     

雷公藤内酯醇抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡作用初探

目的：初步探讨雷公藤内酯醇诱导人卵巢癌细胞株Caov-3细胞的凋亡作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测雷公藤内酯醇对人卵巢癌细胞株Caov-3的生长抑制作用；用透射电镜观察细胞超微结构的变化；以AnnexinV—FITC标记法定量检测细胞凋亡；以蛋白印迹分析雷公藤内酯醇对Caspase3蛋白表达的影响。结果：雷公藤内酯醇能够抑制Caov-3细胞的增殖，且抑制率具有浓度和时间依赖性；雷公藤内酯醇处理Caov-3细胞后，光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞；Annexin V—FITC标记法的定量检测进一步证实了雷公藤内酯醇诱导细胞调亡的作用；蛋白印迹检测表明雷公藤内酯醇可使Caspase3表达变化。结论：雷公藤内酯醇对人Caov-3细胞系具有较强的直接抑制作用，可以诱导癌细胞凋亡，可能与其调节癌细胞Caspase-3蛋白活化有密切的关系。     

HPLC法检测雷公藤药材中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立测定雷公藤药材中雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤醇提物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：PhenomenexLunaC18（4．6mm×250mm,5m）;流动相：甲醇-水;梯度洗脱：0min（甲醇40％）-30min（甲醇50％）;流速1．0mL·min^-1;检测波长218nm;柱温：35℃。结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,25～400μg·ml^-1范围内有良好的线性关系,平均回收率为98．17％。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤药材中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

雷公藤内酯醇对急性重症胰腺炎大鼠全身炎症反应肺损伤的影响

目的:明确雷公藤内酯醇对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠全身炎症反应肺损伤的作用机制。方法:采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法复制SAP肺损伤模型。动态观察注射术后10h各组大鼠血清淀粉酶、TNF-α肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)在血清中的水平,胰、肺组织NF-kB活化表达水平情况及术后24h大鼠的死亡率;HE染色观察胰腺及肺病理损伤。结果:与假手术组比较,模型组血清淀粉酶、TNF-α与IL-6蛋白表达升高、且胰腺和肺组织中NF-kB活性显著升高;与模型组比较,雷公藤内酯醇治疗组上述指标均明显降低,胰腺及肺组织损伤减轻,差异均有统计学意义(P0.05);术后24h雷公藤内酯醇治疗组大鼠死亡率低于模型组(P0.05)。结论:雷公藤内酯醇可能是通过抑制NF-κB活性表达、下调TNF-α、IL-6等炎症因子表达抑制全身炎症反应(SAS),从而对SAP有治疗作用,对SAP肺损伤更有一定保护作用,降低SAP大鼠死亡率。     

HPLC法检测雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立雷公藤超声提取物中测定雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤超声提取物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：大连江申公司C 18柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）;检测波长：218nm;流速：1.0m l.min^-1;柱温：30℃;结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,线性范围为0.96-11.52μg/m l（r=0.9997）,平均回收率为97.82%。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

紫云金对雷公藤内酯醇引起静脉炎的作用

紫云金系紫草、白芷、冰片、银花等的醇提物,ig-紫云金2－4g/kg 对雷公藤内酯醇引起的小鼠尾静脉炎、大鼠足跖肿胀、小鼠耳廓水肿及疼痛反应均有显著的抑制作用。提示,紫云金对雷公藤内酯醇iv引起的静脉炎有防治作用。     

雷公藤内酯醇对足细胞和肾小管上皮细胞保护作用的研究

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）系卫矛科雷公藤属多年生藤本植物的全株,其主要药理作用为抗炎症、抗增殖、抗肿瘤、抗生育等,对它的研究和利用几乎涉及了大部分医、药基础和临床学科［1］。迄今为止,从该属植物中提取到100余种活性成分,主要为生物碱类、二萜类、三萜类、倍半萜类及糖类［2］,其中分离得到的单体大多具有抗炎和免疫抑制活性。近年来,研究发现雷公藤的疗效机制除了其抗炎和免疫抑制作用外,可能还与它能显著改善和修复细胞病变有关［3,4］。基于此,本文将以二萜内酯化合物中的代表性单体雷公藤内酯醇（Triptolide, T10,又名雷公藤甲素）对足细胞和肾小管上皮细胞保护作用的最新研究进展进行综述。     

雷公藤微囊片中雷公藤内酯醇的含量测定

雷公藤微囊片主要有效成分为雷公藤内酯醇(以下简称T—d)。有关该成分的定量分析有报道用薄层扫描法,但薄层扫描仪在国内尚无法普及,测定波长用218nm,干扰因素较多;或用kedde试剂显色后扫描,显色剂的用量,颜色均匀度等等,都会影响测定结果。为此,我们改用薄层比色法,结果较满意,现报道如下。     

黄芩苷对黑质内注射三氯化铁所致中脑损毁的保护作用

目的 探讨黑质部位注射FeCl_3制备帕金森病模型的可行性,并观察黄芩苷的保护作用.方法 雄性Wistar大鼠,黄芩苷组术前灌胃黄芩苷(78 mg·kg~(-1)·d~(-1))1周;模型组和黄芩苷组均单侧黑质定向注射FeCl_3(40μg)造摸,术后第5周中脑黑质病理切片行免疫组化分析酪氨酸羟化酶(TH);铁染色观察中脑黑质铁含量.结果 ①造模后2～3 d,动物头、身体向注射对侧倾斜,部分动物自发向注射对侧旋转,有些伴有抽搐和强直.术后7 d尚见有不同程度类帕金森病表现,震颤、弓背;黄芩苷组死亡率(模型组46%,黄芩苷组36%)降低.②注射侧中脑见明显的铁沉积,脑组织损毁严重.而黄芩苷组未见这一现象.③注射侧黑质多巴胺能神经细胞明显缺失.黄芩苷预防给药1周没能阻止这种损伤.结论 铁剂黑质注射造成的中脑损毁严重,动物有类帕金森病表现.黄芩苷能阻止铁在中脑沉积及所造成的损毁,显示明显的保护作用.     

苁蓉总苷对MPTP帕金森病模型小鼠脑黑质多巴胺能神经元保护作用的研究

目的　探讨苁蓉总苷对MPTP帕金森病(PD)模型小鼠脑黑质多巴胺能(DA)神经元的保护作用。方法 将小鼠随机分为正常组、模型组、苁蓉总苷高（400 mg/kg）、中（200 mg/kg）、低（100 mg/kg）剂量组,各组在造模前3天灌服相应药物;采用MPTP（30 mg/kg）连续5天腹腔注射制作小鼠慢性PD模型,运用爬竿试验定量组织化学检测小鼠的神经行为,免疫组化法测定小鼠脑纹状体酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）阳性纤维表达以及黑质TH神经元数量的变化。结果 在造模后7天和14天时,与模型组比较,苁蓉总苷高剂量组爬杆时间缩短（P＜0.01）,苁蓉总苷各剂量组纹状体TH阳性纤维的平均光密度值均明显增高（P＜0.01）;3个剂量组的苁蓉总苷均能对抗MPTP导致的TH阳性神经元数量减少,但只有高剂量组在两个时间点上与模型组的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 苁蓉总苷能够显著改善PD模型小鼠的神经行为、抑制脑黑质DA神经元的数量减少和纹状体TH表达的降低。     

人参皂苷Re对帕金森病小鼠保护作用--人参皂甙Re抗黑质神经元凋亡的机制初探

目的 :研究人参皂苷Re对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 ( 1 methy 4 phenyl 1,2 ,3,6 tetrahy dropyridine ,MPTP)诱致C5 7BL小鼠黑质神经元凋亡的保护作用及其可能机制。方法 :用MPTP皮下注射C5 7BL小鼠制备帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)模型 ,灌胃给予人参皂苷Re预处理后 ,用TH组织化学染色 ,TUNEL染色观察黑质神经元的变化及凋亡情况 ;免疫组织化学检测Bcl 2 ,Bax蛋白表达。结果 :13mg·kg-1,2 6mg·kg-1人参皂苷Re预处理能使黑质致密带 (SNc)部位的TH染色阳性神经元增多 ,TUNEL染色阳性率降低 ,以及Bcl 2蛋白表达增加 ,Bax蛋白表达减少。结论 :人参皂苷Re对MPTP诱致小鼠黑质神经元凋亡有明显的保护作用 ;Bcl 2表达的升高和Bax表达的降低可能是人参皂苷Re抗凋亡的重要机制。     

葛根素对6-羟多巴胺致帕金森病模型大鼠黑质组织神经细胞的保护作用

目的:研究葛根素对6-羟多巴胺(6-OHDA)致帕金森病(PD)模型大鼠黑质组织神经细胞的保护作用。方法:建立帕金森病大鼠模型,随机分成5组:模型组、左旋多巴阳性组及葛根素低、中、高剂量组。ig给予葛根素20,40,80 mg.kg-1,阳性组给予左旋多巴40 mg.kg-1,连续灌胃30 d。检测黑质组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,进行黑质神经细胞常规染色观察,Western blot法检测黑质组织内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环-磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达。结果:葛根素能缓解帕金森模型大鼠病情。与模型组比较,葛根素有效增加帕金森病大鼠黑质组织中GSH-Px,SOD活性,同时降低MDA含量(P<0.01)。下调黑质组织中iNOS蛋白水平,并上调CREB蛋白表达(P<0.01)。结论:葛根素对6-羟基多巴胺所致PD大鼠黑质组织神经细胞具有保护作用,机制可能与其抑制过氧化应激作用以及调节内源性iNOS、CREB蛋白的表达有关。     

电针帕金森模型大鼠对黑质TH含量的影响

目的 :观察电针对帕金森病大鼠黑质TH含量的影响。方法 :将 6 OHDA注入黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型 ,并用免疫组织化学法检测正常组、假手术组、模型组、电针组黑质TH阳性神经元数目。结果 :帕金森病大鼠损毁侧SNC、SNL的TH阳性神经元数目显著低于正常组 (P <0 .0 1 )及未损毁侧 (P <0 .0 1 ) ,电针可有效地增高帕金森大鼠损毁侧SNC、SNL的TH阳性神经元数目 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5)。结论 :帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元合成多巴胺的功能低下 ,电针可有效地改善这一病理状态     

电针对帕金森病大鼠中脑黑质多巴胺能神经元氧化应激损伤的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)大鼠的中脑黑质超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量及对中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达及多巴胺(DA)能神经细胞凋亡的影响,探讨电针治疗PD的可能机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=11)、电针组(n=11)和西药组(n=11)。皮下注射鱼藤酮溶液制备PD大鼠模型。电针组选"百会""三阴交""太冲"穴电针10min,每天1次,7d为1个疗程,治疗2个疗程;西药组给予美多巴混悬液灌胃(1.67mg/kg)。治疗后行酶法测定右脑中脑黑质SOD、GSH-Px活力,比色定量分析法测定GSH、MDA含量;免疫组化(SP法)染色检测左脑中脑黑质TH,TUNEL法检测DA能神经细胞凋亡。结果:模型组SOD、GSH、GSH-Px均低于正常组(P0.05),模型组MDA高于正常组(P0.05);电针组SOD、GSH、GSH-Px均高于模型组(P0.05),电针组、西药组MDA均低于模型组(P0.05);电针组SOD、GSH-Px均高于西药组(P0.05)。电针组、西药组与模型组相比中脑黑质DA能神经元细胞形态较规则,体积较正常,核仁较明显,神经纤维排列较整齐,结构较密集;西药组改善差于电针组,优于模型组。电针组、西药组与模型组相比TH改善明显,阳性神经元数目增多(P0.05),神经元胞体轮廓及突起清晰;西药组改善差于电针组(P0.05)。电针组、西药组与模型组相比,DA能神经细胞凋亡减少(P0.05)。结论:电针可通过提高PD大鼠中脑黑质SOD、GSH-Px活力和GSH含量,降低MDA含量,增加TH免疫反应阳性神经元数目,抑制DA能神经细胞凋亡来治疗PD。     

电针对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元凋亡的影响

目的 观察电针对帕金森病大鼠黑质DA神经元凋亡的影响.方法 将6-OHDA注入中脑右侧黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型,采用电针对模型大鼠进行治疗,并用TH和TUNEL双标法检测正常组、假手术组、模型组、电针组黑质DA神经元凋亡数目.结果 帕金森病大鼠损毁侧DA神经元凋亡数目显著高于正常组（P＜0.01）及未损毁侧（P＜0.01）,电针可有效地减少帕金森病大鼠DA神经元凋亡数目（P＜0.05）.结论 DA神经元凋亡可能参与帕金森病的发生,电针可有效地改善这一病理过程.     

头穴透刺对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元形态数量影响研究

目的：研究头穴透刺对帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元形态及数量的影响。方法：以6-羟基多巴胺微量注射法制备帕金森病大鼠旋转模型,采用头穴透刺疗法进行治疗,设立正常组、模型组和透刺组：以免疫组织化学方法检测大鼠黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶阳性细胞的形态及数量变化;采用透射电镜观察各组大鼠黑质神经元形态及数量变化。结果：透刺组与模型组比较大鼠黑质多巴胺能神经元形态及数量均明显改善。结论：头穴透刺疗法可以改善多巴胺能神经元形态、增加多巴胺能神经元数量。     

葛根素对帕金森病大鼠黑质组织HO-1,NQO1表达的影响

目的:研究葛根素对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导帕金森大鼠黑质组织血红素加氧酶-1(HO-1),醌氧化还原酶(NQO1)表达的影响.方法:建立帕金森SD大鼠模型,随机分成5组:模型组、美多巴阳性组(40 mg·kg-1)及葛根素低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1).持续灌胃给药30 d.检测黑质组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.HE染色观察黑质神经细胞形态学的变化.RT-PCR法检测黑质组织HO-1mRNA表达.Western blot法检测NQO1蛋白表达.结果:与模型组比较,葛根素显著地增加帕金森病大鼠黑质GSH-Px活性(368.29±37.86),(501.74±43.62),(581.43 ±50.97) U·mg-1和SOD活性(119.36±10.24),(179.85±13.04),(206.94±14.37)NU·mg-1,同时降低MDA含量(10.47±1.15),(7.02±0.94),(5.38±0.82)nmol.mg-1(P＜0.01).缓解6-OHDA所致黑质神经细胞损伤.有效下调黑质HO-1 mRNA水平42.1％,34.2％,24.7％ (P ＜0.01),以及明显增加NQO1蛋白表达24.3％,30.9％,47.6％(P＜0.01).结论:葛根素有效逆转6-OHDA致PD大鼠黑质神经细胞损伤,其机制可能与其抑制氧化应激途径有关.     

葛根素对帕金森病大鼠黑质组织BDNF,TrkB,caspase-3表达的影响

目的:研究葛根素对6-羟多巴胺(6-OHDA)致帕金森病大鼠黑质组织脑原性神经营养因子(BDNF),酪氨酸激酶B(TrkB),半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)表达的影响.方法:建立帕金森病大鼠模型,随机分成5组:模型组、左旋多巴阳性组及葛根素低、中、高剂量组.ig给予葛根素20,40,80 mg· kg-1,阳性组给予左旋多巴40 mg·kg-1,连续灌胃30 d.TUNEL检测法观察黑质神经细胞的凋亡情况,Western blot法检测黑质组织BDNF,TrkB表达.免疫组织化学法检测caspase-3表达.结果:与模型组比较,葛根素(20,40,80 mg· kg-1)有效地降低黑质组织神经细胞凋亡水平(11.94 ±2.57),(7.61±1.21),(4.35±0.36) cell· mm-2(P＜0.01).上调黑质组织中BDNF、TrkB蛋白表达20.45％,31.29％,45.36％;14.76％,27.65％,38.81％ (P ＜0.01).而caspase-3免疫阳性细胞数量明显减少(36.48 ±6.25),(22.74 ±4.03),(12.19±2.51)cell·mm-2(P＜0.01).结论:葛根素对6-OHDA所致PD大鼠黑质神经细胞具有保护作用,机制可能与通过神经修复或再生以及逆转细胞凋亡进程而改善黑质功能有关.