聚合酶链反应微孔酶免疫法检测新型隐球菌

目的 建立一种检测脑膜炎新型隐球菌聚合酶链反应（PCR）产物的微孔酶免疫方法,方法 对PCR所用2条引物进行双标记,使扩增产物一端标记上生物素,另一端标记上地高辛,通过包被在微孔板上的亲和素捕获固定,然后用碱性磷酸酶标记的地高辛抗体反应后显色测定。结果 三种PCR产物检测方法的对照分析表明微孔板酶免疫法敏感性最强,加样量38nL时即可显色,模板DNA经过10^11倍稀释后仍为阳性结果,聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳则分别可检测到0.3125uL,1.25uL及10^7,10^4稀释度,对临床脑脊液标本的检测结果微孔板酶免疫法和聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为100%,二敏感性均高于琼脂微电泳,结论 建立的方法与常规电泳法相比灵敏准确,结果判断客观,重复性也较好;所测结果可相对反应PCR产物量的多少,此方法可取代电泳法成为常规检测PCR产物的方法。     

聚合酶链反应微孔酶免疫法检测新型隐球菌

目的 建立一种检测脑膜炎新型隐球菌聚合酶链反应(PCR)产物的微孔酶免疫方法。方法 对PCR所用两条引物进行双标记,使扩增产物一端标记上生物素,另一端标记上地高辛,通过包被在微孔板上的亲和素捕获固定,然后用碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应后显色测定。结果 三种PCR产物检测方法的对照分析表明微孔酶免疫法敏感性最强,加样量0.038μl时即可显色,模板DNA经过10~(11)倍稀释后仍为阳性结果;聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳则分别可检测到0.312 5μl、1.25 μl及10~7、10~4稀释度。对临床脑脊液标本的检测结果微孔酶免疫法和聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为100％,二者敏感性均高于琼脂糖电泳。结论 微孔酶免疫法与常规电泳法相比灵敏准确,结果判断客观,重复性也较好,所测结果可相对反映PCR产物量的多少,此方法可取代电泳法成为常规检测PCR产物的方法。     

聚合酶链反应诊断新型隐球菌脑膜脑炎50例

目的 探讨聚合酶链反(PCR) 新型隐球菌脑膜脑炎快速诊断的临床标准。方法 应用聚合酶链反应检测50例临床脑脊液标本中的新型隐球菌，同时用直接涂片墨汁复杂、真菌培养进行对比检测。结果 在50例患者临床脑脊液标本中，PCR检测阳性11例；直接涂片墨汁复染阳性7例阳性；真菌培养阳性9例。结论 用PCR方法具有简便、快速、特异、敏感的特点，从脑脊液标本中直接检测新型隐球菌，提供病原学诊断依据，对新型隐球菌脑膜脑炎的快速诊断具有重要的临床意义。     

几株新生隐球菌聚合酶链反应指纹分型的观察

几株新生隐球菌聚合酶链反应指纹分型的观察温海廖万清吴建华陈江汉本课题为意大利米兰大学卫生和预防医学研究所资助项目作者单位：２００００３上海，第二军医大学附属长征医院皮肤科真菌病研究室目前的新生隐球菌基因分型方法中有新生隐球菌ＤＮＡ核型分析，ＤＮＡ限制...     

新型隐球菌脑膜炎26例误诊分析

我院自 1994年 1月至 2 0 0 1年 9月共收治新型隐球菌脑膜炎 (简称隐脑 ) 6 3例其中误诊 2 6例占 4 1.3%。本文对其误诊原因进行分析。1 临床资料1 1　一般资料　 2 6例隐脑中男 17例 ,女 9例 ,年龄 14～ 5 8岁 ,平均年龄34.8岁。1 2　临床症状　有基础疾病患者19例 ,其中系统性红斑狼疮、肺结核各 4例 ,乙肝肝硬化、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、糖尿病各 2例 ,静脉吸毒 3例。主要症状 :渐进性头痛 2 6例 ,发热 2 0例 ,呕吐 2 3例 ,听力下降 19例 ,视力下降 17例 ,复视 15例 ,耳鸣 10例 ,面瘫 3例 ,癫痫发作 6例。1 3　实验室检查　脑脊液…     

新型隐球菌脑膜炎1例临床分析

隐球菌为条件致病菌 ,仅在宿主免疫力降低时才会发病。恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、糖尿病、结核病、系统性红斑狼疮患者易发生隐球菌感染。但仍有一半患者并无基础疾病 ,发病原因不明。中枢神经系统的新型隐球菌感染在国内过去报道较少 ,近 2 0年来逐渐增多 ,但其误诊率及死亡率仍然很高。现将临床收治的 1例新型隐球菌感染临床分析如下。1　临床资料1 1　一般资料　患者男性 ,2 1岁 ,待业。持续头痛 1月 ,伴有畏寒、发热 ,头痛呈撕裂样疼痛 ,以额顶部为主。无视物模糊、吞咽困难、构音不清、饮水返呛 ,无四肢麻木、乏力 ,无…     

27例新型隐球菌脑膜炎临床分析

1　临床资料1)本组均系住院病人 ,共 2 7例 (患者 ) ,其中男性 19例 ,女性 8例 ,年龄 14～ 5 8岁。ＣＳＦ墨汁染色镜检均发现新型隐球菌或培养出隐球菌。2 )临床症状及体征 :以亚急性或慢性起病为主 (少数以急性起病 ) ,本组病例中 :头痛 2 3例 ,发热 19例 ,呕吐 19例 ,视力下降 9例 ,听力下降 7例 ,精神异常 3例 ,肢体瘫痪 3例 ,癫痫全面发作 2例。脑膜刺激征 2 4例 ,视乳头水肿 18例 ,颅神经损害 13例 ,意识障碍 5例 ,双侧瞳孔不等大 3例 ,偏瘫 2例 ,病理征 2例 ,共济失调 1例。3)脑脊液及ＣＴ检查 :腰穿颅内压增高 2 5例 ,最高可达32 0ｍ…     

多重聚合酶链反应快速检测脑膜炎中的病原体

目的 建立脑膜炎多重PCR检测系统,以在一次扩增中快速、特异地同时检出新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌,用于脑膜炎病原体感染的快速诊断。方法 根据新型隐球菌URA保守序列、脑膜炎双球菌基因组中特定的H.8外膜蛋白基因序列、结核分枝杆菌基因组中的IS986插入基因序列片段,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用多重PCR技术,同时检出脑脊液中的新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌。结果 应用多重PCR反应体系,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果：我重PCR扩增的预期结果为：单一菌感染出现一条特异性扩增区带;混合感染应出现2条或3条特异性扩增区带,经实验达到预期的扩增结果;对15份已明确诊断的脑脊液标本,分法均能扩增出预期的目的片段。符合率达100%,对20例临床脑脊液标本的PCR扩增结果分别为：新型隐球菌15%（3/20）、结核肝菌20%（5/20）、脑膜炎双球菌10%（2/20）。结论 多重PCR有效地为临床病原体的混合感染,以及原因不明的脑膜炎患的快速诊断,提供了快速、准确的诊断手段。有效地减少了脑膜炎的误诊和漏诊,更提高了检验效率。     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

多聚酶链反应检测艰难梭菌产毒株

以艰难梭菌A毒素基因非重复片段中的两个寡核苷酸链作引物,扩增306bp,用多聚酶链反应技术扩增31株细菌,结果19株艰难梭菌产毒株均扩增出单一特异的电泳带,而8株艰难梭菌无毒株、2株索氏梭菌和2株大肠杆菌均无特异带出现。将艰难梭菌产毒株的模板DNA从50ng稀释至0.5ng后再进行多聚酶链反应,结果仍可见特异扩增带。说明多聚酶链反应检测艰难梭菌产毒株较之细菌分离培养、细胞毒索测定方法具有快速、简便、特异、敏感的优点,可望用于临床标本的直接检测。     

Detection of toxigenic Clostridium difficile by polymerase chain reaction

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｏｘｉｇｅｎｉｃＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＣｈｅｎＣｕｎｌｏｎｇ（陈村龙）；ＺｈｏｕＤｉａｎｙｕａｎ（周殿元）；ＰａｎＬｉｎｇｊｉａ（潘令嘉）；ＷａｎｇＪｉｄｅ（...     

Detection and Identification of Enteroviruses RNA by Using Polymerase Chain Reaction

Theenteroviruses(EV)areamongthemostcommonandimportantviralpathogensofhumansll'2].Atleast70serotypeswhichinfecthumanshavebeenidentified,includingthepolioviruses(PV),coxsackievirusesgroupAandB(CVAandCVB),andechoviruses(EchoV).Sinceitsinceptionmorethan40yearsago,EVisolationincellculturehasbeenthemainstayofenteroviraldiagnosis.ReportedmeanisolationtimeforEVfromcerebrospinalfluid(CSF)rangedfrom3.7to8.2days.However,asmanyas25%to35%oftheEVserotypes,particularlytheCVAgroup,donotgrowincellcu…     

PCR扩增法检测DMD患者的基因缺失

目的 探讨Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症（ＤＭＤ）患者基因缺失的突变特点并进行基因诊断。方法 用一对特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因ｅｘｏｎ４８附近的ＤＮＡ片段。结果 在２１例ＤＭＤ患者中，检出１６例患者的ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因在该处存在缺失突变。ｅｘｏｎ４８是ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因发生缺失突变“热点”区的观点。结论 该方法可用于ＤＭＤ的遗传咨询、基因诊断及产前基     

分流术治疗隐球菌性脑膜继发性脑积水

目的 脑室腹腔分流术可以治疗隐球菌性脑膜炎所继发脑积水，本文旨在探讨其手术适应证，并发证及评价疗效。方法 回顾同济神经外科自1990～2002年收治的新型隐球菌性脑膜炎合并脑积水15例治疗过程，患者均接受脑室腹腔分流术。结果 15例中有14例临床症状明显改善，有2例后期接受二次分流管调整术。分流术并无形成感染源之虞，无证据显示造成腹腔及循环系统的感染扩散。结论 脑室腹腔分流术能安全有效减轻积水，改善症状及提高疗效。     

用多聚酶链反应检测LT-大肠杆菌

本文报告用多聚酶链反应检测产生不耐热肠毒素大肠杆菌,使用二个寡核苷酸引物,直接从麦康凯平板的菌落中对该毒素的 A 亚基一段高度保守区域的 DNA 进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳检测,30株细菌只有产生不耐热肠毒素大肠杆菌检测结果为阳性,其它细菌均为阴性.此法简便、特异、敏感.