土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。     

蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性比较研究

目的:比较蝉蜕不同提取工艺抗凝与纤溶活性。方法:以凝血酶原时间试验(PT)、活化部分凝血活酶时间试验(APTT)、血小板聚集率和血凝-纤溶动态图为指标,比较蝉蜕仿生胃/胰酶解物、水提物、醇提物、水提醇沉物的抗凝与纤溶活性差异,综合评价各提取物抗凝纤溶活性。结果:蝉蜕各提取物均不能延长家兔PT值,而仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)对于APTT、血小板聚集率、血凝-纤溶表现出抗凝纤溶作用。结论:蝉蜕仿生胃/胰酶解物和水提醇沉(渣)具有一定抗凝纤溶活性,具有后续研究价值。     

沙蚕纤溶酶的一种纯化方法

目的 从双齿围沙蚕体内提取并纯化一种新的纤溶酶。方法 应用硫酸铵沉淀、透析、凝胶柱层析（Sephadex G-100）以及电泳等生化手段对沙蚕纤溶酶进行分离纯化。用平板法测定它降解纤维蛋白的活性。结果 得到纯的沙蚕纤溶酶,测出其等电点为4．5左右,由两条边组成,其相对分子量分别为33000u和14400u。结论 该酶为首次从沙蚕中发现的一种新的纤溶酶。     

蜈蚣胃蛋白酶解物体外抗凝活性肽类的分离与分析

目的:采用凝胶过滤色谱和C18反相色谱对蜈蚣胃蛋白酶解物的抗凝活性部位进行分离纯化,并检测其相对分子质量分布范围。方法:按色带及280 nm紫外光谱法收集凝胶色谱分离各流分;以活化部位凝血活酶时间(APTT)为指标,检测各流分体外抗凝活性;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量分布范围。结果:经凝胶过滤色谱和C18反相色谱纯化得到了抗凝活性组分,用MALDI-TOF-MS测得其相对分子质量分布范围为597～1 146。结论:凝胶过滤色谱和C18反相色谱可用于蜈蚣胃蛋白酶解物抗凝活性组分的分离纯化,其抗凝活性组分为小分子肽类。     

尖吻蝮蛇蛇毒抗凝、纤溶组分的分离及对凝血系统的影响

目的:研究同一尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化的类凝血酶和纤溶酶对凝血系统的影响。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B和Sephadex G-75层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化获得类凝血酶和纤溶酶,通过体内实验,观察两者对凝血系统指标的影响。结果:从尖吻蝮蛇蛇毒中分别分离获得单一组分的类凝血酶和纤溶酶,它们的相对分子质量分别为39300和26600,体内实验证明,尖吻蝮蛇毒类凝血酶和纤溶酶都能明显延长全血凝固时间、活化的部分凝血酶原时间、凝血酶时间和凝血酶原时间,降低纤维蛋白原含量,但类凝血酶的作用更强,而纤溶酶在较大剂量时才显现抗凝作用,两者合用优于各自单用。结论:尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶和纤溶酶对动物体内的凝血系统有影响,两者合用具有明显的抗凝作用。     

乌贼墨酶解肽提取方法及其抗肿瘤活性(英文)

目的:用蛋白酶酶解乌贼墨,经纯化获得寡肽,并对其进行抗肿瘤活性研究。方法:通过胰蛋白酶酶解获得乌贼墨酶解物,将酶解液用超滤、G-25分子筛凝胶层析进行分离纯化,高效液相进行纯度检测。分离纯化得到的寡肽进行氨基酸序列检测,并用CCK-8检测寡肽对DU-145细胞增殖的影响和HE染色方法观察其对细胞形态的影响。结果:乌贼墨寡肽的N端氨基酸序列为:Gln-Pro-Lys,得率为1.82%。将寡肽进行抗肿瘤活性研究,发现寡肽对DU-145细胞有明显的增殖抑制效应,且有浓度依赖性。HE染色结果显示了寡肽使细胞形态发生不规则变化,失去原有的恶性表型。结论:用酶解方法制得的乌贼墨寡肽有明显的抗肿瘤活性。     

水蛭乙醇提取物体外抗凝血活性研究

目的:研究水蛭不同提取物对人血浆的抗凝活性及作用环节。方法:测定水蛭乙醇提取物不同萃取部位对凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(TT),活化的部分凝血活酶时间(APTT),纤维蛋白原凝固时间(FCT)的影响。结果:水蛭的乙酸乙酯部位显著地延长人PT,APTT,TT和FCT;石油醚部位、正丁醇部位、水部位也有较弱抗凝活性。结论:水蛭乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

土鳖虫多肽的分离纯化及溶栓活性

目的:对土鳖虫多肽进行分离纯化,并对其溶栓活性进行研究.方法:采用仿生酶解工艺制备土鳖虫复合多肽,以溶栓活性为指标,采用Sephadex G-25,SP Sephadex C-25凝胶柱和RP-HPLC C18半制备色谱柱对复合多肽进行分离纯化,并测定目标多肽组分(Peak b)的溶栓活性、肽含量和相对分子质量.结果:目标多肽组分的溶栓活性为814 430 U·mg-1,肽含量为95.7％,相对分子质量分布在3 211～3 547.结论:利用仿生酶解制备的土鳖虫多肽,经分离纯化后,可得到具有较强溶栓活性的多肽组分.     

土鳖虫多肽的分离纯化及溶栓活性研究

目的 对土鳖虫多肽进行分离纯化,并对其溶栓活性进行研究.方法 采用仿生酶解工艺制备土鳖虫复合多肽,以溶栓活性为指标,采用Sephadex G-25、SP Sephadex C-25凝胶柱和RP-HPLC C18半制备色谱柱对复合多肽进行分离纯化,并测定目标多肽组分(Peak b)的溶栓活性、肽含量和分子量.结果 目标多肽组分的溶栓活性为814 430 U·mg-1,肽含量为95.7％,分子量分布在3 211 ～3 547.结论 利用仿生酶解制备的土鳖虫多肽,经分离纯化后,得到一具有较强溶栓活性的多肽组分.     

湿法超微粉碎和水煎煮提取法对鼠妇蛋白溶栓抗凝活性的影响及机制初探

目的比较湿法超微粉碎及水煎煮提取法对鼠妇溶栓抗凝活性蛋白的影响,并探究其溶栓抗凝活性的机理。方法比较两种不同提取法所得鼠妇提取物得率及蛋白含量的差异,并采用硫酸铵分级盐析初步纯化鼠妇活性蛋白,纤维蛋白平板法检测鼠妇活性蛋白对纤维蛋白的降解作用及溶栓机理,全自动凝血因子分析仪测定鼠妇活性蛋白对凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响,考察温度对鼠妇活性蛋白的影响。结果两种不同提取方法在提取物得率、蛋白含量存在较大差异;其中,鼠妇的水煎煮提取物未检测出溶栓活性,而湿法超微粉碎提取的蛋白具有很强的溶栓活性,其活性蛋白主要集中在60%~80%硫酸铵饱和度范围内,通过激活纤溶酶原的方式降解纤维蛋白,并且能明显延迟TT、APTT,但对于PT无明显作用;而水煎煮提取物对TT、PT、APTT均无延迟作用。结论湿法超微粉碎提取法能很好地保留鼠妇溶栓抗凝活性蛋白,而水煎煮提取的鼠妇蛋白无溶栓抗凝活性。     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.     

高脂血症诊治研究中问题及策略

目的:探讨高脂血症诊临床治疗中有效对策。方法:结合近代高脂血症诊治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治高脂血症。结果:中西医结合防治此病有效。结论:中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

从“方药离合”看中医学的方药共荣

通过对历代方剂与本草的应用演变和发展过程的论述,揭示了中医方药共荣关系,并以黄柏、升麻等药为例,强调方药配伍运用是方药共荣的核心环节.随后,结合中医发展的现实环境,分析了坚持方药共荣的正确方向,对于防止重药轻方的错误倾向,提高中医临床疗效,启迪现代研究思路,均具有重要的学术价值和现实意义.     

丹栀逍遥散及其提取物镇静催眠作用研究

目的探讨丹栀逍遥散原方及提取物镇静催眠作用。方法将小鼠分为14组,正常对照组、原方组及各组分低中高剂量组,通过测定小鼠自主活动次数,采用戊巴比妥钠延长睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠协同作用实验观察丹栀逍遥散原方及各提取物镇静催眠作用。结果丹栀逍遥散原方及提取物均无改变小鼠自主活动的功能,表明均无中枢兴奋性作用;丹栀逍遥散石油醚提取液高、中剂量具有显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的作用(P<0.01或P<0.05),石油醚提取液高剂量能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数(P<0.01)。结论丹栀逍遥散石油醚提取部位可能为丹栀逍遥散的中枢抑制作用的有效部位。     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。