宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层神经细胞凋亡的影响

目的研究宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层神经细胞凋亡的影响。方法建立妊娠期宫内暴露尼古丁小鼠动物模型,观察生后21天小鼠大脑皮层组织结构变化,免疫组织化学方法和W estern b lot方法检测宫内暴露尼古丁模型大脑皮层caspase-3的表达。结果尼古丁组小鼠大脑皮层脑回厚度较对照组变薄(P<0.05),免疫组织化学法检测到大脑皮层caspase-3阳性反应物的平均光密度值在尼古丁组高于对照组(P<0.05),W estern b lot方法检测到大脑皮层caspase-3酶原(32KD)形式及活性片段形式(17KD、20KD)的相对表达量高于对照组(P<0.01)。结论孕期宫内暴露尼古丁激活生后小鼠大脑皮层神经细胞caspase-3的过表达,参与大脑皮层神经细胞凋亡。     

妊娠期小鼠暴露尼古丁对后代大脑皮层与海马形态结构发育及神经细胞黏附分子表达的影响

目的观察妊娠期小鼠暴露尼古丁对后代大脑皮层和海马形态结构发育及对神经细胞黏附分子（NCAMs）表达的影响.方法建立妊娠期暴露尼古丁的小鼠动物模型,HE染色观察后代大脑皮层和海马形态结构的改变,免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法观察生后小鼠NCAMs表达的变化.结果妊娠期暴露尼古丁小鼠的后代其大脑皮层和海马变薄,海马各区细胞层也变薄.与对照组相比,妊娠期暴露尼古丁小鼠的后代大脑皮层和海马中,PSA-NCAM表达升高,而NCAM-180、140和120的表达减弱. 结论妊娠期小鼠暴露尼古丁能阻碍后代大脑皮层和海马形态结构的正常发生,还能改变NCAMs在生后小鼠大脑皮层和海马中的表达.     

宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层神经细胞凋亡相关基因表达的影响。方法建立妊娠期宫内暴露尼古丁小鼠动物模型,免疫组织化学方法和W estern b lot方法检测宫内暴露尼古丁模型大脑皮层Bc l-2和Bax的表达。结果免疫组织化学法检测到大脑皮层的Bc l-2表达的平均光密度值和W estern b lot检测的平均灰度比值(Bc l-2/GAPDH)在正常对照组高于尼古丁组(P<0.05),而Bax表达的平均光密度值和平均灰度比值(Bax/GAPDH)在尼古丁组高于对照组(P<0.05)。结论孕期宫内暴露尼古丁激活小鼠大脑皮层促凋亡基因Bax表达,参与大脑皮层神经细胞凋亡。     

急性暴露尼古丁对1月龄大鼠丘脑腹后内侧核内Caspase-3的表达及凋亡的影响

目的研究急性暴露尼古丁(n icotine)对1月龄大鼠丘脑腹后内侧核内caspase-3表达及凋亡的影响。方法腹腔注射尼古丁(1mg/kg)建立急性暴露尼古丁的动物模型,用免疫组织化学方法检测模型鼠丘脑腹后内侧核caspase-3的表达,用原位末端标记法(Tunel法)检测凋亡细胞。结果在模型鼠丘脑腹后内侧核,神经细胞caspase-3表达高于对照组。Tunel法证明尼古丁暴露3天组丘脑腹后内侧核凋亡细胞百分率与对照组无明显差异,尼古丁暴露6天组丘脑腹后内侧核凋亡细胞百分率明显多于对照组。结论急性暴露尼古丁使1月龄大鼠丘脑腹后内侧核内caspase-3表达增加,促进该核团内的神经细胞凋亡。     

姜黄素对癫痫小鼠海马脑损伤的保护作用

目的研究姜黄素对匹罗卡品诱导的癫痫小鼠海马新生神经元和细胞凋亡的影响。方法姜黄素预处理后,小鼠腹腔注射匹罗卡品建立小鼠癫痫模型,应用新生神经元标记物双皮层蛋白(doublecortin,DCX)免疫组织化学染色及TUNEL染色对造模后72h的模型小鼠海马进行检测。结果 DCX免疫组织化学染色结果表明,与对照组相比,模型组及姜黄素处理模型组小鼠海马齿状回DCX阳性细胞明显减少;与模型组相比,姜黄素处理模型组小鼠海马齿状回DCX阳性细胞明显增多。TUNEL染色结果表明,与对照组相比,模型组及姜黄素处理模型组小鼠海马齿状回TUNEL阳性细胞明显增多;与模型组相比,姜黄素处理模型组小鼠海马齿状回TUNEL阳性细胞明显减少。结论姜黄素可能对匹罗卡品诱导的癫痫小鼠海马神经元有保护作用。     

红景天苷对低压低氧诱发大鼠脑损伤的保护作用

目的观察红景天苷对低压低氧暴露大鼠脑损伤的保护作用,初步探讨红景天苷预防低压低氧脑损伤的可能机制。方法利用低压低氧小动物模拟实验舱,模拟海拔6000 m急性暴露,制备低压低氧脑损伤大鼠模型。检测各组大鼠呼吸频率改变,利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠海马齿状回(DG)区细胞凋亡情况,利用Western blot法检测海马DG区Ras同源分子家族成员A(Rho A)的表达和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)、c-Jun氨基端激酶(p-JNK)的水平变化。结果模拟海拔6000 m急性暴露后,大鼠呼吸频率显著增加,低压低氧脑损伤引起大鼠海马DG区神经元发生凋亡,大鼠海马DG区组织中Rho A表达下降,ERK和JNK蛋白磷酸化水平下降;红景天苷干预可显著减少海马DG区神经元凋亡,并逆转Rho A蛋白表达和ERK和JNK蛋白的磷酸化水平。结论急性低压低氧暴露引起海马DG区神经细胞凋亡,红景天苷对低压低氧暴露诱发神经细胞凋亡起到保护作用。     

Rapamycin保护大鼠缺血性脑损伤和特定脑区神经新生有关

目的:探讨缺血前给予自噬诱导剂对脑缺血损伤的保护效应及可能机制。方法:双侧颈总动脉结扎建立全脑缺血模型,再灌注后24 h,评价动物神经行为功能,连续脑切片,采用Nissl染色定量检测皮层及海马CA1区细胞密度;通过免疫荧光技术检测Caspase-3阳性神经元,计数皮层及海马CA1凋亡细胞数量;激光共聚焦显微镜观察并计数海马齿状回颗粒下层内呈Ki67阳性、GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阴性(Ki67+/GFAP-)细胞的数量。结果:Rapamycin术前预处理可以改善缺血导致的神经功能缺陷(P<0.05)。Nissl染色结果表明Ra-pamincy术前1 h给药可以减轻缺血导致的皮层(P<0.01)及海马CA1区(P<0.01)细胞丢失。同时,Rapamycin术前给药也显著减少了缺血导致的皮层及海马CA1区内Caspase-3阳性细胞的数量,组间比较有显著性差异(P<0.05)。Rapamycin术前1 h给药增加了海马齿状回内Ki67+/GFAP-细胞的数量,和缺血组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:在全脑缺血模型上,通过自噬活化途径的缺血预处理可以保护缺血性脑损伤,这一作用和Rapamycin减少凋亡、增加新生神经细胞的数量有关。     

宁夏无果枸杞叶提取物对衰老小鼠海马神经细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察宁夏无果枸杞叶提取物(FLE)对衰老小鼠脑海马区神经细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法:13月龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为老年对照组和FLE低剂量组(FLE1组)、FLE中剂量组(FLE2组)、FIE高剂量组(FLE3组),6月龄为成年对照组。FLE1组、FIE2组、FLE3组分别用5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg FLE灌胃,0.2 mmol/I/(10 g·d),老年及成年对照组灌胃等量生理盐水,持续8周。流式细胞术检测海马区神经细胞凋亡率,免疫荧光组织化学方法观察小鼠海马齿状回神经细胞的增殖。免疫组化SP法及WesternBlot技术检测小鼠海马区凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达,结果:流式细胞术检测结果显示,各组均检测到早期凋亡细胞,与成年对照组比较,老年对照组早期细胞凋亡率明显增多(P0.05);FLE2组、FLE3组早期细胞凋亡率明显低于FLEl组和老年对照组(P0.05)。免疫荧光染色结果显示:老年对照组海马齿状回神经细胞增殖率较成年对照组低(P0.05),FLE2及FLE3组小鼠海马齿状回神经细胞增殖率较老年对照组增高(P0.05)。免疫组化及Western Blot检测结果显示:老年对照组海马区Bcl-2蛋白的表达较成年对照组低(P0.01);Bax、Caspase-3蛋白的表达较成年对照组高(P0.01);FLE2及FLE3组Bcl-2蛋白的表达较老年对照组增加(P0.01);Bax、Caspase-3蛋白的表达量较老年对照组降低(p0.01)。结论:中、高浓度的FLE能够促进海马区神经细胞的增殖,提高凋亡蛋白Bcl-2表达,降低Bax、Caspase-3蛋白的表达,减少神经细胞的凋亡,发挥抗衰老作用。     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。     

切割穹窿海马伞大鼠海马内BLBP的表达变化

为了观察切割大鼠右侧穹窿海马伞后,切割侧与正常侧海马齿状回内脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化,本研究应用Western blot和免疫组织化学方法检测双侧海马内BLBP蛋白表达水平的变化,以及海马齿状回门区和颗粒下层中BLBP免疫阳性细胞数和灰度值。结果显示:正常大鼠双侧海马各区和颗粒下层细胞BLBP仅有微量表达,切割穹窿海马伞后第1 d双侧差异不明显;3 d时切割侧颗粒下层阳性细胞及染色深度较正常侧加深;5 d时切割侧颗粒下层阳性细胞数量明显增多,染色较深,并达到最高水平;7 d后BLBP免疫阳性细胞的数量和染色深度开始降低,14 d时接近正常侧水平。而切割后3、5 d时双侧门区BLBP免疫阳性细胞的数量差异不大,但切割侧染色较深,7 d后也逐渐降低,14 d时降至正常侧水平。上述结果提示,切割穹窿海马伞阻断了隔区与海马齿状回的纤维联系后,可引起海马齿状回门区和颗粒下层BLBP表达增强,可能引发了放射状胶质细胞的增殖和激活,构成的支架有助于神经干细胞的迁移和向神经元的分化。     

复方丹参对脑缺血再灌注后大鼠海马和齿状回神经细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后海马和齿状回神经细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:采用大脑中动脉内栓线法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位细胞凋亡检测和原位杂交技术检测大鼠海马和齿状回神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA的表达并做图像分析。结果:与假手术对照组比较,缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧海马CA1、CA3区,齿状回凋亡细胞较少。3个区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2 h后升高,随时间的延长逐渐增强。复方丹参组神经细胞Bcl-2 mRNA的表达明显强于缺血再灌组,而凋亡神经细胞数明显较低。结论:复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,从而减轻缺血再灌注对大鼠海马和齿状回的损伤。     

The effects of regular aerobic exercise in adolescent period on hippocampal neuron density, apoptosis and spatial memory

It is known that positive effects of regular aerobic exercise on cognitive functions in humans and also animals; but how to the effects of aerobic exercise in adolescent period is unknown. The present study examined the effects of regular aerobic exercise on spatial memory using the Morris water maze, cell density and apoptosis of hippocampus in adolescent rats. Twenty-two days of age male rats were run on a treadmill for 30 min/session at a speed of 8m/min and 0 degrees slope, five times a week for 8 weeks. The present study showed that exercise induced significant cognitive improvement throughout brain maturation in rats. The number of hippocampal CA1 and CA3 neurons, and gyrus dentatus neurons were significantly increased in the exercised rats. There was no significant difference of CA2 neuron density between exercise and control groups. There was no significantly differences in any groups according to the results of apoptosis that account of TUNEL positive cells. The present results suggest that regular moderate aerobic treadmill exercise benefit in cognitive functions. This result may derive from treadmill exercise-induced increase cell density without altering of apoptosis in the hippocampus and dentate gyrus of adolescent rats.     

缺血后适应调控树鼩脑缺血海马CA1区Akt（pS473）和Akt（pT308）过磷酸化的抗凋亡机制

观察树鼩脑缺血海马神经元Akt（pS473）和Akt（pT308）磷酸化改变对CA1区细胞凋亡的影响,探讨缺血后适应（PC）抑制细胞凋亡的可能机制。方法 用光化学诱导法诱导树鼩脑缺血并建立缺血PC模型;用免疫组织化学TACS原位凋亡检测试剂盒检测皮层及海马CA1区神经元凋亡数量,用免疫组织化学法检测Akt（pS473）和Akt（pT308）表达的空间分布,用ELISA法检测海马CA1区神经元Akt（pS473）和Akt（pT308）磷酸化水平;用电子显微镜观察其神经元超微结构改变。 结果 脑缺血后神经元皱缩,核消失以缺血24h为著。脑缺血后4 h、24 h及72 h皮层及海马CA1区神经元TUNEL阳性细胞数明显增加（P<0.01）,海马CA1区神经元Akt (pS473) 和Akt (pT308)的表达及磷酸化水平明显升高,以脑缺血4 h的改变最明显,分别为(152.3±3.5) units/mg、(130.8±2.6) units/mg和(149.5±4.7)units/mg和 (42.35±2.49) units/mg、(19.23±1.41) units/mg和(23.38±1.32) units/mg (P<0.01）。缺血PC组神经元损伤明显减轻,皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞明显减少（P<0.01）,且与海马神经元Akt (pT308)活化水平呈平行改变(P<0.05）。结论 树鼩脑缺血海马CA1区细胞凋亡与Akt(pS473) 和Akt (pT308)过磷酸化的信号机制有关,缺血PC抑制海马神经元Akt(pS473) 和Akt(pT308)双磷酸化可能具有抗凋亡作用。     

阿尔茨海默病模型大鼠海马结构Akt磷酸化与caspase 3表达的相关性研究

目的探讨Aβ所致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠Akt的磷酸化水平与caspase 3在海马结构神经元的表达及其分布。方法选用24只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组（侧脑室注射10μg Aβ25-35）。免疫组化方法观察caspase-3在海马结构神经元（海马CA1、CA3和齿状回）的表达;Western blot方法检测海马结构神经元Akt的磷酸化水平。结果模型组海马结构3个亚区神经元的caspase-3的平均光密度值均较对照组明显增高（P〈0.01）;模型组P-Akt的表达量较对照组明显下调（P〈0.05）。结论 Aβ25-35可能是通过下调Akt的磷酸化水平促进caspase-3的表达,进而导致海马结构神经元的凋亡。     

MiR-124 effect in neurons apoptosis in newborn rat with thyroid hypofunction

Congenital thyroid hypofunction can cause a variety of developmental disorders. Hippocampus is an important structure participating in the cognitive activities. Neural function damage is able to induce hippocampal neuron apoptosis. As a miRNA expressed specifically and abundantly in brain tissue, miR-124 has protective effect to neuron apoptosis caused by cerebral apoplexy. However, its role in neuron apoptosis caused by thyroid hypofunction is still unclear. The rats were divided into four groups including normal group, thyroid hypofunction group, miR-124 negative control group, and miR-124 mimics group. Propylthiouracil (50 mg/d) was injected to the stomach to the rats with 15 d pregnancy till the newborn rats were born. Inducing the thyroid hypofunction rat model and then injecting miR-124 mimics to ventricle. Serum TSH, FT3 and FT4 were detected to confirm the model. Immunohistochemistry was carried out to calculate neuron number. Tunel assay was used to detect neuron apoptosis. Western blot was applied to detect apoptosis related protein Caspase-3, Bcl-2 and Bax expression. After brain injection miR-124 mimics, hippocampal neuron number and morphology both improved in 15 d newborn mice compared with thyroid hypofunction group. Tunel staining found positive neurons reduced, which indicated that miR-124 can inhibit hippocampal neuron apoptosis in thyroid hypofunction rats. Further Western blot results revealed that apoptosis inhibition might be related to down-regulating activated Caspase-3 and Bax levels, and up-regulating tumor-suppressor gene Bcl-2 expression. MiR-124 can protect neuron apoptosis in thyroid hypofunction rat.