反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

bcl—2反义寡核苷酸诱导小细胞肺癌细胞凋亡

ｂｃｌ２是一类与细胞凋亡相关的癌基因，其过度表达所致细胞凋亡受抑制是肿瘤发生的重要基础，并增加肿瘤细胞对放疗和化疗的抵抗性。本试验以脂质体为载体，对ｂｃｌ２ｍＲＮＡ翻译起始部位的反义寡核苷酸导入小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞，探讨其对ＳＣＬＣ细胞ｂｃ...     

足叶乙甙诱导HL—60细胞凋亡及其bcl—2基因表达

目的：研究ＨＬ－６０细胞在足叶乙甙诱导的细胞凋亡中ｂｃｌ－２基因表达，以说明药物致凋亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，ＤＮＡ梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平。     

切割bcl－2mRNA核酶诱导HL－60细胞凋亡的形态学研究

切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的形态学研究赵永同，朱峰，金明，王刚，王成济（第四军医大学生物化学教研室西安７１００３３）关键词核糖核酸，凋亡，ｂｃｌ－２中图号Ｑ５２２；Ｑ７８１核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＺ）是一类具有酶活性的ＲＮＡ分...     

bcl—2反义RNA对白血病细胞株程序化死亡的调变

探讨内源性ｂｃｌ－２蛋白水平降低对白血病细胞程序化死亡的调变。方法采用基因转染技术，观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ介导的靶基因抑制，对足叶乙甙诱发人Ｔ淋巴细胞白血病细胞株程序化死亡的影响。     

瑞香狼毒诱导HL—60细胞凋亡和调节SGC—7901细胞bcl—2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

细胞凋亡与bcl—2基因

细胞凋亡(apoptosis)是机体为了维持自身稳定所采取的一种主动、积极的死亡方式.     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

反义bcl-2基因抗白血病作用的研究

目的 研究反义bcl-2基因抗白血病作用及其特点,探讨反义基因或联合药物体外净化和治疗白血病可行性。方法 （1）RT－PCR和蛋白印迹方法检测HL－60、U937、K562、CEM白血病细胞株以及常见白血病类型的bcl-2 mRNA和P26蛋白表达情况。（2）选择高表达bcl-2基因的HL－60细胞株作为靶细胞,用人工合成bcl-2正反义硫代寡聚脱氧核苷酸（PS－ODN）体外培养处理。检测bcl-2 mRNA和P26蛋白的变化;DNA梯形分析细胞凋亡,锥虫蓝拒染法和克隆培养观察细胞生长;同时将HL－60细胞与PS－ODN培养孵育7天后的活细胞腹腔接种Scid鼠,半巢式RT－PCR和病理分析该HL－60细胞在体内生物学行为改变。（3）建立三种白血病细胞株CEM、K562、HL－60 Scid鼠白血病模型和有效监测与追踪白血病细胞株的方法,掌握体内白血病细胞株生物学行为;用bcl-2正反义PS－ODN腹腔给药治疗HL－60 Scid鼠白血病模型,观察治疗后体内白血病进展变化。（4）用RT－PCR方法克隆bcl-2基因和构建其两种不同的反义RNA逆转录病毒表达载体。（5）转染高表达bcl-2的HL－60细胞,比较两种反义RNA在对抗bcl-2的作用与降低内源性bcl-2蛋白水平上的异同性。观察两种反义RNA介导的靶基因抑制对烷化溶血磷脂（ALP）和四种化疗药物诱导的HL－60细胞凋亡的影响。（6）RT－PCR检测基因转染HL－60在化疗药物作用下FGFβ1表达。结果 （1）白血病细胞株表达bcl-2有差异,bcl-2 mRNA和它的P26蛋白不平行。（2）三种白血病细胞株HL－60,K562,CEM可在Scid鼠增殖,产生典型白血病浸润模型特征,白血病增殖和浸润程度与白血病细胞生物特性有关,其顺序为CEM＞K562＞HL－60。（3）人工合成的bcl-2反义硫化寡脱氧核苷酸（ASPO）能够下调HL－60细胞bcl-2表达,诱导凋亡,抑制增殖和克隆形成;同时使其失去在体内的致白血病能力。（4）bcl-2反义硫代寡脱氧核苷酸,腹腔给药能够抑制肿块增长,白血病扩张,延长Scid鼠生存期,呈剂量依赖性。（5）部分编码区的反义RNA能够降低HL－60细胞内源性Bcl-2蛋白水平,提高ALP和四种化疗药物对HL－60杀伤率,促进它们诱导的HL－60细胞凋亡。（6）反义基因转染的HL－60细胞在化疗药物作用下负调控因子TGFβ1基因表达增加。结论 bcl-2反义基因可有效对抗bcl-2原癌基因表达,发挥明显的抗白血病作用,为体外净化白血病细胞和体内治疗白血病提供依据。     

Bcl-2反义RNA对人多发性骨髓瘤凋亡影响的研究

目的　探讨 bcl- 2反义 RNA对人多发性骨髓瘤内源性Bcl- 2蛋白水平及细胞调亡的影响 ,以期为转基因治疗人多发性骨髓瘤提供实验依据。　方法　利用 DNA重组技术 ,构建反义 bcl- 2逆转录病毒表达载体 ,并将其导入人多发性骨髓瘤细胞株 U2 6 6细胞。通过 RT- PCR检测 bcl- 2反义RNA是否导入了细胞 ,应用 Western Blot检测内源性 Bcl- 2蛋白表达的改变 ,应用形态学、流式细胞术、片段化 DNA电泳及定量分析和 TUNEL 法检测靶细胞的凋亡。　结果　(1)成功地构建了反义 bcl- 2逆转录病毒载体 ,获得的重组病毒上清滴度为 4.5 X10 5 CF…     

反义bcl—2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y生长和凋亡的作用

目的：研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH－SY5Y的生长和凋亡的作用。方法：采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine转染SH－SY5Y,经嘌呤霉素筛选,应用RT－PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达,建立细胞株SH－SY5Y／Asbcl-2,应用免疫组化和Western印迹分析Bcl－2蛋白的表达变化;MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况;通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA梯带。结果：RT－PCR证实转染细胞SH-SY5Y/相A－2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达,免疫组化及Western印迹分析显示SH－SY5Y／Asbcl-细胞凋亡形成的DNA梯度更明显。结论：脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞。反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达,抑制SH－SY5Y的细胞的生长,增加SH－SY5Y细胞对CP的敏感性,促进细胞凋亡。     

bcl—2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC—7901细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨bcl-2反义寡核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性的影响。方法 应用脂质体瞬时转染法介导bcl-2反义寡核苷酸,处理人胃癌细胞系SGC－7901后,分别采用Northern blot、Western blot检测bcl-2 mRNA、蛋白表达,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果 bcl-2 ASODN处理的胃癌SGC－7901细胞端粒酶活性明显受到抑制,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论 bcl-2反义寡核苷酸可抑制胃癌细胞端粒酶活性。     

肝癌细胞凋亡相关基因bcl—2及bax的表达意义

目的：探讨凋亡抑制基因和凋亡促进基因bax表达与肝癌生物学行为的关系及对肝癌预后的关系。方法：用免疫组化LSAB法测定40例肝癌细胞和16例正常肝组织的bcl-2和bax蛋白表达水平。结果：bcl-2及bax蛋白表达率在正常肝组织及肝细胞分别为12．5％、45．0％、87．5％、52．5％,两组间差异有显著性（P＜0．05）。bcl-1,bax蛋白表达与肿瘤病理分级、分期、淋巴结转移及患者预后相关,结论：bcl-2和bax蛋白的表达与了肝癌的发生及进展,并存在相互作用的关系.bcl-2蛋白表达在肝癌有独立预后价值。