siRNA抑制人胶质瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖

目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,与对照组比差异具有显著性（P〈0.5）;同时细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,转染siRNA MDM2-1,2的凋亡率分别为49.9%和40.0%,转染阴性对照质粒和对照组未检测出明显的增殖抑制和凋亡改变。结论 siRNA MDM2可以有效抑制U251细胞株中MDM2的表达,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

siRNA抑制人卵巢癌SKOV-3细胞MDM2的表达及细胞增殖的研究

目的 研究siRNA对人卵巢癌细胞SKOV-3细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入SKOV-3细胞;转染siRNA MDM2(简称si-MDM2)转染阴性对照质粒到SKOV-3,并设只加转染试剂作空白对照组,采用MTT法检测si-M...     

siRNA对骨肉瘤U2OS细胞株MDM2-mRNA表达的抑制作用

目的 研究载体介导的siRNA（small interfere RNA）技术对骨肉瘤细胞株U20S中MDM2-mRNA表达的抑制作用.方法 依据设计siRNA的原则,以MDM2为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体PGCsilencerTM中构建重组体（PGCsilencerTM-MDM2 siRNA）.实验分转染重组质粒组,转染阴性对照质粒组和只加脂质体的空白组;RT-PCR法观察U20S细胞中MDM2-mRNA表达改变.结果 成功构建发卡样MDM2 siRNA真核表达载体（PGCsilencer TM-MDM2 siRNA）;PGCsilencer TM-MDM2 siRNA转染到U20S细胞后,MDM2-mRNA表达较空白组显著下降（P＜0.05）,转染阴性对照质粒组与空白组无显著差异（P＞0.05）.结论 成功构建PGCsilencer TM-MDM2 siRNA重组体,并能有效抑制U20S细胞中MDM2-mRNA表达.     

人参皂苷Rh2诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的研究人参皂苷Rh2（G-Rh2）对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为5、10、20 mg/L的G-Rh2作用于HepG2细胞,于24 h、48 h及72 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;72 h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果 MTT法检测显示,G-Rh2对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;流式细胞仪检测显示G-Rh2作用后,细胞被阻滞于G0/G1期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加。RT-PCR结果显示,G-Rh2下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达。结论 G-Rh2在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断G-Rh2诱发肝癌细胞凋亡的作用与其对survivin基因表达的抑制有关。     

P63和MDM2在喉鳞癌中的表达

我们采用免疫组化方法研究喉鳞状细胞癌中P63和MDM2蛋白表达的情况，探讨P63和MDM2蛋白表达对于喉癌生物学行为的作用。     

MDM2蛋白在下咽癌中的表达

作者采用免疫组化方法研究下咽癌中MDM2蛋白的表达情况,探讨MDM2蛋白异常表达的特点以及与分级和淋巴结转移的关系。     

树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因的表达及与细胞凋亡的关系

背景：目前对肝细胞癌(HCC)的研究大多数只局限于对人的肝癌及癌旁组织进行研究，这种研究方法的最大缺陷是不能动态观察肝癌形成过程中的不同时期的各种变化。目的：利用实验诱发树鼩向肝癌的动物模型，动态研究在树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因(survivin)的表达及其抑制凋亡的机制。设计：完全随机对照实验。干预：实验组给予AFB1(黄曲霉毒素B1)105周，然后继续喂正常饲料至150周。对照组动物不喂AFB1，仅按正常饲养方法同样喂至150周。实验期间每隔15周对实验组和对照组动物打开腹腔进行肝组织活检。活检组织用40g／L中性甲醛固定，石蜡包埋。然后将对照组30，60，90周和实验组30，60周及HCC组织的切片，采用免疫组织化学S-P法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术，进行survivin基因蛋白和凋亡细胞的检测。主要观察指标：树鼩肝细胞癌形成过程中每一阶段的survivin基因蛋白的表达情况和细胞凋亡的情况。结果：survivin基因与HCC的发生有关，在树鼩HCC形成过程中，其表达呈递增趋势。survivin在对照组30，60，90周，实验组30，60周平均得分分别为0．62，0．77，0．92，1．02，1．6，在树鼩HCC组织切片中平均得分为5．34，与各组肝组织中的表达差异有显著性意义(t=3．0580，3．2564，3．0316，4．7715，3．8036，P&;lt;0．01)。结论：survivin表达与凋亡指数呈负相关，survivin表达抑制细胞凋亡。     

MDM2在食管鳞癌中的表达及其意义

目的探讨MDM2蛋白在食管鳞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法分别对49例食管鳞癌组织、30例癌旁非典型增生组织及49例正常黏膜组织中MDM2蛋白的表达进行检测。结果正常食管黏膜组织MDM2蛋白阳性表达率为30．61％（15／49）,非典型增生组织MDM2蛋白阳性表达率为60．33％（19／30）,食管鳞癌组织中MDM2蛋白阳性表达率为87．76％（43／49）;三者两两相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论MDM2蛋白表达与食管鳞癌的发生发展有关。     

特异性siRNA抑制XIAP基因表达对人内膜癌细胞凋亡的影响

【目的】探讨RNA干扰抑制内膜癌RL95-2细胞XIAP基因表达及对细胞凋亡的影响。【方法】设计并合成XIAP基因特异性siRNA,转染人内膜癌RL95-2细胞,Real time RT-PCR检测转染后XIAP mRNA的变化,Western Blot检测 XIAP蛋白的变化,MTT 及流式细胞仪法检测细胞增值和凋亡的变化。【结果】XIAP siRNA转染后,特异性转染组mRNA转录量的相对倍数值为0．04±0．06,相对蛋白表达量分别为0．590±0．178,较各对照组明显减少（P＜0．05）;特异性转染组细胞生长抑制率为（47．86±4．46）％,较对照组明显增高（P＜0．05）。【结论】体外实验表明,合成的 siRNA能在mRNA水平及蛋白水平有效抑制人内膜癌RL95-2细胞内 XIAP基因的转录及表达,进而显著的促进内膜癌细胞凋亡,其促凋亡机制仍有待进一步研究。     

siRNA对骨肉瘤U20S细胞株MDM2-mRNA表达的抑制作用

目的 研究载体介导的siRNA(small interfere RNA)技术对骨肉瘤细胞株U20S中MDM2-mRNA表达的抑制作用.方法 依据设计siRNA的原则,以MDM2为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体PGCsilencerTM中构建重组体(PGCsilencerTM-MDM2 siRNA).实验分转染重组质粒组,转染阴性对照质粒组和只加脂质体的空白组;RT-PCR法观察U20S细胞中MDM2-mRNA表达改变.结果 成功构建发卡样MDM2 siRNA真核表达载体(PGCsilencer TM-MDM2 siRNA);PGCsilencer TM-MDM2 siRNA转染到U20S细胞后,MDM2-mRNA表达较空白组显著下降(P＜0.05),转染阴性对照质粒组与空白组无显著差异(P＞0.05).结论 成功构建PGCsilencer TM-MDM2 siRNA重组体,并能有效抑制U20S细胞中MDM2-mRNA表达.     

小干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响

目的构建Survivin基因特异性小干扰RNA(siRNA),检测siRNA-Survivin对Survivin基因表达的抑制,在人肝癌细胞株HepG2中研究survivin和survivin siRNA对细胞凋亡的影响。方法设计survivin siRNA序列,构建靶向Survivin siRNA真核载体。利用脂质体转染人肝癌HepG2细胞,通过相差显微镜下观察、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转染后survivin的表达,以及HepG2细胞的凋亡。结果成功构建了survivin siRNA表达载体,并且si-survivin对survivin有明显抑制效应,可显著抑制HepG2细胞的发生凋亡。转染Survivin-siRNA细胞活性受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,DNA电泳出现典型的凋亡"梯状"带。RT-PCR结果显示细胞转染24 h、48 h和72 h后HepG2 Survivin mRNA分别减少了56%、78%和50%,而siR-NA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论转染的Survivin-siRNA可特异性抑制肝癌细胞株HepG2凋亡抑制基因的表达,从而为肿瘤的基因治疗提供新的实验基础。     

双去甲氧基姜黄素抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡的机制

目的探讨双去甲氧基姜黄素(BDMC)对肝癌细胞的作用及其机制。方法不同BDMC(0、20、40、80μmol/L)干预肝癌细胞株HEPG2 72 h,MTT评价细胞增殖,Tunel分析细胞凋亡,ELISA检测活性氧(ROS)水平和p-STAT3水平,Western blot检测AMPK。采用ROS抑制剂N-乙酰-L半胱氨酸(NAC 2.5 mmol/L)处理30 min后BDMC再干预24 h,评价细胞凋亡能力。结果 BDMC可诱导肝癌细胞凋亡,增加ROS生成和AMPK磷酸化水平,抑制p-STAT3表达。抑制ROS生成可抑制BDMC诱导HEPG2凋亡的能力。结论 BDMC通过ROS/AMPK/STAT3信号通路诱导肝癌细胞凋亡。     

RNA干扰抑制JMJD3基因表达对肝癌细胞生长,增殖和侵袭的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)基因对肝癌细胞QGY-7703和HepG2的生长、增殖和侵袭能力的影响。方法利用RNA干扰技术沉默JMJD3(siR-JMJD3),以非特异性序列(pSilencer 2.1)转染肝癌细胞QGY-7703细胞和HepG2细胞作为阴性对照,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法、集落形成、Transwell侵袭实验来检测肝癌细胞生长、增殖和侵袭能力的变化。结果 Western Blot检测结果显示,转染siR-JMJD3质粒的试验组成功抑制肝癌细胞中JMJD3的蛋白表达水平。MTT结果显示转入siR-JMJD3后,QGY-7703和HepG2细胞的生长活性与对照组相比分别降低了约25%和17%。集落形成结果显示2种细胞系的集落形成数分别降低了约31%和25%。Transwell侵袭实验结果显示穿膜细胞数分别下降了约44%和47%。结论应用siRNA技术能有效抑制JMJD3基因的表达,同时有效抑制肝癌细胞QGY-7703和HepG2体外生长、增殖和侵袭,为肝癌的生物学治疗提供了新思路。     

miR-663a inhibits hepatocellular carcinoma cell proliferation and invasion by targeting HMGA2

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a highly aggressive solid malignancy throughout the world. Dysregulation of miRNAs play essential roles in HCC progression via aberrant regulation of cell proliferation, apoptosis, as well as metastasis. miR-663a is a poorly investigated miRNA. Whether miR-663a regulates HCC development remains unknown. The aim of the study was to explore the role of miR-663a in HCC development. To determine the expression level of miR-663a in HCC, we analyzed the data from GSE21362 and TCGA. The results showed that miR-663a was significantly down-regulated in HCC tissue compared with adjacent non-tumor tissue. Gain of function and loss of function assays revealed that miR-663a distinctly inhibited cell proliferation, migration and invasion. Mechanistic investigations demonstrated that miR-663a modulated cell functions through targeting and suppressing high mobility group A2 (HMGA2). In addition, overexpression of HMGA2 remarkably attenuated the tumor repressive effect of miR-663a. Taken together, miR-663a inhibits HCC cell proliferation and motility by targeting HMGA2.     

膜联蛋白A4对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力及黏附相关基因表达的影响

目的探讨人膜联蛋白A4(AnnexinA4,ANXA4)对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力的影响及其相关机制。方法化学合成针对ANXA4序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌细胞株MHCC97H;RT-PCR和western blot检测RNA干扰后ANXA4 mRNA和蛋白质的表达水平;黏附实验检测ANXA4表达下降对细胞黏附能力的影响;荧光定量RT-PCR检测RNA干扰后黏附相关基因表达的变化。结果荧光定量RT-PCR及western blot结果表明,经siRNA干扰后,ANXA4 mRNA和蛋白质表达水平明显降低;细胞黏附实验结果显示,与空白对照组的0.293±0.019和Mock组的0.305±0.018相比,实验组为0.234±0.013,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,实验组ITGA5、ITGB1、E-cadherin mRNA表达水平下调,ICAM1、CD44、OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 ANXA4可能通过调节黏附相关基因的表达水平影响细胞的黏附能力,参与肝癌的发生和发展进程。