ABO~* B新等位基因的鉴定1例

目的鉴定1名B抗原弱阳性献血者的血型血清学特点及基因特征。方法采用正反定型及吸收放散试验鉴定其ABO血型,并用PCR技术对ABO基因的7个外显子和启动子分别扩增后测序。结果血型血清学鉴定该个体表达弱B抗原,ABO合子型为B/O,经比对,该标本ABO*B基因存在第6外显子的272T>C的突变。结论发现1例新的ABO*B等位基因。     

B亚型新等位基因803delC的分子生物学研究

目的 分析研究1例新的B亚型等位基因血清学特点和分子生物学机制。方法 应用血清学方法检测患者ABO血型。应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)检测ABO血型基因。应用Sanger基因序列分析检测ABO基因1～7外显子编码区域,确定基因突变位点。结果 血清学鉴定患者正定型为O型,反定型为B型。PCR-SSP基因分型结果为A/O型,存在A基因,与血清学结果不符。进一步Sanger双链测序结果显示该标本在ABO~*B.01/ABO~*O.01.01的基础上,第7外显子803位置缺失C碱基。该突变最终导致多肽链上发生p.Ala268Gly和p.Phe269Ser的氨基酸替换,并且从269位置开始产生新的开放阅读框,新的开放阅读框第20号氨基酸为终止密码子,导致B基因表达终止。进一步ABO基因克隆测序证明该突变点位于ABO~*B.01基因上,该突变已提交NCBI数据库,收录编号为OR343908。结论 在中国人群中发现1种新的导致B变异型的ABO等位基因,基因检测方法可辅助鉴定血清学正、反定型不符的疑难血型。     

一例Bx亚型的鉴定

ABO亚型红细胞A或B抗原均呈现弱抗原性,所有亚型H抗原表达正常或反向升高,分泌型唾液中ABH抗原量也不同,弱B亚型的分类比较困难,对B亚型的判定最好参照A亚型的标准[1],我国B亚型频率高于A亚型[2].患者孟某,临床输血前正定型显示为O型,反定型试验发现其血浆室温下与B型红细胞不发生凝集,经进一步检查证实为Bx亚型,现报告如下.     

Bel亚型α1,3半乳糖基转移酶新等位基因的鉴定

目的 分析1例罕见B放散型的ABO血型分子背景,鉴定ABO新等位基因.方法 对1例正反定型未能鉴定其ABO血型的捐血者,分别采用ABO基因第6及第7外显子直接序列测定及单倍体克隆测序进行基因分型,以及检测ABO基因CBF/NF-Y微卫星增强子区域.结果 血清学鉴定为Bel的个体中发现了一个突变的B等位基因,该等位基因与B101等位基因相比,差异在nt905位A>G突变.该突变导致α1,3半乳糖基转移酶Asp302gly,定为Bel新基因,Genbank注册号为FJ009674.ABO基因微卫星增强区域序列测定为G/C型.结论 αl,3-D-半乳糖基转移酶基因中nt905A>G突变可能是Bel分子遗传机制之一,第302位氨基酸变异大大影响了糖基转移酶的活性.     

罕见B（A）亚型的鉴定

目的 鉴定B（A）亚型.方法 采用血清学方法鉴定1例ABO血型正反定型不符样本,PCR扩增ABO基因第6、7外显子及第6内含子,PCR产物经割胶纯化后直接测序,并对含有突变位点的扩增片段进行单倍体序列分析.结果 该样本为罕见的B（A）亚型,血清中有抗-A,测序表明其基因型为B/O）1,其B基因在B101的基础上,还存在nt640A→G的点突变,导致214位氨基酸由甲硫氨酸（Met）转变为缬氨酸（Val）,该基因为已经报道的B（A）04等位基因.结论 鉴定出罕见的B（A）亚型,血清中含有抗-A.     

B(A)血型等位基因分型研究

目的了解血清学定型为B(A)血型标本的分子基础。方法采用PCR-SSP方法检测以血清学方法定型为B(A)血型的4名献血者和8例送检患者标本的ABO基因型;对于有O等位基因的杂合子标本,使用特异性引物分别扩增O和B等位基因的7号外显子编码序列,并做测序分析。结果 12例采用血清学方法定为B(A)血型标本的ABO基因型分别为B/B型1例(8.33%),B/O1型4例(33.33%),B/O2型7例(58.33%);序列分析显示:B(A)02等位基因为5例(41.67%),B(A)04等位基因为7例(58.33%)。结论 B(A)04和B(A)02等位基因可能是我国北方汉族人群B(A)血型中主要的遗传类型。     

Am新等位基因分子遗传背景的研究

目的鉴定ABO新等位基因,分析Am亚型的分子基础。方法对1例血清学鉴定为Am亚型的标本,PCR扩增ABO等位基因的第6、7外显子及侧翼内含子,PCR产物采用直接测序和克隆测序的方法,确定其基因型。结果在血清学鉴定为Am亚型的标本中发现一个突变的A等位基因,它与ABO*A105等位基因相比只有1个点突变(595C>T)。结论 595位突变导致编码A糖基转移酶的199位氨基酸由精氨酸(Arg)转变为半胱氨酸(Cys),极大降低了酶的活性,表明199位氨基酸对决定ABO糖基转移酶活性是十分关键的。     

1例Bx亚型的分子生物学研究

目的研究Bx亚型的分子生物学特点。方法采用PCR-SSP方法,对3份血清学试验疑为Bx和ABx的标本,做ABO初步基因分型,明确其中的A、B、O基因;并进一步对其ABO基因第7外显子作深入的克隆测序分析。结果克隆测序结果显示3份标本均有C721T点突变,先证者及其妹均有正常的A基因,其父有正常的O基因。结论在中国汉族人中检测到Bw03等位基因。     

新等位基因HLA-B*4060的认定

应用PCR—SSO基因分型技术发现可能的HLA新等位基因，对PCR产物进行测序及克隆测序，确认与最同源HLA等位基因序列的差异。发现一个样本的HLA—B位点结果异常，其核苷酸序列与已知所有HLA—B位点等位基因序列均不一致，与同源性最高的等位基因B＊400102在第三外显子区域有7个碱基的差异。判断该等位基因为HLA-B位点的一个新等位基因，于2005年7月被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-B＊4060。     

Bx亚型血型鉴定1例

ABO血型是人类血型系统中最早被发现,对保证输血安全具有重要意义的一个系统.它具有多个亚型,对其亚型进行正确定型是保证安全输血的一个重要前提.     

罕见B放散型分子遗传背景的分析

目的分析一例罕见B放散型的ABO基因分子遗传背景。方法对一例血型血清学正反定型不符的无偿捐血者样本进行了包括吸收放散、血型物质检测等系列血清学实验后,采用PCR-SSP方法、第6、7外显子PCR产物直接测序,进行ABO基因定型;并对第6、7外显子及第6内含子进行基因克隆序列分析,以及采用PCR扩增样本的ABO基因5端调控(CBF/NF-Y增强子)区域,扩增产物经胶回收后进行直接序列测定。结果经过吸收放散等血型血清学实验鉴定为Bel表现型,在此样本中发现了一个ABO*B变异等位基因,它是在ABO基因的第7外显子695核苷酸位出现T>C突变,导致232位氨基酸由Leu转变为Pro。ABO基因微卫星增强区域序列测定为4个43个碱基长度的重复,第1个重复中nt41为C/G杂合,其余3个重复序列中nt41均为G,定为G/C型(B101/O01等位基因型)。结论在中国人群中再次报道nt695位突变的ABO新等位基因,表明ABO基因的第232位氨基酸对决定ABH糖基转移酶活性是至关重要的。     

ABO血型新等位基因Ael08的分子生物学研究

目的研究ABO新等位基因Ael08的分子机制。方法利用单克隆抗体检测先证者标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测血清中的ABO抗体,吸收放散试验检测红细胞上微量抗原;采用PCR技术扩增先证者ABO基因的第5~7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子;扩增产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆作ABO基因第6、7外显子双向测序分析;家系调查采集先证者父亲和哥哥的标本作血型血清学试验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞上表达很弱的A抗原,只有通过吸收放散才能有效检出,同时其血浆中存在较强的抗-B和较弱的抗-A;直接测序分析发现:6号外显子第261位缺失杂合,7号外显子第297位A/G、467C/T、646T/A、681G/A、771C/T、829G/A、804insG/G杂合;克隆测序发现1个为常见的O02等位基因,另1个为1种新的等位基因(已被dRBC NCBI命名为Ael08),与A102比较,Ael08在第804位碱基处插入G,这导致氨基酸第268位后阅读框架发生改变,编码产物比正常A1转移酶多37个氨基酸。家系调查显示:先证者Ael08等位基因从父亲遗传所得。结论发现1个ABO新等位基因Ael08,α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因(A基因)第804位碱基处插入G突变导致产生Ael表型。     

中国汉族人群检出新的B(A)641T>C等位基因

目的明确稀有ABO表现型的遗传学基础。方法对ABO血清学常规定型正反不一致的样本,采用PCR-RFLP方法作初步基因分型,对8例血清学表现为AwB,而基因分型具有O基因的个体,进行ABO基因第6和7外显子PCR产物的TA克隆及核苷酸序列测定。结果8例样本除1对为母女关系外,其余无任何亲缘关系,血清学表现相似,红细胞上含有接近正常的B抗原和少量A抗原,H抗原含量较正常B细胞显著增高,血清中存在抗-A,初定为AwB,基因分型均为BO。克隆测序表明除具有正常O1或者O1V基因外,他们的B基因第7外显子在正常B等位基因的基础上,均发生单碱基突变,4例发生nt700C>G点突变,导致Pro234Ala,2例无关个体为nt640A>G点突变,导致Met214Val,1对母女均表现nt641T>C点突变,导致Met214Thr。证实所有8例样本真正血型应为B(A)表现型,其基因型均为B(A)/O型。结论在中国汉族人群中检出3种B(A)血型,除了已在我国台湾首先被发现的B(A)700C>G和笔者以前报道的B(A)640A>G之外,新发现1种B(A)641T>C等位基因。     

A novel blood group B subgroup: serological and genetic studies

A discrepancy in the ABO blood groups between a newborn child and her parents was identified. Serological and DNA investigative techniques were performed. A weak variant of B (B(w)) was detected on the erythrocytes of the child, her grandmother and great-uncle. Adsorption-elution studies showed that their erythrocytes adsorb and yield anti-B on elution. The B(w) antigenic strength of the A(1)B(w) cells of her mother and maternal aunt was reduced when compared to that of the A(2)B(w) from another family member. Only one of 15 different anti-B sera agglutinated the A(1)B(w) erythrocytes. Agglutinin anti-B that reacted strongly with normal B erythrocytes and did not agglutinate the B(w) cells, was found in the sera of the A(1)B(w) individuals. The B(w) serum glycosyltransferase could not convert O cells into B cells and no B substance was found in saliva. All family members with the B(w)/AB(w) phenotypes were heterozygous for a B allele and DNA sequencing revealed a novel missense mutation in exon 7 of the B allele (556A > G), resulting in M186V. This substitution changes a highly conserved region of the enzyme, proposed to be a disordered loop near the enzyme cleft, and is expected to diminish the enzyme's activity, leading to this B(w) phenotype.     

Ael亚型的分子生物学研究

目的　研究汉族ABO血型系统Ael亚型分子基因基础。方法　在标准血清学鉴定的基础上 ,对 2例汉族Ael亚型进行PCR SSP基因分型。并根据第 6、7外显子及两侧内含子的保守序列设计引物进行扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果　PCR SSP基因分型排除了其中一个等位基因为A2 、B、O1和O2 基因的可能。DNA序列分析表明 ,该Ael亚型基因与A1基因相比 ,有 (798～ 80 4 )G插入和C(I 5 / 5 32 )T两处突变 ,推测的蛋白质除羧基端 86个氨基酸残基与A1糖基转移酶不同外 ,还比A1转移酶多 37个残基。结论 (798～ 80 4 )G插入和C(I 5 / 5 32 )T两处突变揭示了Ael亚型的分子基础     

B抗原减弱表型的表型频率与ABO基因分析

目的对血清学表现为B抗原减弱的血液样本进行筛查和ABO基因分析,了解其分布特征和分子遗传学基础。方法筛查并收集B抗原减弱（与抗-B血清试管法凝集强度中等）的样本,采用血型血清学方法进行鉴定分析,采用直接测序的方法对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行序列分析,对可追踪家庭进行家系分析。结果从241952份样本中检出13例B抗原减弱表型,其中B型9例、AB型4例;所有样本的红细胞与抗-H反应均增强;其中2例可检出不规则抗-B;ABO基因型分别为A102／Bw12（1例）、BIOI／B101（2例）、B10I／002（3例）、A102／B101（3例）、B101／001（4例）。在1例基因型为B101／001个体的家系成员（父亲）中检出相同表型。结论该类表型在B型人群中的频率约为1：7000;除1例样本的B等位基因存在278C〉T突变（Bw12）外,其余样本在第6、7外显子和第6内含子中均未检出突变;ABO基因酶催化活性区域编码序列以外的基因变异,可能是导致B抗原减弱的原因之一。     

新等位基因HLA-B~* 9537的确认和序列分析

目的识别并确认1个新的HLA等位基因。方法应用PCR-SSO,PCR-SSP基因分型技术对1份临床样本做HLA分型,对可能的HLA新等位基因进行分子克隆和DNA测序,分析与最同源的B*1504的差异。结果得到1份样本的序列与已知的所有HLA-B等位基因序列不一致,与B*1504的差异表现在第3外显子区域中的379G>C,409C>T,412G>A,419C>T,导致氨基酸分别由谷氨酸→天冬氨酸(E103D),苏氨酸→赖氨酸(T113K),谷氨酰胺→谷氨酸(Q114E)和丝氨酸→苯氨酸(S116F)。结论该基因为HLA-B位点的1个新等位基因,已被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*9537     

cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析

目的 研究汉族ABO血型系统cisAB亚型的分子遗传基础。方法 在标准血清学鉴定和PCR－SSP基因分型的基础上,对汉族cisAB亚型进行第6,7外显子及侧翼内含子DNA扩增,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果 血清学鉴定表明2例标本分别为A2B3和A3B,先证者的PCR－SSP基因分型肯定了其中的B和O1基因。DNA序列分析表明,其第6外显子有261G缺失／不缺失杂合;第7外显子与A1基因相比,有T467C杂合和C803G杂合,796位为正常C,表明其血型为罕见的cisAB亚型。结论 467T,796C和803C三处核苷酸的独特性决定了cisAB亚型的分子遗传基础。     

4例Ax亚型血清学及分子遗传分析——发现一个新的Ax等位基因

目的 对4例正反定型不符的献血者标本进行分子遗传分析,分析其分子生物特征.方法 采用吸收放散进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法进行基因分型,采用PCR产物直接测序分析其序列.结果 该4例标本均为Ax或AxB亚型,测序结果表明,第六、七外显子含有4个碱基错义突变,分别为nt467T＞C,nt526G＞C,nt539G＞A,nt646T＞A.一个碱基无义突变nt537G＞A.其中nt526G＞C,nt539G＞A两个错义突变和nt537 G＞A无义突变是在Ax亚型个体中首次发现.结论 Ax亚型可能是多个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少.