食管癌组织角蛋白表达的免疫组化研究

角蛋白是广泛存在于多种上皮及肿瘤细胞内的一种中间丝，它对肿瘤的起源，分化程度的鉴别诊断具有重要价值。我们对56例食管石蜡包埋组织采用免疫组化法进行了角蛋白表达的研究，旨在了解食管癌不同病期、分化程度、淋巴结转移和病变浸润深度与角蛋白表达的关系及对临床预后的判断价值。     

肺和肺癌角蛋白免疫组化观察

本文比较正常肺组织和肺癌多克隆角蛋白免疫组化标记结果。10例围产儿尸检肺和31例癌旁组织的正常支气管及较大分支均阳性,程度由近端向末梢逐渐递减。支气管腺体中,浆液性腺泡阳性。鳞癌39例,每例均可查见数量不等的强阳性细胞;这对Ⅲ级鳞癌的诊断很有价值。腺癌20例,呈中度或弱阳性反应,分布较均匀;腺样结构和粘液分泌仍为诊断依据。差分化癌17例和小细胞癌6例以弱阳性为主。还结合文献进行讨论。     

大鼠生后发育期皮肤和毛囊中角蛋白14的研究

目的 研究大鼠新生和幼年期的皮肤和毛囊中角蛋白14的mRNA的分布和含量的变化。方法 生后第1至49天Wistar大鼠分为32组，测定毛发周期，并用放射标记的原位杂交方法（in situ hybridization,ISH）对皮肤和毛囊石蜡切片上角蛋白14mRNA的分布进行了研究和半定量分析。结果 大鼠的第1毛发周期明显短于第2周期，和小鼠同期相比也有差别；角蛋白14mRNA主要见于表皮基底/基上层和毛囊上部外根鞘等部位的角质形成细胞及皮脂腺细胞等，其他区域及细胞无角蛋白14mRNA阳性信号检见。结论 大鼠新生和幼年期皮肤和毛囊中角蛋白14mRNA的表达与在成人和人胚胎皮肤中的规律有一定差异。     

抗原修复对多聚甲醛固定脑组织冰冻切片免疫组化反应的影响

目的 比较抗原修复对多聚甲醛固定脑组织冰冻切片免疫组化结果的影响。方法 成年SD大鼠用4％多聚甲醛经心腔灌注、固定后，分别经15％及30％蔗糖梯度脱水后进行冰冻切片（10μm），取相同部位切片20张，用兔抗Ach-M2受体多克隆抗体和小鼠抗DA-D2受体多克隆抗体作S-P免疫组化染色。结果 经抗原修复的冰冻切片组的阳性结果比未经抗原修复组有明显提高。结论 本实验首次发现多聚甲醛固定的组织冰冻切片经抗原修复可以提高免疫反应敏感性或提升抗体效价。机制可能与多聚甲醛固定后对抗原有封闭作用有关。     

冷冻保存连续冰冻切片在免疫组化染色中的应用

[目的]探讨科研工作中使用连续冰冻切片进行免疫组化染色时切片的保存方法。[方法]将不能马上完成染色的连续冰冻切片采用干燥、密封的方法置于-80℃保存,需要时取出自然干燥后进行常规免疫组化染色。[结果]使用冷冻保存的冰冻切片进行免疫组化染色,组织结构清晰完整,细胞境界分明,染色对比度好,特异性抗原标记明显,与未经冷冻的新鲜切片比较各项观察指标无明显差异。[结论]-80℃冷冻保存冰冻切片的方法是可行的。     

冰冻切片制作及免疫组化的改进

与石蜡切片相比,冰冻切片在抗原完整性的保存上有其不可取代的优势,尤其在科研实验的免疫组化方面,可以标记不能在石蜡切片上显示的抗原.我们对制作冰冻切片及免疫组化操作细节上进行改进,取得了较满意的效果.现将实验操作过程报告如下.     

自体可注射生物复合填充材料毛发角蛋白的应用

目的：体外培养的成纤维细胞(Fbs)与自体毛发角蛋白(HK)颗粒进行复合培养,探讨HK对Fbs的作用。方法：实验分为Fbs组、Fbs: HK=1:1组、Fbs: HK=2：1组及HK组。利用消化分离法对人Fbs进行原代培养;MTT法测定Fbs的生长曲线以及利用羟脯氨酸(HYP)试剂盒对Fbs与HK复合培养的培养液中HY...     

Peripheral nerve repair by conduits made of human hair keratin：An experimental study

Objective: To explore the method to repair injured peripheral nerve using conduits made of human hair keratin (HHK). Methods: The tibial nerves of rabbits were transected leaving a gap 10 mm in length between the 2 severed ends, which were either routinely sutured or bridged using HHK nerve conduits. Electro-physiological , anatomical and histological examinations were performed at different time postoperatively. Results: Electrophysiological study showed more obvious improvement in the neural function recovery in rabbits with HHK conduits bridging as compared with that in rabbits with routine suture. In the former group, HHK conduits were gradually degraded and absorbed with large amount of myelinated nerve fibers and Schwann cells regenerated around HHK conduits. In the latter group, however, the nerve tissues around the suture were degenerated and replaced by connective tissues. Conclusion: HHK may induce the regeneration of the nerve fibers and provides an ideal approach to repair nerve damages.     

大鼠坐骨神经切除后人发角蛋白诱导的神经的再生机制

目的 观察人发角蛋白(HHK)诱导坐骨神经再生时的形态学变化,以揭示神经再生机制,方法制备坐骨神经损伤动物模型,植入HHK丝束桥接体,手术后2天、1、2、3、6、9、12周进行组织学观察.结果 术后第2天到2周,大量新生微血管长入HHK植入部位,切除后近远端的施万细胞发生去分化.去分化后的施万细胞沿着HHK丝束表面纵向分裂增殖.术后第3周人发开始降解,HHK周围可见很多巨噬细胞和多核巨细胞,大量增生的施万细胞有规则地排列于HHK丝间,有轴突和大量的微血管出现.术后第6周,在HHK丝周围可见大量新生的神经纤维,其间有微血管分布.术后第9周,人发角蛋白降解显著,再生神经纤维增多,有明显的神经外膜和束膜.术后第12周,实验组人发角蛋白基本完全降解,其部位被新的神经纤维所取代,并已贯通缺损部位,且外观形态接近正常神经.结论 1,HHK对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥接作用.2、受损后高度分化的施万细胞通过去分化形成幼稚的施万细胞,其中胞质脱落起着关键作用.3、受损轴突立即发生保护性封闭、脱落.健康轴突形成膨大的带突起的生长锥,生长锥突起上伸出许多丝状生长芽.并与1到多个施万细胞嵌合,它们通过竞争性选择,最后只有一条生长芽可发育成完整的轴突.4、神经纤维屏障膜(神经外膜、束膜及内膜)是由最外侧的血管屏障膜中和束内的微血管间充质细胞演变而成的.总之,施万细胞、神经轴突、神经膜三者的再生模式是自身器官化过程所要求的,它们是同步进行的协调行为.     

人发角蛋白神经导管诱导兔胫神经修复时NGF和p75的表达及分布

目的研究人发角蛋白(HHK)神经导管诱导兔胫神经缺损再生修复时神经生长因子(NGF)及其低亲和受体p75的表达及分布。方法取正常胫神经、缝线连接的胫神经和HHK导管桥接的胫神经术后不同时期的切口部位及相邻组织制作石蜡切片,用免疫组化法对切片进行染色。结果正常胫神经组织中无NGF阳性染色。术后76 d,HHK周围的新生组织中NGF免疫组化染色表现为强阳性,而缝线周围的组织中无阳性着色。术后100 d,与正常胫神经组织无显著差异。正常胫神经组织中无p75阳性染色。术后76 d,导管组HHK周围较成熟的神经组织中p75免疫组化染色为弱阳性,而新生组织中为强阳性。术后100 d,导管组的p75免疫组化染色与正常神经组织无显著差别。结论HHK及其降解产物能诱导NGF和p75的产生,为神经再生创造良好的微环境;而缝线无此诱导作用。在新生神经组织中NGF和p75含量多,较成熟的神经组织中含量少。     

无毛囊发干遗传分析新标记的应用

 目的 解决法医检验工作中自然脱落的毛发、严重降解的骨骼及牙齿这类检材检验难度大且检出完整DNA分型的成功率低的问题。方法 应用一类特殊的DNA序列——逆转座子(retrotransponson,RE)进行检验鉴定,用作遗传分析的RE DNA片段长度多在60～125 bp,利用21个基因座组合的RE个体识别系统计算似然比(likelihood,LR),并计算亲缘关系鉴定中的累计非父排除率(combined paternity index,CPI)。 结果 本系统对无毛囊的发干、严重降解的生物检材有较高的检出成功率,LR值多在108～1012,完全能够达到同一认定的水平。计算CPI值后发现难以得出支持假设的结论,多个案例计算的CPI数值小于10 000。结论 21个基因座的RE系统可以用于个体识别鉴定,亲缘关系的鉴定仍需增加基因座。     

Degradation of human hair keratin scaffold material used to repair in-jured skeletal muscles of rabbits

Objective: To explore the mechanism of the degradation of human hair keratin (HHK) scaffold material implanted in damaged skeletal muscle tissues. Methods : Six New Zealand rabbits with HHK scaffold material implants (composed of 3 different types of HHK material with varied degradation speed) after mus-clectomy were divided into 3 groups (2 in each group) to observe the degradation of the material at 1, 3, 6 weeks after operation. Another rabbit without operation was used as the control group. The degradation of HHK was observed with light microscopy, histochemistry of ubiquitin and electron microscopy. Results: Light microscopy showed that human hair cuticles fell off from the HHK material and emerged, and the macrophagocytes and multinucleate giant cells were attached onto the surface of the material, which became homogeneous at the first postoperative week. The HHK scaffold material was degraded into particles that was phagocytosed by macrophagocytes and multinucleate giant cells at the third week. Ubiquitin enzymatic histochemistry showed that the macrophagocytes and the multinucleate giant cells were positive at the first week. Under electron microscope, HHK scaffold material was degraded into particles, and at the sixth week, part of HHK scaffold material was further degraded. Conclusion : Large mass of the HHK scaffold material is degraded via ubiquitin system, and the resultant particles are phagocytosed and degraded with the cooperation of lysosome and ubiquitin.     

人发角蛋白对脊髓损伤大鼠少突胶质细胞增殖分化效应的影响

目的探讨体内可降解生物材料人发角蛋白(HHK)植入急性冲击性损伤脊髓后,对神经再生过程中少突胶质细胞增殖分化效应的影响。方法采用改制Ⅱ型NYU装置,在建立大鼠急性冲击性脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠脊髓损伤部位,对植入后1、4、12、26周损伤脊髓组织进行光学和电镜结构观察。结果第1周时,损伤部位可见少突胶质细胞散在分布于大量浸润的炎症细胞中;第4周时,通过Mallory's磷乌酸苏木素染色,显示HHK周边呈层包绕的增生少突胶质细胞;第12和26周主要为神经再生和髓鞘重建过程,重建中的少突胶质细胞髓鞘内出现较大的空腔,髓鞘层状分离,并形成大小不一的髓鞘小体,重建髓鞘周边可见新生的少突胶质细胞。结论在急性冲击性脊髓损伤后神经再生过程中,HHK对少突胶质细胞的增殖分化及髓鞘再生修复有积极作用,为进一步综合研究HHK对脊髓损伤修复的作用提供了实验依据。     

人发角蛋白人工腱诱导自体腱形成中胶原原纤维的形态学变化

目的观察人发角蛋白(HHK)人工腱诱导自体腱形成过程中胶原原纤维形成的形态学变化。方法制备肌腱损伤动物模型,植入HHK人工腱,于术后3、6、9、12、16周取出,进行光镜及电镜观察。结果自体腱形成过程中,先后有一级、二级和三级胶原原纤维形成。结论HHK人工腱诱导自体腱形成过程中,人工腱植入区肌腱断端和腱膜下的腱细胞去分化,分泌大量的胶原蛋白,并在细胞外生成一级胶原原纤维,再逐级融合形成二级和三级胶原原纤维,最终多数腱细胞胶原化而消失。     

TPA促进小鼠毛囊中TCF3的表达

目的 检测12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13 (TPA)处理C57 BL/6( B6)小鼠背部皮肤后TCF3表达的变化情况.方法 采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot等技术,检测TPA和丙酮分别处理7周大小的B6鼠背部皮肤1、2和4周后TCF3的表达情况.结果 与丙酮处理组相比,TPA处理组中B6鼠...     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法将25只新西兰兔分成3组,对照组不接受手术;另2组切除胫神经10mm,分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断端,术后不同时间分别进行神经电生理检查、解剖和组织学观察。结果术后92d经电生理检查,HHK组较无HHK组功能恢复快。解剖观察发现,神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满,人发部分消失,残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维,神经纤维无序排列,人发被初步降解。术后1年,人发被完全降解,神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生,跨过10mm的缺损间隙,从而修复神经缺损。HHK是制作神经导管的较为理想的材料。