癌基因／抑癌基因与细胞增殖控制

癌基因／抑癌基因与细胞增殖控制浙江医科大学（３１０００６）余应年肿瘤细胞的失控性增殖是恶性肿瘤的基本特征之一。细胞增殖及其调节的分子机制已成为现代生物学与肿瘤学基础研究的热点。细胞周期的控制在稳定条件下有序的细胞周期进程酷似行走准确的时钟（细胞周期钟...     

SOX11抑制食管癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨转录因子SOX11在食管癌组织和细胞系中的表达及对人食管癌细胞EC109增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法 qRT-PCR和免疫组织化学法分析SOX11在食管癌组织、细胞系(EC109、KYSE150、KYSE410和KYSE510)及正常食管上皮细胞HEEC的表达;分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-SOX11质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至EC109细胞系,qRT-PCR验证SOX11的过表达;CCK-8实验和Transwell实验分析SOX11对细胞增殖和迁移能力的影响;qRT-PCR及Western blot验证SOX11对细胞增殖和迁移的相关标志物表达分析。结果与食管上皮组织相比,SOX11 mRNA和蛋白在食管癌组织中的表达明显下调;SOX11的蛋白表达下调与肿瘤分级(P=0.014)、T分期(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.014)相关;同时与食管上皮细胞相比,SOX11 mRNA在食管癌细胞中表达下调,差异具有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,实验组24、48、72 h细胞活性受...     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

儿童肾母细胞瘤的CT诊断价值

目的：探讨ＣＴ对肾母细胞瘤的诊断价值,指导临床治疗。资料与方法：回顾性分析４３例病理证实为肾母细胞瘤平扫加增强扫描的ＣＴ征象。结果：肿瘤单侧多见,也可为双侧,多发生于肾脏一极,也可全部,常表现为强化不明显的实性肿块,瘤内常有坏死、囊变,少数有出血、钙化,典型表现为残存肾实质变薄,呈新月形、环形、或肾的正常结构消失。本组术前发现病灶１００％,诊断准确率９５％。结论：ＣＴ增强扫描能发现小病灶的痛母细胞     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

抑癌基因CDKN2与肿瘤的发生发展

ＣＤＫＮ２基因（Ｐ１６、ＭＴＳ１、Ｃｄｋ４Ｉ）是较近发现的一种新型抑癌基因，其蛋白产物ｐ１６通过直接作用于细胞生长周期的特定调控元件而参与其周期调控。尽管目前ＣＤＫＮ２基因与肿瘤的关系尚未完全阐明，但其在肿瘤细胞中的高频突变率及可能的临床应用前景使其成为当今肿瘤分子生物学研究热点之一。     

一种新的抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达及生物学意义

背景与目的：PTEN基因是新发现的一种抑癌基因,定位于人染色体10q23,它的缺失和突变可能构成一个新的信号转导途径,与人类恶性肿瘤的发生普遍相关,资料报道。肾细胞癌有抑癌基因PTEN的缺失和突变。但目前尚未见到关于抑癌基因PTEN在肾细胞癌中表达的研究,本实验研究抑癌基因PTEN在肾细胞癌的表达和生物学意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测5例正常肾组织,18例癌旁肾组织和40例肾细胞癌组织中抑癌基因PTEN的表达,分析抑癌基因PTEN的表达与肾细胞癌病理类型,淋巴结转移之间的关系。结果：5例正常肾组织和18例癌旁肾组织均有较强的PTEN蛋白的表达,正常肾组织和癌旁肾组织PTEN蛋白的表达强度,阳性细胞的分布形式无明显差异,肾小管上皮细胞的胞质呈PTEN蛋白阳性,免疫组化染色程度较强,肾小球无PTEN蛋白的表达。抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达不同于正常肾组织和癌旁肾组织,12．5％,呈PTEN蛋白阴性,17．5％呈弱阳性,70％呈阳性或强阳性,PTEN蛋白阴性,弱阳性和阳性的肾细胞癌,肾门淋巴结转移率分别为80％,51．74％,10．71％,PTEN蛋白阴性和弱阳性肾细胞癌的肾门淋巴结转移率与PTEN阳性者比较,差异有显著性（P＜0．05）,结论：本实验提示肾细胞癌中存在着抑癌基因PTEN的表达缺失和异常,可能与肾细胞癌的发生,发展有关,抑癌基因PTEN是肾细胞癌的一种新的相关基因。     

抑癌基因CDKN2的变异与原发性胃癌的关系

 目的 研究CDKN2 基因的突变、缺失与原发性胃癌发生发展的关系。方法 用PCR和银染SSCP分析了45 例胃癌组织和22 例相应正常胃粘膜中CDKN2 基因的突变和纯合性缺失情况。结果 发现CDKN2 基因的纯合性缺失率为28-9 % ,其中β型转录子的缺失率为15-6 % ;无一例有CDKN2 基因的突变。结论 胃癌的发生发展与CDKN2 基因纯合性缺失密切相关,与CDKN2基因的突变无关,β型转录子参与维持CDKN2 基因的正常功能,其纯合性缺失与胃癌的发生有关。     

儿童肾母细胞瘤的治疗进展

儿童肾母细胞瘤(Wilms’tumor)的生存率由30年代的30％左右提高到目前的85％以上，综合治疗功不可没。美国国家肾母细胞瘤研究组(national wilms’tumor study group，NWTS)自1969年起进行了5个肾母细胞瘤的随机分组临床研究，为其诊断、分期和治疗提出不少的重要建议。     

PRC1通过激活Wnt/β-catenin途径促进胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成

目的:探讨胞质分裂原蛋白调节因子-1（protein regulator of cytokinesis-1,PRC1）对胶质母细胞瘤的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR和Western blot检测胶质母细胞瘤组织和正常脑组织中PRC1的表达;人胶质母细胞瘤细胞株U251转染siRNA-NC和siRNA-PRC1序列,RT-PCR检测细胞中PRC1 mRNA表达;Western blot检测细胞中PRC1、Wnt1、β-catenin和CyclinD1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;血管生成实验检测血管生成。结果:与正常组织相比,癌组织中PRC1 mRNA和蛋白表达升高（P＜0.001）;与siRNA-NC组相比,siRNA-PRC1组细胞在24 h、48 h及72 h的细胞增殖能力降低（P＜0.01）,G0/G1期细胞含量升高（P＜0.05）,S和G2/M期细胞含量降低（P＜0.05）,细胞迁移数和侵袭数降低（P＜0.01）,内皮细胞管道形成数降低（P＜0.001）,Wnt1、β-catenin和CyclinD1蛋白表达降低（P＜0.01）。结论:PRC1在胶质母细胞瘤组织中表达上调,PRC1可能通过促进Wnt/β-catenin途径活化,促进胶质母细胞瘤细胞增殖、细胞周期进程、迁移、侵袭和血管生成。     

乳腺癌转移抑制基因1抑制肿瘤转移的作用机制

乳腺癌转移抑制基因1 (BRMS1)在多种恶性肿瘤细胞中表达降低或缺失,具有明显降低癌细胞侵袭和转移的作用.BRMS1基因通过磷酸肌醇信号及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路等调节基因转录和蛋白翻译,还可与mSin3-组蛋白去乙酰化酶(HDAC)复合体、雌激素受体等蛋白相互作用、修复细胞间隙通讯等途径抑制肿瘤细胞的侵袭及转移.BRMS1基因将可能成为有效抑制肿瘤转移基因治疗的新靶点.     

WNT4在脑胶质瘤中甲基化下调及抑制恶性胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨WNT4在脑胶质瘤细胞系和组织中细胞系的表达与甲基化对脑胶质瘤细胞系U87增殖的作用和机制。方法 qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析WNT4在脑胶质瘤组织中的表达和甲基化及WNT4在脑胶质瘤细胞系中的表达;以胶质瘤U87细胞为本实验研究对象,分别转染慢病毒载体pLVX-Gfp-WNT4(实验组)和pLVX-Gfp-NC(对照组);细胞增殖和克隆形成实验分析WNT4基因对细胞增殖的影响;免疫蛋白印迹法验证WNT4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果 与正常人星形胶质细胞相比,WNT4 mRNA在脑胶质瘤细胞系中的表达下调(P＜0.001),与正常脑组织相比,WNT4 mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中表达下调(P＜0.001);脑胶质瘤分级越高WNT4 mRNA表达越低(P＜0.001),高表达WNT4 mRNA患者的预后好(P＜0.001);WNT4在脑胶质瘤中甲基化程度明显高于正常脑组织。过表达WNT4后细胞活性和增殖能力受到抑制(P＜0.001);恢复WNT4表达后Wnt/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论 WNT4在人脑胶质瘤组织中表达甲基化下调,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路参与脑胶质瘤的进展。     

Salinomycin inhibits osteosarcoma by targeting its tumor stem cells

Osteosarcoma is the most common primary bone tumor in children and adolescents and is typically associated with a poor prognosis. Tumor stem cells (TSCs) are presumed to drive tumor initiation and tumor relapse or metastasis. Hence, the poor prognosis of osteosarcoma likely results from a failure to target the osteosarcoma stem cells. Here, we have utilized three different methods to enrich TSCs in osteosarcoma and further evaluated whether salinomycin could selectively target TSCs in osteosarcoma. Our results indicated that sarcosphere selection, chemotherapy selection and stem cell marker OCT4 or SOX2 over-expression are all effective in the enrichment of TSCs from osteosarcoma cell lines. Further investigation found that salinomycin inhibited osteosarcoma by selectively targeting its stem cells both in vitro and in vivo without severe side effects, and the Wnt/β-catenin signaling pathway may be involved in this inhibition of salinomycin. Taken together, we have identified that salinomycin is an effective inhibitor of osteosarcoma stem cells, supporting the use of salinomycin for elimination of osteosarcoma stem cells and implying a need for further clinical evaluation.     

HECA通过Wnt通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:拟在通过影响肝细胞癌HepG2细胞株中HECA基因表达变化,观察与HECA基因相关联的Wnt通路上重要调节分子的变化,讨论此通路影响肝癌细胞增殖能力状况及其相关作用机理。方法:HECA慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,细胞株中稳定上调HECA,用HECA siRNA转染HepG2细胞株下调HECA,在HECA表达上调的细胞株中用qPCR检测Wnt通路中β-catenin、TCF4、CDK2、CDK9、Cyclin A和Cyclin K的mRNA表达水平的变化,用Western blot检测qPCR结果中差异明显的β-catenin、TCF4蛋白表达水平的变化,应用FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,进一步验证HECA基因与Wnt通路的关系,利用Western blot检测HECA的表达水平,用MTT、划痕、克隆形成以及Transwell实验检测对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响。结果:qPCR法以及Western blot法对其相关基因表达水平进行测定,结果显示在HepG2细胞株内HECA过表达后,与HECA相关联的Wnt通路重要调节分子中β-catenin、TCF4的表达水平显著降低;FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,Western blot实验结果显示FH535处理过的过表达组HECA水平更高,细胞功能实验也表明FH535处理过的过表达HECA组,其细胞增殖及侵袭能力下降最明显。结论:HECA基因抑制肝细胞癌增殖及侵袭的分子机制可能为:HECA通过Wnt/β-catenin这一经典通路内β-catenin与TCF4的结合活性降低而发挥作用。     

甲基化修饰抑癌基因MSX1抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的研究

目的 探讨MSX1在黑色素瘤细胞系和组织中表达和甲基化及对黑色素瘤细胞A375迁移/侵袭的影响和机制。方法 qRT-PCR和免疫组织化学法分别检测MSX1在黑色素瘤细胞系和组织中的表达;甲基化PCR分析MSX1在黑色素瘤组织中甲基化;分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-MSX1质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至A375细胞;Transwell迁移和侵袭实验检测MSX1对细胞迁移和侵袭的影响;RT-PCR验证MSX1对上皮间质转化及下游相关标志物的影响,免疫蛋白印迹实验验证MSX1对WNT/β-catenin信号通路的影响。结果 与色素痣组织和细胞相比,MSX1 mRNA和蛋白在黑色素瘤细胞和组织中表达下调(P＜0.001);MSX1甲基化水平表达上调,其甲基化程度明显高于癌旁组织和正常色素痣组织。过表达MSX1后抑制细胞迁移和侵袭(P＜0.001),而上皮间质转化及下游相关标志物表达受到抑制。过表达MSX1能抑制WNT/β-catenin信号通路及其下游细胞因子的表达。结论 MSX1在黑色素瘤组织中表达下调,能抑制Wnt/β-catenin信号通路参与黑色素瘤的进展。     

Upregulation of DKK3 by miR-483-3p plays an important role in the chemoprevention of colorectal cancer mediated by black raspberry anthocyanins

It is reported that black raspberry (BRB) anthocyanins could act as a potential chemopreventive agent for colorectal cancer (CRC). However, the underlying mechanism by which BRB anthocyanins inhibits the carcinogenesis of CRC cells has not been elucidated. The abnormal expression of microRNAs (miRNAs) that target important tumor suppressor genes is usually associated with CRC development. In this study, we explored whether BRB anthocyanins could affect the expression of certain miRNAs in an azoxymethane (AOM)/dextran sulphate sodium (DSS)-induced CRC mouse model and human CRC cell lines. miRNA microarray analysis was used to determine the differences in miRNA expression between AOM/DSS-induced mice fed with a diet supplemented without or with BRB anthocyanins. The expression of one particular miRNA, miR-483-3p, was found to decrease dramatically in AOM/DSS-induced mice that were fed with a diet supplemented with BRB anthocyanins. Subsequent quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blot analyses showed that the reduced expression of miR-483-3p was accompanied by an increased expression of Dickkopf 3 (DKK3), a potential target of miR-483-3p as predicted by bioinformatic analysis. The protein and messenger RNA levels of DKK3 were significantly upregulated when the miR-483-3p level was reduced by a miR-483-3p-specific inhibitor, suggesting that DKK3 might be the target gene of miR-483-3p. In addition, the downstream factors of the DKK3 signaling pathway, which included Wnt/β-catenin, also played a role in the miR-483-3p-mediated anticancer effect of BRB anthocyanins. Thus, miR-483-3p might be a potential target in BRB anthocyanin-mediated prevention of CRC.     

Dickkopf-4 is frequently down-regulated and inhibits growth of colorectal cancer cells

Like Dickkopf-1 (DKK1), DKK4 is a target of β-catenin/Tcf-4 in colorectal cancer. However, as a negative regulator of Wnt signalling its function in colorectal cancer cells is not well understood. We report that DKK4 is frequently down-regulated in colorectal cancer cell lines with deregulated β-catenin/Tcf-4 and in primary colorectal cancers. Exposure of cancer cells to DKK4 strongly inhibits basal β-catenin/Tcf-4 signalling activity, cancer cell growth and cell cycle progression. Therefore, loss of this negative feed-back loop provides Wnt factor expressing cancer cells with a growth advantage. Our data demonstrate that DKK4 is an important negative regulator of colon cancer cell growth.     

PTEN基因蛋白在恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨PTEN基因蛋白在恶性黑素瘤中的表达及其意义.方法采用免疫组化EnVision检测PTEN基因蛋白在51例恶性黑素瘤以及30例皮内痣组织中的表达情况.结果恶性黑素瘤组织中PTEN表达强度低,总体阳性率52.9%(27/51),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各期阳性率分别为59.4%(17/32)、38.5%(5/13)、33.3%(2/6);而皮内痣中PTEN均呈强阳性,表达阳性率为100%(30/30),二者差异具有显著性(P＜0.01).结论恶性黑素瘤的发生可能与PTEN基因蛋白的低表达有关,PTEN基因蛋白表达缺失或低下者更易发生远处转移,标记PTEN可作为判断黑素瘤预后的一项指标.