内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用

为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节(DRG)的作用,本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术(切除双侧L1~L5和L7~S2DRG,其中L6DRG作为备用背根)。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位,即足三里和悬钟、伏兔和三阴交,每天一次,每次30min,连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6DRG进行体外培养,24h后全量换液,并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng/ml抗GDNF和NT-4抗体培养液替换,分别作为抗GDNF和NT-4抗体封闭组。7d后终止培养,于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度;并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示:(1)免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95%以上为NSE阳性细胞,且为典型的体外培养的DRG神经元;(2)体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短(P<0.05);(3)而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异(P>0.05);两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长(P<0.05)。本研究结果提示,针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长,进而可能与脊髓可塑性密切相关;内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用;而内源性NT-4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。     

雪旺细胞源神经营养因子对背根节感觉神经元的保护作用

目的：了解雪旺细胞源神经营养因子对周围神经高位损伤所致脊髓背根节感觉神经元死亡的保护作用。方法：选出生3周SD鼠高位切断L4、L5神经根，神经近侧断端应用雪旺细胞源神经营养因子或生理盐水，4周后观察损伤神经根背根节感觉神经元的存活率和形态学变化。结果：术后4周，营养因子组神经元的存活率是91．8％，生理盐水组是58．6％；生理盐水组存活神经元胞体明显萎缩。结论：雪旺细胞源神经营养因子对受损的背根节感觉神经元有明显的神经营养活性．     

部分背根切断改变备用背根节神经元和卫星细胞脑源性神经营养因子的基因表达

目的　探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞脑源性神经营养因子 (BDNF)及其mRNA的量变情况。　方法　对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5、L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG并分别行免疫组织化学及原位杂交染色。观察BDNF及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定BDNF及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值。　结果　部分去背根后 3d ,中小神经元内BDNF及其mRNA的光密度值较正常者明显减少 (P <0 0 5 ) ,而 7d时又恢复近正常水平 (P >0 0 5 )。BDNF及其mRNA在大神经元的光密度值术后 3d无明显变化 ,而 7d时较正常者明显减少 (P <0 0 5 )。比较之 ,卫星细胞BDNF及其mRNA的光密度值术后 7d时明显升高 (P <0 0 5 ) ,术后 3d与正常者比未见明显变化。　结论　部分背根切断导致备用DRG各类细胞BDNF的表达水平发生不同程度的改变。提示备用DRG内BDNF的变化与脊髓Ⅱ板层可塑性有关。     

备用背根猫脊髓Ⅱ板层组织对鸡胚背根节神经突起生长的影响

用１０只存活５ｄ的单侧后肢备用根猫（切除Ｌ１～Ｌ５、Ｌ７～Ｓ２背根节，保留Ｌ６背根），取手术侧（实验组）和非手术侧（对照组）脊髓Ⅱ板层组织块及提取液分别与Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ３５期鸡胚背根节进行悬滴培养，并以不加植块的背根节培养作参照。比较各组在同一观测时间的差异．结果：（１）各组背根节从培养２４ｈ到４８ｈ，其神经突起均明显增长；（２）同一观测时间内，对照组与参照组的神经突起少而短，从背根节迁出的细胞较多，而实验组神经突起多且长，迁出的细胞较少；（３）在两个观测时间，植块与提取液培养的实验组背根节神经突起平均长度均显著长于对照组者，而对照组与参照组背根节神经突起长度的差异无显著性．表明部分腰骶背根切除猫，其脊髓Ⅱ板层及其提取液的促神经突起生长活性增强．     

Caspase-3在成年猫脊髓和背根节的分布

目的采用免疫组织化学方法探讨Caspase-3在成年猫脊髓和背根节的分布。结果Caspase-3的阳性反应物主要分布于脊髓前角、中间带(包括背核)、后角深部以及背根节(DRG)的中小神经元。此外在脊髓白质亦有大量胶质细胞着色。结论Caspase-3参与上述部位的细胞凋亡或其它功能的调控。     

备用背根猫脊髓背核组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用Liu和Chambers创立的备用背根模型,切除成年雄猫(5只)一侧的L_1～L_5、L_7～S_2背根节,保留L_6背根为备用背根,术后动物存活5d。分别制备脊髓T_(12)～L_3节段手术侧(实验组)、非手术侧(对照组)背核组织及其条件培养液。以Hanks平衡盐溶液的条件培养液作为参照组。用实验组、对照组以及参照组条件培养液对Hamburger 35期Leghorn鸡胚腰段背根部进行悬滴法培养,每只动物进行一批实验。于培养24h,48h观察测量各个背根节神经突起的平均长度。在各组背根节从培养24h到48h神经突起明显增长的基础上,求出每批培养物实验组、对照组背根节平均突起长度与参照组平均突起长度的比值以及5批培养物之平均比值。比较实验组、对照组平均比值在同一观测时间内的差异,发现两个观测时间实验组平均比值都明显大于对照组者。结果提示,猫脊髓经部分去后肢背根传入后,背核组织提取液促进神经突起生长的作用增强。     

针刺对备用背根节神经元表皮生长因子表达的影响

成年哺乳动物的脊髓具有可塑性,且针刺可促进脊髓可塑性,但其机制尚不清楚。有实验表明针刺可促进NGF、NT-3在部分去背根动物背根节的表达,表明了针刺可能通过改变背根节部分神经营养因子的表达进而在脊髓可塑性中发挥作用。表皮生长因子(EGF)与神经     

部分背根切断对备用背根节NT-3表达的影响

目的　探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞NT 3及其mRNA的含量变化。　方法　对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5,L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG制作 2 0 μm厚冰冻切片 ,分别用NT 3抗体及NT 3cRNA探针行免疫组织化学及原位杂交染色。观察NT 3及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定NT 3及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值 ,所得数据用q检验进行统计分析。　结果　部分去背根后 ,各时相备用背根节大神经元内NT 3的光密度值较正常者进行性减少 ,(P <0 0 5 ) ,而NT 3mRNA的光密度值术后 3d减少 ,7d回升至近正常者水平。比较之 ,小神经元和卫星细胞NT 3及其mRNA的光密度值进行性增多 (P <0 0 5 )。　结论　部分背根切断对备用背根节各类细胞NT 3表达的影响不同 ,其功能意义可能与NT 3参与脊髓Ⅱ板层可塑性有关     

成年猫L1～L7两侧背根节神经元数量的比较

5只正常成年雄性猫双侧L1～L7背根节(DRG)石蜡包埋,连续切片,显微镜观察计数,比较左、右DRG神经元数量,为神经系统损伤后对神经元的存活和再生影响的研究提供DRG神经元计数资料.结果1)每只动物各节段左、右DRG神经元数量比较,比率在0.70～1.26之间,个别节段两侧有显著性差异(P＜0.01),而每只动物左、右DRG神经元总数比较,比率在0.93-1.02(P＞0.5),两侧无显著性差异.2)5只动物L1～L7各节段左、右DRG神经元均数比较,两侧无显著性差异(P＞0.5).结论成年猫L1～L7各节段两侧DRG神经元数量呈对称性分布.     

针刺对备用背根节神经元CNTF和PDGF表达的影响

目的探讨部分去背根后针刺对备用背根节神经元睫状神经营养因子(CNTF)及血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法制备猫双侧备用背根模型(切除双侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6背根节为备用背根节)。针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位。针刺7d及14d后取备用背根节用CNTF抗血清(1∶500)及PDGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别记数各组阳性总、大及中小神经元的数量。结果正常组左右L6背根节的细胞数无差异,CNTF、PDGF阳性神经元数在7d、14d时与正常组比较无差异。针刺侧CNTF阳性总、大及中小神经元数在针刺7d时均显著多于非针刺侧(P<0.05),而针刺14d时,只有阳性大神经元数多于非针刺侧(P<0.05)。PDGF阳性总及大神经元数针刺7d时多于非针刺侧(P<0.05),针刺14d时,阳性总及中小神经元多于非针刺侧(P<0.05)。结论针刺可促进去背根后备用背根节CNTF、PDGF的表达,这种促进作用显效的时间因不同因子和不同种类的背根节神经元而异。     

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓 板层可塑性中发挥作用     

植块联合培养法探讨备用背根猫脊髓背核组织对鸡胚背根节神经突出…

５只单侧备用背根猫，于术后第５ｄ分别切取手术侧、非手术侧脊髓Ｌ３节段背核组织植块，与Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ ３５期鸡胚背根节（ＤＲＧ）进行植块联合悬滴培养，以单独ＤＲＧ培养作为参照，于培养２４ｈ，４８ｈ观察ＤＲＧ神经突出的生长情况并测量其长度。结果发现：１．所有ＤＲＧ从培养２４ｈ到４８ｈ其神经突出起都有明显增长，２：同一观察时间内，参照组与对照组（ＤＲＧ与非手术侧背核植块联合培养组）神经突起的生长状况     

P物质在成年猫脊髓和背根节的分布

目的 观察P物质在成年猫脊髓和背根节的表达情况。方法 成年健康雄猫5只，取L5脊髓节和随机取一侧L6背根节制作厚20μm冰冻切片，用免疫组织化学ABC法染色，观察SP在正常脊髓和背根节的分布。结果 在脊髓，SP阳性膨体主要见于后角Ⅰ、Ⅱ板层，后角Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ板层及侧角的一些神经元呈弱阳性反应，前角运动神经元胞体和突起呈阳性反应，胞核不着色。在背根节，SP的免疫阳性物主要分布于小细胞的胞浆内，胞核不着色。结论 SP在成年猫脊髓和背根节有表达。     

吗啡对备用根大鼠背根节神经元胞体形态的影响

吗啡对备用根大鼠背根节神经元胞体形态的影响（中山医科大学组织学胚胎学教研室，广州５１００８９，曾园山；华西医科大学组织学研究室，吴良芳）为探讨发生侧支出芽及重建突触的背根节神经元的胞体是否也呈现相应的形态变化，以及吗啡对此变化的影响，取１０只大鼠分为...     

部分背根切断及针刺对备用背根节神经元血小板源性生长因子表达的影响

目的:探讨部分去背根及部分去背根后针刺对备用背根节神经元血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法:制备猫双侧备用背根节模型,并针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位,针刺7d及14d后分别取针刺、非针刺侧备用背根节,行免疫组织化学ABC法显色。分别计数各组阳性神经元总数以及大、中小阳性神经元的数量。结果:PDGF在备用背根节的大、中小神经元均有表达。部分背根切断后,针刺侧、非针刺侧PDGF阳性神经元总数及中小阳性神经元数在7d时较正常显著减少,针刺后7d时,PDGF阳性总数及大神经元数针刺多于非针刺侧,针刺14d时,阳性总数及中小神经元数多于非针刺侧。结论:部分背根切断及针刺可影响PDGF在备用背根节的表达,这种作用显效的时间因不同时相、不同类型的背根节神经元而异。