缺氧对肝癌BEL7402细胞周期及放射敏感性的影响

目的:研究肿瘤细胞在缺氧及放射情况下细胞周期的改变及细胞存活的情况。方法:将贴壁培养的肝癌细胞株BEL7402分成对照组、缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧加照射组和单纯照射组。应用流式细胞仪检测细胞周期的改变,同时应用成克隆分析法观测细胞存活情况。结果缺氧24h与48h组的肝癌细胞株BEL7402存活分数变化不明显,加照射后的实验组则明显下降而缺氧加放射组与单纯放射组比较细胞存活分数明显升高。肝癌细胞株BEL7402细胞缺氧培养后随着缺氧时间的延长(0～48h)S期细胞逐渐减少,而凋亡细胞逐渐增多;G1期和G2/M期细胞变化不明显;单纯放射组可以看到明显的G2/M期细胞阻滞;而在缺氧加放射组看不到明显的G2/M期细胞阻滞,但凋亡细胞明显增高。结论缺氧(1%氧浓度)对肝癌细胞株BEL7402的存活无明显影响;但能保护肝癌细胞株BEL7402使其免受放射线的损伤;缺氧通过影响射线对G2/M期细胞阻滞降低了肝癌细胞株BEL7402对射线的敏感性。     

阿霉素热化疗对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨阿霉素(ADM)加热化疗对人肝癌细胞HHCC及HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以体外培养的人肝癌细胞HHCC和HepG2为研究对象,采用水浴加温法,观察单纯热疗,ADM化疗和热化疗对细胞增殖和凋亡的影响。MTT法确定阿霉素的工作浓度并检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:热化疗组细胞的抑制率显著高于单纯热疗、单纯化疗组[HHCC细胞:(65.77±2.54)%vs(23.18±0.81)%、(38.35±2.23)%,P<0.05。HepG2细胞:(74.25±1.53)%vs(1 7.1 2±2.8 6)%、(30.35±5.90)%,P<0.05]。热化疗组细胞凋亡率显著高于单纯热疗组、单纯化疗组[HHCC细胞:(76.1±2.33)%vs(23.83±1.76)%、(45.57±2.81)%,P<0.05。HepG2细胞:(76.9±2.79)%vs(19.7±7.63)%、(37.43±1.88)%,P<0.05]。结论:加热能增强ADM对HHCC及HepG2的增殖抑制和诱导凋亡作用。     

阿霉素热化疗对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨阿霉素（ADM）加热化疗对人肝癌细胞HHCC及HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法：以体外培养的人肝癌细胞HHCC和HepG2为研究对象,采用水浴加温法,观察单纯热疗,ADM化疗和热化疗对细胞增殖和凋亡的影响。MTT法确定阿霉素的工作浓度并检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：热化疗组细胞的抑制率显著高于单纯热疗、单纯化疗组[HHCC细胞：（65.77±2.54）%vs（23.18±0.81）%、（38.35±2.23）%,P〈0.05。HepG2细胞：（74.25±1.53）%vs（1 7.1 2±2.8 6）%、（30.35±5.90）%,P〈0.05]。热化疗组细胞凋亡率显著高于单纯热疗组、单纯化疗组[HHCC细胞：（76.1±2.33）%vs（23.83±1.76）%、（45.57±2.81）%,P〈0.05。HepG2细胞：（76.9±2.79）%vs（19.7±7.63）%、（37.43±1.88）%,P〈0.05]。结论：加热能增强ADM对HHCC及HepG2的增殖抑制和诱导凋亡作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对两株不同肝癌耐药细胞株基因表达谱的影响

背景与目的:绿茶中的儿茶索单体表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)在体内外能逆转肝癌细胞多药耐药性.鉴于多药耐药机制的复杂性,本研究拟采用高通量基因芯片技术进一步探讨EGCG逆转人肝癌细胞BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU多药耐药的可能机制.方法:MTT法检测药物敏感性.基因芯片技术分析EGCG作用于两株不同肝癌耐药细胞的基因表达谱差异.RT-PCR和Western blot法分别检测相同处理条件下两株肝癌耐药细胞的基因MDR1、LRP和Cyclin G1蛋白表达变化以验证基因芯片技术结果.结果:EGCG对BEL7404/ADM、BELT402/5-FU细胞的IC10分别为24.76 mg/L、20.60 mg/L.20 mg/L EGCG联合0.05 mg/L ADM、100 μmol/L 5-FU对BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU的逆转倍数分别为9.66、2.36倍.EGCG作用BEL7404/ADM双荧光通路显著差异基因210个,上调表达38个,下调表达172个.与耐药机制相关的可能基因有ABCB10(MDR/TAP)、TOP2A、TOP2B、CCNG1上调,ABCB1、MVP、ARHD、HDAC5、GSS、GSTPI、HSPA1B、HSPB7、CDKN1A、RAB11B、RAB9P40下调.作用BEL7402/5-FU双荧光通路显著差异基因179个,上调表达31个,下调表达148个.与耐药机制相关的可能基因有ABCG(BCRP)、CCNG2、GADD34、RB1、RBBP4上调,DTYMK、GPX1、USP5、BAX、BAK1、HSPA1L下调等.相同处理条件下两组肝癌耐药细胞的MDR1、LRP基因表达均减少,Cyclin G1蛋白表达均增加.结论:EGCG对肝癌多药耐药细胞BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU具逆转作用,但作用于不同肝癌多药耐药细胞的基因表达谱变化不完全相同.     

端粒酶反义核酸对BEL-7402肝癌细胞生长和活性的影响

目的 研究人类端粒酶RNA（hTR)基因的反义寡核苷酸（AS－ODN）对BEL－7402肝癌细胞生长和活性的影响。方法 将AS－ODN作用于BEL－7402细胞，观察细胞生长状况，PCR－ELISA法检测端粒酶活性，流式细胞仪和细胞DNA电泳观察细胞的凋亡情况。结果 AS－ODN能抑制BEL－7402细胞的生长，降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论 针对hTR的AS－ODN对治疗肝癌有潜在意义。     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的梯状条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡...     

23,24-二氢葫芦素B抑制Nrf2-ARE通路逆转肝癌耐药的实验研究

目的探讨23,24-二氢葫芦素B(DHCB)抑制核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路逆转肝癌细胞耐药的作用机制。方法采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法建立肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM,分为空白对照组、ADM组、DHCB组、ADM+DHCB组、DHCB+TBHQ组和DHCB+N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)组。MTT法和平板克隆实验检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞增殖活性的抑制作用;流式细胞术检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞活性氧(ROS)含量和细胞凋亡。Western blotting法检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、cleaved caspase-3蛋白表达的影响。结果Bel-7402/ADM细胞对ADM的耐药指数RI为6.56;而经DHCB(4μmol/L)协同作用后,Bel-7402/ADM细胞对ADM的耐药指数RI为2.21。与空白对照组比较,ADM+DHCB组细胞克隆形成率明显降低(P<0.05);MRP1、Nrf2、NQO1和GST-π蛋白表达量下调,cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05)。与Nrf2激活剂TBHQ合用后,DHCB抑制Nrf2/ARE通路的作用被逆转。与空白对照组比较,DHCB可上调Bel-7402/ADM细胞ROS表达水平;与DHCB组比较,DHCB+NAC组细胞ROS表达水平降低。DHCB可明显促进Bel-7402/ADM细胞凋亡。结论DHCB可增强Bel-7402/ADM细胞对ADM的敏感性,其作用机制可能为抑制Nrf2/ARE信号通路,进而促进肿瘤细胞发生氧化应激损伤,诱导细胞凋亡。     

阿霉素诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的观察

目的研究化疗药物阿霉素抗癌作用与癌细胞凋广的关系及意义。方法应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜动态观察阿霉素对体外培养的人肝癌细胞BEL－7402的生长抑制作用与细胞凋亡的关系。结果阿霉素可阻滞人肝癌细胞BEL－7402从G0/G1期进入S期,诱导细胞凋亡。结论本研究显示阿霉素抗癌作用与诱导细胞凋亡有关。应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜观察细胞凋亡是有效、可行的方法。     

miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与凋亡的影响

背景与目的：miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一。该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡。该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsamiR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响。结果：CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G₁期细胞百分率数值明显下降,但S及G₂/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05)。miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡。结论：miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点。     

FasL抗体对人白血病细胞株(K562/ADM)多柔比星耐药性的逆转作用

目的：探讨FasL抗体对K562／ADM细胞的多柔比星(阿霉素)耐药性的逆转作用及其可能机制。方法：以K562／ADM细胞为研究对象，设立了对照组、VER处理组、anti-FasL处理组及anti-FasL VER处理组，进行MTT、FCM、TUNEL、S-P免疫组化及RT-PCR检测。结果：anti-FasL或VER处理能增强K562／ADM细胞对ADM的敏感性，其ID50分为200ng／ml、6μg／ml；从细胞周期分析曲线可见上述各组细胞凋亡DNA含量呈逐渐上升趋势(分为7．42％、32．10％、49．29％、56．26％)，TUNEL染色结果亦然(原位凋亡率分为4．5％、36％、45％、58％)；anti-FasL可影响各组细胞FasL及bcl-2的表达，但不影响Pgp的表达。结论：采用anti-FasL．封闭肿瘤细胞FasL表达可逆转K562／ADM细胞的耐药性，并与VER处理有协同作用，它可能为一种新型的肿瘤耐药逆转疗法。     

5-FU持续和间歇处理对 Bel-7402 肝癌细胞株的抑制作用

目的：评价体外5－FU持续和间歇处理对Bel-7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法：体外培养Bel-7402肝癌细胞株，用一系列不同浓度的5－FU对Bel-7402肝癌细胞株分别进行每天24小时持续处理及2小时间歇处理，4天后进行MTT试验，检测肿瘤细胞的生长抑制率，对两组的IC50进行比较。结果：5－F处理浓度依次10．0μg/L、25．0μg/L、50．0μg/L、75．0μg/L、100μg/L、250．0μg/L、500μg/L、750．0μg/L、1000．0μg/L、2500．0μg/L、5000．0μg/L、7500．0μg/L、10000．0μg/L、20000．0μg/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1．34％、2．01％、7．21％、10．37％、18．64％、29．96％、35．06％、43．35％、50．66％、87．63％、93．63％、94．46％、99．27％、99．35％，IC50是991．7μg/L。5－FU处理浓度依次120．0μg/L、300．0μg/L、600．0μg/L、900．0μg/L、1200．0μg/L、3000．0μg/L、6000．0μg/L、9000．0μg/L、12000．0μg/L、18000．0μg/L、60000．0μg/L、90000．0μg/L、120000．0μg/L、240000．0μg/L2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1．32％、1．78％、2．01％、2．89％、3．57％、5．94％、8．30％、10．36％、15．25％、17．27％、25．95％、32．63％、43．66％、67．81％、IC50为146600μg/L，为持续处理组的147．8倍。结论：低浓度的5－FU持续处理较高浓度的5－FU间歇处理对Bel-7402肝癌细胞有更强的抑制作用。     

吡柔比星和阿霉素的临床观察对比

对48例中、高度恶性非何杰金淋巴瘤(NHL),晚期或复发性头颈部癌及晚期或复发性乳腺癌,分别用包括吡柔比星(THP)和阿霉素(ADM)的联合化疗,进行临床观察对比。结果表明:THP和ADM疗效相当,但恶心、呕吐和脱发的毒副作用均明显较ADM低。     

含阿霉素（或表阿霉素）为主的联合化疗对小细胞肺癌的近期疗效

本文报告用含阿霉素（或表阿霉素）为主的联合化疗方案治疗１１３例小细胞肺癌的近期疗效。治疗结果显示有效率与病期、年龄和治疗周期数有关，局限型高于广泛型，ⅡⅢａ期高于Ⅲｂ、Ⅳ期，随着年龄增加疗效似有提高，化疗周期数增加，疗效提高，但有局限性。     

吡柔比星和阿霉素毒副反应的对比观察

 对含吡桑比星（THP）联合化疗方案施治的71例（183个治疗周期）和合阿霉素（ADM）联合化疗方案施治的106例（269个治疗周期）中晚期恶性肿瘤病人在毒副反应方面的资料进行了对比观察。结果表明，THP组的消化道副反应、脱发、心脏毒性较ADM组明显减轻；骨髓抑制、口腔炎、体温升高、肝肾功能损伤的毒副反应两药基本相当。综合判断，提示THP的毒副反应较ADM轻。     

High-dose adriamycin (ADM) and cis-platinum (DDP) in advanced soft-tissue sarcomas and invasive thymomas

Summary Eighteen previously untreated patients with advanced unresectable or metastatic soft-tissue sarcomas (STS) and two patients with locally invasive thymoma were treated with a combination of adriamycin (ADM) 80 mg/m² on day 1 and cis-platinum (DDP) 120 mg/m² on day 1. The regimen was repeated at 4-weeks intervals. In STS the overall remission rate was 44%, with 21% complete remissions. The overall survival was 15 months (3–35+), responders surviving a median of 20 months (3–35+) and nonresponders, a median of 9 months (3–20+).Tumor responses lasted a median of 8 months (3–35+).Two patients with liposarcoma have now survived disease-free for at least 2 years and are potentially cured.The two patients with thymoma experienced complete remission lasting 4+ and 20+ months.Substantial hematologic toxicity was prominent, due to the high-doses used in this combination regimen.     

Effect of ascorbic acid on DNA synthesis, intracellular accumulation of ADM and ADM resistance of tumor cell lines

Objective: To determine the effect of ascorbic acid (AA) on DNA synthesis, intracellular accumulation of ADM and ADM resistance of tumor cell lines. Methods: K562, K562/ADM and KB cell lines were used to study the effect of ascorbic acid on DNA synthesis, intracellular accumulation of ADM and ADM resistance by fluid scintillometry, MTT method, spectrofluorophotometry and immunocytochemistry. Results: Results showed that AA was capable of inhibiting DNA synthesis of K562 and K562/ADM in a dose-dependence fashion, but not KB cell line, and significantly reducing ADM sensitivity in K562 and KB cell lines, as well as potentiating obviously ADM resistance in K562/ADM cell line. Conclusion: These effects of AA may be closely correlated with significant elevation of intracellular accumulation of ADM in KB cell line, and significant reduction of that in K562 and K562/ADM cell lines but possibly not correlated with the expression of P-glycoprotein.     

肿瘤细胞基因转导载体聚乙烯亚胺的合成及筛选

背景与目的:选择合适的载体是基因治疗成功的关键之一,近年来一种新型多聚阳离子化合物--聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)作为高效低毒的基因转导载体得到广泛重视.本研究应用光化学法制备系列不同粒径的PEI纳米凝胶,初步探讨其转导效率与粒径之间的关系,筛选理想的肿瘤基因转导载体.方法:光化学法制备PEI,光相干光谱仪测定粒径,并用扫描电子显微镜和原子力显微镜表征;以PEI为载体将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)报告基因分别转入Bel7402细胞和A549细胞,荧光显微镜下计数和流式细胞仪检测转染率.结果:光相干光谱仪检测PEI粒径38～200 nm,扫描电子显微镜和原子力显微镜检测其形貌多为球形.荧光显微镜下计数和流式细胞仪检测86.9 nm PEI(4 μg)介导EGFP基因(2 μg)时转染率最高,Bel7402细胞分别为(32.75±1.01)%、(32.40±1.41)%,A549细胞分别为(29.81±1.84)%、(30.00±1.86)%;与脂质体相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:光化学法合成的PEI是有效的基因转导载体,PEI粒径为86.9 nm转染最为有效.