激发型CD40单抗对宫颈癌细胞株SiHa化疗敏感性的影响

目的:研究激发型CD40单抗(5C11)对宫颈癌细胞株SiHa化疗敏感性的影响及其机制。方法:采用流式细胞术检测宫颈癌细胞株SiHa上CD40分子的表达,用MTT法检测5C11联合化疗药物对SiHa细胞的作用,PI染色检测SiHa细胞周期的变化,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,RT-PCR方法分析单抗5C11作用SiHa细胞后凋亡基因表达水平变化。结果:宫颈癌细胞株SiHa高表达CD40,5C11和盐酸吉西他滨单独抑制细胞生长作用不明显,但两者联合能显著抑制SiHa生长和促进凋亡,SiHa细胞经5C11作用后出现S期阻滞,抗凋亡基因bcl-XL表达明显下调,促凋亡基因Bax的上调作用不明显。结论:CD40分子通过介导S期阻滞和调节凋亡基因表达水平增加SiHa细胞对盐酸吉西他滨化疗的敏感性。     

GPR30在宫颈癌细胞生长中的作用及其机制研究

目的:体外研究雌激素膜受体GPR30对宫颈癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选择宫颈腺癌HeLa和宫颈鳞癌SiHa细胞株,分别用GPR30特异性激动剂G1和拮抗剂G15处理宫颈癌细胞株。RT-PCR、Western blot法检测处理前后宫颈癌HeLa与SiHa细胞中GPR30、TLR3 mRNA及其蛋白表达变化;MTT法检测G1、G15及Poly I:C处理对宫颈癌细胞生长的影响。结果:(1)HeLa细胞中GPR30表达量高于SiHa细胞。G1处理后HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05);G15处理后,HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05)。(2)HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA表达量分别为(0.5327±0.05373)、(0.3526±0.05774),蛋白表达量分别为(0.3572±0.097039)、(0.5002±0.09718)。G1能降低He La、Si Ha细胞中TLR3mRNA及其蛋白表达水平,G1 10-6mol/L处理组与对照组比较差异有统计学意义(P均0.05)。G15能增高HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA及其蛋白表达水平,G15 10-5mol/L处理组与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05),与Poly I:C处理组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)10-6mmol/L、10-5mmol/L G1分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞生长增殖率分别为(16.68±5.86)%、(26.67±3.25)%及(14.99±6.43)%、(22.72±1.77)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。10-6mmol/L、10-5mmol/L G15分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞的生长抑制率分别为(21.09±2.32)%、(22.99±3.15)%及(15.86±6.49)%、(19.18±2.61)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。结论:宫颈癌细胞中存在雌激素膜受体GPR30表达,宫颈腺癌细胞中GPR30表达量高于宫颈鳞癌细胞,体外调节GPR30表达可影响宫颈癌细胞生长。抑制GPR30表达可通过上调TLR3表达而抑制宫颈癌细胞生长,GPR30可能成为宫颈癌治疗的新靶点。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对宫颈癌细胞的放射增敏作用

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对宫颈癌SiHa细胞的毒性和放射增敏作用。方法 2009年10月至2010年6月在河北联合大学医学院采用MTT法检测SAHA对SiHa细胞的毒性并计算IC50。选择20%IC50的SAHA与放疗联合,克隆形成实验分析SAHA对SiHa细胞的放射增敏作用,采用Sigma Plot 2000 Demo版软件,利用多靶单击模型S=1-(1-eD0/D)n拟合细胞存活曲线,计算放射相关参数和放射增敏比,评价增敏效果。结果 MTT结果显示SAHA对SiHa细胞的毒性反应呈浓度和时间依赖性,SAHA作用SiHa细胞48h的IC50为4.80μmol/L。克隆形成实验结果显示,SAHA联合放疗组细胞的克隆形成率明显低于单独放疗组,二者的平均致死剂量(D0)分别为2.329、1.213,准阈剂量Dq分别为1.721、0.823。放射增敏比(SER)为1.92。结论 SAHA对宫颈癌SiHa细胞有良好的细胞毒性和放射增敏作用。     

雌、孕激素对人宫颈癌HeLa细胞体外生长影响的研究

目的 :探讨雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡的影响。方法 :体外培养人宫颈癌HeLa细胞 ,免疫组化方法 ,测定其雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的表达 ;不同浓度的E2 、P和E2 +P作用于HeLa细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观测HeLa细胞的增殖 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl 2蛋白的表达 ;光学、电子显微镜检测其形态学和超微结构变化。结果 :HeLa细胞PR表达明显高于ER(P <0 .0 1)。E2 对HeLa细胞有明显促生长作用 (P <0 .0 1) ,P和E2 +P对细胞生长有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,增殖抑制率与浓度呈正相关 (P <0 .0 5 )。FCM显示E2 组细胞周期S期比例上升 ,凋亡率下降 ,细胞内bcl 2蛋白表达上升 ;P组和E2 +P组G0 /G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,凋亡率上升 ,细胞内bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。光镜和电镜可见E2 组细胞生长良好 ,P组和E2 +P组可见细胞凋亡的形态学改变。结论 :E2 对宫颈癌HeLa细胞具有促进增殖、抗凋亡作用 ;P则抑制HeLa细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ;E2 +P显示了抑制增殖、诱导凋亡的增强作用。足量的P可拮抗E2 对宫颈癌细胞的促增殖作用。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

外源性FHIT基因表达对顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因表达与顺铂(cisplatin,DDP)是否可协同促进宫颈癌SiHa细胞的凋亡。方法:重组质粒PRcC-MV-FHIT(A组)及空质粒PRcCMV(B组)分别转染无内源性FHIT蛋白表达的SiHa细胞(未转染SiHa细胞为C组),Western Blot检测外源性FHIT蛋白的表达,使用不同浓度的顺铂分别处理各组细胞,通过AO-EB染色、流式细胞术检测顺铂处理后各组细胞的凋亡。结果:顺铂处理48h后进行流式细胞仪检测,重组质粒+DDP2.0μg/ml、未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组凋亡率分别为51.03%、20.58%、22.07%,重组质粒+DDP组细胞凋亡更明显(重组质粒+DDP2.0μg/ml组与未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组相比P<0.01),AO-EB染色亦见顺铂处理的重组质粒组凋亡细胞明显增多。结论:外源性FHIT基因表达与顺铂协同促进SiHa细胞凋亡,为基因治疗与化疗联合治疗宫颈癌提供理论基础。     

青藤碱与卡铂对宫颈癌Hela细胞增殖的协同抑制研究

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)押制剂青藤碱(sinomenine,SIN)对宫颈癌Hela细胞生长的影响及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的协同抑制作用,初步探讨SIN在宫颈癌中的作用机制.方法:MTT法检测SIN及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪检测处理后宫颈癌Hela细胞周期及凋亡的变化.结果:SIN以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用.流式细胞仪细胞周期分析表明,SIN处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少;卡铂处理组结果相反.细胞凋亡分析表明,SIN处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;两药联合处理组细胞凋亡率较单药处理组升高.结论:SIN以时间和剂量依赖性抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其作用机制与改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.SIN与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用,其机制可能与共同影响细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.     

阿司匹林联用PT化疗抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖的研究

目的:研究阿司匹林(ASA)联用PT方案[奥沙利铂(OXA)+多西紫杉醇(DOC)]抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测并计算各组药物的细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:ASA可抑制HeLa细胞生长,作用24h时将肿瘤细胞聚集在G0/G1期并可诱导细胞凋亡。ASA与PT联用可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),不同时间PT增敏比依次为1.33、1.32、1.56,且联合用药诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:ASA与PT方案协同可抑制人宫颈癌HeLa细胞株增殖,ASA有望用于宫颈癌的内科治疗。     

雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞株(COC1/DDP)体外活性影响机制的初步探讨

目的:通过研究雷公藤内酯醇(TP)对COC1/DDP体外活性的影响,初步探讨雷公藤内酯醇促进COC1/DDP细胞凋亡的机制,为TP成为治疗晚期或耐顺铂卵巢癌药物提供实验依据。方法:采用MTT法检测顺铂(DDP)、TP及两者联用对COC1/DDP的生长抑制作用;用透射电镜观察TP作用24h后细胞超微结构的变化;采用流式细胞术分析不同浓度TP对COC1/DDP细胞周期和细胞凋亡的影响;用DNA电泳分析用药后细胞基因组DNA断裂状况;以免疫组化分析TP对Caspase-7蛋白表达的影响。结果:DDP在24h、48h和72h三个时间段对COC1/DDP细胞的半数抑制量(50%concentration of inhibi-tion,IC50)分别为5.567μg/ml、2.866μg/ml和1.161μg/ml,其对COC1/DDP细胞增殖表现出浓度-时间依赖性的抑制作用(P<0.05);TP可抑制COC1/DDP细胞增殖,其抑制率呈浓度-时间依赖性(P<0.05);TP作用细胞24h后,电镜下可见凋亡小体形成;流式细胞术分析表明,各浓度TP组G1期细胞明显升高,细胞凋亡率呈浓度依赖性(P<0.05);DNA电泳分析可见细胞凋亡特有的DNA断裂形成的"梯形"条带;免疫组化表明Caspase-7参与了TP诱导COC1/DDP细胞凋亡过程。结论:TP对COC1/DDP具有明显的杀伤和促凋亡作用,凋亡机制与Caspase-7蛋白表达上调有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及机制研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌细胞的杀伤作用和机制。方法:用不同浓度的Apicidine作用于体外培养的宫颈癌细胞株HeLa和正常呼吸道上皮细胞REC;用MTT法检测细胞生长存活率;用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR法和Western blot法分析Apicidine作用后宫颈癌细胞中p21WAF1和p53表达的变化。结果:Apicidine纳摩尔级浓度即能有效地抑制宫颈癌细胞增殖,对正常细胞无明显抑制效应。FCM结果表明,Apicidine能显著诱导宫颈癌细胞发生凋亡,对正常细胞无明显促凋亡作用;加入2μmol/L Apicidine作用24h和48h后宫颈癌细胞HeLa凋亡率分别为(10.11±0.63)%和(23.28±0.34)%,差异有显著性(P<0.05),正常呼吸道上皮细胞REC凋亡率分别为(5.81±0.92)%和(6.8±0.55)%,差异无显著性(P>0.05);FCM结果亦表明,Apicidine主要引起G0/G1期细胞周期阻滞,1μmol/L Apicidine处理24h后HeLa细胞G0/G1期细胞显著增多,由(46.8±3.2)%增至(69.5±6.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,Apici-dine能显著诱导p21WAF1RNA和蛋白水平表达,对p53表达无明显影响。上述结果都呈现明显的量-效与时-效关系。结论:Apicidine在体外能有效地抑制人宫颈癌细胞生长,对人正常细胞无明显影响,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21WAF1蛋白水平和引起G0/G1期细胞周期阻滞实现的。     

雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COC1/DDP细胞凋亡的影响及其对PI3K/AKT/GSK3β信号通路的调控

目的：通过研究雷公藤内酯醇（TP）联合紫杉醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞（COC1/DDP细胞）凋亡的影响,以探讨两药联合对COC1/DDP细胞作用的机制。方法：将对数生长期COC1/DDP细胞随机分为6组：空白对照组、紫杉醇组（3.13μg/ml）、LY294002组（10μmol/ml）、TP组（10ng/ml）、LY294002＋紫杉醇组（10μmol/ml LY294002＋3.13μg/ml紫杉醇）、TP＋紫杉醇组（10ng/ml TP＋3.13μg/ml紫杉醇）。采用MTT法检测各组的细胞增殖活性;普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞中Akt、pAkt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。结果：（1）细胞增殖抑制率：TP＋紫杉醇组显著高于TP、紫杉醇组（P〈0.05）;LY294002＋紫杉醇组显著高于LY294002、紫杉醇组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单用药组中,TP组〉紫杉醇组〉LY294002组（P〈0.05）。各组抑制率均呈时间依赖性（P〈0.05）。（2）普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜下观察,除空白组外,各用药组的细胞形态均有凋亡样改变。两联合用药组的细胞凋亡数显著高于各自单药组,TP＋紫杉醇组高于LY294002＋紫杉醇组;单用药组的细胞凋亡数：TP组〉紫杉醇组〉LY294002组。（3）流式细胞仪检测发现,两联合用药组的细胞凋亡率大于各自单药组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组凋亡率显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单药组的细胞凋亡率为：TP〉紫杉醇〉LY294002（P〈0.05）。（4）p-Akt蛋白和p-GSK3β蛋白的表达从空白对照组→紫杉醇组→LY294002组→TP组→LY294002＋紫杉醇组→TP＋紫杉醇组,呈逐渐减少的趋势,而总Akt、GSK3β蛋白的表达不变。结论：TP可协同紫杉醇促进COC1/DDP细胞凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路,从而下调了耐药相关蛋白p-Akt、p-GSK3β的表达。     

苦参碱联合顺铂对子宫颈癌SiHa细胞中TSLC1基因表达的影响

目的探讨苦参碱联合顺铂对人宫颈癌SiHa细胞肺癌肿瘤抑制因子1（TSLC1）基因的表达及SiHa细胞对顺铂敏感性的影响,以期对治疗宫颈癌提供依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）测定不同浓度苦参碱组（50、100、150、200、250μg／ml）、顺铂组（5、10、15、20、25μg／ml）和联合组（15μg／ml顺铂联合5种浓度苦参碱）干预SiHa细胞后的抑制率;采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测TSLC1 mRNA表达水平的变化。结果苦参碱及顺铂呈剂量依赖方式抑制SiHa细胞的生长,且随着各组浓度的增高,TSLC1 mRNA表达上调（P〈0．01）。不同浓度联合组对细胞的抑制率分别为39．35％、63．51％、68．74％、72．04％和74．31％,TSIC1 mRNA的表达量分别为8．59±0．01、15．33±0．01、26．38±0．07、61．34±0．01和92．33±0．01,与苦参碱组或顺铂组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱联合顺铂抑制人宫颈癌SiHa细胞生长的机制可能与TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱能够增加SiHa细胞对顺铂的敏感性。     

丙氨瑞林与DDP对卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)丙氨瑞林(Alarelin)与顺铂(DDP)对人卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响.方法 CoC1/cDDP细胞分别加入不同浓度的丙氨瑞林及DDP+丙氨瑞林培养,设空白对照组(不加药),流式细胞仪检测亚G1期细胞及凋亡细胞和线粒体膜电位(ΔΨm),半定量RT-PCR法检测CoC1/cDDP细胞生存素(survivin)-⊿Ex3 mRNA及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3 mRNA的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长抑制率.结果 ①随DDP浓度增加,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例上升,对细胞的抑制作用增强(P＜0.05).丙氨瑞林作用于卵巢癌耐药细胞CoCl/cDDP后,随浓度增加降低ΔΨm,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例增加,凋亡细胞增多,细胞增殖抑制率上升(P＜0.01).联合应用丙氨瑞林及10 μg/ml DDP后,线粒体膜电位(ΔΨm)降低,Rh123-细胞数增加,G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞增多,细胞抑制率明显上升,强于单用DDP或丙氨瑞林；②丙氨瑞林单独或联合DDP作用于CoCl/cDDP细胞,caspase-3mRNA的表达随丙氨瑞林浓度增加而上调,但survinin-⊿ Ex3 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论 丙氨瑞林能促进凋亡,逆转CoCl/cDDP细胞对DDP耐药,其机制可能与降低ΔΨm,上调caspase-3mRNA表达有关.     

TRAIL联合化疗药物对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测TRAIL单独或联合应用阿霉素(DOX)、顺铂(c-DDP)对Ishikawa细胞增殖的作用;流式细胞仪分析TRAIL单独或联合应用DOX、c-DDP对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果:单独应用TRAIL(50μg/L),DOX(5mg/L),c-DDP(50mg/L)对Ishikawa细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。TRAIL(50μg/L)联合低浓度DOX(5mg/L)、c-DDP(50mg/L)处理Ishikawa细胞后,细胞增殖抑制率明显高于对照组及单独作用细胞(P<0.01);不同浓度的TRAIL、DOX、C-DDP均能诱导Ishikawa细胞凋亡,但DOX、C-DDP能显著增强TRAIL诱导Ishikawa细胞凋亡(P<0.01)。结论:TRAIL联合低浓度化疗药物DOX、c-DDP显著抑制了Ishikawa细胞增殖,诱导了Ishikawa细胞凋亡。     

PinlsiRNA对宫颈癌细胞SiHa增殖和凋亡的影响

目的：通过小干扰RNA（siRNA）栽体介导抑制肽基脯氨酰同分异构酶（Pinl）表达,探讨Pinl对宫颈癌细胞SiHa增殖与凋亡的影响。方法：构建pGPU6／GFP／Neo—PinlsiRNA表达载体,脂质体介导将其转染至宫颈癌细胞SiHa中;实验设3组：实验组（SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组）、阴性对照组（SiHa／pGPU6-con组）和空白对照组（Si-Ha）。采用RT—PCR、Western blot法检测Pinl的表达;M1Tr法检测细胞增殖活性;原位末端标记法（TUNEL）和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果：转染SiHa／pGPU6．PinlsiRNA的SiHa细胞中,PinlmRNA和蛋白表达分别下调68．1％和54．8％,细胞增殖显著抑制。TUNEL显示典型细胞凋亡特征,SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组的凋亡指数（AI）为（29．6±14．58）％,显著高于SiHa／pGPU6-con组[（8．44±5．65）％]和空白对照组[（5．34±4．47）％]（P〈O．05）。SiHa／pGPU6．PinlsiRNA组的细胞凋亡率为（30．95±16．47）％,显著高于SiHa／pGPU6-COIl组[（6．18±6．10）％]和空白对照组[（5．95±4．99）％]（P〈0．05）。结论：RNA干扰技术能特异高效的抑制Pinl基因的表达,Pinl基因的下调能抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,提示Pinl可能成为治疗宫颈癌的新靶点。     

TOFA抑制上皮性卵巢癌细胞活性的体外实验研究

目的:探讨乙酰辅酶A羧化酶抑制剂TOFA对卵巢癌COC1细胞增殖能力的抑制作用及其机制。方法:采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK-8)检测不同浓度TOFA作用24、48、72h对卵巢癌细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测COC1的细胞周期变化情况,免疫印迹技术(Western blot)检测COC1细胞磷酸化AKT、ERK蛋白表达的变化。结果:不同浓度(1、5、10、20、50μg/ml)TOFA分别作用24、48、72h后,对卵巢癌细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖。5、10、20、50μg/ml TOFA处理48h后实验组和对照组相比,阻滞于G0/G1期的细胞数明显增加(P<0.05)。10μg/ml TOFA作用后,可上调磷酸化AKT蛋白表达,60min后磷酸化ERK蛋白表达抑制率为47%(P>0.05)。结论:TOFA对卵巢癌细胞增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性,诱导细胞G0/G1期阻滞,抑制磷酸化ERK表达,TOFA发挥作用的机制可能与MAPK/ERK信号转导通路相关。     

甲羟孕酮对人卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞株放射敏感性的影响

目的 研究人卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞株对放射治疗的影响,及应用醋酸甲羟孕酮( Medroxyprogesterone Acetate,MPA)于SKOV3/DDP细胞株,探讨其对放射敏感性的影响及其可能机制。方法 以人卵巢癌SKOV3细胞株及其耐顺铂SKOV3/DDP细胞株为研究对象接受不同剂量的放射线照射,采用MTT法、克隆形成实验分析细胞相对存活率及放射抗拒性;应用非细胞毒性剂量MPA联合不同剂量放射线照射于SKOV3/DDP细胞,同法测定联合MPA作用后SKOV3/DDP细胞放射敏感性的变化,采用 Sigma Plot 10.0版软件,利用多靶单击模型S =1-(1-eD0/D)n拟合细胞存活曲线,计算放射相关参数。并采用流式细胞技术 (FCM) 检测细胞周期及凋亡情况。结果 随着放射剂量增大,SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞的相对存活率下降,以SKOV3细胞明显;二者的平均致死剂量(D0)分别为3.186和7.794,D0越大,放射抗拒性越强,表明耐药SKOV3/DDP细胞的放射抗拒性强于SKOV3细胞;同法测定MPA联合放疗组细胞的克隆形成率明显低于单纯放疗组,二者D0分别为4.040、7.794,放射增敏比为1.929。MPA联合放疗作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论 人卵巢癌SKOV3/DDP细胞具有放化疗交叉耐受性;MPA可以逆转SKOV3/DDP细胞对放射的抗拒性,其可能机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

Genistein对COC1/DDP细胞增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响

目的:探讨Genistein对顺铂耐药卵巢癌细胞COC1/DDP增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法:用MTT法检测Genistein单用及与顺铂合用对COC1/DDP细胞增殖的影响;流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响及线粒体膜电位的变化;比色法检测Caspase-3活性变化。结果:Genistein对COC1/DDP细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用,并显著提高其对顺铂的敏感性(P<0.05);0.625~5μg/m l顺铂与2.5~10μg/m lGenistein合用基本表现为协同作用。5μg/m l以上浓度Genistein可诱导一定程度的早期凋亡,当顺铂与Genistein合用时,两种药物在诱导COC1/DDP早期凋亡方面呈现显著的协同效应。与对照组相比,Genistein能降低细胞膜电位,增加caspase-3活性。结论:Genistein能抑制COC1/DDP细胞增殖,并显著增强其对顺铂的敏感性。