血管内皮生长因子促进预构皮瓣成活的实验研究

目的　研究使用重组人类血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)对预构皮瓣存活的作用 ,探讨VEGF能否促进正常血供组织的血管化。方法　取大鼠自体尾动脉 8cm移植 ,两端分别与股动、静脉吻合 ,成环状植入下腹部皮下组织 ,对照组局部应用 0 9%NaCl和16 %聚乙烯乙醇 ,实验组将VEGF分别溶于 0 9%NaCl和 16 %聚乙烯乙醇局部应用。分别于术后 3,4 ,5周以植入的尾动脉为血管蒂于下腹部形成 3cm× 4cm大小皮瓣 ,游离掀起皮瓣后缝回原处 ,7d后运用面积仪测出存活皮瓣面积的百分比。结果　第 5周后的皮瓣存活率VEGF组 (75 0 0 % ,5 8 4 1% )明显优于实验组 (10 % ,2 5 % )。结论　VEGF有利于预构皮瓣的存活。     

VEGF促进预构皮瓣血管新生的实验研究

目的探讨VEGF重组蛋白促进大鼠预构皮瓣血管新生、提高皮瓣存活面积的可行性。方法建立大鼠腹部预构皮瓣模型;30只Wistar大鼠随机分为两组;局部应用VEGF165（组Ⅰ）、PBS（组Ⅱ）;4周后形成以植入血管为蒂的岛状皮瓣,原位缝合;术后7d对皮瓣存活、血管新生情况进行检测。结果组Ⅰ、组Ⅱ的皮瓣存活率分别为66．13％±9．9％,55．59％±13．06％（P〈0．05）;组Ⅰ与组Ⅱ比较,微血管显影血管网更丰富,范围更广,分支更粗,内含墨汁的血管在皮瓣的表皮真皮、皮下层均有分布;微血管计数组Ⅰ、组Ⅱ分别为25．83±6．33条／mm^2,26．5±5．61条／mm^2（p〉0．05）。结论VEGF可以促进预构皮瓣的血管新生,提高存活率。     

骨髓间充质干细胞促进兔预构皮瓣成活的实验研究

目的探讨新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSC)同种异体移植促进预构皮瓣的血管再生,从而提高预构皮瓣存活率的可能性。方法体外分离、培养、鉴定并标记新西兰大白兔的BMSC。在实验兔腹部两侧构建预构皮瓣,两侧皮瓣随机分为实验组和对照组,实验组在股血管周围经皮注射已标记的BMSC悬液,对照组注射等量生理盐水。注射后第7天追踪观察BMSC移植后的成活情况,术后第14天掀起以股动静脉为轴心血管的岛状皮瓣,分别对两组的岛状皮瓣进行BrdU/vWF的免疫荧光双标检测;对岛状皮瓣中的VEGF进行Western Blot半定量分析;岛状皮瓣形成后第7天,观察两组皮瓣的成活情况。结果 BMSC异体移植后成活良好;实验组皮瓣内VEGF蛋白表达量明显高于对照组;实验组皮瓣内BrdU标记阳性细胞胞浆内有vWF信号;将预构皮瓣制成岛状皮瓣后第7天,实验组和对照组皮瓣存活率分别为(93.1±2.6)%、(51.5±7.5)%,P<0.05。结论异体移植BMSC可促进预构皮瓣的血管再生,提高预构皮瓣存活率。     

预构皮瓣的应用进展

将知名血管束或含知名血管的小组织瓣 ,移植入随意皮瓣中 ,两者愈合血运沟通后构成新的轴型皮瓣称为预构皮瓣。1　预构皮瓣的原理沈祖尧[1,2 ] 将血管束埋植于供区 ,造影发现 :1～2ｄ植入的血管束旁有造影剂溢漏现象 ,随时间增长 ,植入血管旁的微小血管显影越来越多 ,先是围绕血管纵向排列的较多 ,随后可见垂直向皮瓣真皮发出更小的血管分支 ,2～ 3周贯通整个皮瓣 ,4周达高峰。植入血管与皮瓣间建立血液循环联系有两种情况 :①新生血管与皮瓣原有血管的相互吻合、沟通。②新生血管生长、蔓延并形成网状系统 ,单独支配整个皮瓣。Ｖａｌａｕｒ…     

预构皮瓣的研究进展

目的 总结预构皮瓣的实验研究进展及临床应用成果。方法 广泛查阅有关预构皮瓣的实验研究及临床应用的文献报道综述及研究成果，提出尚需解决的问题。结果 实验研究已证明，预构皮瓣的血管化过程主要是植入血管与皮瓣原血管间的直接沟通，其次是植入血管新生形成完整的血管网并支配整个皮瓣，３～４周血管成熟，可进行皮瓣转移。临床应用方面将颞浅动静脉、胃网膜血管、旋股外侧血管及胸背血管等预构皮瓣带蒡移位或游离移植，均攻     

碱性成纤维细胞生长因子对预构皮瓣血管化及皮瓣成活的影响

预构皮瓣的研究越来越受到临床整形医师的重视 ,它为面颈部软组织缺损的修复和器官再造提供了新的手段 ,其基本概念是将知名血管束植入到皮瓣下方 ,待血管发芽与皮瓣原有血管血运沟通后再行移植。预构皮瓣血运重建受到一些因素的影响。碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)具有广泛的生物活性 ,可调节血管内皮细胞的有丝分裂 ,是有效的血管生成因子之一[1 ] 。内源性 b FGF的降低还可导致组织损伤的加重和修复的延迟 [2 ]。将 b FGF应用于皮瓣的预构 ,有可能促进皮瓣与植入血管束之间血运的早期沟通 ,从而有利于皮瓣的成活和缩短皮瓣预构的时…     

腺病毒介导基因转染提高大鼠皮瓣成活力的实验研究

目的 探讨局部应用腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子,对大鼠全厚随意型皮瓣、轴型皮瓣成活率的影响.方法 按照皮瓣类型将SD大鼠分为随意型皮瓣与轴型皮瓣两组,每组随机分为腺病毒治疗组(AdCMCV-VEGF组)、半乳糖苷酶组(AdCMV-Gal组)与生理盐水组3组(每组10只).分别于大鼠背侧正中设计蒂在尾侧的随意皮瓣(8cm×2cm),于腹部设计双侧腹壁下动脉为蒂的联合轴型皮瓣.在AdCMCV-VEGFA组,在设计皮瓣远端真皮下注射1012pfu的重组复制缺陷型腺病毒;AdCMV-Gal组,同法注入1012pfu的重组复制缺陷型腺病毒AdCMV-Gal;生理盐水组注入生理盐水1ml.注射后3天,皮瓣按原设计掀起并原位缝合,轴型皮瓣同时行右侧腹壁下动静脉结扎.分别与7天(随意型皮瓣)、14天(轴型皮瓣)后计算皮瓣成活率.结果 与AdCMCV-VEGF组和盐水组相比,AdCMV-VEGF组皮瓣成活率明显增高,免疫组化染色检测证明VEGF表达.组织学检测证明AdCMCV-VEGF组肉芽组织形成与血管增生明显增多.结论 腺病毒介导的局部应用VEGF cDNA可明显提高缺血皮瓣的成活.     

重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因对血管生成的治疗作用

经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄率高；支架术后再狭窄率仍高达15％～54％。采用血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗的方法以质粒、重组病毒作为VEGF基因载体经心外膜下或心内膜下心肌内注射。我们用携带人VEGF165基因重组腺病毒(Ad-VEGF165)，在猪慢性心肌缺血模型体内进行了血管生成的实验研究。     

扩张血管束移植预构皮瓣的实验研究

为研究扩张血管束移植皮产的存活范围，将股动静脉血束移植入８保只雄性兔的腹部上以下肉膜内，一侧皮下同时置入皮肤扩张器，对侧置入硅胶薄膜，术后２周开始扩张，术后４进行预构皮瓣活体血管染色和移植 活的比较研究，结果：扩张的预构皮瓣血管染色范围和移植后存在活范围均大于未扩张的预构皮瓣。     

携带人VEGF_(165)和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达

[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA。[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF165、ANG-1基因,将得到的基因通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pTrack-CMV中,构建携带双基因的腺病毒穿梭载体pTrack-CMV-VIA。进而使用AdEasyTM腺病毒系统重组并包装腺病毒。通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测制备的腺病毒pAd-VIA感染的大鼠骨髓基质干细胞中外源基因VEGF165及Ang-1的表达。[结果]该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,证明基因序列正确。转染QBI-293A细胞后,可观察到GFP明显表达。重组合腺病毒载体pAd-VIA获得成功包装,扩增后病毒滴度为2×1010PFU/ml,大鼠骨髓基质干细胞转染48 h后,绿色荧光蛋白表达阳性,ELISA结果显示转染组在感染48 h后,培养细胞上清中的VEGF165浓度为(42.5±2.082)ng/105细胞,ANG-1浓度为(16.67±2.08)ng/105细胞,未转染组几乎未检测到外源基因的表达,有统计学差异(P0.05)。[结论]成功构建携带人VEGF165、ANG-1双基因共表达重组腺病毒载体,为组织工程人工骨血管化的研究奠定基础。     

纳米微囊-VEGF复合体对创伤组织中VEGF、受体KDR的表达及微血管形成的影响

目的：研究纳米微囊-VEGF复合体对创伤组织中VEGF、受体KDR以及微血管表达的影响，探讨其促进损伤组织修复的作用机理。方法：将纳米微囊-VEGF复合体作用于兔耳慢性创面，利用反转录PCR方法观察各组术后1、3、7、10、14天创面组织中YEGF及KDR mRNA表达的变化；利用免疫组化染色观察创面肉芽组织中VEGF蛋白表达及微血管的变化。结果：VEGF mRNA在NW（非缺血创面组）和CW＋VEGF组（转基因组）3天后的表达水平均高于其在CW组（慢性创面组）相应时间点的表达水平，P〈0．05；KDR mRNA在NW组7～14天，CW＋VEGF组3～14天的表达水平高于CW组，P〈0．05；VEGF蛋白表达变化与mRNA表达结果基本一致；与CW组相比，7天后微血管计数在CW＋VEGF组及NW组增加显著，P〈0．05。结论：外源性VEGF基因转染导致创面中VEGF及受体KDR的表达上调，并通过增加肉芽组织中微血管的生成促进了慢性创面的愈合。     

VEGF基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法:体外分离、培养、鉴定MSCs,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染MSCs,转染后用免疫荧光和ELISA检测MSCs表达VEGF蛋白的情况,MTT检测MSCs对VEGF质粒转染的敏感性。结果:骨髓中分离得到MSCs,流式细胞检测显示MSCs不表达CD34和CD45,但表达CD90。透射电镜观察可见细胞浆中含大量粗面内质网和分泌颗粒。VEGF基因转染MSCs后第5天抗VEGF免疫荧光染色约90%的MSCs呈阳性,ELISA检测结果显示PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组细胞培养上清液中VEGF含量明显高于对照组,并于转染后第5天达到峰值。MTT检测结果显示VEGF质粒转染对MSCs增殖无影响。结论:MSC可作为VEGF基因转染的靶细胞用于基因治疗。     

重组人VEGF基因治疗提高游离颗粒脂肪移植存活率的实验研究

目的:研究重组人血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗对大鼠游离颗粒脂肪移植存活的影响。方法:SD雄性大鼠36只,分三组,于游离颗粒脂肪移植后分别注入重组的VEGF质粒(目的基因组),空白质粒(空白质粒组)和生理盐水(生理盐水组)。于术后7、15、30天分别采集移植的脂肪组织,计算植入物校正重量比并行HE染色观察一般组织病理改变,同时使用免疫组化法测定组织的VEGF表达水平及微血管密度。结果:目的基因组在移植物重量改变方面显著小于空白质粒组及生理盐水组(P<0.05),其VEGF表达及微血管密度均显著高于其他两组(P<0.01),空白质粒组及生理盐水组差异无显著性意义。此外,在空白质粒组及生理盐水组镜下存在大量囊样脂池、坏死区。结论:皮下注射的转VEGF基因的质粒在组织中能够表达VEGF,并诱导新血管的形成,增加血流灌注,减少移植组织的吸收,促进移植脂肪存活。     

VEGF对创伤组织中KDR,bFGF和PDGF mRNA表达的影响

目的研究VEGF对创伤组织KDR,bFGF和PDGFmRNA表达的影响,探讨其促进损伤组织修复的作用机理。方法以血管内皮细胞生长因子(VEGF165)为目的基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-VEGF165,利用纳米微囊包裹后,作用于兔耳创面。利用反转录PCR方法观察术后14天损伤组织KDR,bFGF和PDGFmRNA的表达变化。结果施与纳米微囊包裹的VEGF165实验组创面肉芽生长及上皮爬行速度明显快于对照组。反转录PCR的结果显示实验组损伤组织KDR,bFGF和PDGFmRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05)及正常组(P<0.01)。结论VEGF能上调损伤组织内KDR,bFGF和PDGFmRNA的表达,VEGF可能作用于其受体KDR,通过与其他细胞因子的协同作用来实现其对伤口愈合的促进作用。     

Increased expressions of vascular endothelial growth factor （VEGF）, VEGF-C and VEGF receptor-3 in prostate cancer tissue are associated with tumor progression

Aim： To investigate the differences in microvessel densities （MVD） and the expressions of vascular endothelial growth factor （VEGF）, VEGF-C and VEGF receptor-3 （VEGFR-3） between prostate cancer （PCa） tissues and adjacent benign tissues, and to explore the correlations among MVD, Jewett-Whitmore staging, Gleason scores and expressions of VEGF, VEGF-C and VEGFR-3 in the progression of PCa. Methods： An immunohistochemical approach was adopted to detect the expressions of CD34, VEGF, VEGF-C and VEGFR-3 in both cancer areas and peripheral benign areas of 71 primary prostatic adenocarcinoma specimens. A statistic analysis was then performed according to the experimental and clinic data. Results： Significantly upregulated expressions of VEGF, VEGF-C and VEGFR-3 were all found in malignant epithelium/cancer cells compared with adjacent benign epithelium （P 〈 0.01）. Patients in stage D had a significantly higher score than patients in stage A, B or C when comparing the expression of VEGF-C or VEGFR-3 in the tumor area （P 〈 0.01）. In addition, significant correlations were observed between Jewett-Whitmore staging and VEGF-C （rs = 0.738, P 〈 0.01）, clinical staging and VEGFR-3 （rs = 0.410, P 〈 0.01）, VEGF-C and Gleason scores （rs = 0.401, P 〈 0.01）, VEGFR-3 and Gleason scores （rs = 0.581, P 〈 0.001） and MVD and VEGF （rs = 0.492, P 〈 0.001）. Conclusion： Increased expressions of VEGF and VEGF-C were closely associ- ated with progression of PCa. The main contribution of increased VEGF expression for PCa progression was to upregulate MVD, which maintained the growth advantage of tumor tissue. However, the chief role of increased expressions of VEGF-C and VEGFR-3 was to enhance lymphangiogenesis and provide a main pathway for cancer cells to disseminate. （Asian J Androl 2006 Mar; 8： 169-175）     

Gene transfer of naked VEGF plasmid induces the formation of microvessels but not mature collaterals in ischaemic limb muscles

Summary   Background: Several studies have demonstrated increased numbers of angiographically detectable collaterals after vascular endothelial growth factor (VEGF) gene transfer. However, VEGF appears to be insufficient for stimulating the growth of mature blood vessels. Therefore, we decided to reinvestigate in what way the VEGF gene transfer to rabbit ischaemic muscle can restore blood flow impaired by femoral artery excision. Methods: Naked DNA, either control plasmid (pSVβgal) or pSG5-VEGF₁₆₅ (harbouring human VEGF cDNA), was injected into adductor magnus muscle. Results: Human VEGF₁₆₅ mRNA was detected in the ischaemic muscle injected with pSG5-VEGF₁₆₅, and human VEGF protein was present in the blood plasma of the same animals but not in rabbits treated with control plasmid. However, rabbit VEGF synthesis was also enhanced in ischaemic legs of both β-gal and VEGF-treated animals. In spite of the augmented generation of endogenous VEGF, the local blood flow decreased to 75±13.9 % (of flow before excision) after 28 days in pSVβgal injected animals, whereas it was preserved (97.3±15 %) in pSG5-VEGF₁₆₅ treated rabbits (P<0.02). Muscles of rabbits treated with pSG5-VEGF₁₆₅ showed a significantly higher number of microvessels in comparison to ischaemic muscles treated with pSVβgal (230±66 vessels/mm² vs 134±48;P<0.01), but angiographic analysis did not demonstrate significant differences in the number of collaterals between animals. Conclusions: The restoration of blood flow is most probably due to increased local angiogenesis and not to the formation of stable collateral vessels.      

血管内皮生长因子基因改善大鼠腹壁下动脉皮瓣成活的实验研究

目的　通过血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因对腹壁下动脉皮瓣的转染 ,探讨应用VEGF基因对皮瓣成活的影响。方法　以SD大鼠为实验模型制作腹壁下动脉皮瓣 ,并分别注入脂质体包裹的PCD VEGF1 6 5(目的基因组 ) ,PCD(空白质粒组 )和生理盐水 (生理盐水组 )。术后 ,①通过腹腔注射荧光素钠估计皮瓣的血流量 ;②计算断蒂后各组大鼠皮瓣的成活面积 ;③取大鼠皮肤标本行常规染色检测平均血管数目及内径 ;④皮肤标本行VEGF免疫组化染色检测VEGF表达情况。结果　目的基因组、空白质粒组和生理盐水组的平均荧光染色面积分别为6 0 6 4%、30 15 %、2 9 89%(P <0 0 5 ) ,大鼠断蒂后的平均成活面积分别为 92 3%、30 5 %、31 8%(P<0 0 5 ) ,平均血管数目分别为 10 1 72、91 35、89 85 (P <0 0 5 ) ,平均血管内径分别为 2 6、31 0 9、32 5 1μm(P <0 0 5 ) ,免疫组化染色示目的基因组染色深度明显高于空白质粒组和生理盐水组 (P <0 0 5 )。结论　PCD VEGF1 6 5转染能够改善皮瓣的成活 ,且通过转染表达了丰富的VEGF1 6 5。     

VEGF转染对骨髓基质细胞成骨功能的影响

[目的]将血管内皮生长因子121(vascular endothelial growth factor 121,VEGF121)基因转染兔骨髓基质细胞(rabbit bone marrow stroma cells,rMSCs)后,研究转染后细胞的成骨功能变化,为进一步利用经基因转染的rMSCs构建组织工程骨血管化打下基础.[方法]体外培养、扩增rMSCs,将其分为转染组和未转染组,脂质体介导下PCDI- VEGF121真核表达质粒转染rMSCs后,G- 418筛选阳性细胞克隆.通过RT - PCR法检测VEGF mRNA水平,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原检测来评价两组细胞的成骨能力.将阳性克隆细胞和未转染的细胞植入裸鼠股部肌袋内.分别于植入后4、8周处死动物,观察异位成骨情况.[结果]转染组和未转染组的ALP表达随着时间逐渐增强,转染组细胞内ALP水平显著增高,Ⅰ型胶原在转染组细胞内高表达,转染组的rMSCs植入肌袋后,随着植入时间的延长,出现骨髓腔样结构及大量骨小梁,表现出较好的异位成骨能力.[结论]应用VEGF121基因转染rMSCs后,有利于发挥VEGF121的血管化作用,促进rMSCs的成骨能力,将会成为组织工程骨血管化探索的方向.