miR-21靶向PDCD4调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖与迁移

目的:探讨miR-21靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death factor4,PDCD4)对非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)A549细胞增殖和迁移的影响及其作用机制.方法:采用脂质体转染技术分别将miR-21 mimics、miR-21inhi...     

LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 pcDNA-lincRNA-p21、空载质粒pcDNA转染A549细胞设为过表达组和空载组;稳定转染过表达组加入Notch信号通路特异性激活剂Jagged1蛋白,设为Notch激活剂组;不作处理细胞为对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭情况。RT-qPCR及Western blot法检测各组Notch1、HES-1、NICD、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达。结果 过表达组培养24、48和72 h MTT实验A值均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组48 h细胞迁移率和穿膜细胞数及Notch1、HES-1、NICD、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和Notch激活剂组,Notch激活剂组高于空载组和对照组（P<0.05）。结论 LncRNA-p21基因过表达可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其调控机制可能与抑制Notch信号通路、阻断A549细胞上皮间质转化有关。     

miR-601靶向调控MMP-17抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭CSCD

目的探讨miR-601对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法RT-qPCR检测NSCLC组织中miR-601的表达,并分析表达水平与癌细胞侵袭和淋巴结转移的相关性。将miR-601 mimics瞬时转染A549细胞或H1299细胞,Transwell实验检测其对两种细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学预测miR-601相关靶基因,采用双荧光素酶实验进行靶基因验证。检测miR-601的靶基因对A549细胞或H1299细胞迁移及侵袭能力的影响。结果miR-601在NSCLC组织中表达明显降低(P<0.001),且降低水平与癌细胞的浸润(P<0.007)及淋巴结转移(P<0.011)密切相关。瞬时转染miR-601 mimics能明显抑制A549细胞或H1299细胞的迁移及侵袭能力。生物信息学及荧光素酶报告实验提示MMP-17是miR-601的靶基因。MMP-17能促进A549细胞或H1299细胞的迁移和侵袭,但其促进迁移侵袭的能力可被miR-601抑制。结论miR-601通过靶向调控MMP-17而抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭。     

miR-134靶向EGFR对非小细胞肺癌增殖的影响

目的 探讨微小RNA-134（miR-134）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR 134在NSCLC细胞株（A549、H252）和正常胚肺细胞株WI38中的表达情况;将A549和H252细胞分为3组,分别为空白对照组（不转染）、miR-NC组（转染不相关siRNA）和miR-134组（转染miR-134 mimics）。分别于转染后24、48、72、96h收集细胞,采用MTS法检测细胞的增殖情况;转染后96h用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-134与表皮生长因子受体（EGFR）3’UTR的结合情况,QPCR检测过表达miR-134的A549和H252细胞中EGFR的表达情况。结果 与WI38 细胞相比,miR-134在A549细胞中的表达下调85.91％,在H252细胞中下调78.13％（P＜0.05）。MTS检测显示,miR-134能显著降低A549和H252细胞的增殖能力,并呈时间依赖性。流式细胞仪检测显示,与空白对照组比较,miR-134组A549细胞的凋亡比例提高226.31％,H252细胞提高47.85％（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示miR 134能与EGFR3’UTR结合,显著降低荧光值（P＜0.05）。QPCR检测显示,与空白对照组比较,转染miR-134 mimics 后,EGFR在A549细胞中的相对表达量下调57.0％,在H252中下调35.0％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 miR-134在NSCLC中低表达,能通过靶向EGFR抑制NSCLC细胞增殖,并诱导凋亡。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

葛根素抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制.方法:不同浓度葛根素处理非小细胞肺癌A549细胞后,采用CCK-8法检测葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制作用及半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50);显微镜下观察葛根素对非小细胞肺癌A549细...     

miR-150-5p调控非小细胞肺癌的A549细胞凋亡的机制研究

目的 探讨miR-150-5p调控非小细胞肺癌A549细胞凋亡的分子机制.方法 过表达或敲低miR-150-5p后,检测非小细胞肺癌A549的凋亡水平.敲低miR-150-5p后,检测miRDB数据库在线分析的靶标的mRNA水平.通过荧光素酶报告系统检测miRNA是否与潜在靶标直接结合.过表达或敲低靶标后,分析非小细胞...     

miR-21调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)中高表达的miR-21对细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制.方法 采用荧光定量聚合酶链反应检测miR-21在人NSCLC组织、癌旁组织和A549细胞系中的表达.通过序列分析预测被miR-21调控的抑癌基因,通过荧光素酶活性检测和Western blot 检测验证miR-21对靶基因表达调控的影响.采用RNA干扰技术抑制miR-21和程序性细胞死亡因子4(PDCD4),以台盼蓝染色和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡的变化.结果 NSCLC组织和A549细胞中miR-21的表达水平分别为癌旁组织的2.24倍和3.06倍.序列预测和基因表达调控研究表明,miR-21可以在NSCLC中反向调控PDCD4的表达(P＜0.01).荧光素酶活性检测结果显示,共同转入Wt 3'UTR和miR-21会显著抑制A549细胞中的荧光素酶表达(P＜O.001).Western blot检测结果显示,导入反义寡核苷酸抑制miR-21的功能后,PDCD4的表达水平明显上升.抑制miR-21的作用可以显著抑制A549细胞的增殖,并使细胞凋亡率由2.6％上升到10.9％,而抑制PDCD4的表达可以在很大程度上消除miR-21介导的细胞增殖障碍,抑制细胞凋亡.结论 在NSCLC中,抑制抑癌基因PDCD4的表达可能是miR-21介导肿瘤细胞增殖、抵抗凋亡的重要途径之一.     

细胞自噬与非小细胞肺癌关系的研究进展

细胞自噬是细胞重要的基本代谢过程之一,经常作为非小细胞肺癌的治疗靶点。细胞自噬一方面可以通过维持细胞内基因组的稳定、清除促癌因子、促进细胞程序性死亡、参与免疫反应和支持干细胞维持等多种途径抑制癌细胞的产生,另一方面又可以为癌细胞提供营养物质以支持其生长和迁移并使其产生对放化疗的抗性。因此,厘清自噬与非小细胞肺癌发生发展之间的具体联系,不仅可以更加有针对性地制定治疗策略,也可以为开发新的治疗策略提供思路。全文结合最新的研究成果,对细胞自噬和非小细胞肺癌的关系作一综述。     

自噬与非小细胞肺癌治疗研究进展

非小细胞肺癌是一种最常见的肺癌类型,主要治疗方式有放疗、化疗、手术治疗和靶向治疗.自噬是真核细胞内一种程序性死亡降解过程,维持细胞稳态,并且与肿瘤发生、发展及耐药密切相关.自噬对肿瘤的治疗存在双重作用.本文就自噬在非小细胞肺癌治疗中的作用进行综述.     

毒黄素对非小细胞肺癌A549细胞株作用的实验研究

目的 研究毒黄素不同浓度和不同作用时间对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 分别取0.5、0.375、0.25和0.125 μmol／L毒黄素作用于A549细胞（实验组）,以不加毒黄素为对照组,分别培养24 h和48 h。采用CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC／PI凋亡试剂盒检测A549细胞增殖抑制率和凋亡率。划痕实验对比0.125 μmol／L毒黄素组和对照组（0 μmol／L毒黄素）在12、24和48 h细胞迁移率。结果 0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞增殖抑制率分别为（93.51±3.69）％、（40.38±3.08）％、（23.54±2.58）％和（13.07±2.37）％,48 h为（90.53±3.58）％、（53.72±3.02）％、（34.44±3.10）％和（24.78±2.43）％。0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞凋亡率分别为（78.68±2.22）％、（43.66±2.53）％、（20.81±2.59）％和（6.25±0.96）％,高于对照组的（1.57±0.52）％;0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组48 h细胞凋亡率分别为（88.66±3.16）％、（59.86±2.81）％、（27.89±3.48）％和（9.91±1.33）％,高于对照组的（1.59±0.55）％。0.125 μmol／L毒黄素组12、24和48 h细胞迁移率分别为7％、11％和16％,低于对照组相应的14％、26％和39％。结论 毒黄素对A549细胞有明显增殖抑制和促凋亡作用,并呈时间和剂量依赖性,且可抑制A549细胞迁移活性。     

FUNDC1调控肺癌A549细胞及其干细胞的生长、自噬、凋亡和细胞干性的研究

目的:本实验旨在阐明线粒体自噬受体蛋白FUNDC1(FUN 14 domain containing 1)在肺癌病理进程中对肿瘤细胞生长死亡以及细胞干性的调控作用.方法:使用RT-qPCR分析FUNDC1在肺癌组织和细胞中的表达情况.siRNAs和过表达载体转染A549细胞以及诱导形成的A549干细胞团(A549/CS...     

miR-126通过靶向调控Crk基因抑制非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭

目的:探究miR-126通过靶向调控Crk基因来调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及侵袭.方法:应用实时定量PCR检测NSCLC组织及其癌旁肺组织中miR-126和Crk mRNA的表达.应用荧光素酶报告基因系统验证Crk是miR-126的靶基因.在NSCLC细胞转染miR-126 mimics或特异沉默Crk的s...     

沉默circ9119调控miR-126抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和自噬

目的:探讨环状RNA-9119（circular-RNA-9119,circ9119）在肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的作用及其作用机制。方法:qRT-PCR检测收集的组织样本和购买的细胞系中circ9119、miR-126的表达,并对细胞进行筛选。借助荧光原位杂交（FISH）实验、RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）实验与双荧光素酶报告实验对circ9119和miR-126的关系进行明确。凋亡相关因子和自噬标记物借助qRT-PCR、Western blot测定。CCK8、Transwell、流式细胞术分别测定HCC细胞的增殖、侵袭和凋亡。裸鼠成瘤实验观测肿瘤生长状况。结果:HCC组织和细胞中,circ9119的表达上调、miR-126的表达下调（均P＜0.05）。circ9119能够作为miR-126的ceRNA对其进行调控。沉默circ9119有利于抑制HCC细胞的增殖、侵袭和自噬,促进细胞的凋亡,且能够抑制小鼠体内肿瘤的生长（均P＜0.05）。而过表达circ9119则变化与之相反。上调miR-126的表达与沉默circ9119中细胞变化趋势一致。上调miR-126的作用能够被过表达circ9119所逆转。结论:circ9119作为促癌因子负调控miR-126在HCC中发挥作用。     

扶正抑瘤汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌增殖、凋亡及自噬

目的 探讨扶正抑瘤汤对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡、自噬以及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 采用不同浓度（12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL、100 mg/mL、200 mg/mL、400 mg/mL）扶正抑瘤汤体外培养非小细胞肺癌A549细胞, CCK-8法测定细胞增殖抑制率;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平;透射电镜下观察自噬溶酶体形成情况。结果 200 mg/mL和400 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞增殖抑制率增加（均P<0.05）。200 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞侵袭和迁移能力降低（均P<0.05）;细胞凋亡率增加（P<0.05）;Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平升高（均P<0.05）,P62蛋白的表达水平降低（P<0.05）;A549细胞自噬溶酶体数量增加;p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白的表达降低（均P<0.05）。结论 扶正抑瘤汤可以抑制A549细胞增殖,并促进细胞凋亡和自噬,可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路失活有关,是治疗非小细胞肺癌的潜在药物。     

miR-181c-5p靶向TRIM71调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡研究

目的 探讨miR-181c-5p调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制.方法 检测非小细胞肺癌细胞A549和人正常肺细胞HLF-a中miR-181c-5p的表达水平.过表达或敲低miR-181c-5p后,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平.通过miRDB在线分析miR-181c-5p潜在底物,过表达miR-181c...     

微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-149（miR-149）在非小细胞肺癌（NSCLC）中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物（mimics）及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照（未转染组）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC／PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果 QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为（16.51±2.49）％、（22.90±3.65）％和（31.43±5.27）％,均高于其余两组,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染48 h的凋亡率为（29.17±4.48）％,高于未转染组的（5.34±1.72）％和miR 149对照组的（7.62±1.59）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-149 转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义（P＜0.05）;双荧光素酶报告基因实验表明 miR-149可显著抑制野生型 FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。     

非小细胞肺癌患者血浆miR-21水平与化疗疗效的相关性

目的:探讨miRNA-21（miR-21）在非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆中的表达及治疗前后NSCLC患者血浆中miR-21水平与化疗药物疗效的相关性。方法:使用荧光定量PCR法检测并比较15例正常人和26例晚期NSCLC患者血浆中miR-21的表达差异;检测并比较晚期NSCLC患者化疗前后血浆中miR-21的变化水平。结果:NSCLC患者血浆中的miR-21表达水平显著高于正常人（P<0.01）。化疗后患者血浆中miR-21表达水平较化疗前存在差异（P<0.05）。miR-21在（SD+PD）组的表达量高于（CR+PR）组（P<0.05）;而（CR+PR）组血浆miR-21的水平与正常对照组比较,无显著差异（P>0.05）。分析miR-21表达与NSCLC患者临床病理参数相关性,发现miR-21表达与患者临床特征无关。结论:血浆中miR-21的表达水平,对于NSCLC早期诊断及化疗药物治疗后评估患者疗效有较好地评判价值。     

miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors,并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9,从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

miR-21和PDCD4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨微小核糖核酸21（miR-21）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:应用Real-time PCR法检测61例NSCLC组织及61例对应癌旁肺组织中miR-21、PDCD4的表达,分析二者表达的相关性及其与临床病理特征和预后的关系。结果:同癌旁正常组织相比,NSCLC组织中miR-21 mRNA表达明显上调（88.52%,P=0.000）,PDCD4 mRNA表达明显下调（83.61%,P=0.000）。两者表达呈负相关（r＝0．044,P＜0.05）。中晚期（Ⅲ-Ⅳ期）肺癌组织中miR-21 mRNA表达高于早期（Ⅰ-Ⅱ期）（P＜0.05）。PDCD4 mRNA 表达与NSCLC的分化程度、临床分期及淋巴转移相关（P＜0.05）。Kaplan-Meier 生存分析显示miR-21高表达患者较低表达患者总生存期明显缩短（P=0.007）,相反,PDCD4高表达的患者较低表达患者具有较长的总生存期(P=0.003)。