旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白对卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用

目的　探讨旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白（Adult?worm excretory?secretory protein, AES）对卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用。方法　18只雌性BALB/c小鼠随机分为3组：A组为空白对照组,B组为变应性鼻炎组,C组为AES治疗组。A组小鼠给予PBS;B组小鼠经腹腔注射抗原佐剂混悬液进行基础致敏,隔日1次,共7次,后以5% OVA溶液滴鼻进行局部激发,每日1次,共7次,诱导建立变应性鼻炎模型;C组小鼠在诱导变应性鼻炎基础上,于基础致敏和局部激发时分别加入25 μg AES进行干预。末次激发后观察各组小鼠30 min,并进行行为学评分;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IFN?γ、IL?4、IL?5、IL?10及TGF?β水平变化,HE染色后镜下观察小鼠鼻黏膜病理改变。结果　3组小鼠行为学评分差异有统计学意义（F = 110.12, P < 0.01）;B组小鼠行为学评分显著高于A组[（7.17 ± 0.75）分和（1.33 ± 0.52）分,P < 0.01],且鼻黏膜病理损伤更为显著;经AES治疗后,C组小鼠行为学评分[（3.83 ± 0.75）分]显著下降（P < 0.01）,鼻黏膜病理损伤亦显著缓解。3组小鼠血清中IFN?γ水平差异有统计学意义（F = 7.50,P < 0.01）,B组小鼠血清中IFN?γ水平显著低于A组（P < 0.05）;经AES治疗后,C组小鼠血清中IFN?γ水平较B组显著升高（P < 0.05）。3组小鼠血清中IL?4 （F = 470.81,P < 0.01）、IL?5水平（F = 68.20,P < 0.01）差异均有统计学意义,B组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均显著高于A组（P均 < 0.01）;经AES治疗后,C组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均较B组显著降低（P均 < 0.01）。3组小鼠血清中IL?10（F = 174.91,P < 0.01）、TGF?β水平（F = 9.39,P < 0.01）差异均有统计学意义;经AES治疗后,C组小鼠血清中IL?10、TGF?β水平均显著高于B组（P均 < 0.05）。结论　旋毛虫AES对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有显著的保护作用。     

旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白对卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用

目的　探讨旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白（Adult?worm excretory?secretory protein, AES）对卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用。方法　18只雌性BALB/c小鼠随机分为3组：A组为空白对照组，B组为变应性鼻炎组，C组为AES治疗组。A组小鼠给予PBS；B组小鼠经腹腔注射抗原佐剂混悬液进行基础致敏，隔日1次，共7次，后以5% OVA溶液滴鼻进行局部激发，每日1次，共7次，诱导建立变应性鼻炎模型；C组小鼠在诱导变应性鼻炎基础上，于基础致敏和局部激发时分别加入25 μg AES进行干预。末次激发后观察各组小鼠30 min，并进行行为学评分；采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IFN?γ、IL?4、IL?5、IL?10及TGF?β水平变化，HE染色后镜下观察小鼠鼻黏膜病理改变。结果　3组小鼠行为学评分差异有统计学意义（F = 110.12, P < 0.01）；B组小鼠行为学评分显著高于A组[（7.17 ± 0.75）分和（1.33 ± 0.52）分，P < 0.01]，且鼻黏膜病理损伤更为显著；经AES治疗后，C组小鼠行为学评分[（3.83 ± 0.75）分]显著下降（P < 0.01），鼻黏膜病理损伤亦显著缓解。3组小鼠血清中IFN?γ水平差异有统计学意义（F = 7.50，P < 0.01），B组小鼠血清中IFN?γ水平显著低于A组（P < 0.05）；经AES治疗后，C组小鼠血清中IFN?γ水平较B组显著升高（P < 0.05）。3组小鼠血清中IL?4 （F = 470.81，P < 0.01）、IL?5水平（F = 68.20，P < 0.01）差异均有统计学意义，B组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均显著高于A组（P均 < 0.01）；经AES治疗后，C组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均较B组显著降低（P均 < 0.01）。3组小鼠血清中IL?10（F = 174.91，P < 0.01）、TGF?β水平（F = 9.39，P < 0.01）差异均有统计学意义；经AES治疗后，C组小鼠血清中IL?10、TGF?β水平均显著高于B组（P均 < 0.05）。结论　旋毛虫AES对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有显著的保护作用。     

旋毛虫成虫排泄分泌蛋白抗CLP诱导的小鼠脓毒症的观察

目的 目的 探讨旋毛虫成虫排泄分泌蛋白 （AES） 对盲肠结扎穿孔术 （CLP） 诱导的小鼠脓毒症的抑制作用。方法 方法 将48只BALB/c小鼠随机分为3组, 即假手术对照组 （PBS + sham组, A组）、 脓毒症组 （PBS + CLP组, B组）、 AES蛋白治疗 组 （AES + CLP组, C组）。A组和B组于CLP术后经腹腔注射200 μl PBS, C组术后经腹腔注射含25 μg AES蛋白的等量 PBS。每组随机抽取8只, 建模后观察各组小鼠的一般情况及96 h生存率; 每组其余8只小鼠于建模后12 h取肝、 肺、 肾, HE染色观察病理改变; 以酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测小鼠血清中TNF?α、 IL?1β、 IL?6、 IL?10及TGF?β细胞因子水平 的变化。结果 结果 3组小鼠96 h生存率差异有统计学意义 （χ2 = 21.16, P < 0.05）; 与A组 （100%） 相比, B组小鼠生存率 （0） 降低 （P < 0.05）, 且肺、 肝及肾脏损伤明显加重; 经AES治疗后, C组存活率 （75%） 明显增加 （P < 0.05）, 小鼠肺脏、 肝脏及 肾脏病理损伤亦显著缓解。3组小鼠血清中的促炎因子TNF?α （F = 27.11, P < 0.05）、 IL?1β （F = 18.75, P < 0.05） 及IL?6 （F = 100.93, P < 0.05） 水平差异均有统计学意义; B组小鼠的促炎因子水平均高于A组 （P均< 0.05）; 经AES治疗后, C组 小鼠上述3种促炎因子水平较B组均显著下降 （P均< 0.05）。3组小鼠血清中的调节性细胞因子IL?10 （F = 10.88, P < 0.05） 及TGF?β （F = 11.37, P < 0.05） 水平差异亦有统计学意义; 经AES治疗后, C组小鼠IL?10及TGF?β分泌水平较B组亦 明显增加 （P < 0.05）。结论 结论 旋毛虫AES对CLP诱导的BALB/c小鼠脓毒症有显著的缓解作用。     

CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的　观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α（SIRPα）和血小板反应蛋白1（TSP⁃1）在孕中、晚期的动态表达。方法　以C57BL/6J小鼠（6～8周龄）构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d（Gd6.5）时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精⁃伊红（HE）染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP⁃1、主要表面抗原1（SAG1）及γ干扰素（IFN⁃γ）、白细胞介素2（IL⁃2）、IL⁃4和IL⁃13 mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP⁃1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果 　与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高（[χ2] = 20.405、28.644,P 均< 0.001）。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中 CD47、SIRPα、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[F′（F）= 37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均< 0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1表达水平升高（P 均< 0.01）,而Gd18.5时表达降低（P 均< 0.001）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13表达下降（P 均< 0.001）。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中 CD47、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[H （F′、F）= 14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P 均< 0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP⁃1表达水平均升高（P 均< 0.01）,但SIRPα表达无变化（P > 0.05）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13 表达水平下降（P 均< 0.001）。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ（rs = 0.735）、IL⁃2（rs = 0.655）表达水平呈正相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = -0.689）、IL⁃13达水平（rs = -0.795）表呈负相关（P 均< 0.05）;Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ表达水平（rs = -0.745）、IL⁃2（rs = -0.816）呈负相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = 0.704）、IL⁃13表达水平（rs = 0.802）呈正相关（P均< 0.05）。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP⁃1呈强表达。结论　孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP⁃1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。     

吡喹酮异构体对肝星状细胞系LX⁃2增殖及活化的作用

目的　观察左旋吡喹酮（L⁃PZQ）和右旋吡喹酮（D⁃PZQ）体外对人肝星状LX⁃2细胞系增殖及活化的作用差异。方法　利用转化生长因子⁃β（TGF⁃β）刺激激活LX⁃2细胞;采用CCK⁃8法检测以0 ~ 50 μg/mL梯度浓度吡喹酮刺激24 h后的LX⁃2细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫印迹试验检测15 mg/mL吡喹酮刺激LX⁃2细胞24 h 后的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃平滑肌肌动蛋白（α⁃SMA）基因表达水平和48 h后蛋白表达水平,以分析LX⁃2细胞活化情况。结果　L⁃PZQ和D⁃PZQ两药物各浓度组LX⁃2细胞存活率差异均有统计学意义（F = 6.119、79.180,P均< 0.05）;药物浓度< 30 μg/mL时,L⁃PZQ和D⁃PZQ对激活型LX⁃2增殖能力均无显著影响（P均> 0.05）;L⁃PZQ浓度> 50 μg/mL和D⁃PZQ浓度> 40 μg/mL时,均对激活型LX⁃2增殖能力产生抑制作用（P均< 0.05）;D⁃PZQ浓度为40 μg/mL和50 μg/mL时,对激活型LX⁃2增殖的抑制作用均强于L⁃PZQ（t = 3.419、8.776,P均< 0.05）。空白组、TGF⁃β诱导组、L⁃PZQ组和D⁃PZQ组LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因（F = 21.55、79.99、46.70,P 均< 0.05）和蛋白表达水平（F = 20.12、30.29、32.93,P 均< 0.05）差异均有统计学意义。L⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因表达水平具有显著抑制作用（P均< 0.05）,但对Ⅰ型胶原基因表达水平及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA蛋白表达水平均无显著影响（P均> 0.05）;D⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因和蛋白表达水平均有显著抑制作用（P均< 0.05）;D⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因表达抑制作用强于L⁃PZQ（P均< 0.05）。结论　L⁃PZQ和D⁃PZQ对LX⁃2细胞增殖及活化均有一定抑制作用,且D⁃PZQ的抑制作用强于L⁃PZQ。     

中性粒细胞性支气管哮喘小鼠模型建立的探索

目的利用不同剂量脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）干预卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏和激发的小鼠,探索中性粒细胞性哮喘（neutrophilic asthma,NA）小鼠模型的建立。方法 80只BALB/c小鼠随机分为正常对照组（A组）、肺损伤对照组（B组：B1～B4）、嗜酸细胞性哮喘模型对照组（C组）、NA模型探索组（D组：D1～D4）。分致敏和激发两阶段建模,致敏阶段：A组PBS腹腔注射及PBS滴鼻,B组PBS腹腔注射及LPS滴鼻,C组OVA腹腔注射,D组OVA腹腔注射及LPS滴鼻;激发阶段：A、B组生理盐水雾化,C、D组5%OVA雾化。通过观察小鼠雾化时的症状、肺组织病理改变,检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞总数及分类计数和血清OVA-sIgE等评价NA小鼠模型建立。结果①D3组小鼠出现类似C组小鼠呼吸急促、大小便失禁等表现。②D3组BALF炎症细胞总数较A组显著升高（P〈0.01）;D3组中性粒细胞（neutrophil,NEU）百分比（NEU%）较A、C、D1、D2组显著升高（P值均〈0.01）,嗜酸粒细胞（eosinophil,EOS）百分比（EOS%）较A组显著升高而较C组显著低下（P值均〈0.01）。③D3组支气管管壁及肺泡间隔增厚变形,部分断裂,气道黏膜下除了EOS浸润外还存在明显NEU浸润。④D3组血清OVA-sIgE水平显著高于A组而低于C组（P值均〈0.05）。⑤D3组IL-4水平显著高于A组（P〈0.05）,与C组无显著差异（P〉0.05）;D3组IFN-γ水平显著低于A组（P〈0.05）,与C组无显著差异（P〉0.05）。结论 10μg LPS滴鼻吸入＋50μg OVA腹腔注射三次与5%OVA连续激发两周即D3组可成功建立NA小鼠模型。     

日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞分化的研究

目的 目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原 （SEA） 和可溶性成虫抗原 （SWAP） 诱导小鼠效应性B细胞分化情况。方 方 法 法 SEA、 SWAP和脂多糖 （LPS） 分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+ B细胞, 72 h后采用流式细胞术检测 CD19+ IL?6+ 及CD19+ IFN?γ+ 细胞比例; 用酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL?6和IFN?γ 水平。用SEA、 SWAP、 PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠, 每周1次, 共3次, 末次免疫后7 d取小鼠脾脏, 流式细胞 术检测CD19+ IL?6+ 及CD19+ IFN?γ+ 细胞比例, 用ELISA法检测培养上清中IL?6和IFN?γ水平。 结果 结果 SEA与LPS可以体 外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞 （F = 5.099, P < 0.05; F = 6.951, P < 0.05）, 并刺激脾脏B细 胞分泌IL?6 （F = 55.184, P < 0.01）; SEA免疫小鼠后, 可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL?6 （F = 19.244, P < 0.01）, 并诱 导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞 （F = 14.904, P < 0.05）。SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为 CD19+ IFN?γ+ B细胞 （F = 3.277, P < 0.05）, 但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFN?γ+ B细胞, 也不能刺激脾脏B细胞分泌 IFN?γ; SWAP免疫小鼠后, 可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFN?γ （F = 31.886, P < 0.01）, 并诱导其分化为CD19+ IFN? γ+ B细胞 （F = 49.873, P < 0.01）。 结论 结论 日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞, 而 SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IFN?γ+ B细胞, 但依赖于其他免疫细胞的参与。     

重组刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答

目的 观察不同浓度重组刚地弓形虫抑制蛋白（rTgPRF）滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨其最佳免疫剂量。方法 50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组,免疫组分别用10、20、30 μg和40 μg rTgPRF溶于20 μl磷酸盐缓冲液（PBS）后滴鼻免疫,对照组用20 μl PBS。分别于第0、14和21 天滴鼻免疫小鼠,末次免疫后2周,颈椎脱臼处死小鼠。无菌取脾,采用CCK?8法测定脾淋巴细胞刺激指数（SI）,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脾淋巴细胞上清液中IFN?γ、IL?2、IL?4和IL?10浓度。结果 经rTgPRF刺激,30 μg和40 μg免疫组小鼠脾淋巴细胞SI均高于对照组（P均< 0.05）,且30 μg组显著高于40 μg组（P < 0.05）。与对照组比较,所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN?γ含量升高（P均< 0.05）,20、30 μg和40 μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL?2含量增加（P均< 0.05）,其中30 μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN?γ（P均< 0.01）和IL?2含量最高（P均< 0.01）;所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL?4和IL?10含量与对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。结论 rTgPRF滴鼻免疫小鼠可诱导脾淋巴细胞增殖和Th1型细胞免疫应答,以30 μg剂量免疫效果最佳。     

缺氧诱导因子⁃1在弓形虫感染孕鼠中的表达

目的　探讨缺氧诱导因子⁃1（hypoxia⁃inducible factor⁃1, HIF⁃1）在小鼠妊娠早期感染弓形虫后母胎界面的表达及可能发挥的作用。方法　将20只妊娠C57BL/6小鼠（体质量为16～20 g）随机分为4组,即12 d对照组、12 d感染组和18 d对照组、18 d感染组。在小鼠孕6 d时,给予12 d感染组、18 d感染组小鼠腹腔注射弓形虫PRU株速殖子150个/只,孕12 d、孕18 d对照组孕鼠则注射等量PBS。于孕12 、18 d分别处死相应对照组和感染组小鼠,取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化;采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测孕鼠胎盘和子宫中HIF⁃1α、HIF⁃1β及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平,并分析HIF⁃1α和VEGF mRNA表达水平的相关性。此外,设置孕12 d感染组和孕18 d感染组PBS阴性对照组,采用免疫组化染色检测孕鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α表达水平。结果　与孕12 d、孕18 d对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组孕鼠出现畸胎、胎盘发育不良等不良妊娠结局。HE染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘组织迷路区细胞分别出现肿胀和瘀血,且均出现血窦减少、炎性细胞浸润;两组小鼠子宫组织均有柱状上皮细胞损伤和炎性细胞浸润。qPCR检测结果显示,与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著上升（F ＝ 132.6、286.9,P 均＜0.05）,子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著下降（F ＝111.5、55.2,P均＜ 0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平均显著下降（F ＝ 215.8、418.9、156.8、200.1,P 均＜ 0.05）。与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著下降（F ＝426.2、104.6、566.9,P 均＜0.05）,子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平显著上升（F ＝ 95.8、502.4、610.0,P均＜0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘组织和子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著上升（F ＝521.9、100.6、275.9、224.6、108.2、333.4,P均＜ 0.05）。免疫组化染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘迷路区HIF⁃1α分别呈强阳性和弱阳性表达,子宫组织中HIF⁃1α均不表达。结论　小鼠孕早期感染弓形虫后,胎盘组织中HIF⁃1α表达呈现孕中期上升、孕晚期下降的趋势,且与VEGF⁃A、VEGF⁃B、VEGF⁃C表达变化趋势相反;推测HIF⁃1α通过抑制VEGF表达而抑制小鼠妊娠期间胎盘血管生成,导致不良妊娠结局。     

旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用

目的　探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂（TsadSPI）对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用。方法 BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、TsadSPI治疗组,每组6只,共18只。模型组和TsadSPI治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔术（CLP）构建脓毒症急性肾损伤模型,假手术组小鼠剖腹探查,不结扎、不穿孔盲肠。术后30 min,假手术组和模型组小鼠腹腔注射100 μL PBS溶液,TsadSPI治疗组小鼠腹腔注射100 μL含有2 μg TsadSPI蛋白的PBS溶液。造模后12 h,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平以评价肝肾功能,HE染色观察小鼠肾脏结构改变,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）?α、白细胞介素（IL）?6、IL?10、转化生长因子（TGF）?β水平,采用免疫组化染色评估肾脏组织中髓样分化因子88（MyD88）、核因子?κB p65（NF?κB p65）表达水平。结果　术后12 h,3组小鼠血清ALT（F = 41.031,P < 0.001）、AST（F = 54.757,P < 0.001）、Cr（F = 24.142,P < 0.001）和BUN水平（F = 214.849,P < 0.001）差异均有统计学意义,模型组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著高于假手术组（P < 0.001）,而TsadSPI治疗组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著低于模型组（P < 0.001）。HE染色结果显示,小鼠CLP术后肾脏损伤严重,TsadSPI治疗后损伤明显缓解。ELISA检测结果表明,3组小鼠血清TNF?α（F = 47.502,P < 0.001）和IL?6水平（F = 222.061,P < 0.001）差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠TNF?α、IL?6水平较模型组显著下降（P < 0.001）;3组小鼠血清IL?10（F = 16.227,P < 0.001）和TGF?β水平（F = 52.092,P < 0.001）差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠血清IL?10、TGF?β水平较模型组均显著升高（P < 0.001）。免疫组化染色结果表明,模型组小鼠肾脏组织内MyD88表达水平及NF?κB p65核阳性率显著高于TsadSPI治疗组。结论　TsadSPI可减少小鼠肾脏组织内MyD88表达及NF?κB p65核阳性率,进而上调免疫调节因子、下调促炎因子水平,从而保护脓毒症造成的肾脏损伤。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导 小鼠巨噬细胞凋亡机制

目的　观察日本血吸虫感染过程中巨噬细胞数量及其凋亡动态变化,并探讨血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）诱导巨噬细胞凋亡的可能机制。方法　将C57BL/6小鼠（6～8周龄）随机分为4组,其中3组作为实验组,另1组作为正常对照组。实验组每只小鼠均经腹部皮肤感染（12 ± 1）条日本血吸虫尾蚴,于感染后3、5周和8周各处死1组小鼠;正常对照组小鼠不感染血吸虫,于实验组小鼠感染当天处死。取各组小鼠肝组织和腹腔渗出细胞,检测肝脏和腹腔巨噬细胞数量及其凋亡动态变化。此外,体外用SEA、PBS及卵清蛋白（ovalbumin,OVA）处理纯化的小鼠腹腔巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡;以实时定量PCR和Western blotting技术检测巨噬细胞中BCL⁃2家族成员mRNA和蛋白表达水平;以流式细胞术和Western blotting技术检测caspase 3活化水平。同时,体外在caspase抑制剂、H2O2或N⁃乙酰⁃L⁃半胱氨酸（NAC）存在时用SEA处理巨噬细胞,以流式细胞术检测巨噬细胞凋亡水平。结果　感染日本血吸虫尾蚴后3、5周和8周,小鼠肝脏[（0.873 ± 0.106）× 106、（2.737 ± 0.460）× 106个和（3.107 ± 0.367） × 106个;F = 81.900,P < 0.01]和腹腔中巨噬细胞总数[（5.282 ± 1.136） × 105、（7.500 ± 1.200） × 105个和（12.800 ± 0.800） × 105个;F = 55.720,P < 0.01]不断增加,且感染小鼠肝脏[（0.092 ± 0.018） × 106、（0.186 ± 0.025） × 106 个和（0.173 ± 0.027）× 106 个;F = 57.780,P < 0.000 1]和腹腔中凋亡的巨噬细胞数量[（0.335 ± 0.022）× 105、（0.771 ± 0.099） × 105个和（1.094 ± 0.051） × 105个;F = 49.460,P < 0.01]亦不断增加。经SEA体外处理的巨噬细胞凋亡比例[（24.330 ± 0.784）%]高于PBS [（18.500 ± 1.077）%]及OVA[（18.900 ± 1.350）%]处理组（P均 < 0.01)。经SEA和PBS处理的巨噬细胞中,Bcl⁃2 [（1.662 ± 0.943） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 1.215,P > 0.05]、Bax [（0.711 ± 0.200） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 2.507,P > 0.05]、Bak [（1.255 ± 0.049） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 0.897,P > 0.05]、BCL⁃2 [（0.068 ± 0.004） vs. （0.070 ± 0.005）;t = 0.699,P > 0.05]、BAX [（0.089 ± 0.005） vs. （0.097 ± 0.003）;t = 2.232, P > 0.05]、BAK [（0.439 ± 0.048） vs. （0.571 ± 0.091） ; t = 2.231,P > 0.05]表达水平差异均无统计学意义。在caspase抑制剂存在时,SEA仍能诱导巨噬细胞凋亡（F = 0.411,P > 0.05）;而在H2O2或NAC存在时,SEA不能诱导巨噬细胞凋亡（F = 11.880、9.897,P均< 0.05）。结论　在日本血吸虫感染过程中,SEA可能通过促进活性氧表达而诱导巨噬细胞凋亡。     

尘螨1类嵌合变应原TAT-IhC-R8的致敏效果分析

目的探讨尘螨1类嵌合变应原TAT-Ih C-R8的致敏效果。方法将40只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组(PBS组)、OVA致敏组(OVA组)、R8致敏组(R8组)和TAT-Ih C-R8致敏组(TIR8组)4组,每组10只。上述3个致敏组分别用OVA、R8和TAT-Ih C-R8于第0、7、14天进行腹腔注射致敏(剂量为10μg/ml);自第21天起,分别用上述致敏液(剂量为10μg/ml)雾化吸入30 min,连续7 d。PBS组则用PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24 h后将小鼠脱臼处死,分别收集支气管肺泡灌洗液(BLAFs)和血清,并进行脾细胞培养。以ELISA法检测BALFs及脾细胞培养上清液(SCSs)中细胞因子IFN-γ和IL-13水平,以及血清中特异性抗体Ig E(s Ig E)、Ig G1和Ig G2a水平;并对BALF进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数。此外,制作小鼠肺组织病理切片,经HE染色后进行观察。结果与PBS组相比,OVA、R8组和TIR8组小鼠肺部炎症均明显,表现为肺组织炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落、血管炎等,而PBS组小鼠未见明显病理改变。TIR8组小鼠BALF中白细胞总数和EOS数均显著高于OVA组和R8组(P均0.01),其BALF及SCSs中IL-13水平亦明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但IFN-γ含量则显著低于该两组(P均0.01)。TIR8组小鼠血清s Ig E和Ig G1抗体水平明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但其Ig G2a抗体水平则显著低于该两组(P均0.01)。结论TAT-Ih C-R8可有效激发小鼠肺部炎症,且其致敏效果明显优于R8。     

可诱导共刺激分子及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用

目的 探讨可诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecule,ICOS)及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用.方法 80只BALB/c小鼠(体质量18～ 22 g)随机分为对照组和感染组,每组40只.按10000个原头节/只腹腔注射制备细粒棘球蚴感染小鼠模型,腹腔接种2、8...     

源自日本血吸虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的 探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Schistosoma japonicum cysteine protease inhibitor,SjCystatin）对葡聚糖硫酸钠（Dextransulphate sodium,DSS）诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎的抑制作用。方法 18只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组：A组为对照组,B组为肠炎组,C组为SjCystatin治疗组。A组给予蒸馏水,B、C组连续饮用3％DSS溶液7 d诱发肠炎;C组每天经腹腔注射10 μg SjCystatin,A和B组注射PBS。观察各组小鼠临床表现,进行临床疾病活动指数（Disease activity index,DAI）评分。第7天处死小鼠,观察结肠大体及组织病理改变。同时提取小鼠结肠组织匀浆,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其上清中肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、白细胞介素?4（IL?4）、IL?6及IL?10水平。结果 与A组[（[0.50±0.28]）分]相比,B组小鼠DAI评分[（[9.30±1.30]）分]明显增加,建模后小鼠结肠病理损伤显著,结肠组织匀浆上清中TNF?α为（321.33 ± 67.01） pg/mL,IL?6为（403.58 ± 180.51） pg/mL,均明显上升。C组小鼠DAI评分为（[6.67±1.57]）分,显著下降（F = 86.86,P < 0.01）;小鼠结肠大体及组织病理明显缓解,结肠组织匀浆上清中TNF?α为（188.14 ± 40.14） pg/mL,IL?6为（209.71 ± 48.47） pg/mL,均显著下降（F = 17.46、9.89, P < 0.01）。结论 SjCystatin对DSS诱导的C57BL/6小鼠急性溃疡性结肠炎有抑制效果。