PI3K/AKT通路在二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

目的 研究PI3K/AKT 信号通路在二烯丙基二硫（DADS）诱导K562 细胞凋亡中的作用。方法 用 10、20、40、80 mg/L DADS 处理K562 细胞48 h,采用吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）染色法倒置显微镜观察细胞形态学变化;AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot 技术检测AKT、p-AKT、Caspases-3 蛋白的表达,并设置空白对照组和溶媒对照组。结果 DADS 作用K562 细胞48 h 后,细胞出现体积缩小、形态不规则、胞膜突出等凋亡特征。AO/EB 染色显示：随DADS 浓度增加,胞体缩小、胞核呈固缩状或圆珠状,染色质凝集,核染色呈橘红色的凋亡细胞数增多,以40 mg/L DADS 组最明显。10、20、40、80 mg/L DADS 组的凋亡率均高于对照组（P P > 0.05）;随DADS 浓度增加,p-AKT 蛋白逐渐下降、Caspases 3 蛋白逐渐升高,差异有统计学意义（P 结论 DADS 诱导K562 细胞发生凋亡,其机制可能与DADS 抑制PI3K/AKT 信号通路的表达相关。     

β-榄香烯对K562细胞周期与细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的探讨β-榄香烯(β-ELE)对人慢性髓性白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的影响及其机制。方法K562和不同浓度的β-ELE共同培养后,应用流式细胞仪技术和Hoe-chest33258/PI荧光染色法检测β-ELE对K562细胞周期及凋亡的影响,应用RT-PCR技术测定野生型p53活化片段(P21wild-type p53 activated fregmentl,P21WAF1)、Survivin mRNA水平。结果不同浓度β-ELE能使K562细胞阻滞于G1期,G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比明显下降,呈剂量、时间依赖性,且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。β-ELE作用于K562细胞24h,48h后,在G0/G1期前,可见明显的亚二倍体(凋亡峰),其凋亡率呈剂量、时间依赖性,与对照组比较有显著意义(P<0.01)。Hoechest33258/PI免疫荧光技术发现β-ELE能使凋亡细胞数目明显增多(P<0.01)。RT-PCR结果显示β-ELE能下调K562细胞Survivin mRNA表达,上调P21WAF1mRNA的表达(P<0.01)。结论β-ELE能够阻止细胞K562细胞从G1期向S期转换。β-ELE可以诱导K562细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性。β-ELE导致细胞周期阻滞可能与上调P21WAF1mRNA的表达有关;促进K562细胞凋亡机制可能与下调Survivin mRNA的表达有关。随着药物浓度的增加,P21WAF1mRNA表达增加,而SurvivinmRNA表达下降。     

甲状腺激素T3诱导K562细胞铁蛋白表达与细胞凋亡和生长的关系

目的：探讨甲状腺激素T3对K562细胞铁蛋白表达及其对细胞凋亡和增殖的影响。方法：收集各组细胞胞浆蛋白，用放射免疫法检测铁蛋白含量，并和流细胞术分析各组细胞凋亡百分率及细胞周期变化。结果：中等浓度及高浓度的T3均能增加K562细胞铁蛋白表达。与空白对照相比有显著性差异（P＜0．05），且随T3浓度增加，铁蛋白的表达亦增高。同一浓度T3与K562细胞共培养，随时间延长，铁蛋白表达增加，与空白对照相比具有显著性差异（P＜0．01）。24h培养组细胞凋亡率较空白对照略有下降，差异有统计学意义，72h培养组T3＝200nM时凋亡百分率明显下降。T3各处理组中S＋G2期细胞比例较空白对照组明显减少（P＜0．01），且72h各组G2＋S细胞百分率较24h明显下降。结论：甲状腺激素T3能诱导K562细胞铁蛋白表达增加，且能干预细胞凋亡和细胞增殖周期。     

儿童重型再生障碍性贫血T细胞内调控因子GAS5和mTOR信号途径分子的表达研究

目的：通过检测再生障碍性贫血（AA）患儿T细胞内mTOR信号途径分子及T细胞内调控因子GAS5的表达水平,初步探讨该信号途径在儿童AA中的改变。方法（1）对16例初治重型AA（SAA）及8例免疫抑制剂治疗（IST）有效的SAA患儿,用流式细胞术（FCM）方法检测外周血CD3＋T细胞内mTOR信号途径分子磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化TSC2（p-TSC2）、磷酸化mTOR （p-mTOR）、磷酸化4EBP1（p-4EBP1）及磷酸化p70S6K（p-p70S6K）的表达水平。（2）用实时荧光定量聚合酶连反应（QRT-PCR）方法检测23例初治SAA及7例IST有效SAA患儿骨髓CD3＋T细胞内调控因子 GAS5的表达水平。结果（1）初治 SAA 组外周血 CD3＋T 淋巴细胞内 p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1及p-p70S6K表达水平均明显高于正常对照组,而低于阳性对照CEM细胞株组;（2）SAA 治疗有效组外周血 CD3＋T 淋巴细胞内 p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1及p-p70S6K的表达水平均均低于初治SAA组;SAA治疗有效组p-Akt、p-TSC2、p-mTORC1、p70S6K的表达水平与正常对照组无明显差异,但p-4EBP1的表达水平高于正常对照组。（3）初治SAA组骨髓CD3＋T淋巴细胞内GAS5的表达量明显低于正常对照组,而显著高于CEM细胞株组。（4）SAA治疗有效组骨髓CD3＋T淋巴细胞内GAS5的表达水平高于初治SAA组,而与正常对照组无明显差异。结论（1）mTOR信号途径的活化程度与疾病状态相关,初治SAA患儿外周血细胞中p-Akt、p-TSC2、p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K表达升高,说明mTOR信号在SAA患儿中呈活化状态,可能参与AA的T细胞的免疫异常。（2）初治SAA患儿骨髓T细胞内GAS5表达水平明显低于正常儿童而显著高于 CEM细胞,SAA 治疗有效后 GAS5表达水平明显升高,GAS5的表达水平可能与mTOR信号途径的活化存在一定负相关。GAS5可能为负性调控因子。     

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰RNA（shRNA）诱导FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）的靶向抑制对急性单核细胞白血病（AMOL）细胞株THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成FLT3靶向shRNA（FLT3-shRNA）,转染THP-1细胞。以半定量逆转录PCR（RT-PCR）、流式细胞法（FCM）检测细胞FLT3在mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8（CCK-8）检测细胞增殖活力,FCM法检测细胞周期,DNA梯度条带（DNA Ladder）和Annexin V—FITC染色法分析细胞凋亡。结果合成的FLT3-shRNA 15nmol／L转染48h对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达（72．95±2．07）％、（65．39±5．57）％。shRNA干扰后细胞增殖活力受到抑制,48h抑制率达（36．66±3．67）％,72h达（35．56±0．73）％。转染48h细胞周期出现G0／G1期到S期的阻滞,FLT3-shRNA组G0／G1期的细胞百分比（65．71±4．47）％明显高于对照组,S期（25．11±2．70）％低于对照组。FLT3-shRNA作用48h有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC检测细胞的早期凋亡率（18．59±2．07）％明显高于对照组。结论由shRNA诱导的FLT3靶向干扰可有效的抑制THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童AMOL治疗中具有潜在的价值。     

雷帕霉素逆转急性淋巴细胞白血病CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药的研究

目的探讨雷帕霉素是否可以逆转地塞米松(DEX)耐药的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞的GC耐药性。方法以儿童T-ALL GC耐药株CEM-C1和GC敏感株CEM-C7为研究对象,MTT法检测不同浓度(1 000 ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml和0.1 ng/ml)雷帕霉素及其联合1μmol/L地塞米松(DEX)作用后对细胞增殖的影响;细胞离心甩片瑞氏染色法观察细胞形态学变化;Annexin V/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;PI染色法检测细胞周期改变。结果①不同浓度雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞,对细胞生长的抑制作用均呈时间和浓度依赖性,联合应用1μmol/L DEX后,这一生长抑制作用显著增强,24 h IC50约为100 ng/ml。②以终浓度100 ng/ml雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞18、24及48 h,细胞形态学与对照相比均无明显变化;Annexin V-PI双染流式细胞术检测均未见明显凋亡;细胞周期测定发现两种细胞均阻滞于G1期,S期细胞比例均明显降低。③以终浓度100 ng/ml雷帕霉素联合1μmol/L DEX作用于CEM-C1细胞后,瑞氏染色发现CEM-C1细胞于24 h出现细胞核改变,48 h出现明显凋亡;Annexin V/PI双染细胞凋亡检测显示细胞凋亡率较单用雷帕霉素及DEX时显著增加,18 h时早期凋亡细胞开始增多,24 h时最为明显;细胞周期测定显示S期细胞比率较单用雷帕霉素时显著降低,而G1期细胞显著增多。结论雷帕霉素能够逆转CEM-C1细胞对GC的耐药性,其机制有待进一步深入研究。     

粒细胞集落刺激因子通过mTOR/p70S6K途径调节新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后炎症反应北大核心CSCD

目的观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后炎症反应的影响及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体S6蛋白激酶（mTOR/p70S6K）信号通路在其中发挥的作用。方法7日龄新生SD大鼠90只按随机数字表法随机分为假手术组、缺氧缺血（HI）模型组、G-CSF组、雷帕霉素组及对照组,改良Rice法建立新生大鼠HIBD模型。HI前1 h,雷帕霉素组腹腔注射雷帕霉素250 μg/kg,对照组予等体积乙醇腹腔注射。HI 1 h后,G-CSF组、雷帕霉素组及对照组腹腔注射G-CSF 50 μg/kg,HI模型组及假手术组予等体积9 g/L盐水腹腔注射。HI 48 h后,Western blot检测脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-10及mTOR/p70S6K信号通路蛋白水平,尼氏染色评估海马CA1区及皮质神经元损伤情况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死面积。结果与HI模型组比较,G-CSF组及对照组脑梗死面积减少[（12.87±1.54）%、（11.90±1.31）%比（24.21±3.28）%],尼氏染色阳性神经元计数增多[海马CA1区：（61.00±4.90）个/视野、（61.67±6.40）个/视野比（42.67±4.46）个/视野;皮质：（92.67±6.68）个/视野、（90.17±4.45）个/视野比（70.83±6.97）个/视野],TNF-α及IL-1β水平降低（TNF-α：0.67±0.07、0.55±0.05比0.86±0.05;IL-1β：0.65±0.06、0.52±0.10比0.86±0.06）,IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平升高（IL-10：0.68±0.04、0.62±0.05比0.34±0.02;p-mTOR/mTOR：0.53±0.02、0.51±0.01比0.26±0.01;p-p70S6K/p70S6K：0.89±0.03、0.90±0.03比0.55±0.02）,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与G-CSF组及对照组比较,雷帕霉素组脑梗死面积增加[（25.70±1.50）%],尼氏染色阳性神经元计数减少[海马CA1区：（40.67±3.50）个/视野;皮质：（68.33±8.17）个/视野],TNF-α及IL-1β水平升高（分别为0.97±0.06、0.98±0.10）,IL-10、p-mTOR/mTOR及p-p70S6K/p70S6K水平降低（分别为0.21±0.02、0.30±0.01、0.55±0.01）,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论G-CSF可能通过上调mTOR/p70S6K信号通路抑制HIBD后的炎症反应。     

雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株生长抑制及诱导凋亡的研究

目的 研究雷帕霉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,并设立对照组,以CCK-8检测细胞生长活性,流式细胞法(FCM)检测细胞周期,DNA梯度条带(DNA Ladder)和罗丹明123-碘化丙啶(Rhodamine 123/PI)染色法分析细胞凋亡.结果 雷帕霉素处理后,神经母细胞瘤细胞呈浓度依赖性生长抑制.20μM雷帕霉素处理12 h后,细胞周期出现G2/M期、S期阻滞,G2/M期(24.22±2.89)%、S期(22.05±0.96)%的细胞百分比明显高于对照组.罗丹明123-碘化丙啶检测细胞凋亡率(54.35±5.39)%也明显高于对照组,并有明显的凋亡条带出现.结论 雷帕霉素具有抑制神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y生长、诱导其凋亡的作用.     

Survivin反义寡核苷酸对k562细胞周期及c-myc的影响

目的探讨凋亡抑制基因survivin的反义寡核苷酸对白血病细胞k562细胞周期及cmyc的影响。方法实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组,转染后24、48小时流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测survivin、cmyc蛋白水平。结果反义寡核苷酸作用后,k562细胞被阻滞在G0/G1期,G0G1期细胞明显增多,S期及G2M期细胞明显减少,细胞周期进程受到明显阻滞,而无义组、脂质体组、空白组细胞周期进程无明显变化(P<0.05);反义寡核苷酸作用24小时后细胞内survivin及cmyc的表达水平下降,但与无义组、脂质体组、空白组比较无显著性差异(P>0.05),而48小时后survivin及cmyc表达水平进一步降低,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能阻滞K562细胞于G0/G1期、并下调cmyc蛋白的表达。     

不同剂量三氧化二砷作用下K562细胞动力学变化

目的研究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对K562细胞的作用及细胞动力学变化。方法K562细胞培养在50 mL培养瓶和24孔板,用浓度为1、2、4、8μmol/L的As2O3处理24、48、72 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;光镜检查核分裂指数(MI);用放射自显影检查[3H]-TdR掺入细胞;流式细胞仪检查增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)。结果低剂量As2O3(1.0μmol/L)组[3H]-TdR掺入细胞,MI、PI皆减少;中剂量组(2和4μmol/L)出现高MI、AI和低PI;高剂量组(8μmol/L)给药24 h后可见细胞凋亡和坏死。结论不同剂量As2O3作用不同,低剂量可引起K562细胞DNA合成减少和抑制细胞增殖,中剂量引起细胞凋亡,高剂量则引起细胞坏死。     

人参皂苷Rb1对川崎病小鼠冠状动脉损伤的作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对川崎病（KD）小鼠模型冠状动脉损伤（CAL）的治疗作用及信号通路。方法 将BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组、人参皂苷Rb1低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（100 mg/kg）,每组12只。除对照组外的其他各组均采用间断性腹腔注射10%牛血清白蛋白溶液进行造模;阿司匹林组、Rb1低剂量组和高剂量组分别在造模后给予相应药物灌胃20 d。苏木精-伊红染色观察冠状动脉组织病理变化;ELISA法检测各组小鼠血清和冠状动脉组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β等相关炎症因子;Western blot法检测各组小鼠冠状动脉组织中调控自噬信号通路（AMPK/mTOR）和氧化应激信号通路（PI3K/AKT）相关蛋白的相对表达水平。结果 病理切片结果显示,与模型组相比,高剂量Rb1显著改善了CAL小鼠的血管壁增厚、内膜水肿、纤维断裂和内皮细胞炎性浸润等症状。和对照组相比,模型组、Rb1低剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著增加（P < 0.05）;模型组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著增加（P < 0.05）;而模型组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著下降（P < 0.05）。和模型组相比,阿司匹林组、Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1低、高剂量组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著下降（P < 0.05）,且两个剂量组之间有剂量依赖性（P < 0.05）;Rb1低剂量组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平增加（P < 0.05）,而Rb1高剂量组上述3种蛋白相对表达水平均显著增加（P < 0.05）。和Rb1低剂量组相比,阿司匹林组和Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1高剂量组的P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT表达水平均显著增加（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1可有效减轻KD小鼠模型CAL,疗效与Rb1使用剂量有关。其作用机制可能与通过调控自噬信号通路AMPK/mTOR/P70S6抑制CAL炎症,同时调控氧化应激信号通路PI3K/AKT/GSK-3β发挥保护冠状动脉内皮细胞生物学活性有关。     

磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶信号通路对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的作用

目的通过使用盐酸异丙肾上腺素(ISO)制备心肌损伤模型,探讨磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路是否参与心肌损伤的发病机制。方法 20只雄性Wistar大鼠随机分成心肌损伤模型组(ISO组)和对照组。ISO组大鼠每天背部皮下注射ISO 20 mg.kg-1.d-1,对照组大鼠每天注射等量9 g.L-1盐水,均连续注射7 d。采用全自动生化检测仪检测2组大鼠血浆中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)水平。采用蛋白印迹法定量检测大鼠心肌组织中PI3K、p85-PI3K、p55-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达。结果与对照组比较,ISO组大鼠血浆LDH、CK及α-HBDH水平均显著上升,差异有统计学意义(Pa<0.05),证明采用ISO建模成功;与对照组比较,ISO组大鼠心肌组织中PI3K和AKT蛋白水平未见明显变化,但其磷酸化p85-PI3K、p55-PI3K和p-AKT蛋白水平均显著上调,差异有统计学意义(Pa<0.05)。结论在ISO所致的心肌损伤中,PI3K和AKT的磷酸化水平上调,PI3K/AKT信号通路参与ISO所致心肌损伤的发病机制。     

人参皂苷Rb1对川崎病小鼠冠状动脉损伤的作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对川崎病（KD）小鼠模型冠状动脉损伤（CAL）的治疗作用及信号通路。方法 将BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组、人参皂苷Rb1低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（100 mg/kg）,每组12只。除对照组外的其他各组均采用间断性腹腔注射10%牛血清白蛋白溶液进行造模;阿司匹林组、Rb1低剂量组和高剂量组分别在造模后给予相应药物灌胃20 d。苏木精-伊红染色观察冠状动脉组织病理变化;ELISA法检测各组小鼠血清和冠状动脉组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β等相关炎症因子;Western blot法检测各组小鼠冠状动脉组织中调控自噬信号通路（AMPK/mTOR）和氧化应激信号通路（PI3K/AKT）相关蛋白的相对表达水平。结果 病理切片结果显示,与模型组相比,高剂量Rb1显著改善了CAL小鼠的血管壁增厚、内膜水肿、纤维断裂和内皮细胞炎性浸润等症状。和对照组相比,模型组、Rb1低剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著增加（P < 0.05）;模型组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著增加（P < 0.05）;而模型组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著下降（P < 0.05）。和模型组相比,阿司匹林组、Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1低、高剂量组小鼠冠状动脉组织中P-AMPK/AMPK、P-mTOR/mTOR和P-P70S6/P70S6表达水平均显著下降（P < 0.05）,且两个剂量组之间有剂量依赖性（P < 0.05）;Rb1低剂量组小鼠冠状动脉组织中P-PI3K/PI3K表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,P-AKT/AKT和P-GSK-3β/GSK-3β表达水平增加（P < 0.05）,而Rb1高剂量组上述3种蛋白相对表达水平均显著增加（P < 0.05）。和Rb1低剂量组相比,阿司匹林组和Rb1高剂量组小鼠血清及冠状动脉组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均显著下降（P < 0.05）;Rb1高剂量组的P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT表达水平均显著增加（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1可有效减轻KD小鼠模型CAL,疗效与Rb1使用剂量有关。其作用机制可能与通过调控自噬信号通路AMPK/mTOR/P70S6抑制CAL炎症,同时调控氧化应激信号通路PI3K/AKT/GSK-3β发挥保护冠状动脉内皮细胞生物学活性有关。     

短发夹RNA介导调节S100A4表达对子宫内膜癌KLE细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)调节子宫内膜癌KLE细胞中S100A4基因表达,对KLE子宫内膜癌的细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过利用慢病毒shRNA技术,将S100A4-OVER、S100A4-shRNA转染进子宫内膜癌KLE细胞,应用无源性的OVER-NC细胞株和shR...     

PTEN基因敲减及RESC救援后人T淋巴细胞增殖和信号通路的变化

目的：构建人PTEN基因RNA干扰（RNAi）及其逃避RNAi策略结构（RESC）救援的慢病毒载体。观察PTEN基因敲减前后及RESC救援后人T淋巴细胞信号通路、细胞增殖和细胞周期的变化,为进一步研究淋巴细胞性白血病的发病机制提供依据。方法：利用慢病毒载体系统,构建人PTEN基因RNAi及其RESC救援的慢病毒载体,转染T淋巴细胞,建立PTEN基因敲减及RESC救援的细胞模型T-LC-shPTEN和T-LC-rrshPTEN;分别应用Western blot法、MTT法和流式细胞术检测PTEN基因敲减前后及RESC救援后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况、细胞增殖及细胞周期的变化。结果：慢病毒介导的RNAi能有效下调PTEN基因的表达。PTEN基因表达下调后,T淋巴细胞生长受到促进,G0/G1期细胞减少,S期细胞和G2/M期细胞增多,PI3K/AKT通路激活。而RESC救援则能够完全恢复PTEN基因RNAi所造成的现象。结论：成功构建了人PTEN基因RNAi及其RESC救援的慢病毒载体。PTEN基因敲减后,通过激活PI3K/AKT通路促进T淋巴细胞生长。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：979-983］     

槐耳清膏对K562细胞体外作用研究

目的通过用不同浓度的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞,探讨槐耳清膏对K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法应用MTT法、细胞形态学观察以及流式细胞术观察槐耳清膏对体外培养的K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。结果MTT法结果显示:在终浓度分别为0.5、1、2、4和8mg/ml的槐耳清膏作用于体外培养的K562细胞12、24、36、48、72h后,槐耳清膏抑制细胞增殖作用随着浓度增加及培养时间延长而逐渐增强,与对照组相比差异统计学意义(P<0.01)。流式细胞技术显示:不同浓度的槐耳清膏作用于K562细胞48h后,随着浓度的增加,凋亡细胞百分比逐渐增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论槐耳清膏在体外对K562细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

Serabelisib抗人肝母细胞瘤HepG2细胞的作用及其机制探讨

目的探讨小分子抑制剂Serabelisib抑制PI3K-Akt信号通路活性及对人肝母细胞瘤细胞系增殖、凋亡的效应作用及其相关机制。方法采用不同浓度的小分子抑制剂Serabelisib(0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L)处理人肝母细胞瘤细胞Hep G2细胞,通过四氮唑盐比色法检测Serabelisib对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪检测细胞凋亡变化情况,采用蛋白质免疫印迹检测Serabelisib处理后Hep G2细胞中PI3K信号通路活性及凋亡相关蛋白表达变化情况。结果当Serabelisib浓度≥4μmol/L时,对人肝母细胞瘤细胞系Hep G2细胞增殖具有显著抑制作用,随着Serabelisib浓度增加,其对Hep G2细胞增殖的抑制率逐渐增大,具有剂量和时间依赖性。随着Serabelisib浓度增加,Hep G2细胞凋亡率明显升高,同样具有剂量依赖性。蛋白质免疫印迹检测发现Serabelisib处理后的Hep G2细胞中PI3K信号通路中关键激酶Akt磷酸化水平降低,促凋亡蛋白PARP 89KD裂解片段表达增加。结论Serabelisib通过抑制PI3K/Akt信号转导通路,抑制人肝母细胞瘤Hep G2细胞增殖,并诱导凋亡。