抗IGF-ⅠR抗体联合顺铂对卵巢癌细胞及其移植瘤的抑制作用

目的：察抗胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-ⅠR）单克隆抗体4F2联合顺铂对卵巢癌细胞及其移植瘤的生长抑制作用。方法：Western blotting检测4种卵巢癌细胞（CAOV3、ES2、SKOV3和Hey细胞）中IGF-ⅠR的表达;流式细胞术检测抗IGF-ⅠR单抗4F2与各卵巢癌细胞系的结合特异性;Western blotting检测4F2对SKOV3和 CAOV3细胞内IGF-ⅠR磷酸化水平的影响,CCK-8检测4F2、顺铂单用或联用对卵巢癌细胞的生长抑制作用;建立卵巢癌SKOV3、CAOV3细胞裸鼠移植瘤模型,观察4F2、顺铂单用或联合治疗对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果：IGF-ⅠR在4种卵巢癌细胞中的表达水平由高到低为SKOV3、CAOV3、ES2,Hey细胞不表达, 4F2与SKOV3、CAOV3、ES2细胞均能特异性结合,并且4F2能够抑制IGF-ⅠR的酪氨酸磷酸化。联合组顺铂为0.2 μg/ml时细胞生长抑制率即显著高于4F2单抗组[SKOV3：（47.4±3.1）% vs (5.3±0.6）%;t=3.126,P=0.007。CAOV3：（51.6±2.3）% vs (8.2±1.8）%;t=3.516,P=0.009]及顺铂组[SKOV3：（47.4±3.1）% vs (30.5±4.1）%;t=2.933, P=0.027。CAOV3：（51.6±2.3）% vs (28.9±2.3）%;t=3.226,P=0.034];在体内,联合组对卵巢癌种植瘤小鼠肿瘤的抑制率亦显著高于4F2单抗组[SKOV3：（87.3±3.1）% vs (41.6±4.9）%;t=2.29, P=0.004 3。CAOV3：（86.6±3.5）% vs (42.1±7.7）%;t=3.02,P=0.009 1]及顺铂组[SKOV3：(87.3±3.1)% vs (28.9±5.5)%; t=2.56, P=0.008 7。CAOV3：（86.6±3.5）% vs (32.7±4.1）%;t=2.91,P=0.007 3]。结论：4F2单抗特异性结合IGF-ⅠR阳性卵巢癌细胞,联合顺铂能够协同抑制卵巢癌细胞及其移植瘤的生长。     

伽马-分泌酶抑制剂下调Notch1可诱导卵巢癌细胞A2780生长抑制及凋亡

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂对Notch1的抑制作用及对卵巢癌细胞生长抑制及凋亡的影响。方法 采用Western blot及实时定量PCR检测四株卵巢癌细胞（A2780, SKOV3, HO-8910, HO-8910PM）及一株卵巢上皮细胞（IOSE144）Notch1及其下游基因hes1的表达情况;采用MTT、流式细胞术、ELISA及克隆形成实验检测γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对卵巢癌细胞的影响。结果 Notch1、hes1在IOSE 144及四株卵巢癌细胞系中均有表达,且在A2780细胞系中的表达最高;DAPT下调Notch1可抑制A2780细胞生长、诱导细胞G1期阻滞、诱导细胞凋亡并呈现时间和剂量依赖性,同时A2780细胞中DAPT 下游hes1基因的表达也呈现时间和剂量依赖性。结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制卵巢癌细胞A2780生长、诱导细胞凋亡,γ-分泌酶抑制剂下调Notch1可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。     

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA（LncRNA） ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞（OVCAR5、OVCAR8、SKOV3）及永生化卵巢上皮细胞（IOSE29、IOSE80）中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度（0、1、2、4、8、16 mg/L）DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低（P＜0.05）。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）;与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高（P＜0.05）,增殖率降低（P＜0.05）,细胞存活率呈DDP浓度依赖降低（P＜0.05）。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。     

TIZ基因mRNA在卵巢癌细胞系中的表达及其RNA干扰载体构建

目的检测卵巢癌细胞株中TIZ基因的mRNA表达水平,并构建TIZ基因的特异性RNA干扰（RNAi）载体。方法通过RT-PCR方法检测卵巢癌细胞系（SKOV3、SKOV3顺铂耐药细胞、SKOV3卡铂耐药细胞、A2780、A2780卡铂耐药细胞、H08910）中TIZmRNA的表达;根据Genebank上TIZ的mRNA序列,设计5对siRNA干扰片段,采用脂质体转染法介导siRNA干扰片段并下调卵巢癌细胞系中TIZmRNA的表达。采用pTG19-T质粒构建TIZ和β-actintmRNA表达重组质粒并制备其标准品。采用实时定量PCR（QRT—PCR）检测siRNA干扰片段对TIZ基因的下降效率,并筛选最佳siRNA干扰片段。以pGPU6／GFP／Neo载体和质粒DNA测序方法构建pGPU6／GFP／Neo-siRNA—TIZ-573重组质粒。结果①除卵巢癌细胞H08910细胞无TIZ基因mRNA表达外,其余细胞均有TIZ基因mRNA表达。②细胞siRNA干扰片段筛选结果显示介导TIZ-573片段后可下调60％细胞TIZmRNA表达。③成功构建了TIZ基因RNAi载体pG-PU6／GFP／Neo-TIZ-573。结论多数卵巢癌细胞系表达TIZmRNA。siRNA-TIZ-573为最佳下调细胞TIZmRNA片段。构建的pGPU6／GFP／Neo-TIZ-573重组质粒可用于下一步的实验研究。     

HMGA1基因小分子RNAi对卵巢癌转移抑制的实验研究

目的：探讨高迁移率蛋白家族A1（high mobility group A1,HMGA1）基因小分子干扰RNA对卵巢癌转移抑制的机理。方法：RT—PCR一步法检测3种不同的卵巢癌细胞株中HMGA1、E钙黏蛋白mRNA的表达水平;设计并合成HMGA1 siRNA,转染H08910PM细胞：半定量RT—PCR分析法观察HMGA1 siRNA转染对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞株体外侵袭、运动的抑制作用。结果：RT—PCR半定量分析结果显示：OVCAR-3细胞中HMGA1 mRNA表达量相对较低（0．64±0．13）,而E-钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR-3细胞中有表达;H08910PM细胞稳定转染HMGA1 siRNA后,转染组、对照组HMGA1 mRNA表达水平分别为0．16±0．08、0．47±0．11（P〈0．01）,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0．38±0．07、0．09±0.05（P〈0．01）;体外运动实验显示,跨膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．05）;重组细胞基底膜侵袭实验显示,穿透基底膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．01）。结论：HMGA1基因与卵巢癌转移密切相关,HMGA1基因siRNA可上调卵巢癌细胞中E钙黏蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的运动和侵袭,为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。     

miR-139-5p通过靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖与侵袭

目的：探讨miR-139-5p靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞增殖和侵袭的作用机制。方法：选取2018年1月至2018年12月在河南省南阳市中心医院妇科手术切除的24例EOC患者的癌和相应的癌旁组织标本,以及人卵巢癌细胞系SKOV3、ES2、HEY-T30和人卵巢上皮细胞株IOSE80,用qPCR检测EOC组织和细胞系中miR-139-5p和Notch1 mRNA的表达。将过表达miR-139-5p载体、重组质粒pLV-Notch1转染至SKOV3细胞,并设置空白对照组（Ctrl组）和阴性对照组（NC组）,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与Notch1 3’-UTR靶向关系,用CCK-8、Transwell、划痕愈合实验分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力,用Western blotting检测细胞中增殖和迁移相关蛋白的表达。结果：与癌旁组织和IOSE80细胞比较,EOC组织和细胞系中miR-139-5p表达显著降低、Notch1 mRNA表达显著升高（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实,Notch1是miR-139-5p的靶基因。与NC组比较,miR-139-5p mimic组3 d时SKOV3细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Notch1、NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin及N-cadherin表达水平均明显降低（均P<0.01）,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.01）;同时过表达Notch1可逆转miR-139-5p抑制SKOV3细胞增殖、侵袭与迁移的作用。结论：miR-139-5p可靶向Notch1抑制EOC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能与其下调NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin、N-cadherin而上调E-cadherin的表达水平有关。     

RIP1蛋白在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的:探讨RIP1对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响。方法:通过实时定量PCR法检测RIP1在卵巢癌组织和癌旁组织中的表达;免疫组化方法分析卵巢癌组织和癌旁组织中RIP1蛋白的表达;实时定量PCR法以及Western blot法检测卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中RIP1的表达;通过在SKOV3卵巢癌细胞中敲除RIP1蛋白及在A2780卵巢癌细胞中过表达RIP1蛋白,采用MTT法检测其增殖能力的改变,并联合克隆形成法考察细胞对顺铂敏感性的变化。结果:相比于癌旁组织以及卵巢上皮细胞,RIP1在人卵巢癌组织和卵巢癌细胞中表达有不同程度升高,其中在SKOV3细胞中升高最为显著（P＜0.01）,在A2780细胞中不显著（P＞0.05）;在SKOV3细胞中敲除RIP1,96 h后细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;同时,在A2780细胞株中过表达RIP1,72 h后细胞增殖能力明显升高（P＜0.05）。RIP1敲除后,顺铂对SKOV3细胞的杀伤作用明显升高（P＜0.05）,同时顺铂的IC50降低;RIP1过表达后,顺铂对A2780细胞的杀伤作用明显降低（P＜0.05）,同时顺铂的IC50升高。结论:RIP1作为一种癌基因,能够促进肿瘤细胞的增殖,并降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

TRIM21 通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖及耐药

目的：探讨TRIM21 通过激活Wnt/β-catenin 信号通路调控卵巢癌细胞增殖以及PARP抑制剂耐药的相关机制。方法：收集2018 年1 月至2019 年1 月于延安市人民医院手术切除的8 例卵巢癌组织及宫颈上皮组织标本,并根据患者是否对PARP抑制剂尼拉帕尼耐药分为耐药组和非耐药组（4 例/组）;卵巢癌细胞系CAOV3、SKOV3、OVCAR3、ES-2、HO8910、A2780 和OV2008。用qPCR 法和Western blotting（WB）分别检测卵巢癌组织和细胞系中TRIM21 和β-catenin 表达水平。构建TRIM21 过表达及敲减细胞系,用CCK-8 法检测各组细胞的增殖活力,用TOP/FOP 双荧光素酶实验检测TRIM21 对Wnt信号通路激活的影响,qPCR法和WB检测TRIM21 对β-catenin mRNA和蛋白水平的影响,并通过Wnt通路抑制剂XAV-939 作进一步验证。结果：TRIM21 在卵巢癌组织中的表达水平显著高于宫颈上皮组织（P<0.01）,且在耐药组织中表达水平较高（P<0.01）;TRIM21 在卵巢癌ES-2 细胞中表达水平相对最高,而在CAOV3 和A2780 中表达水平相对较低（均P<0.01）。敲减TRIM21 后,ES-2 细胞中TRIM21 的表达水平显著降低（P<0.01）,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）;过表达TRIM21 后,CAOV3 细胞的增殖能力显著增强（P<0.01）,并可抑制尼拉帕尼的抗肿瘤增殖活性,其可调控Wnt/catenin 通路的激活,而敲减β-catenin 或使用Wnt/β-catenin 抑制剂XAV-939 后,TRIM21 在卵巢癌中的作用被显著逆转。结论：TRIM21 可通过调控Wnt/β-catenin 信号通路增强卵巢癌细胞的增殖能力并在PARP抑制剂尼拉帕尼耐药过程中发挥一定的作用。     

Kilon基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达状况的探讨

目的 探讨Kilon基因在卵巢上皮性癌中的表达状态及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法 采用RTPCR的方法检测20例卵巢正常组织，17例良性上皮性肿瘤，72例卵巢上皮性癌组织和SKOV3、3AO、CaoV3卵巢癌细胞株Kilon基因mRNA的表达并用限制性内切酶一PCR的方法检测基因启动子中CpG岛甲基化的状况。结果 在卵巢上皮性癌组织中KilonmRNA的表达率（33．3％），显著低于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织的表达率分别为60．0％，76．5％。SKOV3、ca0V3和3AO均未见KilonmRNA表达。启动子甲基化在3种组织中的阳性率分别为0，11．8％和5．6％，卵巢癌与卵巢正常组织和良性肿瘤无显著差异。卵巢癌Kilon启动子HapII内切酶位点甲基化与mRNA失表达无相关性。SKOV-3、CAOV3和3AO均未发现甲基化。结论 卵巢上皮性癌细胞存在Kilon基因表达缺失。基因启动子CpG岛HapII酶切位点的甲基化与Kilon基因低表达无相关性。     

数据库挖掘ACAA2基因在卵巢癌中的表达及血根碱对其水平的影响

目的：卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤，死亡率居高不下且预后差。血根碱是白屈菜中的主要活性成分之一，具有潜在的抗癌作用。本研究通过Oncomine数据库挖掘乙酰辅酶Ａ酰基转移酶2（acety-Coenzyme Aacyltransferase 2，ACAA2）在浆液性卵巢癌中的表达情况及其临床意义，并在体外实验中探究血根碱对卵巢癌细胞ACAA2水平的影响。方法：获取并二次分析Oncomine数据库中ACAA2的信息，探讨ACAA2在浆液性卵巢癌中的表达，借助Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析，探讨其与卵巢癌患者预后的关系。血根碱处理人浆液性卵巢癌SKOV3细胞，基因芯片检测，获得差异表达基因，探讨血根碱对卵巢癌SKOV3细胞ACAA2基因表达的影响。结果：Oncomine数据库中共收录了447项ACAA2基因在不同类型肿瘤中的研究数据，其中9项超过1500个样本涉及卵巢癌的研究。与正常卵巢组织相比，ACAA2在浆液性卵巢癌中表达降低差异有统计学意义（P＜0.05）。ACAA2高表达者总体生存率高于低表达者（P＜0.05）。血根碱处理后卵巢癌SKOV3细胞中ACAA2表达水平显著上调（｜logFC｜≥2，FDR＜0.05，P＜0.05）。结论：浆液性卵巢癌组织中ACAA2表达降低，表达水平高者预后更好，可能发挥抑癌基因的作用，血根碱可能通过上调ACAA2基因发挥作用。     

TIZ基因mRNA在卵巢癌细胞系中的表达及其RNA干扰载体构建

目的 检测卵巢癌细胞株中TIZ基因的mRNA表达水平,并构建TIZ基因的特异性RNA干扰(RNAi)载体.方法通过RT-PCR方法 检测卵巢癌细胞系(SKOV3、SKOV3顺铂耐药细胞、SKOV3卡铂耐药细胞、A2780、A2780卡铂耐药细胞、H08910)中TIZ mRNA的表达;根据Genebank上TIZ的mR...     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

Neu RNAi对卵巢癌细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用

目的探讨nenRNAi对卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用,寻找下调基因表达并逆转化疗耐药的方法,为卵巢癌的基因治疗探索新途径。方法应用含有u6启动子的pSilencer 1．0-U6表达载体构建neu基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（pSilencer—neu）,用脂质体方法将pSilencer—neu转染卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP,另设未转染组及转染pSilencer—control组为对照。显微镜下观察转染前后细胞的变化;用RT—PCR及Western Blot检测neu基因mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;加入顺铂后检测RNAi对SKOV3／DDP顺铂药物敏感性的影响。结果neuRNAi可明显下调卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP中neu的基因表达;使其细胞生长受到抑制,生长速度减慢,生长曲线低平;细胞凋亡增加且细胞周期发生变化,G1／G0期细胞增多,S期细胞则减少;顺铂耐药实验显示,转染RNAi的SKOV3／DDP细胞IC50明显下调,细胞凋亡率显著增加。结论应用RNAi可以部分阻抑neu基因在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP中的表达,使SKOV3／DDP细胞生长减慢、凋亡增加,而且对顺铂的敏感性增强。     

卵巢癌组织中EZH2蛋白表达与临床病理特征及预后的关系

摘 要：［目的］ 检测果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在卵巢癌组织中表达情况及与临床病理特征预后的关系,分析EZH2检测的临床意义。［方法］ 采用免疫组织化学法(SP法)检测85例卵巢癌、30例卵巢良性肿瘤、30例正常卵巢组织中EZH2、Cyclin D1及MMP-9蛋白表达情况。［结果］ EZH2蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为72.9%（62/85）,较卵巢良性肿瘤组20.0%（6/30）和对照组10.0%（3/30）显著增高（P<0.05）;Cyclin D1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为60.0%（51/85）,较卵巢良性肿瘤组13.3%（4/30）和对照组10.0%（3/30）显著增高（P<0.05）;MMP-9蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为90.6%（77/85）,较卵巢良性肿瘤组23.3%（7/30）和对照组6.7%（2/30）显著增高（P<0.05）。EZH2、Cyclin D1及MMP-9蛋白表达与卵巢癌分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移、脉管瘤栓有明显相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,卵巢癌EZH2蛋白表达阳性患者的生存期短于阴性表达者(P<0.05),经相关性分析发现,EZH2与Cyclin D1及MMP-9蛋白表达呈正相关(r=0.314,0.298;均P<0.01)。［结论］ EZH2参与卵巢癌的发生发展,可能与Cyclin D1、MMP-9协同促进卵巢癌的恶性增殖与转移,是卵巢癌预后的危险因素。     

KIF4A在卵巢癌中的预后、生物学功能及富集分析

目的：探讨驱动蛋白超家族成员4A(kinesin family member 4A,KIF4A)与卵巢癌患者预后的关系,对卵巢癌细胞生物学功能的影响,以及功能富集分析。方法：利用TCGA（the cancer genome atlas, TCGA）数据库中372例卵巢癌患者数据进行KIF4A基因与相关共表达基因的富集分析及Kaplan-Meier法预后分析。采用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）及Western blot检测多种卵巢癌细胞系中KIF4A的表达量。将三组KIF4A-shRNA分别转染至KIF4A相对表达量最高的细胞系。采用qRT-PCR及Western blot检测转染效果,选取沉默效率最高的建立稳定沉默细胞。采用MTT实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果：KIF4A基因在卵巢癌临床样本中显著高表达（P<0.05）,且KIF4A高表达组总生存期显著低于低表达组（P<0.01）。不同卵巢癌细胞株中的表达水平均高于正常人卵巢上皮细胞株IOSE80（P<0.05）,其中在SKOV3中表达最高。沉默KIF4A的表达能有效抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力（P<0.05）,并促进卵巢癌细胞凋亡（P<0.05）,并主要影响G0/G1期。基因富集分析显示KIF4A与MYH11、ACTG2、HSPB6等基因成负相关,与BUB1、CCNA2、MELK等基因呈正相关。且KIF4A在卵巢癌中与有丝细胞核分裂等功能功能相关,并且可影响细胞周期等相关通路。结论：沉默KIF4A基因可抑制卵巢癌细胞的增殖,迁移能力并促进其细胞凋亡,影响其细胞周期,该基因有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

溶酶体组织蛋白酶L对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L（Cathepsin L）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力。方法 荧光定量PCR法检测人卵巢癌细胞ES-2、SKOV3、OV1以及OV2中CathepsinL的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的卵巢癌细胞SKOV3以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,Western blot和定量PCR法验证shRNA的干扰效率;划痕实验及Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、p-AKT的变化。结果 四株卵巢癌细胞中,SKOV3的Cathepsin L表达水平最高（以此为参照）,而ES-2、OV1以及OV2细胞的表达水平分别为0.72±0.04、0.34±0.03和0.55±0.05。Cathepsin L-shRNA转染SKOV3细胞后,SKOV3/shRNA中的Cathepsin L的表达水平较空白组和对照组显著下降;划痕12 h和24 h后, SKOV3/shRNA组的细胞迁移能力明显受到抑制;SKOV3、SKOV3/Con和SKOV3/shRNA组的穿膜细胞数分别为（93.67±8.62）、（90.33±12.22）、（35.67±4.73）,与对照组相比,SKOV3/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制（P<0.01）;Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、p-AKT表达较对照组显著下降。结论 Cathepsin L可以促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭;其机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail、p-AKT有关。提示Cathepsin L在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

KIF4A在卵巢癌中的预后、生物学功能及富集分析

目的：探讨驱动蛋白超家族成员4A(kinesin family member 4A,KIF4A)与卵巢癌患者预后的关系，对卵巢癌细胞生物学功能的影响，以及功能富集分析。方法：利用TCGA（the cancer genome atlas, TCGA）数据库中372例卵巢癌患者数据进行KIF4A基因与相关共表达基因的富集分析及Kaplan-Meier法预后分析。采用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）及Western blot检测多种卵巢癌细胞系中KIF4A的表达量。将三组KIF4A-shRNA分别转染至KIF4A相对表达量最高的细胞系。采用qRT-PCR及Western blot检测转染效果，选取沉默效率最高的建立稳定沉默细胞。采用MTT实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况，划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力，流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果：KIF4A基因在卵巢癌临床样本中显著高表达（P<0.05），且KIF4A高表达组总生存期显著低于低表达组（P<0.01）。不同卵巢癌细胞株中的表达水平均高于正常人卵巢上皮细胞株IOSE80（P<0.05），其中在SKOV3中表达最高。沉默KIF4A的表达能有效抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力（P<0.05），并促进卵巢癌细胞凋亡（P<0.05），并主要影响G0/G1期。基因富集分析显示KIF4A与MYH11、ACTG2、HSPB6等基因成负相关，与BUB1、CCNA2、MELK等基因呈正相关。且KIF4A在卵巢癌中与有丝细胞核分裂等功能功能相关，并且可影响细胞周期等相关通路。结论：沉默KIF4A基因可抑制卵巢癌细胞的增殖，迁移能力并促进其细胞凋亡，影响其细胞周期，该基因有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

浆细胞瘤多样异位基因1 在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3 细胞恶性生物学行为的影响

目的：研究人浆细胞瘤多样异位基因1（plasma-cytoma variant translocation gene 1, PVT1）对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：选取2015年11 月至2017 年4 月郑州大学第三附属医院妇产科收治的卵巢癌患者32例。利用实时荧光定量PCR检测PVT1 在32例卵巢癌组织及癌旁组织的表达。通过CCK-8法、划痕法及Transwell法检测PVT1 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：PVT1在SKOV3细胞和卵巢癌组织表达水平均明显升高（均P<0.01）;PVT1表达水平与卵巢癌者组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移具有相关性（P<0.05或P<0.01）。转染PVT1 siRNA36、48 h 后,SKOV3细胞中PVT1 表达水平明显下降（P<0.05）;敲减PVT1的表达能够降低SKOV3细胞的增殖能力（P<0.05）,抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：PVT1 在卵巢癌中高表达,抑制PVT1表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

ALDH5A1在卵巢癌中的表达及其对细胞侵袭特性和预后的影响

目的探讨醛脱氢酶5A1(ALDH5A1)在卵巢癌组织中的表达、临床意义及其影响卵巢癌细胞侵袭转移的作用和分子机制。方法首先基于GEO数据库比较ALDH5A1在卵巢癌转移组织和原发灶的表达差异。然后通过转染小干扰RNA(siRNA)方式建立ALDH5A1表达下调的卵巢癌细胞株SKOV3,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力的变化。cBioPortal数据库描绘了ALDH5A1在卵巢癌细胞株和卵巢癌患者中的共表达基因谱。最后运用TCGA和GEO数据库分析ALDH5A1表达水平与卵巢癌预后的相关性,HPA数据库再次确认卵巢癌患者中ALDH5A1和MMPs的相对表达水平。结果相比于卵巢癌原发灶,转移组织中的ALDH5A1表达下调。细胞实验结果显示下调ALDH5A1表达可促进卵巢癌细胞株迁移和侵袭。富集分析发现ALDH5A1的共表达基因在细胞外基质(ECM)组织通路中显著富集,进一步通过数据库转录组数据验证ECM组织通路中发挥重要作用的基质金属蛋白酶(MMP)表达与ALDH5A1表达水平呈负相关,提示ALDH5A1可能通过ECM组织通路影响卵巢癌的转移和侵袭能力。生存分析结果提示ALDH5A1低表达的卵巢癌患者预后更差。结论ALDH5A1表达下调可能促进卵巢癌侵袭转移,且与预后不良相关。