益生菌联合应用行为分析法治疗儿童孤独症谱系障碍的前瞻性随机对照研究

目的 探讨益生菌联合应用行为分析法（applied behavior analysis,ABA）治疗儿童孤独症谱系障碍（autism spectrum disorder,ASD）的疗效。 方法 选取2019年5月至2020年12月在江苏大学附属医院就诊的ASD患儿41例,随机分为观察组（n=21）和对照组（n=20）。观察组给予口服益生菌联合ABA干预,对照组仅给予ABA干预,比较两组的疗效。在干预前、干预后3个月分别依据孤独症治疗评估量表（autism treatment evaluation checklist,ATEC）对两组患儿行为症状的严重程度进行评分,并分别留取患儿的粪便标本,基于16s rRNA高通量测序分析两组患儿的肠道菌群差异。 结果 干预前,观察组与对照组ATEC评分差异无统计学意义（P>0.05）;干预后3个月,观察组与对照组ATEC评分均较干预前明显下降,且观察组ATEC评分低于对照组（P<0.05）。干预前,观察组与对照组肠道菌群构成情况无明显差异;干预后3个月,观察组与对照组肠道菌群构成情况存在明显差异。观察组双歧杆菌属、乳杆菌属、粪杆菌属、瘤胃菌属、普雷沃菌属、布劳特菌属的相对丰度明显高于对照组（P<0.05）,志贺氏菌属、梭状菌属的相对丰度明显低于对照组（P<0.05）。 结论 益生菌可能通过调节肠道菌群微生态进一步改善传统ABA治疗儿童ASD的疗效。 引用格式:     

广谱抗生素疗程对极低出生体重儿粪便肠道菌群和短链脂肪酸影响的前瞻性研究

目的 探讨广谱抗生素疗程对极低出生体重儿粪便肠道菌群和短链脂肪酸的影响。 方法 前瞻性选取2020年6~12月重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊治中心收治的29例极低出生体重儿为研究对象,根据抗生素疗程分为≤7 d组（n=9）和>7 d组（n=20）。采集患儿住院第14天和第28天的粪便标本,运用16S rDNA高通量测序法和气相色谱-质谱法分别分析粪便样本的菌群和短链脂肪酸。 结果 ≤7 d组和>7 d组早产儿第4周和第2周相比,肠道菌群的Chao指数均显著下降（P<0.05）。≤7 d组第4周菌群与第2周相比,厚壁菌门和狭窄梭菌属1的比例均显著升高,而变形菌门显著降低（P<0.05）。第4周时,>7 d组厚壁菌门和狭窄梭菌属1的比例较≤7 d组显著降低而变形菌门显著升高（P<0.05）;>7 d组异丁酸和戊酸含量较≤7 d组显著下降（P<0.05）。 结论 广谱抗生素疗程可影响极低出生体重儿肠道菌群的丰富度、定植和演化,以及其代谢产物短链脂肪酸的含量。临床上应该严格把握广谱抗生素适应证及疗程。     

IL10RA基因突变致极早发型炎症性肠病患儿肠道菌群特征横断面调查

目的：分析IL10RA基因功能缺陷所致的极早发型炎症性肠病（VEO-IBD）患儿的肠道菌群特征。方法：以复旦大学附属儿科医院消化科病房及门诊为横断面调查现场,纳入IL10RA基因功能缺陷患儿（IL10RA组）、未检测到基因功能缺陷的类似症状患儿（症状组）及年龄匹配的健康儿童（健康组）,采用16S rRNA基因测序方法检测3组儿童粪便菌群组成及多样性。使用生物信息学软件对数据去杂,按97%相似性进行OTU聚类后计算多样性指数,并行物种差异判别分析。 结果：①共纳入IL10RA组17例 ,症状组15例及健康组22人,收集54份粪便标本。②健康组、症状组及IL10RA组平均Shannon多样性指数值分别为1.86±0.53、1.43±0.55及1.11±0.87。③健康组厚壁菌门的菌属比例均衡,放线菌门中双歧杆菌属比例97.8%;症状组及IL10RA组中,链球菌属及肠球菌属的平均丰度之和分别占厚壁菌门的61.8%及63.7%。IL10RA组放线菌门中的双歧杆菌属比例低于症状组,罗氏菌属比例高于症状组。④17种菌属在IL10RA组及健康组差异有统计学意义(P＜0.05),以丰度降低为主。结论：IL10RA基因功能缺陷致VEO-IBD患儿存在肠道菌群紊乱,表现为肠道菌群多样性降低且组内变异度大、菌群分类学结构失衡及肠道共生菌相对丰度降低。     

妊娠期糖尿病对母乳喂养的12周龄婴儿肠道菌群影响

目的 比较妊娠期糖尿病（GDM）及正常孕妇的持续母乳喂养的12周龄婴儿肠道菌群的分布特点,以探索GDM对12周龄婴儿肠道菌群的影响。方法 选择2016年6月—2019年12月入组的母亲及其随访至12周龄的母乳喂养的婴儿,依据母亲孕期血糖检测结果将母乳喂养婴儿分为GDM组（n=13）和对照组(n=27)。采集婴儿12周龄粪便,采用16S rDNA高通量测序技术对所有粪便样本进行检测,比较两组肠道菌群分布特点。采用Spearman相关分析法分析肠道菌群与孕期血糖、婴儿体重的相关性。结果 共纳入40对研究对象,GDM组13对,对照组27对。两组的优势菌门均为放线菌门、厚壁菌门和变形菌门,GDM组的疣微菌门相对丰度高于对照组,差异有统计学意义（Z=2.233,P <0.05）。在属水平上,GDM组中肠道菌群优势菌属来自放线菌门和厚壁菌门,对照组中肠道菌群的优势菌属来自放线菌门、厚壁菌门和变形菌门。LEfSe差异分析结果显示,GDM组中疣微菌门/目/科、阿克曼氏菌、劳森氏菌、哈利真杆菌的丰度明显升高（LDA>2）,而在对照组中芽孢杆菌目、孪生球菌属、丹毒梭菌属的丰度明显升高（LDA&...     

基于高通量测序分析早产认知障碍大鼠肠道菌群结构特征

目的 分析早产认知障碍大鼠肠道菌群结构特征，探讨肠道菌群改变与早产认知障碍的关系。方法 给孕16~17 d Sprague-Dawley大鼠连续2 d腹腔注射脂多糖（LPS）建立认知障碍模型，以腹腔注射PBS为对照。孕21 d行剖宫术，将早产大鼠随机分配给代母鼠喂养。于生后30 d利用Morris水迷宫中的定位航行实验对早产大鼠进行认知评估，并分为早产认知障碍组（n=21）与正常对照组（n=10）。采用苏木精-伊红染色观察两组大鼠海马病理改变，提取各组大鼠粪便进行16S rRNA测序并分析。同时对两组大鼠肠道菌群进行主成分分析（PCA）。结果 与对照组相比，早产认知障碍大鼠海马可见大量神经元变性坏死；肠道菌群丰富度及多样性降低（P < 0.05）；门水平上变形菌门丰度增加（P < 0.05）；目、科、属水平上，普氏菌属、乳杆菌属等丰度显著降低，葡萄球菌科、寡养杆菌属等丰度显著增加（P < 0.05）。PCA显示两组大鼠在肠道菌群构成上差异明显。结论 早产认知障碍大鼠肠道菌群结构发生明显变化，可为早产认知障碍导致的微生态变化的治疗及干预提供依据。     

功能性便秘儿童肠道菌群DNA的PCR-SSCP和BOX-PCR指纹图谱分析及临床意义

目的 探讨功能性便秘(functional constipation,FC)儿童肠道微生态菌落的构成及其在便秘发生过程中的作用.方法 研究对象分为便秘组和对照组,便秘组15例,平均年龄6.5岁,对照组35例,平均年龄6岁.取所有儿童粪便提取细菌基因组DNA, 应用基于细菌16SrDNA的PCR-SSCP技术和基于细菌基因组的BOX-PCR技术对肠道菌落的DNA指纹图谱分析,结合克隆测序和生物信息学技术对FC儿童的肠道菌落进行初步鉴定,并对其组成结构进行分析.结果 对照组和便秘组的所有样品分别进行3 次以上的PCR-SSCP和BOX-PCR指纹图谱分析,得到了稳定可重复的图谱,便秘组菌种的种类较对照组明显增多,差异有统计学意义;对照组优势菌主要为拟杆菌属、埃希氏菌属、双歧杆菌属、乳杆菌属;便秘组的优势菌主要为脆弱拟杆菌属、埃希氏菌属、真杆菌属和梭菌属.结论 功能性便秘儿童肠道菌群的菌属多样性增加,各肠道菌属间存在比例失调,肠道微生态失调可能参与了便秘的产生或加重过程.     

Diversity and functional prediction of gut microbiota in children with autism spectrum disorder北大核心CSCD

目的分析孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)儿童肠道菌群结构和多样性,并预测分析菌群的代谢功能。方法采集30例ASD儿童(ASD组)和20例正常发育(typically developing,TD)儿童(TD组)的粪便样本。提取基因组DNA,PCR扩增16S rDNA V4区,使用Illumina NovaSeq6000平台进行高通量测序。分析2组肠道菌群的构成和分布特征,并预测分析菌群的代谢功能。结果ASD组和TD组儿童肠道菌群的α多样性指数(Chao1、Shannon和Simpson)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在门和纲水平,2组儿童肠道菌群的结构差异无统计学意义(P>0.05)。在属水平,ASD组巨单胞菌属、巴恩斯氏菌属、小杆菌属、巨球菌属、瘤胃球菌属扭链群及梭杆菌属的丰度大于TD组(P<0.05)。功能预测分析显示,ASD组肠道菌群的色氨酸降解、谷氨酸降解及丁酸盐生成等代谢功能的丰度低于TD组(P<0.05),而γ-氨基丁酸降解功能的丰度高于TD组(P<0.05)。结论ASD儿童和TD儿童肠道菌群的α多样性无显著差异,但属水平物种构成不同,菌群的代谢功能有差别。     

儿童幽门螺杆菌根除治疗过程中肠道菌群的变化

目的探讨儿童幽门螺杆菌根除治疗对肠道菌群的影响,并寻找影响根除治疗效果的差异菌群。方法确诊幽门螺杆菌感染儿童进行三联标准化方案治疗14天,留取治疗前、治疗7天及14天时的粪便进行16SrDNA测序。根据取样时间分为治疗前组、治疗7天组、治疗14天组,根据治疗效果分为治疗成功组、治疗失败组,根据既往根治病史分为复治成功组、初治成功组,分析不同组别之间的菌群差异。结果幽门螺杆菌感染儿童肠道菌群优势菌门依次为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、疣微菌门,主要优势菌属有拟杆菌、栖粪杆菌、大肠杆菌/志贺菌、双歧杆菌、Gemmiger、克雷伯菌。与治疗成功组相比,普氏菌属在治疗失败组相对丰度升高,差异有统计学意义(P0.001)。幽门螺杆菌根除治疗前、治疗7天和14天比较,各肠道菌群相对丰度均发生改变,差异有统计学意义(P0.05)。LEfSe分析及组间秩和检验发现,治疗失败组弓形杆菌属、肠道巴恩斯菌属、Coprobacter、粪球菌属、霍尔德曼菌属、假单胞菌属高于治疗成功组,差异有统计学意义(LDA2)。与初治成功组相比,复治成功组不动杆菌属、魏斯菌属、萨特菌属、普罗维登斯菌属显著升高(LDA2),另枝菌属、丹毒丝菌属、梭状芽胞杆菌属、粪杆菌属、Gemmiger显著降低(LDA2)。结论幽门螺杆菌根除治疗影响肠道菌群结构,表现为菌群多样性下降及优势菌群改变。肠道致病性细菌的生长可能影响幽门螺杆菌根除效果,导致根除治疗失败。     

Intestinal and pharyngeal microbiota in early neonates: an analysis based on high-throughput sequencing北大核心CSCD

目的 初步探讨早期新生儿肠道和咽部微生物群的分布特点及相关性。 方法 选取上海市浦东新区妇幼保健院2021年9月—2022年1月出生的混合喂养的足月健康新生儿为研究对象。采用16S rRNA基因测序技术分析新生儿出生当天及出生后5~7 d的粪便和咽拭子样本,分析比较早期新生儿肠道和咽部微生物群的组成及功能差异。 结果 多样性分析表明,早期新生儿咽部微生物群的多样性高于肠道,但差异无统计学意义（P>0.05）。门水平上,出生当天肠道变形菌门相对丰度高于咽部（P<0.05）;出生后5~7 d肠道放线菌门和变形菌门相对丰度高于咽部、厚壁菌门相对丰度低于咽部（P<0.05）。属水平上,出生当天肠道和咽部的优势菌属组成差异无统计学意义（P>0.05）;出生后5~7 d肠道和咽部的链球菌属、葡萄球菌属、罗氏菌属、双歧杆菌属及埃希菌-志贺菌属等共生菌差异有统计学意义（P<0.05）。直系同源序列聚类数据库分析显示,咽部菌群更多地集中在染色质结构和动力学及细胞骨架上,而肠道菌群在RNA加工修饰、能量生成和转换、氨基酸转运代谢、碳水化合物转运代谢、辅酶转运和代谢等方面表现丰富（P<0.05）。京都基因和基因组百科全书分析显示,与咽部菌群相比,肠道菌群对细胞运动、细胞进程和信号转导、内分泌系统、排泄系统、免疫系统、代谢性疾病、神经系统和转录功能参数的预测程度更高（P<0.05）。 结论 新生儿出生时肠道和咽部的微生物群组成及多样性无显著差异,随着出生时间的推移,两个生态位的微生物群组成开始出现分化,并逐渐显现出各自不同的功能。     

儿童急性淋巴细胞白血病化疗前后肠道菌群变化特点北大核心CSCD

目的探索儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患儿初诊时肠道菌群的变化及化疗对肠道菌群的影响。方法采集40例初诊ALL患儿化疗前、化疗后2周、化疗后1个月和化疗后2个月及10例健康对照组儿童的粪便样本,进行16S rDNA测序及分析,比较ALL组与健康对照组及ALL患儿化疗前后的肠道菌群差异。结果与化疗前及健康对照组相比,ALL患儿化疗后1个月及2个月时肠道菌群丰度显著下降(P<0.05)。与健康对照组比较,ALL患儿化疗前后肠道菌群多样性均明显降低(P<0.05)。门水平上,放线菌门的相对丰度在ALL患儿化疗后2周、1个月及2个月时较健康对照组显著降低(P<0.05),变形菌门的相对丰度在ALL患儿化疗后1个月及2个月时较健康对照组显著升高(P<0.05)。属水平上,双歧杆菌属的相对丰度在ALL患儿化疗后2周、1个月及2个月时均较健康对照组显著降低(P<0.05);克雷伯菌属的相对丰度在ALL患儿化疗后1个月及2个月时较健康对照组显著升高,并且在化疗后1个月时较化疗前显著升高(P<0.05);Faecalibacterium相对丰度在ALL患儿化疗前后均较健康对照组显著降低,并且在化疗后2周及1个月时较化疗前显著降低(P<0.05)。肠球菌属相对丰度在ALL患儿化疗后1个月及2个月较健康对照组及化疗前均明显升高(P<0.05)。结论ALL患儿肠道菌群多样性明显低于健康儿童。化疗导致肠道菌群丰度显著降低,并可致部分有益菌(双歧杆菌属、Faecalibacterium)丰度下降、病原菌(克雷伯菌属、肠球菌属)丰度增加。     

局灶性癫痫患儿治疗前后肠道菌群的变化及意义北大核心CSCD

目的研究局灶性癫痫患儿与健康儿童肠道菌群是否不同,以及癫痫患儿治疗前后肠道菌群的变化。方法招募未经治疗的初诊局灶性癫痫患儿10例为病例组,且均用单药奥卡西平治疗。收集患儿临床资料,以及治疗前和治疗3个月后的粪便标本;另招募相同年龄段的健康儿童14例为对照组。提取粪便标本中细菌总DNA,进行16S rDNA测序,并行生物信息学分析。结果病例组经奥卡西平治疗3个月后癫痫发作频率减少>50%。门水平方面,治疗前组放线菌门丰度高于治疗后组和对照组(P<0.05);属水平方面,治疗前组埃希菌/志贺菌属、链球菌属、柯林斯菌属和巨单胞菌属丰度高于对照组(P<0.05),经治疗后其丰度降低(P<0.05)。结论与健康儿童相比,局灶性癫痫患儿的肠道菌群存在显著差异;奥卡西平可以显著改善癫痫症状,重塑癫痫患儿的肠道菌群。     

PCR-变性梯度凝胶电泳法初探婴儿期肠道菌群菌种演替

目的通过研究婴儿粪便菌种组成,探索婴儿期肠道菌群定植规律。方法收集15例健康婴儿出生后第0、2、4、7、10、14、28天,以及3、6、12月时的新鲜粪便,采用PCR-变性梯度凝胶电泳(DGGE)检测肠道菌群结构,对其优势菌种进行测序,分析婴儿期肠道菌群菌种演替过程。结果 DGGE指纹图谱可见,婴儿期的肠道菌群结构随出生后时间变化显著;克隆测序结果显示,变形菌门的细菌定植最早,以专性需氧菌肠杆菌、假单胞菌为主,其次是厚壁菌门的专性厌氧菌(梭状芽孢杆菌、小韦荣球菌)和兼性厌氧菌(多枝梭菌)定植,随后疣微菌门定植,放线菌门定植最晚,以双歧杆菌为主,并逐渐成为优势菌群。结论婴儿期肠道中专性需氧菌首先定植,随后是专性厌氧菌和兼性厌氧菌。变形菌门细菌定植最早,厚壁菌门细菌次之,随后是疣微菌门细菌,以双歧杆菌为主的放线菌门细菌定植最晚。     

不同肠内营养开始时间对极低出生体重儿肠道菌群及代谢产物影响的前瞻性研究北大核心CSCD

目的 探讨不同肠内营养开始时间对极低出生体重儿肠道菌群及代谢产物的影响。方法 选取2020年6~12月重庆医科大学附属儿童医院新生儿科收治的29例极低出生体重儿为研究对象,根据生后肠内营养开始时间(开奶时间)不同分为<24 h组(n=15)和24~72 h组(n=14)。采集患儿住院第2周和第4周的粪便标本,采用16S rDNA高通量测序和气相色谱-质谱法分别分析粪便样本的菌群和短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)。结果 菌群结果显示,生后第2周和第4周2组间Chao指数(反映菌群丰富度)和Shannon指数(反映菌群多样性)差异无统计学意义(P>0.05)。菌群组成分析中,生后第2周和第4周2组间主要菌群在门、属水平上差异无统计学意义(P>0.05)。2组SCFAs比较显示,开奶时间<24 h组第4周丙酸高于24~72 h组(P<0.05),而2组SCFAs总量及其他各SCFAs含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 较早开始肠内营养对极低出生体重儿肠道菌群多样性和丰富度无影响,但24 h内开始肠内营养可以使代谢产物丙酸水平增高。     

�������ݸ˾���Ⱦ���ƺ󻼶�������Ⱥ�ı仯

目的探讨儿童幽门螺杆菌(H.pylori)感染及抗H.pylori治疗对儿童肠道菌群状态的影响。方法将浙江大学医学院附属儿童医院2004年410月门诊收治的68例慢性胃炎、十二指肠球炎患儿分为H.pylori阳性组36例、H.pylori阴性组32例二组。称取68例患儿新鲜粪便1.0g,分别进行需氧和厌氧培养,分离肠道菌群中最有代表性的三种需氧菌(肠杆菌、肠球菌、酵母菌)和四种厌氧菌(双歧杆菌、乳杆菌、类杆菌、产气荚膜梭菌),菌落记数,同时计算B/E比值来代表定植抗力。对36例H.pylori阳性组中的26例患儿进行“三联”抗H.pylori治疗1周后留取新鲜粪便进行肠道菌群分析,5例患儿在停药1个月后再次进行肠道菌群分析。结果H.pylori阳性组和H.pylori阴性组上述三种需氧菌和四种厌氧菌的菌落检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗H.pylori治疗1周后双歧杆菌、乳杆菌、类杆菌菌落数量较治疗前明显降低(P<0.05),B/E值明显下降(P<0.01),酵母菌的检出率明显增加(P<0.05),产气荚膜梭菌检出率下降(P<0.05)。5例患儿在停药1个月后,乳酸杆菌数量仍继续下降,肠杆菌数量继续增加,双歧杆菌、类杆菌数量有所恢复,但仍低于治疗前。结论儿童H.pylori感染后对肠道菌群影响不大;三联疗法抗H.pylori治疗对儿童肠道菌群产生明显的影响,因此在治疗H.pylori感染时须考虑到大量抗生素治疗后可能对患儿的副作用及潜在的危险。     

辅助生殖技术与妊娠期糖尿病孕产妇肠道菌群的特异表达

目的 通过检测和比较不同受孕方式及是否并发妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)孕产妇的肠道菌群,明确辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)及GDM孕产妇肠道菌群的特异性表达,分析其机制,为今后预防干预、促进ART妊娠母婴健康...     

双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道β-防御素-2表达的影响

目的 探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎（NEC）新生大鼠肠道β-防御素-2（BD-2）表达的影响。方法 将40只大鼠分为正常对照组、双歧杆菌对照组、NEC模型组和双歧杆菌干预组（n=10）。采用缺氧+冷刺激+人工喂养的方法建立NEC模型。双歧杆菌对照组和双歧杆菌干预组在每日冷刺激后经胃管注入双歧杆菌,每天1次,连续3 d。收集各组大鼠末段回肠组织于光镜下观察形态学改变并对肠道损伤进行评分,采用免疫组织化学法、qRT-PCR法分别检测各组大鼠回肠黏膜组织中BD-2蛋白及mRNA的表达水平。结果 NEC模型组肠道损伤评分分别高于正常对照组、双歧杆菌对照组、双歧杆菌干预组（P < 0.05）;双歧杆菌干预组的肠道损伤评分高于正常对照组和双歧杆菌对照组（P < 0.05）。正常对照组BD-2 mRNA及蛋白的表达低于双歧杆菌对照组、NEC模型组和双歧杆菌干预组（P < 0.05）;双歧杆菌对照组BD-2 mRNA及蛋白的表达高于NEC模型组和双歧杆菌干预组（P < 0.05）;双歧杆菌干预组BD-2 mRNA及蛋白的表达高于NEC模型组（P < 0.05）。结论 双歧杆菌可诱导大鼠肠道表达BD-2,其可能通过增加BD-2的表达而减轻肠道炎症反应,发挥对新生大鼠NEC模型的保护作用。