安丝菌素P-3的发酵工艺

考察了珍贵橙色束丝放线菌SIPI-3-21生产安丝菌素P-3(AP-3)的发酵工艺。首先优化了摇瓶发酵培养基配方,在含葡萄糖20.0 g/L、玉米淀粉30.0 g/L、棉籽饼粉30.0 g/L、CaCl2 10.0 g/L和CaCO3 5.0 g/L的发酵培养基中发酵培养9 d,AP-3产量为123.2 mg/L。进一步在摇瓶中考察了前体异丁醇对AP-3合成的影响,结果表明,添加异丁醇可以显著提高AP-3的产量。当其添加浓度为54 mmol/L时,AP-3的产量为307.8 mg/L,同时发酵液中AP-3的含量从57.2%提高到86.5%。     

双组分调控系统与细菌耐药性的关系及其抑制剂研究进展

双组分调控系统(TCS)是细菌感知和响应环境信号、调节生理行为最主要的机制,在细菌致病性、耐药性、生物被膜形成、毒力因子调控等方面均发挥着重要作用。该文简述了TCS的结构、功能、分类和与耐药性的关系,并讨论了靶向细菌TCS的抑制剂,以期为控制耐药细菌的传播和新型抗菌药物的研发提供理论基础。     

丹参酮和丹酚酸类化合物的生物合成及其转录调控机制

丹参酮和丹酚酸类化合物是治疗冠心病、心肌梗死、高血压、高血脂、脑卒中等疾病的重要物质基础。近年来,随着基因组学、转录组学、代谢组学和生物信息学的快速发展,其生物合成途径和转录调控机制研究取得较大进展。文章在总结丹参酮和丹酚酸类化合物生物合成最新研究的基础上,着重综述了转录因子对其生物合成的调控作用,认为进一步厘清丹参酮和丹酚酸类化合物的生物合成途径(尤其是下游合成途径的研究)和不同家族转录因子的相互作用、信号响应和协同调控机制,对于挖掘其合成、转运、调节、修饰相关的新基因及揭示调控网络的分子机制十分必要;同时,根据丹参活性成分生物合成规律,人工设计并构建新的、具有特定生理功能的生物系统,从而大幅度提高合成酶基因的表达及活性物质的产量,是有待进一步深入研究的方向之一。     

对阿弗菌素产生菌Streptomyces avermitilis生物合成有效组份进行选择性生成的控制

在阿弗菌素(avermectin)发现之前的数千种发酵产物中,有amthelmycin、anthelve-ncins、aspiculomycin、axenomycins、G-418、hygromycin B、destomycin A、paromomycin和thaimycins等几种曾被先后报道具有驱肠寄生虫活性,但只有氨基糖苷类的hygromycin B、destomycin A 和 paromo-mycin被实际用作抗寄生虫药.然而,化学合成化合物一直在抗寄生虫药物市场中占有优势.自从发现阿弗菌素之后,市场发生了戏剧性的转变,因为此化合物具有广谱强力抗寄生虫活性.尽管它没有抗细菌和真菌活性,但可抗线虫和节肢动物寄生物,而且用药剂量无论是人或动物都极小.     

miRNA-93调控细胞信号转导与转录激活因子3信号通路影响喉癌细胞机制研究

目的研究miRNA-93调控细胞信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路影响喉癌细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组(miRNA-93组)、联合组(miRNA-93+STAT3组)。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hep-2细胞中STAT3及miRNA93的表达,蛋白质免疫印迹检测Hep-2细胞质粒-细胞信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、周期蛋白依赖性激酶(Cyclins)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)、B淋巴细胞瘤-2、生存素基因的表达。结果转染miRNA-93对STAT3基因mRNA含量无明显影响(P>0.05);转染miRNA-93可明显下调STAT3蛋白(P<0.05)。故而提示miRNA-93于转录后水平调控STAT3基因的表达;3组对Hep-2细胞周期无明显影响(P>0.05);与对照组比较,实验组可明显诱导细胞凋亡(P<0.05);而与实验组比较,联合组可明显抑制细胞凋亡(P<0.05);转染48 h后,与对照组比较,实验组转染miRNA-93后,p-STAT3、Cyclins、c-Myc、CKI、B淋巴细胞瘤-2、生存素基因明显下调,而联合组可使p-STAT3、c-Myc、B淋巴细胞瘤-2表达明显上升。结论 miRNA-93可通过与STAT3基因mRNA93结合而于转录后水平调控该基因的表达,并且通过下调STAT3信号通路的相关蛋白,从而抑制Hep-2细胞凋亡。     

盐霉素生物合成的研究——Ⅰ.浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响

对脂肪酸生物合成有专一抑制作用的浅蓝菌素对盐霉素合成也有抑制作用,且其作用强度与加入的剂量和时间有关.当加入剂量为40μ/ml时,抑制盐霉素生物合成的程度可达60%左右;而加入浓度达100μ/ml时,抑制程度为100%,因而可以认为盐霉素的生物合成与脂肪酸相似,即经由聚乙酰途径;而浅蓝菌素阻断了聚乙酰途径中的β-酮脂酰载体蛋白合成酶;且两者间具有竞争关系.据此,可把选育耐高浅蓝菌素菌株作为选育高产菌株的方法之一.比较二株具有不同生产能力的盐霉素产生菌的脂肪酶活力发现:酶活力与盐霉素合成间有着密切的关系.高产菌株具有较高的脂肪酶活力.因而可把脂肪酶活力作为选育高产菌株的一个指标.考察发酵过程中脂肪酶活力的动态变化,似乎亦可作为控制发酵的一个参数.实验证明脂肪酶是由底物诱导产生的,其活力受到葡萄糖反馈阻遏.因此在实际生产中,中途补糖不适合.     

大蒜素治疗大肠埃希菌诱导的急性膀胱炎的分子机制研究

目的 探讨大蒜素在治疗大肠埃希菌诱导的急性膀胱炎中的作用及潜在的机作用机制。方法 研究首先通过构建大鼠急性膀胱炎模型,并进行大蒜素治疗,取大鼠膀胱组织进行HE染色观察组织结构改变以确定大蒜素的治疗效果;接着对不同分组的大鼠膀胱组织进行转录组测序并结合GEO数据分析大蒜素可能作用的下游靶点,通过GO与KEGG及蛋白互作（PPI）等分析筛选潜在分子靶点,进而在大鼠膀胱组织切片中进行免疫组化的实验验证。结果 大鼠膀胱组织切片HE染色结果显示大蒜素可缓解急性膀胱炎的组织结构紊乱及免疫细胞浸润程度,存在显著疗效;大鼠膀胱组织的转录组测序结果显示大蒜素可显著抑制115个在急性膀胱炎中上调的蛋白及诱导24个下调的蛋白,结合GEO中C57小鼠膀胱炎症的测序结果后,筛选出37个共同上调的蛋白及1个下调的蛋白,功能富集分析显示,这些基因主要集中在免疫相关的通路上,包括免疫反应调控、T细胞受体信号通路、Th17细胞分化、Th1和Th2细胞分化、细胞因子-免疫因子受体相互作用等。通过蛋白互作分析研究进一步筛选出CD74,CD96,ICOS,PTPN22,PDCD1,CXCR6等免疫细胞相关因子,结合其在大鼠中...     

基于转录组测序探讨金天格胶囊调控SMSC外泌体miRNA和ACs mRNA治疗大鼠骨关节炎的作用机制

目的 对金天格胶囊治疗骨关节炎(OA)的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes, ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法 采用Ⅱ型胶原酶诱导大鼠骨关节炎,通过一般行为学观察、双足平衡差异实验、机械足反射阈值、Micro-CT观察与番红固绿染色进行药效验证。将SMSC、ACs在适宜浓度的含药血清中培养,对对照组、模型组和金天格组ACs进行mRNA测序以及SMSC-Exos进行miRNA测序。筛选差异表达mRNA与差异表达miRNA并进行靶基因预测。通过Venn图对SMSCs与ACs的差异表达基因求交集得到共同差异表达基因,运用Cytoscape软件构建miRNA-mRNA调控网络。对共同差异表达基因进行表达趋势分析以及对差异表达基因mRNA与miRNA、Micro-CT药效指标与差异表达基因mRNA进行相关性分析。结果 OA病理状态下,miRNA-23a-3p、miRNA-342-3p、miRNA-146b-5p、miRNA-501-3p、miRNA-214-3p表达下调,miRNA-222-3p、miRNA-30e-3p、miRNA-676-3p、miRNA-192-5p表达上调(P＜0.05),这些miRNA的表达均在金天格胶囊含药血清干预后逆转表达趋势明显。Micro-CT药效指标、mRNA与miRNA之间存在一定的相关性。结论 金天格胶囊治疗OA的药效作用明显,其作用机制可能与促进SMSC-Exos靶向ACs转运miRNA进而调控Serpinb10、Ntn1、Il1b、Tgm2、Megf10 、Il11、Cd40、Slc15a3、Pou2f2等基因有关     

从VEGF/VEGFR2/PI3K/AKT信号轴所介导的血管新生调控网络探索白虎加桂枝汤干预类风湿关节炎热证的作用及其机制

出自《金匮要略》的热痹经方白虎加桂枝汤(BHGZD)临床治疗类风湿关节炎(RA)的疗效确切。但针对该方的作用机制研究多围绕调节机体炎症反应和免疫功能等方面,对其抑制滑膜血管新生的药效与机制尚未见报道。本研究采用转录组学数据挖掘、生物网络分析与“动物-细胞”实验验证相整合的研究策略,探讨BHGZD干预RA热证滑膜血管过度新生病理环节的潜能和分子机制。动物福利和实验过程均遵循中国中医科学院实验动物伦理委员会的规定。网络分析结果表明, BHGZD干预RA热证的候选网络靶标显著参与多条血管新生调节相关通路。其中,血管内皮生长因子A-血管内皮生长因子受体2 (VEGFA-VEGFR2)信号通路包含多个BHGZD候选网络靶标,如VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝-苏氨酸激酶(AKT)等。进一步的实验验证结果表明, BHGZD可有效降低佐剂诱导性关节炎热证大鼠膝关节滑膜中血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达,血清中VEGF的水平、内皮性一氧化氮合酶(eNOS)的活性,关节组织中磷酸化血管内皮生长因子受体2 (p-VEGFR2)、p-PI3K以及p-AKT蛋白的表达水平,升高血清中内皮...     

野野村放线菌ATCC 39727的双组份信号转导系统的生物信息学分析

双组份信号转导系统是放线菌中重要的全局调控系统之一，参与细胞形态分化、氮磷代谢、次级代谢产物合成和其他生理代谢过程。本文采用生物信息学方法系统分析了Nonomuraea sp.中双组份信号转导系统(two-component signal transduction system, TCS)的分布、系统分类、结构与功能，初步构建了部分TCS调控网络，旨在揭示Nonomuraea sp.中次级代谢产物合成与TCS之间的关系，为提高糖肽抗生素A40926效价和发现新的潜在生物活性物质奠定基础。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路与肿瘤

在近年来的肿瘤治疗中,靶向生物治疗逐渐成为研究的热点。该文就磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt)/the mammalian target of Rapamycin(mTOR),PI3K/Akt/mTOR]信号通路予以综述,重点包括PI3K/Akt/mTOR信号转导在肿瘤机制中作用以及肿瘤治疗过程中耐药性方面的关系等。     

JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症发病过程中的作用

目的 研究JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症 （EMS） 发展过程中的作用。方法 将60只大鼠随机分为假手术组、 模型组、 JAK2/STAT3通路抑制剂组 （AG组）, 每组20只。模型组、 AG组大鼠通过自身子宫内膜移植建立EMS模型。AG组造模前给予AG490 1 mg/kg, 手术后给予AG490 4 mg/kg, 每周2次, 连续4周; 模型组给予生理盐水。处理结束后记录各组大鼠异位内膜体积, 计算异位内膜生长抑制率, HE染色观察病理改变; 蛋白质印迹法 （Western blot） 检测内膜组织中p-JAK2、 JAK2、 p-STAT3、 STAT3蛋白表达水平。结果 治疗后AG组异位内膜组织生长发育不良, 异位内膜体积明显小于模型组, 异位内膜生长的抑制率为65.66%。Western blot结果显示, EMS模型大鼠异位内膜病灶中JAK2、 STAT3总蛋白及其磷酸化水平 （p-JAK2/JAK2、 p-STAT3/STAT3） 明显高于假手术组; 而 AG组大鼠异位内膜病灶中JAK2、 STAT3总蛋白及其磷酸化水平明显低于模型组。结论 JAK2/STAT3通路在EMS 发病过程中可能发挥了重要作用, 而抑制JAK2/STAT3信号通路则能够对EMS的治疗产生积极作用。     

ERK／MAPK信号传导通路在胃肠道肿瘤治疗靶向中的意义

细胞外信号调节激酶／丝裂原活化蛋白激酶（ERK／MAPK）信号传导通路在胃肠道肿瘤的发生和发展中有着重要的作用。ERK／MAPK信号传导通路有3个重要分子靶：小G蛋白Ras、Raf激酶及其MEK1／2和ERK1／2。目前主要有3种抑制ERK／MAPK信号传导通路的办法：（1）破坏靶蛋白的结构和（或）功能;（2）采用功能缺失策略;（3）破坏蛋白与蛋白之间的相互作用。这些办法可为胃肠道肿瘤的治疗提供新的思路。     

淡豆豉异黄酮对增殖血管平滑肌细胞JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及Janus激酶2-细胞信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法检测VSMC增殖活性;RT-PCR法检测AngⅡ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor1,AT1R)mRNA表达;Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2,STAT3及其磷酸化表达水平。结果100、200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,并明显下调AT1R mRNA表达水平;200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显下调磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的表达。结论淡豆豉异黄酮可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与下调AT1R表达,阻断JAK2/STAT3信号通路的磷酸化有关。     

BAFF/BAFF-R通过PI3K/Akt/mTOR信号转导通路调节B淋巴细胞功能在类风湿关节炎发病机制中的意义

B淋巴细胞活化和生存在类风湿关节炎(RA)病程中起关键作用。肿瘤坏死因子家族B细胞活化因子(BAFF)是维持B细胞功能的重要细胞因子。BAFF与其受体BAFF-R结合(BAFF/BAFF-R),能够激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节B淋巴细胞的增殖、存活和活化。该文就B淋巴细胞、BAFF/BAFF-R以及PI3K/Akt/mTOR信号通路参与RA的发病机制加以综述。     

Constitutive activity of H3 autoreceptors modulates histamine synthesis in rat brain through the cAMP/PKA pathway

We previously described that agonist-activated histamine H3 autoreceptors inhibit the stimulation of histamine synthesis mediated by calcium/calmodulin- and cAMP-dependent protein kinases (CaMKII and PKA respectively) in histaminergic nerve endings. In the absence of an agonist H3 receptors show partial constitutive activity, so we hypothesized that suppression of constitutive activity by an inverse agonist could stimulate these transduction pathways. We show here that the H3 inverse agonist thioperamide increases histamine synthesis in rat brain cortical slices independently from the amounts of extracellular histamine. Thioperamide effects were mimicked by the inverse agonists clobenpropit and A-331440, but not by the neutral antagonist VUF-5681. In contrast, coincubation with VUF-5681 suppressed thioperamide effects. The effects of thioperamide were completely blocked by the PKA inhibitor peptide myristoyl-PKI14-22, a peptide that did not block depolarization stimulation of histamine synthesis. In addition, thioperamide effects required depolarization and were impaired by blockade of N-type calcium channels (mediating depolarization), but not by CaMKII inhibition. These results indicate that constitutive activity of H3 receptors in rat brain cortex inhibits the adenylate cyclase/PKA pathway, and perhaps also the opening of N-type voltage sensitive calcium channels, but apparently not CaMKII.     

Effects of calcitriol on the immune system: new possibilities in the treatment of glomerulonephritis

1. 1,25-Dihydroxyvitamin D3 (1,25(OH)2D3), the hormonal form of vitamin D, is widely appreciated to play a central role in calcium and phosphate homeostasis. However, it is becoming increasingly clear that the sterol also play an important role in the regulation of cellular growth, haematopoietic tissues and the immune system, as well as in the modulation of hormone secretion by several endocrine glands. 2. In the present review, some of the mechanisms by which 1,25(OH)2D3 regulates immune function are highlighted. Moreover, a number of studies on the effects of calcitriol in several experimental animal models of renal disease are reported, suggesting new possibilities in the therapy of glomerulonephritis.     

黄地安消胶囊调控磷脂酰基醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路减轻GK大鼠血管病变损伤程度的研究

目的 探讨黄地安消胶囊治疗2型糖尿病(T2DM)血管病变的作用机制.方法 选取符合T2DM模型的GK大鼠按随机数字表法随机分为模型组、参芪降糖颗粒组、二甲双胍组、黄地安消胶囊高、中、低剂量组,另取Wistar大鼠为健康组,每组10只.通过在GK大鼠饮用水中加入0.1 g·L-1 Nω-硝基L精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制T2DM血管病变大鼠模型.造模同时给药,每天1次,连续给药6周.实验结束后,测定大鼠的空腹血糖(FBG),血清生化指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL);通过苏木精-伊红(HE)染色法、马松三色染色法、Verhoeff铁苏木精弹力纤维染色法观察腹主动脉血管纤维化程度;采用RT-qPCR技术检测GK大鼠腹主动脉中磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)、抑癌基因(PTEN)、假性蛋白激酶3(TRIB3)、蛋白激酶B(PKB/Akt)缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达情况.结果 与健康组比较,模型组大鼠腹主动脉病理组织损伤程度明显增加,糖脂代谢水平、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01),PTEN、TRIB3 mRNA表达降低(P<0.01).与模型组比较,黄地安消胶囊高剂量组(12.00 g·kg-1)、中剂量组(6.00 g·kg-1)不仅可改善GK大鼠腹主动脉病理组织学损伤程度,明显降低糖脂代谢、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01),还可升高PTEN,TRIB3 mRNA表达水平(P<0.01),其中模型组、黄地安消胶囊高剂量组、中剂量组的PTEN mRNA表达水平分别为(0.42±0.22)、(0.70±0.12)、(0.55±0.08),TRIB3 mRNA表达水平分别为(0.43±0.07)、(0.75±0.16)、(0.55±0.04).结论 黄地安消胶囊对T2DM血管病变具有一定的治疗作用,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、改善糖脂代谢有关.