lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

lncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-124-3p调控肝癌细胞凋亡和放射敏感性的研究机制

目的:探讨lncRNA PTPRG-AS1对肝癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402,qRT-PCR检测细胞中PTPRG-AS1和miR-124-3p表达水平。转染si-PTPRG-AS1、miR-124-3p mimics至HepG2细胞,抑制HepG2细胞中PTPRG-AS1表达或过表达miR-124-3p,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,Western Blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。生物信息学软件预测PTPRG-AS1与miR-124-3p存在互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因实验验证PTPRG-AS1与miR-124-3p之间的调控关系。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402中PTPRG-AS1表达显著升高（P＜0.05）,miR-124-3p表达显著降低（P＜0.05）。抑制PTPRG-AS1或过表达miR-124-3p均可促进肝癌HepG2细胞的凋亡,增强肝癌HepG2细胞的放射敏感性,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达。PTPRG-AS1负调控miR-124-3p表达。抑制miR-124-3p表达可部分逆转抑制PTPRG-AS1表达对肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用以及放射敏感性的增强作用。结论:抑制PTPRG-AS1表达可能通过上调miR-124-3p表达促进肝癌细胞的凋亡并提高其放射敏感性,是肝癌治疗的潜在作用靶点。     

miR-485-3p通过调控ATR信号通路增强MGC803细胞放射敏感性研究

目的 研究miR-485-3p对胃癌细胞MGC803放射敏感性影响及其可能作用机制。方法 将miR-485-3p mimic或ATR siRNA转染MGC803细胞后X线照射,MTT、克隆形成实验和凋亡实验观察细胞生物效应(表达检测照射6 Gy,克隆形成实验0、2、4、6、8、10 Gy)。分别用RT-PCR和蛋白印迹法检测miR-485-3p和ATR表达水平,DIANA、TargetScan和miRanda软件预测和双荧光素酶实验验证miR-485-3p对ATR靶向作用。结果 MGC803细胞放射后miR-485-3p表达下调。miR-485-3p过表达降低了细胞增殖和存活分数,增加了细胞凋亡率。经靶基因预测软件发现ATR可能是miR-485-3p靶基因,双荧光素酶实验进一步验证了ATR是miR-485-3p直接靶点。miR-485-3p负调控ATR表达,转染ATR siRNA抑制ATR信号通路后放射敏感性升高。结论 miR-485-3p可能靶向ATR,通过抑制ATR信号通路活性调节MGC803细胞放射敏感性。     

lncRNA MEG3通过下调miR-7-5p表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA MEG3对鼻咽癌细胞的放射敏感性影响及潜在作用机制。方法 实验设置过表达对照组、过表达MEG3组、抑制miR-NC组、抑制miR-7-5p组、过表达对照+4 Gy组、过表达MEG3+4 Gy组、抑制miR-NC+4 Gy组、抑制miR-7-5p+4 Gy组、过表达MEG3+过表达miR-NC组、过表达MEG3+过表达miR-7-5p组。采用qRT-PCR检测miR-7-5p和MEG3表达;细胞克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 MEG3在鼻咽癌组织和细胞系中低表达;过表达MEG3和抑制miR-7-5p表达可增加鼻咽癌细胞放射敏感性且促进细胞凋亡。MEG3可靶向调节miR-7-5p表达;过表达miR-7-5p逆转了过表达MEG3对鼻咽癌细胞放射增敏和促进细胞凋亡的作用。结论 过表达MEG3增加鼻咽癌细胞放射敏感性,并促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-7-5p有关。     

lncRNA MEG3通过下调miR-7-5p表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA MEG3对鼻咽癌细胞的放射敏感性影响及潜在作用机制。方法 实验设置过表达对照组、过表达MEG3组、抑制miR-NC组、抑制miR-7-5p组、过表达对照+4 Gy组、过表达MEG3+4 Gy组、抑制miR-NC+4 Gy组、抑制miR-7-5p+4 Gy组、过表达MEG3+过表达miR-NC组、过表达MEG3+过表达miR-7-5p组。采用qRT-PCR检测miR-7-5p和MEG3表达;细胞克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 MEG3在鼻咽癌组织和细胞系中低表达;过表达MEG3和抑制miR-7-5p表达可增加鼻咽癌细胞放射敏感性且促进细胞凋亡。MEG3可靶向调节miR-7-5p表达;过表达miR-7-5p逆转了过表达MEG3对鼻咽癌细胞放射增敏和促进细胞凋亡的作用。结论 过表达MEG3增加鼻咽癌细胞放射敏感性,并促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-7-5p有关。     

沉默LncRNA HOXD-AS1调控miR-454-3p表达增加H460细胞放射敏感性

目的 探究LncRNA HOXD-AS1靶向调控miR-454-3p表达对肺癌H460细胞放射敏感性影响。方法 qRT-PCR检测HOXD-AS1、miR-454-3p表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,克隆实验检测细胞放射敏感性。蛋白印迹法检测细胞中Caspase-3、Cyclin D1、γ-H2AX的蛋白表达量。结果 照后细胞中HOXD-AS1表达升高(P<0.05),miR-454-3p表达降低(P<0.05)。沉默HOXD-AS1促进细胞凋亡、增加放射敏感性,促进Caspase-3、γ-H2AX蛋白表达,抑制Cyclin D1表达;HOXD-AS1可靶向结合miR-454-3p并可负向调控其表达。结论 沉默HOXD-AS1可靶向调控miR-454-3p促进肺癌细胞凋亡及抑制细胞存活进而提高放射敏感性。     

circLPAR3靶向miR-1238对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨circLPAR3对食管癌细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法收集37例食管癌患者的癌组织和癌旁组织, 体外培养食管癌细胞系Eca-109、EC9706和KYSE30及食管上皮细胞HET-1A, RT-qPCR法检测组织和细胞中circLPAR3和miR-1238的表达水平。以Eca-109细胞为研究对象, 转染circLPAR3 siRNA、miR-1238模拟物或共转染circLPAR3 siRNA与miR-1238抑制剂。用细胞克隆实验检测沉默circLPAR3、过表达miR-1238或同时沉默circLPAR3和miR-1238对Eca-109细胞放射敏感性的影响。4 Gy照射沉默circLPAR3、过表达miR-1238或同时沉默circLPAR3和miR-1238的Eca-109细胞, CCK-8法(A值)、流式细胞术、蛋白印迹法分别检测沉默circLPAR3、过表达miR-1238或同时沉默circLPAR3和miR-1238联合4 Gy照射对Eca-109细胞增殖、凋亡及相关蛋白CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax表达的影响。双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull down实验验证circLPAR3和miR-1238调控关系。结果与癌旁组织比较, 食管癌组织中circLPAR3表达升高(P<0.05), miR-1238表达降低(P<0.05)。与HET-1A细胞比较, Eca-109、EC9706和KYSE30细胞中circLPAR3表达升高(均P<0.05), miR-1238表达降低(均P<0.05)。沉默circLPAR3、过表达miR-1238降低了Eca-109细胞存活分数(均P<0.05), 放射增敏比分别为1.21、1.75。沉默circLPAR3、过表达miR-1238降低了Eca-109细胞A值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(均P<0.05), 而提高了Eca-109细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(均P<0.05)。沉默circLPAR3、过表达miR-1238联合4 Gy照射后Eca-109细胞A值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05), Eca-109细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达升高(均P<0.05)。circLPAR3在Eca-109细胞中靶向结合并负调控miR-1238的表达。同时沉默miR-1238、circLPAR3表达后Eca-109细胞存活分数较只沉默circLPAR3时升高, 放射增敏比为0.59。沉默miR-1238逆转了沉默circLPAR3联合4 Gy照射对Eca-109细胞增殖和凋亡的影响。结论 circLPAR3在食管癌组织和细胞系中呈高表达, 沉默其表达可靶向上调miR-1238抑制食管癌Eca-109细胞增殖, 促进其凋亡, 并增强细胞放射敏感性。     

miR-339-5p通过抑制NUDT5增强肺癌A549细胞的放射敏感性

目的：探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5（Nudix hydrolase 5,NUDT5）的表达对肺癌A549细胞放射敏感 性的影响。方法：体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株（RA549）,qPCR检测 miR-339-5p在人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）、肺癌细胞系（A549、 L78、 H1299、 H460和RA549细胞）中的表达水平。根据对 RA549细胞的处理,实验分为NC组、 5 Gy组（5 Gy X 射线处理 RA549 细胞）、 5 Gy+miR-339-5p mimic组、 5 Gy+si-NUDT5组和 5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及 NUDT5、 γ-H2AX 和 H2AX 蛋白表达的变化,双荧光素酶报告基因系统验证 miR-339-5p 和 NUDT5 的靶向关系。结果： miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞（均P<0.05）,其中RA549细胞表达水平最低。验证显示NUDT5是 miR-339-5p的靶基因。与 NC 组相比, 5 Gy 组 RA549 细胞增殖活力和 NUDT5 表达显著降低（均 P<0.01）,凋亡率显著升 高（P<0.01）;与5 Gy组相比, 5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低（P<0.05）、凋亡率[（12.97±1.48） % vs （5.21±0.62） %, P<0.01]和γ-H2AX的表达水平（P<0.05）显 著 升 高 , 5 Gy+si-NUDT5 组 RA549 细 胞 中 NUDT5 的表达水平 （P<0.01）和细胞增殖活力（P<0.01）均显著降低,凋亡率[（11.21±1.06） % vs（5.54±0.44） %, P<0.01]和γ-H2AX表达水平（P<0.01）均 显著升高, 而5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平。结论：过表达miR-339-5p通过靶 向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性。     

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果：miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系（r=-0.666,P < 0.05）;与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低（P < 0.05）,ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）;沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论：miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:分析miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法:采用生物信息学方法对miR-194-3p的表达情况以及预后信息进行统计分析。采用荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-194-3p的表达情况;采用CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞技术检测miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡能力的影响;Western blot检测过表达miR-194-3p后Caspase3的表达情况。结果:与癌旁组织相比,miR-194-3p在胃癌组织中显著高表达。TCGA预后分析显示,miR-194-3p的高表达与良好的预后相关。与GES-1相比,miR-194-3p在6种胃癌细胞系中均显著低表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与空载组相比,慢病毒转染过表达miR-194-3p后显著抑制胃癌细胞增殖。流式细胞术显示,miR-194-3p可显著促进胃癌细胞凋亡。Western blot结果显示,Caspase3的表达在miR-194-3p过表达的胃癌细胞中显著增加。结论:miR-194-3p在胃癌细胞中低表达,miR-194-3p的过表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进细胞凋亡。其中miR-194-3p促进凋亡的机制可能是通过Caspase3的凋亡相关通路发挥作用。     

lncRNA MEG3 increases the radiosensitivity of lung cancer cells by regulating miR-21

Objective To investigate the regulatory mechanism of long-chain non-coding RNA (lncRNA) MEG3 on the sensitivity of lung cancer cell line H1299 to irradiation. Methods The expression of MEG3 and miR-21-5p in lung cancer cell line H1299 was detected by qRT-PCR. Overexpression control group (transfected with pcDNA3.1), MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA3.1-MEG3), miR-NC inhibition group (transfected anti-miR-NC), miR-21-5p inhibition group (transfected with anti-miR-21-5p), MEG3 overexpression+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-NC), MEG3 overexpression+miR-21-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-21-5p mimics) were all transfected into H1299 cells by liposome method treated with 4Gy irradiation. Cell survival fraction was detected by colony formation assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry. The binding of MEG3 to miR-21-5p in cells was assessed by dual luciferase reporter assay. Results Compared with normal lung epithelial cells, the expression of MEG3 was significantly decreased, whereas the expression of miR-21-5p was significantly increased in the radioresistant lung cancer cells H1299. Overexpression of MEG3 or inhibition of miR-21-5p could promote the apoptosis and enhance the radiosensitivity of H1299 cells. MEG3 could targetedly regulate the expression of miR-21-5p. Overexpression of miR-21-5p could reverse the enhanced radiosensitivity of MEG3 to H1299 cells. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of lung cancer cells H1299 to irradiation. The mechanism may be related to targeting miR-21-5p.     

miR-502-3p通过靶向GTPBP2基因调控结直肠癌干细胞增殖与凋亡

目的：探讨miR-502-3p通过靶向GTP结合蛋白2(GTPBP2)调控结直肠癌干细胞（CCSC）增殖、细胞周期和凋亡的分子机制。方法：利用免疫磁珠分选技术从结直肠癌细胞HCT116中分选CCSC(CD133+CD44+双阳性细胞和CD133-CD44-双阴性细胞),用qPCR法检测细胞中miR-502-3p表达水平。利用脂质体转染法分别将miR-NC、miR-502-3p、si-miR-NC、si-miR-502-3p、miR-502-3p+vector和miR-502-3p+GTPBP2转染至CD133+CD44+细胞中,记作miR-NC、miR-502-3p、si-miR-NC、si-miR-502-3p、miR-502-3p+vector和miR-502-3p+GTPBP2组。用qPCR法检测细胞中miR-502-3p、GTPBP2 mRNA表达水平,MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡率,WB法检测细胞中Ki67、CDK1、Bcl2、BAX和GTPBP2蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-502-3p与GTPBP2基因的靶向关系。结果：CD1...     

鱼藤素通过调控miR-520a-3p影响卵巢癌SKOV3细胞的增殖和凋亡

目的：探讨鱼藤素通过调控miR-520a-3p表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法：将SKOV3细胞分为对照组（鱼藤素0μmol/L）、鱼藤素低剂量（5μmol/L）、中剂量（10μmol/L）、高剂量（20μmol/L）组,miR-NC组、过表达miR-520a-3p组,鱼藤素+anti-miR-NC组、鱼藤素+anti-miR-520a-3p组。CCK-8法、细胞集落形成实验、FCM以及qPCR法分别检测SKOV3细胞的增殖抑制率、细胞克隆形成数、凋亡率以及miR-520a-3p表达水平。结果：与对照组比较,鱼藤素（低、中、高剂量）组SKOV3细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-520a-3p表达水平均显著升高（均P<0.05）,细胞克隆形成数显著减少（P<0.05）。与miR-NC组比较,过表达miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著升高（均P<0.05）,细胞克隆形成数显著减少（P<0.05）。与鱼藤素+anti-miR-NC组比较,鱼藤素+anti-miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著降低（均...     

环状RNA＿000926通过靶向miR-411-5p调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的：探讨环状RNA＿000926(circ＿000926)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年5月至2020年9月河北医科大学第一医院手术切除的30例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7,用qPCR法检测组织和细胞中circ＿000926和miR-411-5p的表达水平。将circ＿000926过表达质粒及空白质粒、circ＿000926小干扰RNA及阴性对照寡核苷酸、miR-411-5p mimic和阴性对照质粒分别转染HeLa和SiHa细胞,分为pc-circ＿000926组、pc-NC组、si-circ＿000926组、si-NC组、miR-411-5p mimic组和miR-NC组。通过CCK-8法检测转染细胞的增殖活力,TUNEL法检测细胞的凋亡水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证circ＿000926与miR-411-5p之间的靶向关系,WB法检测细胞中Ki67、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结果:与癌旁组织和Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌组织和He La...