桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法:选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养,分为不同浓度桦褐孔菌醇组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)和对照组(未加桦褐孔菌醇)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定两组对人卵巢癌SKOV3细胞株的作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜观察两组细胞形态学变化;通过免疫组化法比较两组核增殖抗原Ki-67的表达。结果:①作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的抑制率分别为(17.16±4.71)%、(35.16±4.26)%和(57.83±3.48)%,与对照组(0)比较差异有统计学意义(P<0.05)。②HE染色光镜下,桦褐孔菌醇组卵巢癌SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;倒置显微镜下,桦褐孔菌醇组SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力明显减弱。③作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的Ki-67阳性表达率分别为(64.67±3.98)%、(43.83±3.06)%和(34.00±2.61)%,与对照组(92.83±3.06)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:桦褐孔菌醇对人卵巢癌SK-OV3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用,并表现出浓度依耐性。     

siRNA LSINCT5联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LSINCT5联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响。方法:选取SKOV3细胞株,采用小干扰技术将LSINCT5基因片段转入卵巢癌SKOV3细胞中,同时联合顺铂作用于卵巢癌细胞。按不同处理因素将SKOV3细胞分为5组:对照组、NC-siRNA组、顺铂组、LSINCT5-siRNA+顺铂组和LSINCT5-siRNA组。CCK-8检测转染后SKOV3细胞对顺铂的敏感性。显微镜下观察细胞的生长状况及形态变化。Western blot和RT-PCR法分别检测与凋亡相关的Caspase 3蛋白和基因表达水平。结果:CCK-8显示,3μg/ml顺铂作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度。沉默LSINCT5能显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。LSINCT5-siRNA+顺铂组中Caspase 3蛋白和mRNA相对表达量均明显高于其他各组(P0.05)。结论:沉默LSINCT5提高了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。沉默LSINCT5联合顺铂能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞凋亡。     

miR-101对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用研究

目的:探讨miRNA-101(miR-101)对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用,以及在失巢凋亡过程中可能的作用机制。方法:构建失巢凋亡模型模拟卵巢癌细胞转移的生长状态;用脂质体Lipofectamine 2000将miR-101 mimics及miR-NC转染SKOV3细胞,随机分为阴性对照组、miR-空白质粒组(miR-NC组)和miR-101质粒组。RTPCR法检测细胞内miR-101 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力;RT-PCR及Western blot法检测c-fos基因mRNA和蛋白表达水平。结果:失巢凋亡模型构建成功,模型中SKOV3细胞呈悬浮、团簇状生长;将miR-101 mimics转染SKOV3细胞后,SKOV3细胞中miR-101表达水平增加,同时癌细胞失巢凋亡增加;透膜细胞数量及细胞迁移距离减少;c-fos mRNA和蛋白表达水平均降低。结论:miR-101过表达可增加SKOV3细胞失巢凋亡,降低细胞侵袭及迁移能力,下调c-fos基因表达可能是其作用分子机制。     

microRNA-99b表达调控对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。方法:利用转染试剂将Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor转染宫颈癌HeLa细胞,荧光实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测其靶基因CDC-25A蛋白的表达。结果:转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor的HeLa细胞,miR-99b表达增高86.45倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,同时细胞CDC-25A蛋白表达降低。结论:上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC-25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。     

miR-17～92基因簇过表达调控PTEN、BIM蛋白对卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药的影响

目的:分析miRNA-17~92基因簇过表达与卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药的关系,为卵巢癌化疗耐药的研究提供理论依据。方法:脂质体法将构建的p EGFP-N1-miR-17~92质粒转染入卵巢癌SKOV3细胞。Real time-PCR法及Western blot法分别检测转染前后miR-17~92及BIM、PTEN表达。结果:与SKOV3细胞相比,空质粒p EGFPN1转染的SKOV3-p EGFP-N1细胞miR-17~92含量0.970,与对照组比较差异无统计学意义(t=0.581,P=0.620);过表达质粒p EGFP-N1-miR-17~92转染的SKOV3-p EGFP-N1-miR-17~92细胞miR-17~92含量2.082,与对照组比较差异有统计学意义(t=-5.602,P=0.030);SKOV3-p EGFP-N1-miR-17~92细胞组的miR-17~92 mRNA相对表达量与SKOV3-p EGFP-N1细胞组比较,差异有统计学意义(t=-8.473,P=0.014)。不同浓度紫杉醇作用于转染p EGFP-N1-miR-17~92质粒后细胞,miR-17~92过表达使BIM蛋白表达下降,对PTEN蛋白表达的影响不明显。结论:miR-17~92基因簇与卵巢癌SKOV3细胞紫杉醇耐药有关。miR-~92基因簇过表达影响卵巢癌耐药的机制是通过下调BIM蛋白而非PTEN蛋白参与。     

miR-184通过JNK信号通路调控卵巢癌的增殖与凋亡

目的:探讨miR-184通过JNK信号通路对卵巢癌增殖与凋亡的影响。方法:收集卵巢癌患者的癌组织与癌旁组织标本,荧光定量PCR检测miR-184表达;采用Lipofectamine 2000将miR-184 inhibitor和miR-184 mimic分别转入卵巢癌细胞株OVCAR3,qPCR检测其转染效率,MTT及细胞凋亡实验检测miR-184表达对细胞增殖及凋亡的影响;Westerm blot检测miR-184表达对JNK信号通路中total JNK及p-JNK蛋白的影响。结果:卵巢癌组织中miR-184表达较癌旁组织明显升高,差异有统计学意义(P0.05);高表达miR-184后,OVCAR3细胞增殖率显著提高,细胞凋亡率显著下降,磷酸化p-JNK表达明显上调(P均0.05);下调miR-184表达后,OVCAR3细胞增殖率明显下降,细胞凋亡率显著升高,磷酸化p-JNK表达明显下调(P均0.05)。结论:miR-184可促进卵巢癌细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制可能与JNK信号通路有关。     

CircWHSC1调节miR-107/CLOCK轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响

目的:探讨环状RNA(circRNA)WHSC1调节miR-107/生物钟循环输出蛋白(CLOCK)轴对卵巢癌(OC)细胞增殖、凋亡和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法检测人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌细胞(SKOV3、HO-8910、A2780)及卵巢癌DDP耐药株SKOV3/DDP中CircWHSC1、miR-107表达及CLOCK蛋白表达。将SKOV3细胞分为Ct组、si-NC组、si-CircWHSC1组、mimic NC组、miR-107 mimic组、si-CircWHSC1+inhibitor NC组、si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组;将SKOV3/DDP分为DDP组、DDP+si-NC组、DDP+si-CircWHSC1组、DDP+mimic NC组、DDP+miR-107 mimic组、DDP+si-CircWHSC1+inhibitor NC组、DDP+si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组。qRT-PCR检测SKOV3细胞和SKOV3/DD...     

卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡影响的研究

目的:研究卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡的影响。方法:MTT法检测卵巢癌细胞暴露于17β-E2不同浓度及不同时间的细胞增殖率。用特异性雌激素受体激动剂DPN联合17β-E2或单独使用DPN处理细胞,RT-PCR法检测ERβmRNA、ERK1/2 mRNA及caspase-3 mRNA表达,蛋白免疫印记法检测ERβ和p-ERK1/2蛋白表达。结果:10-6mol/L 17β-E2作用60min时,细胞的增殖活性最强(5.7±0.23),与对照组相比(3.5±0.45),差异有统计学意义(P0.05)。ERβ在卵巢癌中低表达。随着DPN作用时间延长及浓度增加,ERβmRNA、caspase-3 mRNA表达逐渐增加(P0.05),ERK2 mRNA表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。随着DPN作用时间延长及浓度的增加,ERβ蛋白表达逐渐增加,p-ERK1/2蛋白表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:ERβ在卵巢癌中低表达,上调ERβ表达能抑制卵巢癌细胞的增殖,同时促进细胞的凋亡。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。     

Mir-204靶向调控Bcl-2影响卵巢癌细胞增殖和凋亡的相关机制研究北大核心CSCD

目的通过体外实验探索上调miRNA-204表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖、凋亡的影响,阐明miR-204在卵巢癌中的作用机制。方法采用Mimics转染的方法,构建过表达miR-204的SKOV-3细胞株和空载对照组细胞株,实验共分为三组：正常对照组、过表达组和空白载体组,采用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测各组细胞miRNA-204表达水平的变化。采用CCK-8实验和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况。通过Targetscan靶基因预测网站,筛选Bcl-2作为miR-204的靶向蛋白,采用蛋白印迹法（Western Blot）和双荧光素酶靶标实验验证。采用ANOVA和S-N-K检验分析三组及两两间统计学差异。结果与正常对照组相比,过表达组细胞miRNA-204的表达显著增加（P〈0.01）,细胞存活率显著降低（P〈0.05）,相对荧光强度明显降低（P〈0.01）,Bcl-2的蛋白表达水平显著下降（P〈0.01）;过表达组与空白载体组差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 miR-204高表达能明显抑制卵巢癌细胞的生长增殖、诱导凋亡,其可能的机制与Bcl-2参与促进细胞生长增殖、诱导细胞凋亡相关。     

盐酸右美托咪定通过调控miR-223对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨盐酸右美托咪定(Dex)对子宫内膜癌细胞AN3CA增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 AN3CA 细胞分为对照组、不同浓度(1、2、5 μmol/L)Dex组、miR-223组、miR-NC组、5 μmol/L Dex+anti-miR-223组和5μmol/LDex+anti-miR-NC组.MTT法检测细胞...     

Cell proliferation and apoptosis in BRCA-associated hereditary ovarian cancer

OBJECTIVE: The goal was to test the hypothesis that cellular growth properties differ between hereditary and sporadic ovarian cancers. METHODS: Cell proliferation and apoptosis were assessed in 67 tumors associated with deleterious germline BRCA mutations (hereditary) and 69 tumors without BRCA mutations (sporadic). Cell proliferation was evaluated by immunohistochemical analysis of Ki-67 expression, and apoptosis was assessed using a TUNEL assay. RESULTS: The mean number of Ki-67-immunopositive nuclei was significantly higher in ovarian cancers from the hereditary group compared with those from the sporadic group (P = 0.017). Cell proliferation did not differ significantly between BRCA1- and BRCA2-associated hereditary tumors, and apoptosis did not differ significantly between the hereditary and sporadic tumors. CONCLUSION: These data indicate that ovarian carcinomas associated with germline BRCA mutations have a significantly higher growth fraction than sporadic cancers. This property may contribute to an improved response to cytotoxic chemotherapy, partially accounting for the longer recurrence-free interval and overall survival observed in the hereditary group.     

MiR-9对宫颈癌细胞增殖、迁移及其下游基因表达的影响

目的探讨miR-9对宫颈癌细胞生物学功能及其下游基因表达的影响。方法将miRNA mimic转染至宫颈癌Hela细胞中,通过MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力的改变,利用基因芯片检测转染后mRNA的表达,并采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）对芯片检测下调最明显的两个基因进行验证。结果转染miR-9组的细胞增殖倍数明显高于转染NC（Negative Control）组和空白对照组（P〈0.05）;转染miR-9的迁移细胞数明显高于转染NC组和空白对照组（P〈0.05）;基因芯片结果显示转染miR-9mimc后共173个基因表达降低,其中降低最明显的两个基因是FSTL1和CDH1。经RT-PCR验证,转染miR-9mimic组FSTL1和CDH1相对表达量明显低于转染NC组（P〈0.05）。结论 miRNA-9促进宫颈癌细胞的增殖和迁移,并调节其下游基因的表达。     

微小RNA-7在上皮性卵巢癌原发灶及转移灶中表达的研究

目的:检测上皮性卵巢癌组织原发灶、转移灶中miR-7及其靶标EGFR蛋白的表达,探讨miR-7及EGFR与卵巢癌转移的关系。方法:采用显色原位杂交(CISH)检测miR-7在卵巢癌组织原发灶、转移灶石蜡切片中的表达;采用免疫组化检测EGFR蛋白表达。结果:上皮性卵巢癌转移灶中miR-7表达显著低于原发灶(P0.05),而EGFR表达显著高于原发灶(P0.05);miR-7与EGFR表达具有相关性(r=-0.441,P0.05)。结论:miR-7可能通过EGFR抑制卵巢癌的转移,miR-7可能成为治疗卵巢癌的新靶标。     

microRNA-145对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达调控研究

目的 探讨microRNA -145（miR-145）对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达的调控。 方法 选取2012年2月至2013年4月在重庆医科大学,通过慢病毒转染技术将含miR-145的质粒转入SKOV3细胞中,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达miR-145的SKOV3细胞株。实时定量荧光RT-PCR验证miR-145的表达情况,western-blot检测过表达miR-145后SKOV3细胞中p53蛋白表达量的变化。 结果　过表达miR-145的SKOV3细胞p53蛋白相对表达量实验组0.714±0.18,对照组0.333±0.07,增高1.14倍（P＜0.05）。 结论　miR-145可能通过增强卵巢癌SKOV3细胞中抑癌基因p53的表达来降低细胞的肿瘤恶性程度。     

miRNA-93在卵巢癌OVCAR3细胞的侵袭和迁移中的作用研究

目的:研究miR-93对卵巢癌细胞系OVCAR3侵袭及迁移能力的影响。方法:用miR-93的成熟模拟物过表达miR-93,用化学合成的特异性抑制物下调miR-93的表达。通过miRNA特异的定量PCR验证miR-93的过表达和抑制效率,采用MTT、软琼脂集落形成和Transwell侵袭实验分析miR-93表达对OVCAR3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。结果:miR-93过表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力显著增强(分别达3.82倍和2.56倍)。降低内源性miR-93的表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力分别下降了66.57%和57.26%。结论:miR-93能明显促进卵巢癌OVCAR3细胞的侵袭和迁移。     

GNAS-AS1靶向miR-2116-3 p基因表达调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的:探讨GNAS-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法:RT-qPCR法检测正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中GNAS-AS1和miR-2116-3 p表达水平.以SKOV3细胞为研究对象,分别转染GNAS-AS1小干扰RNA、mi...