内源性一氧化碳对肺动脉平滑肌细胞凋亡基因表达谱的影响

目的：运用芯片技术研究内源性一氧化碳(CO)刺激下血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达谱的变化。方法：取Sprague-Dawley (SD)大鼠肺动脉平滑肌细胞进行离体培养,用血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor,PDGF-BB, 20 ng/mL)和高氯血红素(hemin, 20 μg/mL）进行刺激后2 h,用Affymetrix表达基因谱芯片检测其基因表达谱变化。结果：PDGF刺激后,Map2k3(P38)信号通路中相关差异表达基因Kras、Nras、丝分裂原蛋白激酶的激酶Map2k3 、细胞周期素CyclinD1、CyclinH、CyclinL1等的表达显著上调,而周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达显著下调。Hemin刺激后,P53依赖途径中的一些基因如:Gadd45α、P21、Trp53inp1表达显著上调。结论内源性CO所引发的血管平滑肌细胞的凋亡可能与P53调控途径密切相关。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：882-885］     

GATA-6基因在内源性一氧化碳抑制肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨GATA-6基因在内源性一氧化碳（CO）抑制肺动脉平滑肌细胞（PVSMCs）增殖中作用。方法体外培养雄性SD大鼠的PVSMCs，用血小板衍生生长因子（PDGF）诱导其增殖，用不同浓度氯血红素（Hemin）诱导血红素加氧酶（HO-1）．促进CO生成，用四唑盐（MTT）法测定不同条件下PVSMCs的细胞增殖，氚掺入法测定DNA合成，RT-PCR测定GATA-6基因mRNA的表达。结果CO可抑制PDGF诱导的PVSMCs增殖，此抑制作用呈剂量和时间依赖关系，高浓度Hemin可明显抑制PVSMCs增殖和DNA合成，在PDGF刺激后2h，PVSMCs的GATA-6表达明显下调，6h开始恢复，而CO可阻止GATA-6这种下调。结论CO可抑制PDGF诱导的PVSMCs增殖，PDGF可引起GATA-6基因表达下调，这种下调可被CO阻止；提示在抑制PVSMCs异常增殖过程中，CO可能通过调节GATA-6表达发挥作用。     

miR-21抑制表达稳定转染SK-N-SH1381中差异表达mRNA筛选及验证

目的 筛查miR-21抑制表达的人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1381) mRNA表达谱,寻找miR-21潜在下游靶基因,以进一步深入探讨miR-21及其参与的通路在肿瘤发生发展中的作用.方法 采用Agilent Human Gene Expression Chip技术筛选了慢病毒转染稳定抑制miR-21表达的入神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1381)和其配对的慢病毒转染无义序列的入神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH1v3-nc),运用生物信息技术,预测miR-21靶基因、基因功能富集,结合相关文献检索,筛选出候选基因,并在细胞水平通过荧光定量PCR验证芯片结果.结果 基因表达谱芯片共筛选出4 985个差异在2倍以上的mRNA(P＜0.05),其中上调表达的基因2 734个,下调表达的基因2 251个.基于microRNA的作用,我们仅选择其中上调的2 734个基因为miR-21可能靶基因,与生物信息学软件分析预测出的398个潜在靶基因进行Venn分析,共获取64个候选潜在靶基因.进一步通过生物信息学分析与文献检索,挑选出6个可能靶基因,分别为EVA1A、TOM1 L2、RGMA、LINC-PINT、NACC2及RPAP3.细胞水平荧光定量PCR结果均与芯片结果一致,EVA1A、TOM1 L2是其中差异表达倍数变化最大的2个候选基因.结论 结合芯片技术和生物信息学分析,在miR-21抑制表达的神经母细胞瘤细胞株中,筛选出6个miR-21可能的下游靶基因,分别为EVA1A、TOM1L2、RGMA、NACC2、RPAP3及LINC-PINT.其中EVA1A、TOM1L2是其中差异表达倍数变化最大的2个候选基因,进一步后续研究,探讨其在神经母细胞瘤发生发展中的作用.     

基因芯片筛选先天性肛门直肠畸形相关基因

目的 应用基因芯片筛选先天性肛门直肠畸形(ARM)的相关基因.方法 用Affy-metrix U133 Plus 2.0表达谱芯片对2例高位肛门直肠畸形直肠末端及1例死于非胃肠道疾病患儿直肠末端组织的基因表达谱进行分析.应用RT-PCR的方法对筛选出的7个表达差异基因进行了表达水平的实验验证.结果 肛门直肠畸形直肠末端与正常直肠末端组织中表达差异在2倍以上的基因有776条,其中ARM下调的基因有399条,上调基因377条.差异表达4倍以上的基因259条,其中ARM下调的基因有150条,上调的基因109条.RT-PCR技术验证的7个差异表达基因中,RHOB、HOXA5基因在高位肛门闭锁患儿直肠末端组织中的表达水平高于正常对照,而SOX11、MMP7、SALL1、NKX3-1和EPHB2基因在高位肛门闭锁患儿直肠末端组织中的表达水平明显低于正常对照.结论 基因芯片可有效筛查出肛门直肠畸形发生的相关基因,在ARM的发生发展中有多种类型的基因参与.本研究中基因表达谱的实验结果具有较好的可信度和可靠性.应用基因芯片筛查差异表达基因为先天性肛门直肠畸形的病因及病理生理学研究奠定基础.     

新生大鼠脑缺血后脑室下区基因表达谱的生物信息学分析

摘要 目的 建立3日龄大鼠脑缺血模型，采用基因芯片分析新生大鼠未成熟脑缺血损伤后脑室下区（SVZ）基因表达谱的变化。方法 同窝3日龄大鼠随机分为实验组和对照组，采用双侧颈总动脉结扎法制备缺血性脑损伤模型，于不同时点取SVZ组织，采用Affymetrix Rat230 2.0基因表达谱芯片观察SVZ基因表达变化，芯片数据分别用3种不同方法分析，并用实时PCR方法验证芯片结果。结果 ①通过差异基因筛选，发现3日龄大鼠脑缺血损伤后SVZ有17个基因发生表达变化，其中上调基因10个，下调基因7个，这些基因参与多种功能的调节。②基于基因功能的表达趋势分析显示，在所有参与增殖、凋亡功能的基因中，转化生长因子-β（TGF-β）在3日龄大鼠脑缺血损伤后SVZ微环境基因表达变化中起枢纽作用。实时PCR验证结果显示，TGF β1及Smad2于缺血后1、4和7 d表达均上升，7 d达高峰。③在参与Wnt、TGF、BMP 和血管内皮生长因子（VEGF）通路所有基因组成的基因功能相似性网络中，有13个基因在网络中起核心调控作用，构成信号通路串话节点。结论 新生大鼠在脑缺血损伤后SVZ微环境中，参与神经新生的BMP、TGF、VEGF和Wnt通路间的串话可发生于信号转导通路中多个水平，TGF-β1对神经新生的调控起重要作用。     

室间隔缺损胎儿心室肌组织微小RNAs时序性表达差异研究

目的 采用微小RNAs(miRNAs)表达谱芯片分析不同孕龄（孕早期与孕中期）室间隔缺损（VSD）胎儿心室肌组织中时序性表达差异的miRNAs。方法 连续性纳入2009年7~12月南京医科大学附属南京妇幼保健院因病理因素流产经解剖证实为VSD且不合并其他畸形的胎儿为VSD组。以同期因生理性难免流产,并经解剖证实无心脏畸形和其他器官畸形的胎儿为对照组,依据孕龄与VSD组1∶1匹配。根据孕龄,将VSD组和对照组分别分为孕早期亚组和孕中期亚组。采用Agilent Human 2.0 miRNAs表达谱芯片观察胎儿心室肌组织miRNAs表达变化,芯片数据采用生物信息学方法进行分析,包括差异miRNAs筛选,预测miRNAs靶基因Gene Ontology分析,靶基因信号通路分析,并采用实时PCR法验证芯片结果。结果 VSD组和对照组各纳入6例,两组孕早期亚组和孕中期亚组均各3例。①通过差异miRNAs筛选,发现孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组间有33个时序性表达差异的miRNAs。19个miRNAs在孕早期VSD亚组表达上调,在孕中期VSD亚组表达下调;14个miRNAs在孕早期VSD亚组表达下调,在孕中期VSD亚组表达上调。②生物信息学预测到2 761个靶基因,大部分miRNAs的靶基因中含有与心脏发育直接相关的关键基因（TBX5、GATA4、TBX1和NKX25等）。③靶基因Gene Ontology分析表明其中与细胞进程、代谢过程和生物调控相关的靶基因分别占整个靶基因数量的23.5%、18.3%和17.7%。④靶基因信号通路分析发现,WNT信号通路中的靶基因在孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组中存在时序性差异。⑤随机挑选孕早期VSD亚组与孕中期VSD亚组时序性表达差异的4个miRNAs（hsa-miR-19a、hsa-let-7e、hsa-miR-134和hsa-miR-206）进行验证,定量PCR结果显示, 孕早期VSD亚组分别上调3.2（hsa-miR-19a）和4.1倍（hsa-let-7e）,下调5.3（hsa-miR-134）和4.4倍（hsa-miR-206）;孕中期VSD亚组分别下调4.8（hsa-miR-19a）和3.4倍（hsa-let-7e）,上调4.5（hsa-miR-134）和3.9倍（hsa-miR-206）。结论 时序性表达差异的miRNAs在胎儿VSD畸形的发生中可能起着重要作用,但本研究样本量较小,需要进一步扩大样本量进行验证。这些差异表达miRNAs的预测靶基因与细胞发育、分化和代谢密切相关,含有与心脏发育直接相关的关键基因,部分靶基因为WNT信号通路中的关键因子,提示VSD的发生发展是机体在miRNAs的参与下,在多个层面上使基因表达失控的共同结果。     

特发性矮身材儿童循环microRNA表达水平的研究

目的 研究特发性矮身材（ISS）患儿循环miRNA表达水平,初步建立ISS循环miRNA表达谱,为进一步探索miRNA与ISS发生、发展及寻找新的生物标记物提供理论依据。方法 选取20例ISS患儿和20例健康对照儿童,提取血清总RNA,利用microRNA microarray技术比较ISS患儿与对照儿童血清miRNA的表达差异;实时荧光定量PCR技术验证芯片结果,生物信息学分析软件对筛选出的具有显著差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果 ISS组与对照组对比共有40个差异表达的miRNA,其中表达上调的miRNA有24个;表达下调的有16个;实时荧光定量 PCR对其中2个表达上调（miR-185和miR-574-5p）和2个表达下调（miR-497和miR-15a）的miRNA进行验证,ISS患儿血清中miR-185较对照组明显上调（P<0.05）,miR-497明显下调（P<0.05）。结论 ISS患儿与健康对照血清miRNA表达存在显著差异,提示血清miRNA可能与ISS的发生发展有密切的关系。     

一氧化碳对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨一氧化碳（CO）对缺氧性大鼠肺血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将大鼠随机分为4组：常氧对照组（7只）、低氧组（6只）、低氧＋锌原卟啉组（低氧＋ZnPP组）（6只）及低氧＋低浓度一氧化碳组（低氧＋低浓度CO组）（5只）。应用增殖细胞核抗原（PCNA）单克隆抗体、Fas多克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法（TUNEL）对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行增殖与凋亡定位及半定量分析。结果 1．低氧＋低浓度CO组肺动脉平滑肌细胞增殖指数（PI）明显低于低氧组和低氧＋ZnPP组（P＜0．01）,低氧＋ZnPP组PI高于低氧组（P＜0．01）;2．TUNEL检测低氧＋低浓度CO组凋亡指数（AI）明显高于其余三组（P＜0．01）;3．低氧＋低浓度CO组Fas表达高于其余三组（P＜0．01）;4．低氧＋低浓度CO组PI／AI与常氧对照组PI／AI相近约等于1。结论 CO对缺氧大鼠肺血管平滑肌细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的 通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系.方法 应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响; FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化.结果 不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR 表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性.结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化.     

应用基因芯片对先天性肾盂输尿管连接部梗阻相关基因的筛选

目的应用基因芯片筛选先天性肾盂输尿管连接部梗阻（UPJ）的相关基因。方法用一步法提取梗阻段输尿管及正常输尿管组织的总RNA，并过柱纯化，用包含21522条cDNA的基因芯片对梗阻段输尿管及正常输尿管的基因表达谱进行分析。结果肾盂输尿管连接部梗阻段输尿管与正常输尿管组织中差异表达的基因有709条，其中UPJ中下调的基因有535条，上调基因174条。表达差异有极显著意义的基因有16条，其中UPJ下调的基因有11条，上调基因5条。结论基因芯片可有效筛查出肾盂输尿管连接部梗阻发生的相关基因，包括细胞生长、发育、分化、信号传导、核酸转录、翻译、物质代谢及运输等多种基因，这表明在UPJ的发生发展中有多种类型的基因参与，非单一因素所致。     

术中判断肠活力三种方法的比较

术中准确地评价肠活力是外科医师面临的一个普遍问题。应用兔肠缺血模型，比较静脉荧光素、表面血氧测定和激光多普勒三种技术判断肠活力的精确性。结果：诊断效率静脉荧光素法为７８％，表面血氧测定为６８％，激光多普勒为９５％。后者精确度显著优于前二者，且操作简便、迅速，具有临床应用前景。     

早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。     

主动脉缩窄的治疗研究进展

主动脉缩窄(coarctation of aorta,CoA)是主动脉的局限性狭窄,狭窄最常见于峡部,是一种常见的先天性心血管畸形,占所有先天性心脏病的5％ ～8％.缩窄导致上肢血压升高,下肢血压降低,并可引起心功能下降,未经治疗的CoA预后不佳.治疗方式包括外科治疗及经皮介入治疗,不同治疗方式的并发症发生率不同,术后长期监测其并发症、心功能是评估预后的重要指标.该文对主动脉缩窄的治疗方式及术后并发症、心功能情况的研究进展作一综述.     

小儿法洛四联症根治术106例临床分析

目的探讨小儿法洛四联症根治术的特点,以提高手术疗效。方法对1998-02—2005-07在河南省郑州市第七人民医院接受法洛四联症根治术的106例患儿的临床资料进行回顾性分析。结果治愈103例,死亡3例,病死率为2.9%。术后随访率100%,随访3～93个月,无晚期死亡。全部病例心功能皆恢复至Ⅰ或Ⅱ级(NYHA)。结论绝大部分法洛四联症患儿可施行一期根治术,提高手术成功率的关键在于合理的体外循环灌注、严密修补室间隔缺损和恰当疏通右室流出道。     

Outcome of the Treatment of Inborn Errors of Metabolism

The use of specific dietary restrictions, cofactor administration, mobilisation of insoluble substances, environmental modifications, product replacement and selective enzyme inhibition are now established for the treatment of some inborn errors of metabolism. There is no generally accepted application for enzyme administration, cytopharmacology (manipulation of the cytoskeleton) or for cell transplantation except for bone marrow transplantation in disorders where the bone marrow is primarily at fault. The other uses of bone marrow transplantation which have been proposed require further evaluation. Results of recent research suggest that the scope of this approach is gradually being widened. There is also scope for development in the field of organ transplantation taking advantage of recent technical¹ and immunological progress. The treatment of inborn errors of metabolism by genetic modification is not yet on a practical clinical level; more laboratory and animal studies are needed before this can be attempted in man. Adenosine deaminase deficiency appears to be the disease in which this will be first attempted using a retroviral vector to insert the gene into the genome of pluripotential bone marrow cells.     

Reliability of subjective estimates of exercise capacity after total repair of tetralogy of Fallot

Sixty-nine patients (age 10 × 3.5 years, median 9.7 years) operated on for tetralogy of Fallot, underwent excercise testing 5.1 × 2.5 years after total correction. Aerobic capacity was assessed by the ventilatory threshold method. After the exercise test, parents completed a validated standardized questionnaire to evaluate the habitual level of physical activity of their child. They were then asked to place their child into one of three groups, describing their child's activity level, compared to normals (below average, average and above average). In the average and above-average groups, 73% and 65% of the patients were misclassified when compared to objective exercise testing. However, in the below-average group, no misclassifications were found. Subjective estimates of activity level, and consequently exercise tolerance, were poorly associated with objective measurements of exercise performance in these patient groups. Our results question the reliability of self-reported estimates of physical activity level and consequently exercise capacity in children after surgical correction of tetralogy of Fallot.     

Spectrum of clinical presentations of vein of Galen aneurysm

Aneurysm of the vein of Galen is a rare intracranial vascular malformation. It is known to have diverse manifestations and varying severity. Four cases with different modes of presentation and outcome are reported. A mortality of 50 per cent was encountered. Among the survivors, one had neurologic sequelae whereas the other had attained age-appropriate developmental milestones. The former was a rare case of spontaneous thrombosis of the aneurysm while the latter was a boy who underwent therapeutic embolization.     

早产儿脑病研究进展

早产儿脑病是复杂的原发性脑损伤和继发性脑发育异常疾病.过去几年对该病有了较为深刻的认识,该文就最新的有关早产儿脑病概念演变,脑损伤后的细胞分子机制和损伤后发育障碍,尤其是活化小胶质细胞介导的少突胶质细胞损伤机制、神经/髓鞘受损和丘脑、板层下神经元及大脑皮层的受损机制或发育成熟障碍进行综述,以便对该病有更深刻的认识.     

婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的影响因素

目的 探讨影响婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的各相关因素.方法 将2003年8月至2011年2月经作者一期手术纠治的117例年龄≤3岁的法乐四联症患儿分为疗效良好、疗效较差两组.分析手术时患儿年龄、体重、术前HCT值、McGoon指数、EDVI、主动脉阻断时间、转流时间、室间隔缺损大小、升主动脉与肺动脉干直径比、...