RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因表达的影响

目的 探讨RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因的表达。 方法 采用脂质体介导的基因法将不同浓度的CD105-siRNA、 Ki67-siRNA转染至体外培养的人卵巢癌OVCAR3细胞中,检测干扰前后人卵巢癌细胞中CD105、Ki67基因表达的变化以确定沉默效果。构建CD105-siRNA、Ki67-siRNA及各自的阴性对照序列并高效地转染人卵巢癌OVCAR3细胞,采用Western blotting和Real-time PCR从蛋白和基因水平检测CD105和Ki67的表达变化。 结果 转染CD105-siRNA或Ki67-siRNA终浓度为50nmol/L和100nmol/L的人卵巢癌细胞中CD105mRNA或Ki67mRNA的相对表达水平及CD105和Ki67的表达均明显低于空白对照组和阴性对照组（NC1）,差异具有统计学意义（P＜0.001）。 结论 CD105-siRNA和Ki67-siRNA能特异性抑制人卵巢癌OVCAR3细胞中的CD105和Ki67基因表达,下调mRNA和蛋白的表达水平。     

ORP-150基因沉默对SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默ORP-150基因对体外培养卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、转移及侵袭的影响并初步探讨其可能作用机制.方法:运用慢病毒包装shRNA方法沉默SKOV-3细胞的ORP-150基因;研究分为3组:实验组(ORP-150 shRNA)、阴性对照组(NC shRNA)和空白对照组(CON);采用qRT-PCR和Western印迹法检测基因敲减效率,CCK8法、克隆形成试验检测ORP-150沉默对细胞增殖能力的影响,划痕试验、Transwell试验检测SKOV-3细胞侵袭迁移能力的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹法探讨ORP-150基因敲减后影响细胞表型改变的作用机制.结果:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞的增殖能力、克隆形成能力以及跨膜转移扩散能力(P<0.05),但对细胞的侵袭能力无明显影响(P>0.05);敲减ORP-150基因后卵巢癌细胞凋亡明显增加(P<0.05);敲减ORP-150基因后的卵巢癌细胞可能通过Wnt信号通路及Caspase级联反应影响细胞的修复,最终抑制细胞增殖,促进凋亡发生.结论:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖和转移,同时促进凋亡发生.这种细胞表型的改变可能是通过下调Wnt信号通路中β-catenin,同时的表达,以及抑制Caspase级联反应从而下调c-myc,cyclin D1和caspase-3蛋白的表达来实现,ORP-150基因沉默可能是卵巢癌治疗的新靶点.     

TRIM19通过调控p53信号促进卵巢癌进展的作用及机制研究

目的:探讨TRIM19在卵巢癌进展中的作用及其分子机制。方法:qPCR检测人卵巢表皮细胞IOSE80、卵巢癌细胞SKOV-3、A2780、OVCAR3中TRIM19表达水平;以siRNA敲减SKOV-3细胞中TRIM19基因表达;以CCK-8方法、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖能力、迁移行为及凋亡率;以RT-qPCR技术检测信号通路分子表达。结果:在卵巢癌细胞SKOV-3、A2780、OVCAR3中,TRIM19表达量较正常表皮细胞IOSE80中明显增强。当TRIM19基因在卵巢癌SKOV-3细胞中被成功敲减后,细胞增殖能力降低74.2%,侵袭能力降低70.0%,凋亡率增加约30倍。在分子水平,敲减TRIM19后,p53、p21、CyclinD、CDK2、Bax基因表达显著增加;同时敲减TRIM19与p53后,p53、p21、CyclinD、CDK2、Bax基因表达略有提高。结论:沉默TRIM19基因抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭,诱导凋亡,并且激活p53依赖的凋亡信号,TRIM19促进卵巢癌进程。TRIM19具有成为卵巢癌治疗的新靶点潜力。     

HOTAIR 促进卵巢癌恶性生物学行为

目的:研究沉默HOTAIR后对上皮性卵巢癌恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量聚合酶链反应检测HOTAIR在卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR3和A2780的表达情况。沉默HOTAIR后,划痕实验检测卵巢癌细胞转移能力,侵袭实验检测卵巢癌细胞侵袭能力,胸腺嘧啶核苷类似物检测卵巢癌细胞增殖能力。结果:HOTAIR在SKOV3和OVCAR3细胞中表达高于A2780细胞;沉默HOTAIR后,卵巢癌SKOV3细胞转移、侵袭和增殖能力降低;结论:沉默HOTAIR可以抑制卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为。     

沉默PDK1基因抑制卵巢癌细胞系SKOV3的增殖及侵袭

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)基因对卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力的影响,并初步探讨其机制。方法采用PDK1 siRNA及control siRNA分别瞬时转染干扰实验组和阴性对照组SKOV3细胞。运用Western blot及real-time PCR验证转染效率后,CCK8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖及克隆能力;Transwell小室法及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力;流式细胞计量术探索细胞周期及凋亡情况。结果实验组细胞增殖及克隆(P0.01),侵袭及迁移能力(P0.05)显著低于对照组;SKOV3细胞内PDK1基因沉默后缩短了细胞复制期并提高了其早期凋亡能力(P0.01)。结论沉默PDK1基因可显著抑制SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力,并可缩短细胞S期,增加细胞凋亡率。     

沉默吲哚胺2,3-双加氧酶2基因对黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨沉默吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)基因对小鼠黑色素瘤B16-BL6细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响。方法:IDO2-siRNA转染体外培养的黑色素瘤细胞B16-BL6,应用real-time PCR和Western blot检测IDO2和IDO1基因的表达;平板集落形成实验检测IDO2基因沉默对肿瘤细胞增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell小室细胞迁移实验观察IDO2对肿瘤细胞迁移的影响;Transwell小室侵袭实验观察肿瘤细胞侵袭能力。结果:沉默B16-BL6细胞中IDO2基因能使细胞单集落形成密度降低,划痕迁移变慢,Transwell小室细胞迁移数减少,侵袭细胞数减少。结论:沉默IDO2可以影响黑色素瘤细胞B16-BL6的增殖、迁移和侵袭能力。     

RNA干扰CD151基因对子宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的观察RNA干扰(RNAi)介导的CD151基因沉默对子宫颈癌细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化EnVision法检测子宫颈鳞状细胞癌及慢性子宫颈炎组织中CD151蛋白的表达;设计并筛选抑制CD151 mRNA表达的siRNA序列,构建含有shRNA序列的质粒转染子宫颈癌细胞;采用Western blot法筛选稳定沉默CD151基因的子宫颈癌细胞株,用于后续的细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭实验。结果 CD151蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中阳性;与空载体组及空白对照组相比,转染Psciencer2.0-shRNA-CD151重组质粒的子宫颈癌细胞CD151表达水平显著下降,细胞增殖活力明显降低,细胞周期被阻滞在G_1期,细胞凋亡显著增加,细胞迁移和侵袭能力亦受到明显抑制,差异有统计学意义(P均0.05)。结论通过RNAi介导的CD151基因沉默可明显抑制子宫颈癌细胞的生长及恶性生物学行为,CD151有望成为治疗子宫颈癌的潜在靶点。     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

针对CD44的siRNA对脑胶质瘤细胞U87增殖与侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞U87中的表达,观察CD44的表达抑制对胶质瘤增殖、迁移和侵袭的影响。方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染U87细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;Western blot检测CD44蛋白水平的变化;MTT法检测U87细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44-siRNA下调了U87细胞中CD44mRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和迁移侵袭能力下降。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗奠定基础。     

STAT3调控P13K/Akt信号通路对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响北大核心CSCD

目的：探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)对食管癌EC106细胞增殖、侵袭和迁移的调控作用以及相关蛋白表达变化。方法：利用STAT3 shRNA慢病毒载体和STAT3过表达慢病毒载体干扰食管癌EC106细胞中STAT3表达。将细胞分为对照组、沉默组和过表达组，采用CCK-8法检测细胞增殖差异，流式细胞术观察细胞周期变化，细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力。使用RT-PCR检测STAT3、P13K和Akt mRNA表达水平，通过Western blot检测Ki67、PCNA、E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。结果：与对照组相比，沉默组的细胞增殖显著降低（P<0.05），而过表达组的细胞增殖增加。流式细胞术显示，与对照组相比，沉默组细胞的细胞周期在G0/G1期阻滞（P<0.05），而过表达组S期细胞增加。此外，细胞划痕实验结果表明，沉默组细胞的迁移能力显著下降（P<0.05），而过表达组细胞的迁移能力增强。Transwell实验结果显示，沉默组细胞的侵袭能力明显减弱（P<0.05），而过表达组细胞的侵袭能力增强；RT-PCR结果显示，与对照组相比，沉默组细胞中STAT3、P13K、Akt mRNA含量显著降低（P<0.05），过表达组STAT3、P13K、Akt mRNA含量显著增加；Western blot分析结果表明，相对于对照组，沉默组细胞中Ki67、PCNA和Vimentin蛋白相对表达水平明显降低，E-cadherin表达显著升高，过表达组Ki67、PCNA及Vimentin蛋白相对表达增加，E-cadherin表达显著降低（P<0.05）。结论：STAT3对食管癌EC106细胞的存活具有重要作用，沉默STAT3表达后，P13K、Akt表达下调，细胞周期进程阻滞，细胞增殖、迁移和侵袭受到抑制。     

蛋白激酶Cε对肝癌SK-Hep-1细胞生物学行为的影响*

 目的：使用小干扰RNA（siRNA）抑制人肝癌SK-Hep-1细胞中蛋白激酶Cε（PKCε）的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默后SK-Hep-1细胞增殖和侵袭能力的变化。方法：培养SK-Hep-1细胞,分为PKCε-siRNA组、阴性对照（NC-siRNA）组和未行处理（control）组。采用MTT比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用Transwell法观察各组细胞侵袭能力的变化,Western blotting观察细胞核增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶 9（MMP-9）等功能蛋白的表达,萤光素酶报告基因检测NF-κB信号通路的活性。结果：与对照组相比,PKCε-siRNA组PKCε mRNA和蛋白表达水平都明显降低（P＜0.01）,Ki67和MMP-9蛋白表达水平降低,细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）,PKCε-siRNA组穿过Transwell膜的细胞少于对照组（P＜0.01）,且NF-κB转录活性下降（P＜0.01）。结论：通过siRNA技术降低PKCε表达可抑制肝癌SK-Hep-1细胞增殖及其侵袭能力,其抑制作用可能与抑制NF-κB通路的转录活性有关。     

miRNA-20a促进卵巢癌细胞OVCAR3的转移

目的 检测miRNA-20a对卵巢癌细胞系OVCAR3转移能力的影响.方法 通过实时定量RT-PCR验证反义寡核苷酸与小干扰RNA封闭与过表达的效果,然后利用MTT、软琼脂集落形成和transwell 侵袭实验检测封闭和过表达miRNA-20a对OVCAR3细胞增殖及转移能力的影响.结果 封闭内源性miRNA-20a后,细胞活性基本不受影响,但集落形成能力和细胞的转移能力明显降低.过表达miRNA-20a后,细胞活性基本不受影响,但集落形成能力和细胞的转移能力明显升高.结论 miRNA-20a可能参与了卵巢癌细胞OVCAR3的转移.     

RNA干扰下调HE4基因表达对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响

目的应用RNA干扰技术下调人附睾蛋白HE4基因表达水平,观察HE4对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力的影响。方法化学合成3对HE4特异性小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法转染人卵巢癌细胞系SK-OV-3(HE4-siRNA组),同时以非特异序列siRNA转染的SK-OV-3细胞(阴性对照组)和正常培养的SK-OV-3细胞(正常对照组)为对照,于转染后48 h,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)和Western blot方法分别检测HE4 mRNA及蛋白表达水平。采用CCK8试剂盒检测卵巢癌细胞增殖活性的变化,穿膜小室模型测定HE4对细胞侵袭能力的影响。结果与正常对照组相比,HE4-siRNA转染卵巢癌SK-OV-3细胞48 h后,HE4 mRNA的表达水平显著下降,仅为正常对照组的12.7%(P<0.01),与之相应HE4蛋白表达也显著下降,而转染非特异序列的阴性对照组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。HE4-siRNA下调卵巢癌SK-OV-3细胞HE4表达后,细胞增殖受到明显抑制,细胞增殖活性仅为正常对照组的60%,阴性对照组细胞增殖未见明显变化。体外侵袭实验显示,HE4-siRNA组穿膜细胞数为每视野(21.8±2.86)个,显著低于正常对照组(187.4±11.17)个(P<0.01)和阴性对照组(177.8±9.76)个(P<0.01),而阴性对照组和正常对照组两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HE4特异性siRNA能成功下调SK-OV-3细胞中HE4基因的表达,显著降低卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,HE4有可能成为人卵巢癌侵袭转移防治的重要靶点。     

LncRNA MEG3 impacts proliferation,invasion, and migration of ovarian cancer cells through regulating PTEN

Objective and design

We investigated the expressions of lncRNA MEG3 and PTEN in ovarian cancer tissues and their effects on cell proliferation, cycle and apoptosis of ovarian cancer.

Methods

Expression levels of MEG3 in ovarian cancer cell lines and normal ovarian cell lines were detected by qRT-PCR. Cell viability was detected by MTT assay. Cell apoptosis and cell cycle distribution were measured by flow cytometry. Cell invasion capability was tested by transwell assay. Cell migration capacity was tested by wound healing. The xenograft model was constructed to explore the effect of lncRNA MEG3 on ovarian cancer in vivo.

Result

Compared with normal ovarian cells, expression levels of MEG3 and PTEN were relatively lower in ovarian cancer cells. There was a positive correlation between the expression of PTEN and the expression of MEG3. Enhanced expression level of PTEN suppressed SKOV3 cell proliferation, increased cell apoptosis rate, and decreased cell invasion and migration.

Conclusion

LncRNA MEG3 and PTEN were down-regulated in ovarian cancer cells. LncRNA MEG3 regulated the downstream gene PTEN in ovarian cancer cells to prohibit cell proliferation, promote apoptosis and block cell cycle progression.

     

NEK2基因沉默促进卵巢癌细胞SKOV3凋亡

目的研究siRNA干扰NEK2表达对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法设计合成3条对NEK2的siRNA,转染进SKOV3细胞,采用real-time PCR和Western blot技术筛选出抑制效率最高的NEK2-siRNA序列,进行后续实验;分别采用MTT和流式细胞学技术检测细胞增殖和凋亡,用Western blot检测BAD、BCL-2和caspase-3的表达。结果 1)RNA干扰序列2对SKOV3细胞NEK2的抑制效果最明显;2)与空白组和阴性对照组相比,NEK2-siRNA转染48 h后,SKOV3细胞增殖能力下降,发生凋亡的细胞增加(P<0.01);3)与空白组和阴性对照组相比,NEK2-siRNA转染48 h后,SKOV3细胞中BAD和caspase-3的蛋白表达上调,而BCL-2的蛋白表达下调(P<0.01)。结论 NEK2-siRNA可能通过沉默NEK2的表达,促进卵巢癌细胞SKVO3的凋亡。     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

柴胡皂苷D通过下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长

目的探究柴胡皂苷D通过调控miR-517a对胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的影响.方法采用MTT试剂盒检测U-87细胞和正常星形细胞的存活率;Q-PCR检测miR-517a表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白免疫印迹试剂盒检测cleaved caspase-3、Ki67、MMP-2、Cyclin D1蛋白水平.建立裸鼠移植瘤模型,检测各组肿瘤重量;免疫组化检测Ki67、VEGF表达.结果柴胡皂苷D对正常星形细胞存活率无影响,降低U-87细胞存活率,下调miR-517a表达,促进细胞凋亡,上调cleaved caspase-3蛋白表达,抑制细胞迁移、侵袭、增殖,下调MMP-2、Cyclin D1、Ki67蛋白表达;抑制体内移植瘤生长,降低Ki67、VEGF阳性表达率.结论柴胡皂苷D具有下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的作用.     

丙泊酚对人胶质瘤U251细胞株增殖、凋亡、侵袭和转移能力的调节作用

目的　探究丙泊酚对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的作用和机制。 方法 将细胞随机分为U251组、Propofol（1 mM）组、Propofol（2 mM）组和Propofol（5 mM）组。除U251组外,其余组用相应浓度的丙泊酚处理,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ki67、Caspase-3、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）、磷脂酰肌醇-3-羟激酶（Phosphoinositide 3-kinase, PI3K）、Akt、p-PI3K和p-Akt的表达。 结果 与U251组比较,Propofol （1, 2, 5 mM）组细胞增殖速度明显降低,细胞凋亡率显著升高;同时,Propofol （1, 2, 5 mM） 组侵袭细胞数与U251组比较明显减少,Propofol（2, 5 mM） 组划痕闭合率明显低于U251组;此外,丙泊酚还能显著抑制细胞增殖和迁移相关蛋白Ki67和VEGF表达,诱导细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达;丙泊酚能明显降低p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比值。 结论 丙泊酚能降低胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移能力,抑制U251细胞凋亡,作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路激活有关。